简易高效分离培养大鼠胸主动脉血管内皮细胞方法的建立
血管组织工程内皮细胞分离培养新方法
血管组织工程内皮细胞分离培养新方法向萍;李敏;张超颖【期刊名称】《福建师范大学学报：自然科学版》【年(卷),期】2011(27)5【摘要】建立一种简单高效的血管组织工程内皮细胞分离培养方法.无菌分离大鼠主动脉,剪成约5mm×2mm的组织块,内膜朝下平铺于含Ⅰ型胶原酶的细胞培养皿中消化30min,收集内皮细胞;其后,取出组织块继续内膜朝下置于另一培养皿中贴壁培养,直至细胞爬出并融合成单层.观察细胞形态,并分别对两种方式获得的传至第5代的细胞进行Ⅷ因子免疫组化鉴定.酶消化获得的细胞数目约为4.8×103个,组织块继续贴壁培养5d后细胞数目可达5×105mL-1.细胞多呈三角形或多角形,融合后以"铺路石"状排列.两种方式所获得的细胞均表现出内皮细胞特征,纯度达100%.酶消化结合组织贴块法为血管组织工程提供了获取大量高纯度内皮细胞的新方法.【总页数】5页(P91-95)【关键词】大鼠主动脉;内皮细胞;酶消化法;组织贴块法;血管组织工程【作者】向萍;李敏;张超颖【作者单位】福建师范大学生命科学学院【正文语种】中文【中图分类】R318【相关文献】1.组织块培养法及胶原酶消化法分离培养豚鼠耳蜗微血管内皮细胞 [J], 魏运军;张学渊2.组织块半悬浮培养法分离培养大鼠视网膜血管内皮细胞 [J], 庄淼;殷丽;秦时月;邵珺;谭澄烨;姚勇3.人增生性瘢痕组织中微血管内皮细胞的分离、纯化和培养 [J], 姜笃银;胡大海;汤朝武;陈璧4.早孕蜕膜组织血管内皮细胞的分离与培养 [J], 徐立康;王介东5.皮下脂肪组织微血管内皮细胞的分离和培养 [J], 唐洪泰;朱世辉;苏波;李元义;张素贞;夏照帆;葛绳德;陈玉林因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
成年大鼠心肌微血管内皮细胞的分离与培养
成年大鼠心肌微血管内皮细胞的分离与培养陈小燕;樊梦雅;李慧;蒋易楠;靖静;张海龙【摘要】目的本文建立一种简便、高效的成年大鼠心肌微血管内皮细胞分离及培养的方法.方法选取7~8周龄Wistar大鼠,麻醉后开胸取出心脏,采用离体心脏灌流和酶消化法进行心肌微血管内皮细胞的分离;取第3代细胞观察其增殖特征并绘制增殖曲线;用免疫细胞化学和免疫荧光对细胞的第Ⅷ因子相关抗原和CD31进行鉴定,利用基质胶检验其血管形成能力.结果体外培养心肌微血管内皮细胞呈多边形或梭形,具有典型的铺路石样生长特点;同时,第Ⅷ因子相关抗原和CD31呈阳性;具备血管形成能力.结论本方法培养的成年大鼠心肌微血管内皮细胞具有较高的纯度,方法简便易行,可用于心血管疾病基础及临床研究.%Objective To establish a simple and efficient method for isolation and culture of adult rat cardiac micro-vascular endothelial cells. Methods Wistar rats were anesthetized and thoracotomy was performed. Cardiac micro-vascular endothelial cells were isolated by heart perfusion and enzyme digestion. The morphology and growth curve of the third generation cells were examined by inverted microsc opy. Its molecular markers factor Ⅷ-related antigen and CD31 were detected by immunocytochemistry and immunofluoresence. The angiogenic ability was examined by matrigel. Results The primary cultured cardiac microvascular endothelial cells in vitro were polygonal or fusiform with typical paving stone-like growth characteristics. At the same time,the cells were positive stained by factorⅧ-related antigen and CD31 and showed angiogenic ability. Conclusions Cardiac microvascular endothelial cells cul-tured by this method possess high purity. The method is easy tooperate and can be used for laboratory and clinical research of cardiovascular diseases.【期刊名称】《基础医学与临床》【年(卷),期】2018(038)004【总页数】5页(P530-534)【关键词】细胞培养;内皮细胞;成年大鼠;心肌微血管【作者】陈小燕;樊梦雅;李慧;蒋易楠;靖静;张海龙【作者单位】河南大学医学院抗体药物开发技术国家地方联合工程实验室河南省抗体药物国际联合实验室细胞与分子免疫重点实验室,河南开封475004;河南大学医学院抗体药物开发技术国家地方联合工程实验室河南省抗体药物国际联合实验室细胞与分子免疫重点实验室,河南开封475004;河南大学医学院抗体药物开发技术国家地方联合工程实验室河南省抗体药物国际联合实验室细胞与分子免疫重点实验室,河南开封475004;郑州大学基础医学院,河南郑州450001;河南大学医学院抗体药物开发技术国家地方联合工程实验室河南省抗体药物国际联合实验室细胞与分子免疫重点实验室,河南开封475004;河南大学医学院抗体药物开发技术国家地方联合工程实验室河南省抗体药物国际联合实验室细胞与分子免疫重点实验室,河南开封475004【正文语种】中文【中图分类】R331心肌微血管是深入心脏内的终末细小分支，在心脏内分布广泛，结构上与其他血管不同，由单层内皮细胞和细胞外基质组成；微血管内皮细胞在表型与功能上均表现出不同于大血管内皮细胞的异质性，且其性质与功能在不同组织器官之间也具有显著差异[1]。
大鼠胸主动脉内皮细胞培养方法的改进
・
１４・ ６
Ａ ｔ ｃ ｄＭｅ ｃａＡ ａ ｄＮｅ ｉＭｏ ｇ ｌ Ｊ ｎ ２ ０ Ｖ １２ Ｎｏ ３ ｎ ｏ ｕ ． ０ ７ ｏ． ９ ．
大 鼠胸 主 动脉 内皮细 胞 培 养方 法的 改进
瞿海龙 ， 陈晓春
（ 内蒙古 医学 院第三 附属 医院 心 内科 ， 内蒙古 包头 ０４ １ ） １００
ｒａ ｈ ｄ ｍｏ ｏａｅ ｏ ｆ ｅ ｃ ． ｅ Ｃ ｆｐ ｓａ ｅ ２ ｗｅｅ ｉｅ ｔ ｅ ｙ ｆｃｏ ｅａｅ ｎ ｇ ｎ ｅ ｃ ｅ ｎ ｌｙ ｒ ｃ ｎｌ ｎ ｅ Ｔ Ｅ ｓ ｏ ａｓｇ ｒ ｄ ｎｉ ｄ ｂ ａ ｔｒ Ｗ ｒｌｔｄ ａ ｔ ｅ ｕ ｈ ｉ ｆ ｉ
摘
要： 目的： 建立一种简单 易行 的 ｓ Ｄ大鼠胸主 动脉 的内皮细胞培养方法。方法 ： 离大鼠胸主动脉 ， 分 清除
血管外结缔组织， 将其剪成厚约 １５ ｍ 的血 管环 ， １ ２ ．ｒ ａ 以 ５— ０个血 管环 密度接种于 ２ ｃ ５ ｍ 培养瓶 中， 以含 ２ ％胎 ０
牛血清的 Ｄ Ｅ 液培养， ｈ ＭＭ ６ 后去掉血 管环 。待细胞生长达单层融合时 ， ０ 消化传代 。对 Ｐ 代细胞应用抗Ⅷ 因子 ２
抗体进行鉴定。结果 ：０ 后 ， ６ ｈ 细胞呈集落样散在分布于瓶 底 ； ９ ７— ｄ细胞汇合成单层 ， 呈销路石状 。经Ⅷ 因子相
关抗原免疫组化鉴 定， 所培养细胞为 内皮细胞 。结论 ： 管环贴壁 法培养 ｓ 血 Ｄ大鼠胸主动脉 内皮细胞简易可行 。
关键词 ： 鼠； 大 内皮 细 胞
中图分类号 ：３ ９ Ｒ ２
ｈ ｏ ｇ ｍｍｕ ｏ ｙｏ ｈ ｍｉ ａ ｔ ｏ ｔｒｕ ｈ ｉ ｎ ｃ ｔｃ ｅ ｃ ｍｅ ｄ．Ｒｅ ｕ ｔ Ａｆｅ ０ ｈ ｕ ｓ ｏ ｕ ｔ ｒｎ ｌ ｈ ｓ ｌｓ： ｔ ｒ６ ｏ ｒ ｆ ｃ ｌｕ ｇ，ｔ ｅ ｃ ｌ ｉｔｉ ｕ ｅ ｎ ｉ ｈ ｅ ｓ ｄｓｒｂ ｔｄ ｉ ａ ｃｕ ｔｒｏ ｅ ｂａ ｅ ｎ ．Ａ ｔ ｒ ｓ ｖ ｎ —ｎｉｅ ｄａ ｓ ｔ ｅ ｃ ｌ ｅ ｃ ｅ ｎ ｌ ｙ ｒｃ ｎ ｌｅ ｃ ｓ “ ａ ｉｇ ｌ ｓｅ ｎ ｔ ｓ ｍｅ ｔ ｆ ｅ ｅ ｅ ｈ ｎ ｙ ， ｅ ｓ ｒ ａ ｈ ｄ ｍｏ ｏａ ｅ ｏ ｆｕ ｎ ｅ ａ ｈ ｐ ｖｎ
新生大鼠心脏微血管内皮细胞的分离培养及鉴定
新生大鼠心脏微血管内皮细胞的分离培养及鉴定
周燕琼;郭福晓;贾强用;张艳美;郑燕珊;李乐娜;石刚刚
【期刊名称】《汕头大学医学院学报》
【年(卷),期】2008(21)3
【摘要】目的:介绍一种改良的心脏微血管内皮细胞(CMECs)的分离培养及鉴定方法。
方法:应用酶消化法分离大鼠CMECs,再用差速贴壁进行纯化。
结果:用光学显
微境、免疫细胞化学法进行第Ⅷ因子相关抗原染色来鉴定CMECs,其纯度约98%。
结论:该法简单且经济。
【总页数】4页(P135-136)
【关键词】新生大鼠;心脏微血管内皮细胞,分离,培养,鉴定
【作者】周燕琼;郭福晓;贾强用;张艳美;郑燕珊;李乐娜;石刚刚
【作者单位】汕头大学医学院药理学教研室;汕头大学医学院第一附属医院泌尿风
湿病区
【正文语种】中文
【中图分类】R-332;R322.11
【相关文献】
1.改良大鼠心脏微血管内皮细胞的培养方法及鉴定 [J], 周蓉芳;李莉;严静
2.大鼠脊髓微血管内皮细胞的分离培养与鉴定 [J], 苑晓晨;李炳蔚;秦伟伟;武清斌;
荆瀛黎;李宏伟;刘淑英;修瑞娟
3.大鼠心肌微血管内皮细胞的分离培养和鉴定 [J], 滕丽新;刘胜学;谢庭菊;何作云
4.大鼠脑皮质微血管内皮细胞的分离培养及鉴定 [J], 张磊;胡格;张涛;林红;索占伟;段慧琴;穆祥
5.SD大鼠心脏微血管内皮细胞的分离及培养 [J], 朱世辉;苏波;唐洪泰;李元义;刘世康;陈玉林;葛绳德
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大鼠血管内皮细胞培养研究
大鼠血管内皮细胞培养研究血管内皮细胞是血管中重要的细胞类型，其在维护血管生理特性以及参与血管病理反应中都具有重要的作用。
大鼠作为实验动物，其血管内皮细胞的研究也是非常重要的。
在这篇文章中，我们将重点介绍大鼠血管内皮细胞的培养技术及其在血管生物学研究中的应用。
一、大鼠血管内皮细胞培养技术1.1 资源准备大鼠动脉、静脉组织、FBS、DMEM/F12、胰酶、胰酶抗性味粉、细胞凝集素、槲皮素、PBS、二氧化碳培养箱、显微镜、离心机、相位对比显微镜、细胞均质器等。
1.2 组织消化将新鲜的大鼠动脉或静脉取出，去除外膜及脂肪组织，用PBS缓冲液清洗数次。
接着，用胰酶液消化组织，割碎后转移到消化液中，37℃孵育1-2小时，直到组织消化完全。
1.3 筛选基质消化完全的组织过筛，筛子孔径为80目。
去掉筛子上的淋渣后，产出的细胞可以用显微镜观察并鉴定是否为血管内皮细胞。
1.4 细胞培养将产出细胞悬浮在完全培养基（DMEM/F12，10% FBS，100ug/mL嘌呤鸟嘌呤，100ug/mL青霉素和50ug/mL链霉素）中，在培养室内孵育。
按细胞密度不同，可选用不同的培养方法，比如单细胞悬浮培养、半贴壁培养和全贴壁培养等。
1.5 纯化细胞如果需要纯化大鼠血管内皮细胞，还需要使用血管壁内形成的凝集素贴壁分离技术，配合药物槲皮素进行消除非内皮细胞。
二、大鼠血管内皮细胞在血管生物学研究中的应用2.1 血管内皮损伤与修复在血管损伤修复研究中，常常会使用拉环法、加热法、切割法、放置血栓等手段产生不同程度的血管内皮损伤模型，进而观察、探究血管内皮细胞的响应和修复机制。
例如研究大鼠颈动脉内皮细胞在内膜损伤后的DNA修复机制是一个非常热门的研究课题。
2.2 血管疾病如高血压、动脉硬化、心血管疾病等，都与血管内皮细胞的损伤和功能异常有关。
通过培养大鼠血管内皮细胞，可以模拟这些血管疾病模型，如在培养基中将NO剂加入，从而模拟高血压或将脂质压入细胞内，模拟动脉硬化等，可以帮助我们更好的探究血管疾病的病理生理机制。
大鼠胸主动脉血管内皮细胞的分离培养和纯化鉴定
大鼠胸主动脉血管内皮细胞的分离培养和纯化鉴定杨翠燕;王金凤;张艳萍;王芳;王国玉;侯明晓【摘要】目的探索分离、培养大鼠胸主动脉血管内皮细胞的有效方法.方法取Wistar大鼠1只,无菌条件下打开胸腔取出胸主动脉,去除外周结缔组织及脂肪,使主动脉内膜翻出,用丝线结扎动脉两端后用烧热的镊子烫烙.置于50ml铺有鼠尾胶培养瓶中培养,加入含有20%新生牛血清的DMEM/F12培养液静止培养,6d后换液并弃主动脉.经0.125%胰酶差速消化传代,采用免疫细胞化学法鉴定血管内皮细胞标志分子Ⅷ因子在细胞中的表达情况.结果培养6d时有少量细胞自主动脉迁移出并贴壁生长;12～14d时贴壁细胞覆盖大部分培养瓶底,约70%的细胞汇合成单层;经胰酶差速消化传代细胞生长旺盛,细胞汇合后呈现典型的"鹅卵石"样内皮细胞特征;内皮细胞标志物Ⅷ因子表达阳性率达100%.结论本研究采用的方法简便易行,不需要胶原酶及内皮细胞生长补充物,更为经济适用,适用于细小血管内皮细胞的分离与培养.【期刊名称】《解放军医学杂志》【年(卷),期】2010(035)002【总页数】3页(P195-196,200)【关键词】主动脉;胸;内皮细胞;体外研究;大鼠【作者】杨翠燕;王金凤;张艳萍;王芳;王国玉;侯明晓【作者单位】130062,长春,解放军208医院心脏介入科;130062,长春,解放军208医院心脏介入科;130062,长春,解放军208医院心脏介入科;130062,长春,解放军208医院心脏介入科;130062,长春,解放军208医院心脏介入科;130062,长春,解放军208医院心脏介入科【正文语种】中文【中图分类】R349.26血管内皮细胞（vascular endothelial cells，VEC）具有多种重要的生物学功能，而大鼠是常用的实验动物，因此建立简易、有效、重复性好的分离培养大鼠胸主动脉VEC的方法，在心血管疾病、肿瘤扩散、免疫疾病研究中具有广泛的应用价值。
简便有效分离培育大鼠主动脉内皮细胞的一种新方式
简便有效分离培育大鼠主动脉内皮细胞的一种新方式肖琼房云海徐蕴田铧张立平田兴松【摘要】目的：探讨分离、培育鼠主动脉内皮细胞的有效方式。
方式：将鼠主动脉内膜翻向外，结扎两头，置于50 mL培育瓶中培育、传代，Ⅷ因子相关抗原免疫细胞化学染色。
结果：培育6～8 d 时有少量细胞自主动脉迁移出并贴壁生长；12～14 d 时贴壁细胞覆盖大部份培育瓶面，约80%的细胞汇合成单层；传代细胞生长旺盛；细胞汇合后呈现典型的“鹅卵石”样内皮细胞特点，内皮细胞标志物Ⅷ因子相关抗原表达阳性；未见杂细胞。
结论：此方式无损伤、不需要酶消化，能比较容易的取得高纯度大鼠原代主动脉内皮细胞，适用于细小血管内皮细胞的分离与培育。
【关键词】主动脉·体外培育·内皮细胞·大鼠A new method for isolation and culture of the endothelial cells of the rat aorta【ABSTRACT】Objective:To investigate a modified method of isolating and culturing the endothelial cells from the rat aortafor endothelial bioresearch. Methods:Turned inside out, the aorta of the rat, of which the intima tunica was exposed, was ligated at both ends and cultured in a 50 mL culture bottle. Results:A small amount of cells migrated out from the aorta 6 to 8 days after cultured; the migrating cells spread over most of the culture surface of the bottle 12 to 14 days after cultured, 80% of them in a confluent monolayer. The confluent cells were identified as endothelial cells with the typical cobblestone appearance and the positive reaction for factor Ⅷ relative antigen, no other types of cells was observed. Conclusion:This is a woundless, nonenzymatic method of obtaining highly purified primary endothelial cells of the rat aorta, especially practical for isolation and culture of small vascular endothelial cells.内皮细胞是研究心血管、炎症、肿瘤等疾病最经常使用的工具。
一种小鼠主动脉内皮细胞的分离及培养方法
一种小鼠主动脉内皮细胞的分离及培养方法说实话小鼠主动脉内皮细胞的分离及培养方法这事，我一开始也是瞎摸索。
我试过好几种方法，有一回，我按照一个看起来很靠谱的文献里说的做。
首先就是处死小鼠这一步，听起来简单，其实要很小心。
就好比你要拆除一个特别精密的小零件一样，手要稳准狠。
我刚开始的时候手有点抖，导致取主动脉的时候就不是很顺利。
这中间有个小窍门就是一定要让小鼠处于合适的麻醉或者处死状态，要是它突然动一下，那就全乱套了。
取主动脉的时候呢，因为主动脉很细小，就像在一堆细细的面条里面找到一根特定的面条那样难。
我曾经就因为镊子用得不顺手，把主动脉弄破了，这一破，基本上前面的工作就白费了。
所以，工欲善其事必先利其器，镊子剪刀这些小工具，一定要选那种尖细又合手的。
取出来主动脉之后，就要开始处理细胞分离了。
我试过用酶来消化，但是这个酶的浓度啊，我当时就把握不好。
浓度太高吧，会把细胞都给毒死了似的，浓度低呢，又分不出来多少细胞。
就像你做饭放盐，多了就咸得没法吃，少了又没味道。
在无数次尝试之后，我感觉大概这个酶的浓度到多少多少是比较合适的，当然这个数值可能不是完全精准，但是能做出效果。
再就是培养了，培养的时候那个细胞生长的环境很重要。
比如说培养皿就像房子，得先把房子打扫干净，也就是把培养皿进行非常严格的消毒处理。
那培养基就像是食物，得选对适合主动脉内皮细胞生长的培养基。
我在这方面也走了不少弯路，刚开始随便选了一种培养基，结果细胞根本就不怎么长，就像把树栽在沙漠里肯定不行啊。
后来换了适合的培养基，还有就是温度、湿度这些环境一定要控制好，就好比人类不能在高温火山或者冰冷极地好好生活一样，细胞也需要合适的温湿度。
还有就是观察细胞的时候，千万不能偷懒。
我有时候忘记及时观察细胞状态，结果细胞就被污染了，那些污染就像侵略者一样，一进来就把细胞都破坏掉了。
所以要时不时地看看细胞有没有变化。
虽然这个过程很折腾，但只要耐心地不断尝试，总能找到适合自己的方法的。
大鼠胸主动脉内皮细胞培养方法的改进
大鼠胸主动脉内皮细胞培养方法的改进
瞿海龙;陈晓春
【期刊名称】《内蒙古医学院学报》
【年(卷),期】2007(29)3
【摘要】目的:建立一种简单易行的SD大鼠胸主动脉的内皮细胞培养方法.方法:分离大鼠胸主动脉,清除血管外结缔组织,将其剪成厚约1.5mm的血管环,以15～20个血管环密度接种于25cm2培养瓶中,以含20%胎牛血清的DMEM液培养,60h 后去掉血管环.待细胞生长达单层融合时,消化传代.对P2代细胞应用抗Ⅷ因子抗体进行鉴定.结果:60h后,细胞呈集落样散在分布于瓶底;7～9d细胞汇合成单层,呈铺路石状.经Ⅷ因子相关抗原免疫组化鉴定,所培养细胞为内皮细胞.结论:血管环贴壁法培养SD大鼠胸主动脉内皮细胞简易可行.
【总页数】3页(P164-166)
【作者】瞿海龙;陈晓春
【作者单位】内蒙古医学院第三附属医院,心内科,内蒙古,包头,014010;内蒙古医学院第三附属医院,心内科,内蒙古,包头,014010
【正文语种】中文
【中图分类】R329
【相关文献】
1.原代大鼠脑微血管内皮细胞培养方法的改进 [J], 徐平湘;齐特;陆莉;薛明;肇玉明
2.大鼠肺微血管内皮细胞原代培养方法的改进及细胞鉴定 [J], 李颖川;江伟;周明;
薛瑛;李亚春
3.大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞原代培养方法的改进 [J], 孟立平;蒋承建;赵飞;郭艳;池菊芳;郭航远
4.大鼠肺微血管内皮细胞培养方法的对比和改进 [J], 李敏;杨明会;刘毅
5.大鼠胸主动脉外膜成纤维细胞的培养方法初探 [J], 马彦军;林家冲;杨絮;张勇刚因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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中图分类号：R 339. 5 文献标志码：A
Establishment of a simple and efficient method for isolating and culturing vascular endothelial cells of rat thoracic aorta
2011 年 11 月 第 31 卷 第 11 期
基础医学与临床 Basic ＆ Clinical Medicine
文章编号： 1 0 0 1 -6 3 2 5 （ 2 0 1 1 ） 1 1 -1 2 7 8 -0 5
November 2011 Vol． 31 No． 11
技术与方法
简易高效分离培养大鼠胸主动脉血管内皮细胞方法的建立
收稿日期：2010 － 02 － 18 修回日期：2011 － 09 － 01 基金项目：国家自然科学基金（ 30871219） ； 国家重点基础性研究项目（ 2006CB5041） ； 北京市教育委员会科技计划重点项目
（ KZ200810025012） ； 北京市属高等院校人才强教计划项目（ 京教人［2008］17 号） ； 北京市新世纪百千万人才工程 培养经费（ 08-016） ； 教育部高等学校博士点科研基金（ 20091107110001） * 通信作者（ corresponding author） ： junfali@ ccmu． edu． cn
韩 松，曲彦明，李俊发*
（ 首都医科大学 神经生物学系 北京神经科学研究所，北京100069）
摘要：目的 建立一种高效分离、培养大鼠胸主动脉血管内皮细胞的方法。方法 用 Wistar 大鼠（ 200 ～ 250 g） ，无菌
条件下开胸取胸主动脉，去除血管外膜，制备长约 1. 0 ～ 1. 5 mm动脉环。将血管环垂直置于干燥的培养皿中，并向 血管环内加入含有 10% 胎牛血清的 DMEM / F12 培养液、静止培养； 24 h血管环贴壁后，加入培养液； 3 ～ 4 d内皮细 胞长出，弃血管环，并经 0. 25% 胰蛋白酶消化传代。用形态学、免疫细胞化学及流式细胞分析等方法，鉴定血管内 皮细胞标志物，vWF 的表达。结果 培养 3 ～ 4 d时有细胞自主动脉环内迁移出并贴壁生长，细胞汇合后呈现典型的 “铺路石”样内皮细胞特征； 免疫组化和流式细胞分析结果示，vWF 表达阳性率可高达 98. 3% ± 0. 2% 。结论 用改 良的植块培养方法，不需要胶原及内皮细胞生长补充物，较传统酶消化法更为经济、高效，且简便易行，适用于细小 血管内皮细胞的分离与培养。
韩松 简易高效分离培养大鼠胸主动脉血管内皮细胞方法的建立
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The cells were identified as endothelial cells，its positive ratio was （ 98. 3 ± 0. 2） % by using immunostaining and flow-cytometry with vWF． Conclusion The modified explanting cultivation method for isolating and culturing was established in this study． This method is simple，easy to handle and more economic without need of collagen and endothelial cell growth promoting substrate． Key words： endothelial cells； thoracic aorta； rats
HAN Song，QU Yan-ming，LI Jun-fa*
（ Department of Neurobiology and Beijing Institute for Neuroscience，Capital Medical University，Beijing 100069，China）
Abstract： Objective To establish a simple and efficient method for isolating and culturing vascular endothelial cells of rat thoracic aorta． Methods Under aseptic condition，the thoracic aorta was separated from Wistar rat． After stripping off the adventitia，the thoracic aorta was cut into vessel rings with length of 1. 0 ～ 1. 5 mm． The vessel rings were placed on culture dish vertically and filled with the culture medium DMEM / F12 containing 10% fetal bovine serum； After 24 h，the vessel rings had attached on the culture dish firmly and some new culture medium was added； 3 ～ 4 d later，the thoracic aorta was discarded and the new culture medium was added into the culture dish． The migrating cells were digested by 0. 25% trypsin for serial subcultivation． The endothelial cells were identified by morphological，immunohistochemical and flow-cytometry methods with anti-vWF antibody． Results A amount of cells migrated from the aorta and adhered to the bottom of culture dish 3 ～ 4 d after cultivation． The confluent cells grew rapidly after being digested with 0. 25% trypsin and showed the typical cobblestone appearance．