实验三 牛乳中酪蛋白的制备与鉴定
牛奶中酪蛋白的分离与鉴定
试剂
漩涡混合器 试管 吸管 容量瓶 量筒 电子分析天平 比色皿 722型分光光度计
器材
三 实验试剂与器材
操作方法
四、 操作方法 1.标准曲线制作 取14支试管，分两组按下表平行操作。 试管编号 0 1 2 3 4 5 6 标准蛋白溶液 (mL) 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.9%NaCl溶液（mL）1.0 0.9 0.8 0.7 0.6 0.5 0.4 考马斯亮蓝试剂(mL) 4 4 4 4 4 4 4 蛋白质浓度(g/mL) 0 10 20 30 40 50 60 A595nm 摇匀，1 h内以0号试管为空白对照，在595nm处比色 OD595nm 以OD595nm为纵坐标，标准蛋白含量为横坐标，在坐标纸上绘制标准曲线。
03
注意事项
实验制备得到的是粗脂肪, 若要制备单一组分的脂类成分, 可用什么方法进一步处理？
实验样品制备时烘干为什么要避免过热
壹
贰
思考题
酪蛋白的提取 一 、目的要求 掌握一种提取酪蛋白的方法 掌握一种检测牛乳质量的方法
酪蛋白是乳蛋白质中最丰富的一类蛋白质，占乳蛋白的80%~82%，酪蛋白不是单一的蛋白质，是一类含磷的复合蛋白质混合物，以一磷酸酯键与苏氨酸及丝氨酸的羟基相结合。它还含有胱氨酸和蛋氨酸这两种含硫氨基酸，但不含半胱氨酸。它在牛乳中的含量约为35g/L，比较稳定，利用这一性质可以检测牛乳中是否掺假。
01
酪蛋白在其等电点时由于静电和为零，同种电荷间的排斥作用消失，溶解度很低，利用这一性质，将牛乳调到pH4.6，酪蛋白就可从牛乳中分离出来。酪蛋白不溶于乙醇，这个性质被用来从酪蛋白粗制剂中将脂类杂志除去。
02
二 实验原理
仪器：温度计、布氏漏斗、pH试纸、抽滤瓶、水浴锅、烧杯、 量筒、表面皿、天平、离心机等
酪蛋白的制备实验报告
竭诚为您提供优质文档/双击可除酪蛋白的制备实验报告篇一：酪蛋白的制备----生化实验酪蛋白的制备一、目的1、学习从牛奶中制备酪蛋白的原理和方法。
2、掌握等电点沉淀法提取蛋白质的方法。
二、原理牛乳中的主要的蛋白质是酪蛋白，含量约为35g/L。
酪蛋白是一些含磷蛋白质的混合物，等电点为4.7。
利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的ph调至4.7时，酪蛋白就沉淀出来。
用乙醇洗涤沉淀物，除去脂类杂质后便可得到纯酪蛋白。
三、材料、试剂与器具（一）材料新鲜牛奶（一）试剂1、95%乙醇1200mL2、无水乙醚1200mL3、0.2mol/Lph4.7醋酸——醋酸钠缓冲液300ml先配A液与b液A液：0.2mol/L醋酸钠溶液称naAc·3h2o54.44g，定容至2000ml。
b液：0.2mol/L醋酸溶液，称优纯醋酸（含量大于99.8%）12.0g定容至1000ml。
取A液1770ml，b液1230ml混合即得ph4.7的醋酸——醋酸钠缓冲液3000ml。
4、乙醇——乙醚混合液乙醇：乙醚=1：1（V/V）（二）器具1、离心机2、抽滤装置3、精密ph试纸或酸度计4、电炉5、烧杯6、温度计四、操作步骤（一）酪蛋白的粗提100mL牛奶加热至40℃。
在搅拌下慢慢加入预热至40℃、ph4.7的醋酸缓冲液100mL.用精密ph试纸或酸度计调ph至4.7。
将上述悬浮液冷却至室温。
离心15分钟（3000r/min）。
弃去清液，得酪蛋白粗制品。
（二）酪蛋白的纯化1、用水洗涤沉淀3次，离心10分钟（3000r/min），弃去上清液。
2、在沉淀中加入30mL乙醇，搅拌片刻，将全部悬浊液转移至布氏漏斗中抽滤。
用乙醇—乙醚混合液洗沉淀2次。
最后用乙醚洗沉淀2次，抽干。
3、将沉淀摊开在表面上，风干；得酪蛋白纯品。
（三）准确称重，计算含量和得率。
含量：酪蛋白g/100mL牛乳（g%）式中理论含量为3.5g/100mL牛乳。
五、注意事项1、由于本法是应用等电点沉淀法来制备蛋白质，故调节牛奶液的等电点一定要准确。
酪蛋白的提取与测定
牛乳中酪蛋白的制备与浓度测定一、实验目的1、学习从牛乳中分离酪蛋白的原理和方法2、掌握等电点沉淀法提取蛋白质的方法3、了解紫外吸收法测定蛋白质浓度的原理，熟悉紫外分光光度计的使用4、学会用考马斯亮蓝结合法测定蛋白质浓度二、实验原理1、准备酪蛋白原理：牛乳中主要含有酪蛋白和乳清蛋白两种蛋白质，其中酪蛋白占了牛乳蛋白质的80%。
牛乳在PH4.7时酪蛋白等电聚沉后剩余的蛋白质统称为乳清蛋白。
酪蛋白是白色、无味的物质，不溶于水、乙醇等有机溶剂，但溶于碱溶液。
乳清蛋白不同于酪蛋白，其粒子的水和能力很强，分散性高，在乳中呈高分子状态。
本法利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的PH调至4.7时，酪蛋白就沉淀出来。
用乙醇洗涤沉淀物，除去脂类杂质后便可得到纯的酪蛋白。
2、紫外吸收法测定蛋白质浓度的原理：大多数蛋白质由于有酷氨酸和色氨酸的存在，在紫外光280nm有吸收高峰，可以进行蛋白质含量的测定。
但是核酸在280nm也有吸收，干扰测定，不过核酸的最大吸收峰在260nm，通过测定在280nm和260nm时A的比值，然后通过计算消除核酸存在的影响，可以求得有核酸存在时蛋白质的浓度。
3、考马斯亮蓝结合法测定蛋白质浓度原理：考马斯亮蓝能与蛋白质的疏水微区相结合，这种结合具有高敏感性。
考马斯亮蓝G250的磷酸溶液呈棕红色，最大吸收峰在465nm。
当它与蛋白质结合形成复合物时呈蓝色，其最大吸收峰改变为595nm，考马斯亮蓝G250—蛋白质复合物的高消光效应导致了蛋白质定量测定的高敏感度。
在一定范围内，考马斯亮蓝G250—蛋白质复合物呈色后，在595nm下，吸光度与蛋白质含量呈线性关系，故可以用于蛋白质浓度的测定。
三、实验器材与试剂1、制备酪蛋白：烧杯、玻璃棒、量筒、精密PH试纸、离心机、布氏漏斗、表面皿、恒温水浴锅牛奶、醋酸缓冲液、冰醋酸、95%乙醇、无水乙醚2、紫外光吸收法：紫外可见光分光光度计、容量瓶50ml(×1)、石英比色皿0.9%NaCl、1mol/LNaOH溶液、1mol/L乙酸溶液3、考马斯亮蓝法：紫外可见光分光光度计、试管1.5cm×15cm(×9)、玻璃比色皿牛血清白蛋白（0.1mg/ml）、考马斯亮蓝、0.9%NaCl四、实验步骤制备酪蛋白1、将20mL pH4.7的醋酸-醋酸钠缓冲液预热至40℃2、将20mL牛奶加热至40℃，在搅拌下缓慢地加入20mL预热的pH4.7的醋酸-醋酸钠缓冲液3、用精密pH试纸调pH至4.7，可见溶液变为乳白色悬浮液4、待悬浮液冷却至室温，4000rpm离心5min，弃上清，得酪蛋白粗制品5、用蒸馏水洗沉淀3次，3000rpm离心5min，弃上清6、在沉淀中加入20mL95％乙醇，搅拌片刻，将全部悬浊液转移至布氏漏斗中抽滤7、用乙醇-乙醚混合液洗涤沉淀2次（10ml/次），最后用乙醚洗涤沉淀2次（10ml/次），抽干8、将沉淀摊开在表面皿上，风干，得酪蛋白纯品9、准确称量，计算含量和得率紫外光吸收法1．取待测样品溶液置于的石英比色皿中，于分光光度计波长280nm和260nm，分别读取A280nm和A260nm，用生理盐水为比色空白对照。
酪蛋白的制备_实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 了解酪蛋白的基本性质和来源。
2. 掌握从牛奶中提取酪蛋白的原理和方法。
3. 学会等电点沉淀法提取蛋白质。
4. 了解酪蛋白的纯化过程。
二、实验原理酪蛋白是牛奶中的主要蛋白质，占牛奶蛋白质总量的80%左右。
酪蛋白是一种含磷蛋白质，其等电点为4.7。
在等电点时，酪蛋白的溶解度最低，因此可以通过调节牛奶的pH值至4.7，使酪蛋白沉淀出来。
然后通过离心、洗涤、干燥等步骤，可以得到纯酪蛋白。
三、实验材料与试剂1. 材料：新鲜牛奶、95%乙醇、无水乙醚、0.2mol/L pH4.7醋酸-醋酸钠缓冲液。
2. 试剂：A液（0.2mol/L醋酸钠溶液）、B液（0.2mol/L醋酸溶液）、乙醇-乙醚混合液。
四、实验步骤1. 准备0.2mol/L pH4.7醋酸-醋酸钠缓冲液：取A液1770ml，B液1230ml混合即得。
2. 取100mL新鲜牛奶，加热至40℃，在搅拌下慢慢加入预热至40℃的醋酸-醋酸钠缓冲液100mL。
3. 用精密pH试纸或pH计调节pH值至4.7。
4. 将上述悬浮液冷却至室温，离心15分钟，弃去清液，得到酪蛋白粗制品。
5. 用水洗涤沉淀3次，每次加入50mL水，离心10分钟，弃去上清液。
6. 在沉淀中加入30mL乙醇，搅拌，悬浊液转移至布氏漏斗中抽滤。
7. 用乙醇-乙醚混合液清洗沉淀2次，每次加入50mL混合液，离心10分钟，弃去上清液。
8. 最后用乙醚清洗沉淀2次，抽干。
9. 将沉淀风干，得到纯酪蛋白。
五、实验结果与分析通过上述实验步骤，我们成功从牛奶中提取了纯酪蛋白。
实验过程中，我们发现以下几点：1. 在调节pH值至4.7时，酪蛋白开始沉淀，此时溶液变得浑浊。
2. 离心过程中，酪蛋白沉淀逐渐沉淀到离心管底部。
3. 在洗涤过程中，沉淀物逐渐变得纯净，颜色由白色变为淡黄色。
4. 通过乙醇、乙醚洗涤，沉淀物进一步纯化，颜色变为淡黄色。
六、实验总结本次实验我们成功从牛奶中提取了纯酪蛋白，掌握了等电点沉淀法提取蛋白质的方法。
第二学期食品质量分析与检验实验
实验三酪蛋白的制备一、实验目的学习从牛乳中制备酪蛋白的原理和方法。
二、实验原理鲜乳中蛋白质的含量为3.4（W/V）%，但因地因时而异，蛋白质含量夏天最低，而秋冬季高。
牛乳总蛋白的80%为酪蛋白。
实际上酪蛋白是一些含磷蛋白质的混合物，等电点为4.6，利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的pH值调至4.6，酪蛋白就沉淀出来。
酪蛋白不溶于乙醇，利用这个性质用乙醇洗涤沉淀物从酪蛋白粗制品中除去脂类杂质。
三、实验材料和用具1、材料、试剂：鲜牛奶，95%乙醇，无水乙醚，0.2摩尔/升pH4.6醋酸-醋酸钠缓冲液，乙醇-乙醚混合液（1:1 V:V）2、仪器：恒温水浴，离心机，精密试纸，布氏漏斗，抽滤瓶，温度计，表面皿。
四、实验方法及操作步骤1、将20mLA牛乳放到50毫升烧杯中加热到40℃，在搅拌下慢慢加入预热到40℃的pH4.6的醋酸缓冲液20毫升，用精密pH试纸调pH至4.6；2、将上述悬浮液冷却至室温，5000转/分离心5分钟，弃去上清液，得酪蛋白粗制品；3、用无离子水洗涤沉淀3次，5000转/分离心5分钟，弃去上清液；在沉淀中加入20毫升95%乙醇，搅拌片刻，将全部旋浊液转移至布氏漏斗中抽滤4、用乙醇-乙醚混合液洗涤两次，最后用乙醚洗沉淀两次，抽干；5、将沉淀摊开在表面皿上，风干，得酪蛋白纯品；6、准确称量，计算含量和得率。
7、实训结果与分析含量：酪蛋白g/100毫升牛乳（g%）得率：测得含量/理论含量*100%，式中理论含量为3.4g/100毫升。
五、注意事项酪蛋白含量与季节有关，另外在热处理乳过程中也有一些乳清蛋白沉淀出来，其沉淀量依热处理条件不同而有差异，因此测定出来的酪蛋白值可能要高于相应的实际值或理论值。
六、思考题制备高产率纯酪蛋白的关键是什么？实验四卵磷脂的提取及鉴定一、实验目的掌握从卵黄中提取卵磷脂的方法并能够进行鉴定。
二、实验原理在卵黄中约含有10%的卵磷脂。
纯卵磷脂是白色块状物，不溶于水，易溶于乙醇、氯仿、乙醚和二硫化碳中，不溶于丙酮，利用这一性质可以与中性脂肪分离。
实验三 牛乳中酪蛋白的制备与鉴定
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二、实验原理
牛乳中主要的蛋白质是酪蛋白，含量约为 35g/L。酪蛋白是一些含磷蛋白质的混合物，等电 点为4.8。利用等电点时溶解度最低的原理，将牛 乳的pH调至4.8时，酪蛋白就沉淀出来。用乙醇洗 涤沉淀物，乙醚除去脂类杂质后便可得到纯的酪 蛋白。
二、实验原理
两分子尿素加热Leabharlann 180℃左右时，生成双缩脲6
四、实验步骤
1、酪蛋白的制备： （1）量取10mL牛奶置于25mL刻度试管中，水浴中加 热至40℃。在搅拌下慢慢加入10mL预热至40℃的乙酸-乙 酸钠缓冲液（pH4.6）。用精密试纸调pH值至4.8（可选择 1%氢氧化钠或10%乙酸溶液进行调整）。40℃保温10min， 使沉淀完全。 （ 2）将上述悬浮液冷却至室温。 2000r/min离心 5min ，
（6）准确称重，计算牛乳中酪蛋白含量（g/100mL）, 并与理论含量为3.5g/100mL牛乳相比较，求出实际得率。
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四、实验步骤
2、酪蛋白的溶解度鉴定： 取6支试管，分别加入蒸馏水、10%氯化钠、0.5%碳 酸钠、0.1mol/L氢氧化钠、0.2%盐酸及饱和氢氧化钙各 1mL。于每管中加入少量酪蛋白，不断摇荡，观察并记录
弃去上清液。
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四、实验步骤
1、酪蛋白的制备： （ 3 ）往沉淀物中加入 5mL 蒸馏水，混匀后 2000r/min 离心5min， 弃去上清液。 （ 4 ） 将 洗 净 的 沉 淀 物 加 入 3mL 无 水 乙 醇 ， 混 匀 后
2000r/min离心5min， 弃去上清液，得酪蛋白粗制品。
（ 5 ）将沉淀物全部摊开在已称过重的滤纸上，置于 25℃烘箱中烘干。
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五、实验结果、计算与分析
1、酪蛋白含量（g/mL）=酪蛋白g/10mL ×100%
牛奶酪蛋白实验报告
一、实验目的1. 学习从牛奶中提取酪蛋白的原理和方法。
2. 掌握等电点沉淀法提取蛋白质的操作步骤。
3. 了解蛋白质的颜色反应及其原理。
4. 鉴定提取的酪蛋白。
二、实验原理牛奶是一种复杂的胶体溶液，其中含有多种蛋白质，其中酪蛋白是其主要成分之一。
酪蛋白是一种含磷蛋白质，其等电点为4.7。
在等电点时，酪蛋白的溶解度最低，因此可以通过调节牛奶的pH值至等电点，使酪蛋白沉淀出来。
此外，蛋白质具有多种颜色反应，如缩二脲反应、蛋白黄色反应和茚三酮反应等，可以通过这些反应来鉴定蛋白质。
三、实验材料与试剂1. 实验材料：新鲜牛奶、脱脂牛奶、离心机、烧杯、温度计、pH计、精密pH试纸等。
2. 实验试剂：95%乙醇、无水乙醚、0.2mol/L pH4.7醋酸-醋酸钠缓冲液、稀醋酸溶液、硝酸等。
四、实验步骤1. 酪蛋白的提取（1）取50mL脱脂牛奶于150mL烧杯中。
（2）用热水浴加热至40℃，维持此温度，边搅拌边加入稀醋酸溶液约2mL，观察现象。
（3）继续搅拌并使悬浊液冷却至室温。
（4）将混合物转入离心杯中，于3000r/min离心15min。
（5）离心完毕后，弃去清液，得到酪蛋白粗制品。
2. 酪蛋白的纯化（1）将酪蛋白粗制品用水洗涤3次，离心10min，弃去上清液。
（2）在沉淀中加入30mL乙醇，搅拌。
（3）将悬浊液转移至布氏漏斗中抽滤。
（4）用乙醇-乙醚混合液清洗沉淀2次。
（5）最后用乙醚清洗沉淀2次，抽干。
3. 酪蛋白的鉴定（1）缩二脲反应：取少量酪蛋白沉淀，加入适量的Cu2+溶液，观察颜色变化。
（2）蛋白黄色反应：取少量酪蛋白沉淀，加入适量的硝酸，加热，观察颜色变化。
（3）茚三酮反应：取少量酪蛋白沉淀，加入适量的茚三酮，共热，观察颜色变化。
五、实验结果与分析1. 酪蛋白的提取：在实验过程中，观察到牛奶中加入稀醋酸溶液后，出现白色沉淀，表明酪蛋白已经沉淀出来。
2. 酪蛋白的纯化：通过乙醇洗涤、抽滤和乙醚洗涤，得到较为纯净的酪蛋白沉淀。
酪蛋白的提取与测定
牛乳中酪蛋白的制备与浓度测定一、实验目的1、学习从牛乳中分离酪蛋白的原理和方法2、掌握等电点沉淀法提取蛋白质的方法3、了解紫外吸收法测定蛋白质浓度的原理，熟悉紫外分光光度计的使用4、学会用考马斯亮蓝结合法测定蛋白质浓度二、实验原理1、准备酪蛋白原理：牛乳中主要含有酪蛋白和乳清蛋白两种蛋白质，其中酪蛋白占了牛乳蛋白质的80%。
牛乳在PH4.7时酪蛋白等电聚沉后剩余的蛋白质统称为乳清蛋白。
酪蛋白是白色、无味的物质，不溶于水、乙醇等有机溶剂，但溶于碱溶液。
乳清蛋白不同于酪蛋白，其粒子的水和能力很强，分散性高，在乳中呈高分子状态。
本法利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的PH调至4.7时，酪蛋白就沉淀出来。
用乙醇洗涤沉淀物，除去脂类杂质后便可得到纯的酪蛋白。
2、紫外吸收法测定蛋白质浓度的原理：大多数蛋白质由于有酷氨酸和色氨酸的存在，在紫外光280nm有吸收高峰，可以进行蛋白质含量的测定。
但是核酸在280nm也有吸收，干扰测定，不过核酸的最大吸收峰在260nm，通过测定在280nm和260nm时A的比值，然后通过计算消除核酸存在的影响，可以求得有核酸存在时蛋白质的浓度。
3、考马斯亮蓝结合法测定蛋白质浓度原理：考马斯亮蓝能与蛋白质的疏水微区相结合，这种结合具有高敏感性。
考马斯亮蓝G250的磷酸溶液呈棕红色，最大吸收峰在465nm。
当它与蛋白质结合形成复合物时呈蓝色，其最大吸收峰改变为595nm，考马斯亮蓝G250—蛋白质复合物的高消光效应导致了蛋白质定量测定的高敏感度。
在一定范围内，考马斯亮蓝G250—蛋白质复合物呈色后，在595nm下，吸光度与蛋白质含量呈线性关系，故可以用于蛋白质浓度的测定。
三、实验器材与试剂1、制备酪蛋白：烧杯、玻璃棒、量筒、精密PH试纸、离心机、布氏漏斗、表面皿、恒温水浴锅牛奶、醋酸缓冲液、冰醋酸、95%乙醇、无水乙醚2、紫外光吸收法：紫外可见光分光光度计、容量瓶50ml(×1)、石英比色皿0.9%NaCl、1mol/LNaOH溶液、1mol/L乙酸溶液3、考马斯亮蓝法：紫外可见光分光光度计、试管1.5cm×15cm(×9)、玻璃比色皿牛血清白蛋白（0.1mg/ml）、考马斯亮蓝、0.9%NaCl四、实验步骤制备酪蛋白1、将20mL pH4.7的醋酸-醋酸钠缓冲液预热至40℃2、将20mL牛奶加热至40℃，在搅拌下缓慢地加入20mL预热的pH4.7的醋酸-醋酸钠缓冲液3、用精密pH试纸调pH至4.7，可见溶液变为乳白色悬浮液4、待悬浮液冷却至室温，4000rpm离心5min，弃上清，得酪蛋白粗制品5、用蒸馏水洗沉淀3次，3000rpm离心5min，弃上清6、在沉淀中加入20mL95％乙醇，搅拌片刻，将全部悬浊液转移至布氏漏斗中抽滤7、用乙醇-乙醚混合液洗涤沉淀2次（10ml/次），最后用乙醚洗涤沉淀2次（10ml/次），抽干8、将沉淀摊开在表面皿上，风干，得酪蛋白纯品9、准确称量，计算含量和得率紫外光吸收法1．取待测样品溶液置于的石英比色皿中，于分光光度计波长280nm和260nm，分别读取A280nm和A260nm，用生理盐水为比色空白对照。
牛乳中酪蛋白的制备
操作方法
1．将25mL牛奶加热至40℃。在搅拌下慢慢加入预热至40℃、 醋酸缓冲液25mL。用精密试纸调pH。
2. 将上述悬浮液冷却至室温。离心10min(3000r/min)弃 去上清液，得酪蛋白粗制品。
3．用水洗沉淀两次，离心5min(3000r/min)，弃去上清液。
3．用乙醇洗沉淀1次，离心5min(3000r/min)，弃去上清 液。用乙醇—乙醚混合液洗沉淀1次。最后用乙醚洗沉淀1次， 各离心5min(3000r/min) 。
离心10min(3000r/min)弃去上清液，得酪蛋白粗制品。
95%乙醇；乙醇—乙醚混合液 实验七 牛乳中酪蛋白的制备
g/100mL牛乳相比较，求出实际得率。
(V/V=1∶1);无水乙醚
实验七 目的要求 学习从牛乳中分离纯化酪蛋白的原理和方法。
醋酸—醋酸钠缓冲液 利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的pH调至4.
纯牛奶(蒙牛) 牛乳中主要的蛋白质是酪蛋白，含量约为35g/L。
在搅拌下慢慢加入预热至40℃、醋酸缓冲液25mL。
目的要求 学习从牛乳中分离纯化酪蛋白的原理和方法。
用乙醇—乙醚混合液洗沉淀1次。
目的要求 学习从牛乳中分离纯化酪蛋白的原理和方法。
将上述悬浮液冷却至室温。
牛乳中主要的蛋白质是酪蛋白，含量约为35g/L。
4．将沉淀摊开在表面皿上，风干；得酪蛋白纯品。
5．准确称重，计算含量酪蛋白g/100mL牛乳（g%）,并和 g/100mL牛乳相比较，求出实际得率。
思考题
1．制备高产率纯酪蛋白的关键是什么？
谢谢观看
试剂和器材
5．准确称重，计算含量酪蛋白g/100mL牛乳（g%）,并和
3．用水洗沉淀两次，离心5min(3000r/min)，弃去上清液。
牛乳中酪蛋白的制备
目的要求
学习从牛乳中分离纯化酪蛋白的原理和方法。
实验原理
牛乳中主要的蛋白质是酪蛋白，含量约为35g/L。 35g/L 牛乳中主要的蛋白质是酪蛋白 ， 含量约为 35 g/L。 酪蛋白是一些含磷蛋白质的混合物 等电点为4 混合物， 酪蛋白是一些含磷蛋白质的混合物，等电点为4.7。 利用等电点时溶解度最低的原理， 将牛乳的pH pH调至 利用等电点时溶解度最低的原理 ， 将牛乳的 pH 调至 酪蛋白就沉淀出来。 4.7时，酪蛋白就沉淀出来。
离心注意事项： 离心注意事项：
1.样品倒入玻璃离心管不能太满； 1.样品倒入玻璃离心管不能太满； 样品倒入玻璃离心管不能太满
2.离心前玻璃离心管（套上塑料管套） 2.离心前玻璃离心管（套上塑料管套）放在 离心前玻璃离心管 天平上平衡 平衡好 天平上平衡好； 3.离心机中对称放置； 3.离心机中对称放置； 离心机中对称放置 4.接通电源前确认速度旋钮是否归零， 4.接通电源前确认速度旋钮是否归零，调节 接通电源前确认速度旋钮是否归零 定时旋钮设定时间，按开始键开始离心， 定时旋钮设定时间，按开始键开始离心， 缓慢调节速度至实际需要速度。 缓慢调节速度至实际需要速度。 5.等到离心机完全停止后，机盖取出离心管。 5.等到离心机完全停止后，机盖取出离心管。 等到离心机完全停止后
4．用95%乙醇洗沉淀1次，离心5min(3000r/min)，弃去上 95%乙醇洗沉淀1 乙醇洗沉淀 离心5min(3000r/min)， 清液。用乙醇—乙醚混合液洗沉淀1 最后用乙醚洗沉淀1 清液。用乙醇—乙醚混合液洗沉淀1次。最后用乙醚洗沉淀1 各离心5 洗涤试剂用量4毫升/ 次， 各离心5min(3000r/min) 。洗涤试剂用量4毫升/管 5．将沉淀摊开在培养皿上，电吹风吹干；得酪蛋白纯品。 将沉淀摊开在培养皿上，电吹风吹干；得酪蛋白纯品。 6．准确称重，计算含量酪蛋白g/100mL牛乳（g%）,并和 准确称重，计算含量酪蛋白g/100mL牛乳（g%） g/100mL牛乳 理论含量为3.5g/100mL牛乳相比较，求出实际得率。 理论含量为3.5g/100mL牛乳相比较，求出实际得率。 3.5g/100mL牛乳相比较
综合实验-几种乳制品中酪蛋白和乳糖的制备与鉴定(生化实验2)修改
乳制品中的糖主要是乳糖。乳糖是一种二糖，由 D半乳糖分子与 D- 葡萄糖分子通过 β-1,4 糖苷键连接而成。 乳糖不溶于乙醇，但乙醇混入乳糖水溶液中，乳糖就会结 晶出来，从而达到分离的目的。
三种品牌牛奶中酪蛋白和乳糖的制备与鉴定
3. 器材与试剂
三种品牌牛奶、电炉、温度计、pH计、离心机、离心 管、抽滤装置、表面皿(或一次性培养皿)、分析天平(万分 之一 ) 、恒温水浴锅、蒸发皿、烧杯、量筒、试管、吸管。 0.2 mol/L pH 4.7的醋酸(NaAc-HAc)缓冲液、冰醋酸、 CaCO3粉末、95%乙醇、0.9% NaCl溶液、茚三酮溶液、 10% NaOH溶液、1% CuSO4溶液、浓硝酸、本尼迪试剂。
三种品牌牛奶中酪蛋白和乳糖的制备与鉴定
1. 实验目的
学习从牛奶中分离酪蛋白和乳糖的原理；
掌握等电点沉淀法提取蛋白质的方法； 学习常用蛋白质和乳糖的鉴定方法。
2. 实验原理
乳制品中主要含有酪蛋白和乳清蛋白两种蛋白质， 其中酪蛋白占了其蛋白质总量的 80%。乳制品在pH4.7时 酪蛋白等电聚沉后剩余的蛋白质统称为乳清蛋白。酪蛋白 是白色、无味的物质，不溶于水、乙醇等有机溶剂，但溶 于碱溶液。乳清蛋白不同于酪蛋白，其粒子的水合能力强， 分散性高，在乳中呈高分子状态。 本实验利用等电点时溶解度最低的原理，将乳制品 的pH调至4.7时，酪蛋白就沉淀出来。用乙醇洗涤沉淀物， 除去脂类杂质后便可得到纯的酪蛋白。
（冰箱），让乳糖充分结晶。
（3）酪蛋白的含量测定、鉴定和乳糖晶体收集：
酪蛋白完全干燥后准确称重，计算酪蛋白含量（g/100mL牛奶）。
取0.20 g酪蛋白颗粒于烧杯中，加入NaCl溶液12 mL溶解。 取4 mL酪蛋白溶液（试管），加入茚三酮溶液约1 mL，振荡，放入 沸水浴（烧杯）中加热2-3 min，观察溶液颜色变化（茚三酮反应：所有 氨基酸及具有游离α-氨基和α-羧基的肽与茚三酮反应都产生蓝紫色物质， 只有脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮反应产生（亮）黄色物质）。 取4 mL酪蛋白溶液（试管），加入10% NaOH溶液0.8 mL后，滴入 1% CuSO4溶液，振荡，观察溶液颜色变化（双缩脲反应：含有两个以 上肽键的多肽，具有与双缩脲相似的结构特点，能与碱性硫酸铜发生双 缩脲反应，生成紫红色或蓝紫色络合物）。 取4 mL酪蛋白溶液（试管），加入浓硝酸0.8 mL后加热（沸水浴）， 观察现象，再加入10% NaOH溶液0.8 mL，观察现象（黄色反应：含有 苯环结构的氨基酸，如酪氨酸等遇硝酸后，可被硝化成黄色物质）。 过滤（或抽滤）收集乳糖晶体，并用冷的95%乙醇洗涤晶体，干燥 2 d。
牛奶中酪蛋白含量的测定
在等电点时，蛋白质分子以两性离子形式存在，其分子净电荷为零(即正负 电荷相等)，此时蛋白质分子颗粒在溶液中因没有相同电荷的相互排斥，分子相 互之间的作用力减弱，其颗粒极易碰撞、凝聚而产生沉淀，所以蛋白质在等电点 时，其溶解度最小，最易形成沉淀物。酪蛋白的等电点为左右（不同结构的酪蛋 白等电点有所不同），本实验中将牛乳的 pH 调值时，酪蛋白就沉淀出来。
称取的酪蛋白样品质量为，稀释倍数为 500 倍。 =
=%
五、误差分析与讨论
1、本次制备实验中得到的蛋白质量较多，但纯度较低，分析原因如下： 1）得到的蛋白质略呈黄色，且有些发粘，说明可能脱脂不彻底，蛋白质产品中 含有脂质。 2）考马斯亮蓝 G520 染液中有沉淀，最后影响考马斯亮蓝-蛋白质复合物溶液的 吸光度。 3）配制标准溶液时操作上可能有误差，如往试管中加入溶液时挂在管壁，且最 终也没有与下方溶液混合均匀，导致标准溶液的浓度可能不准，致使标准曲线不 准，数据处理时也发现数据线性并不好，尤其是浓度较大时，虽然可能是超出考 马斯蓝线性范围，但不能排除操作失误的可能。 2、注意事项
1）试管提前一周清洗干净并晾干，否则制作标准曲线时无法保证各管浓度。并 且不干净的试管在加溶液时容易挂管壁，不利于控制标准蛋白液浓度。 2）在配制不同浓度标准蛋白液时，各组分的体积要准确移取，特别是量较少的 标准蛋白液，只要稍微洒出一点就会导致较大的相对误差 3）蛋白质粗品的洗涤一定要按照规范做，每一次离心洗涤时要将搅匀，在布氏 漏斗上洗涤时要先微接抽气管，待洗出液缓慢流出后，再接紧橡皮管抽干。
酪蛋白的制备实验报告
酪蛋白的制备实验报告摘要本实验旨在探究酪蛋白的制备方法以及酪蛋白的功能。
通过不同的制备方法，得到不同形态的酪蛋白，并进行生化实验来验证其功能。
实验结果表明，通过不同方法制备的酪蛋白在功能上存在差异，且不同形态的酪蛋白具有不同的功能。
关键词：酪蛋白；制备方法；功能一、引言酪蛋白是牛乳中含量最多的蛋白质，为一种水溶性球形蛋白。
酪蛋白由几种不同的蛋白质组成，其中酪蛋白α和酪蛋白β为主要成分。
酪蛋白具有多种生物功能，如维持皮肤、毛发和指甲的健康，促进骨骼健康等。
因此，研究酪蛋白的制备方法以及其功能对于了解酪蛋白的生物学作用具有重要意义。
二、实验材料1.牛乳；2.酶（胃酸、胰蛋白酶）；3.氨基酸检测试剂盒；4.凝胶电泳试剂盒。
三、实验方法1.酸酶法制备酪蛋白（酪蛋白A）将1L牛乳加热至80°C，加入5mL1M HCl调节pH至4.6左右，搅拌30min。
冷却至室温后放置静置3h，用100μm滤网过滤得到酸性乳清。
乳清加入2mg/mL胃蛋白酶，在37°C下水浴搅拌4h，定时加酸至pH4.0，继续处理1h。
取出混浊的酪蛋白A沉淀；通过离心或过滤等方法，得到纯化后的酪蛋白A。
3.生化实验将纯化后的酪蛋白A和酪蛋白B溶解至同一浓度，进行氨基酸含量测定，比较两者的差异。
将酪蛋白A和酪蛋白B进行凝胶电泳，观察两者的分子量和运动轨迹的差异。
四、实验结果通过酸酶法制备的酪蛋白A表现为曲线状纤维丝状，胰蛋白酶法制备的酪蛋白B为球状结晶状，两者的形态差异明显。
通过氨基酸含量分析发现，酪蛋白A中含有较高含量的脯氨酸和苯丙氨酸，而酪蛋白B中则含有较高含量的谷氨酸和组氨酸。
凝胶电泳结果显示，酪蛋白A分子量大于酪蛋白B，且两者的运动轨迹存在明显差异。
五、实验讨论通过不同的制备方法制备的酪蛋白形态、氨基酸组成和分子量存在差异，这些差异可能影响酪蛋白的生物学作用。
例如，酪蛋白A中较高的脯氨酸和苯丙氨酸含量可能与其维持皮肤、毛发和指甲的健康有关。
酪蛋白的制备
实验45 酪蛋白的制备一、实验目的掌握从牛乳中制备酪蛋白的原理和方法。
二、实验原理酪蛋白是牛乳中主要的蛋白质，它在牛乳中的含量约为每升35克。
实际上酪蛋白不是一种简单的蛋白质，而是一些含磷蛋白的混合物，酪蛋白在其等电点时溶解很低，利用这一性质，将牛乳调到PH4.8，酪蛋白就可以从牛乳中分离出来。
酪蛋白不溶于乙醇，可利用此性质从酪蛋白粗制剂中除去脂类杂质。
三、实验试剂与材料仪器（一）试剂1.牛乳2.醋酸钠缓冲液0.2M，PH4.63.乙醇（AR）95％4.乙醚（）AR5.乙醇-乙醚混合液（1：1体积比）（二）仪器1.1000C温度计；2.电炉；3.细布；4.玻璃大漏斗；5.布氏漏斗（5mm）；6.抽滤瓶(250ml);7.烧杯(500ml、100ml各一只)；8.PH试纸活酸度计；9.量筒(500ml、100ml各一只)；10.表面皿一块，玻棒一根；11.容量瓶(500ml一只)；12.托盘天平；13.分析天平；14.研钵一套（￠9cm）；15.离心机4000转/分；16.冰箱。
四、实验方法1.将100ml牛乳放到500ml烧杯中，加热到40℃，水浴控温。
再在搅拌下慢慢加入100ml 40℃左右醋酸缓冲溶液，调pH4.8左右，冷却至室温，（放至5分钟用细布过滤，收集沉淀）得酪蛋白粗品。
2.用蒸馏水洗去沉淀三次（每次30ml左右）。
搅碎离心10分钟，（3000转/分），弃去上清液。
3.将沉淀置于研钵中，渐加30毫升95%乙醇，静置片刻将此悬浮液倾于布氏漏斗中，抽滤，抽干后的制品移于小烧杯中，用乙醇-乙醚混合液洗二次（每次20毫升，洗一次，抽一次）最后用无水乙醚洗沉淀两次（每次10-20毫升），抽干。
4．将沉淀从布氏漏斗中移出，摊于表面皿上，烘干，得酪蛋白纯品。
5.称重计算含量和得率。
含量：酪蛋白克/100毫升牛奶（克%）得率：测得含量/理论含量×100%五.思考题1.等电点沉淀蛋白质的原理是什么？2.如果不用PH酸度计，用更简单的方法本实验是否也能进行？。
酪蛋白制作实验报告
一、实验目的1. 了解酪蛋白的来源和性质。
2. 掌握从牛奶中提取酪蛋白的原理和方法。
3. 熟悉等电点沉淀法提取蛋白质的实验操作。
二、实验原理酪蛋白是牛奶中主要的蛋白质，含量约为35g/L。
酪蛋白是一种含磷蛋白质的混合物，其等电点为4.7。
在等电点时，酪蛋白的溶解度最低，容易从溶液中沉淀出来。
通过调节牛奶的pH值至酪蛋白的等电点，使酪蛋白沉淀，然后进行离心、洗涤、干燥等步骤，可以得到纯酪蛋白。
三、实验材料与试剂1. 材料：新鲜牛奶2. 试剂：95%乙醇、无水乙醚、0.2mol/L pH4.7醋酸-醋酸钠缓冲液3. 器具：离心机、抽滤装置、精密pH试纸或酸度计、电炉、烧杯、温度计四、实验步骤1. 酪蛋白粗提（1）取100mL新鲜牛奶，加热至40℃。
（2）在搅拌下，缓慢加入预热至40℃的0.2mol/L pH4.7醋酸-醋酸钠缓冲液100mL。
（3）用精密pH试纸或酸度计调节pH值至4.7。
（4）将混合液冷却至室温，离心15分钟。
（5）弃去清液，得到酪蛋白粗制品。
2. 酪蛋白纯化（1）用水洗涤沉淀3次，离心10分钟，弃去上清液。
（2）在沉淀中加入30mL 95%乙醇，搅拌。
（3）将悬浊液转移至布氏漏斗中抽滤。
（4）用乙醇-乙醚混合液清洗沉淀2次。
（5）最后用乙醚清洗沉淀2次，抽干。
五、实验结果与分析通过上述实验步骤，成功从牛奶中提取了酪蛋白。
实验过程中，观察到以下现象：1. 当pH值调节至4.7时，酪蛋白开始沉淀。
2. 经过离心、洗涤、干燥等步骤，得到纯酪蛋白。
六、实验结论1. 本实验成功从牛奶中提取了酪蛋白，证明了等电点沉淀法提取蛋白质的可行性。
2. 通过实验，掌握了酪蛋白的制备原理和实验操作方法。
3. 酪蛋白是一种重要的蛋白质资源，具有广泛的应用前景。
七、实验注意事项1. 在实验过程中，注意保持实验环境的清洁，避免污染。
2. 调节pH值时，应缓慢加入酸碱溶液，避免剧烈反应。
3. 离心速度不宜过快，以免损坏离心机。
酪蛋白的制备实验报告
酪蛋白的制备实验报告酪蛋白的制备实验报告一、引言酪蛋白是一种重要的蛋白质，在食品工业、医药领域和生物科学研究中都具有广泛的应用价值。
本实验旨在通过酪蛋白的制备过程，了解其制备原理和方法，并探究实验条件对酪蛋白产率的影响。
二、实验材料与方法1. 实验材料：- 牛乳：新鲜牛乳1000ml- 醋酸：纯醋酸100ml- 酪蛋白试剂：酪蛋白提取试剂盒2. 实验方法：- 步骤一：将1000ml牛乳倒入锅中，加热至80℃，保持温度10分钟。
- 步骤二：将100ml纯醋酸加入牛乳中，搅拌均匀。
- 步骤三：将混合液静置20分钟，待凝块形成。
- 步骤四：用纱布过滤凝块，收集蛋白质沉淀。
- 步骤五：将沉淀与酪蛋白试剂按比例混合，制备酪蛋白溶液。
三、实验结果与分析1. 实验结果：- 经过实验操作，成功制备了酪蛋白溶液。
- 蛋白质沉淀的收率为40%。
2. 实验分析：- 在实验过程中，加热牛乳能够破坏脂肪膜，使蛋白质易于析出。
- 醋酸的加入能够改变牛乳的酸碱度，促使酪蛋白凝聚成块。
- 过滤凝块时使用纱布能够有效分离酪蛋白沉淀与乳清。
四、实验讨论1. 实验条件对酪蛋白产率的影响：- 温度：在80℃下加热牛乳能够促进蛋白质的析出，但过高的温度会导致蛋白质变性，影响产率。
- 酸度：适量的醋酸能够使酪蛋白凝聚成块，但过多的醋酸会使酪蛋白溶解度增加，降低产率。
- 时间：静置时间过短，酪蛋白凝块未充分形成；静置时间过长，酪蛋白易被细菌污染，影响产率。
2. 酪蛋白的应用价值：- 食品工业：酪蛋白可用于制作乳制品、奶酪、酸奶等，增加产品的营养价值和口感。
- 医药领域：酪蛋白具有抗菌、抗炎、抗氧化等生物活性，可用于药物载体和医用材料的制备。
- 生物科学研究：酪蛋白在细胞培养、基因工程和生物学实验中具有重要作用，可用于细胞培养基的配方和蛋白质分离纯化。
五、实验总结通过本次实验，我们成功制备了酪蛋白溶液，并了解了酪蛋白的制备原理和方法。
实验条件对酪蛋白产率有一定影响，需要在适宜的温度、酸度和时间下进行操作。
牛乳中酪蛋白的制备实验报告
牛乳中酪蛋白的制备实验报告实验目的：掌握牛乳中酪蛋白的制备方法。
实验原理：牛乳中含有丰富的酪蛋白，可以通过调节pH值和添加酸性物质来使酪蛋白凝聚并沉淀。
实验器材与试剂：1. 牛乳2. 醋酸或柠檬汁3. pH试纸4. 试管或锥形瓶5. 酒精灯或电热板6. 离心机或漏斗和滤纸7. pH调节剂实验步骤：1. 取适量的牛乳倒入试管或锥形瓶中。
2. 添加少量的pH调节剂（醋酸或柠檬汁），同时观察试管中的液体颜色变化。
3. 使用pH试纸检测试管中的pH值，确保其达到需要的酸性条件。
4. 将试管（或锥形瓶）置于酒精灯或电热板上加热，加热至牛乳开始沸腾。
5. 烧热约5分钟后，关闭酒精灯或电热板，待试管中的液体冷却至室温。
6. 可选择使用离心机进行离心，或者使用漏斗和滤纸将液体过滤，得到沉淀。
7. 将沉淀储存在干燥的容器中，即可得到制备好的酪蛋白。
实验结果与分析：根据实验操作可以得到一定量的酪蛋白沉淀。
如果沉淀量较少，可能是因为pH值的调节不当或加热时间过短导致酪蛋白无法充分凝聚。
实验注意事项：1. 操作过程中要注意使用酒精灯或电热板时的安全问题，避免发生火灾或烫伤。
2. 操作时要注意保持试管或锥形瓶的干净，以避免其他杂质对实验结果的影响。
3. 在添加pH调节剂时应慎重，防止pH值过低或过高的情况发生。
4. 在离心或过滤沉淀时，要注意避免将沉淀溅出或损坏滤纸。
实验总结：通过本实验，我们成功地制备了牛乳中的酪蛋白。
实验的成功与否与调节pH值的准确性和加热时间的充分性有关。
这个实验方法可以用于其他酪蛋白的制备和分离过程中。
牛乳酪蛋白提取
牛乳酪蛋白提取综合实验：从牛奶中分离乳脂、酪蛋白和乳糖一、引言牛奶约含有3.4％乳脂，经离心就可上浮，撇出乳脂层可加工奶油，剩余的即脱脂乳，可用于分离酪蛋白和乳糖。
牛奶中主要的蛋白质是酪蛋白，含量约为35g/L。
酪蛋白在乳中是以酪蛋白酸钙-磷酸钙复合体胶粒存在，胶粒直径约为20～800 纳米，平均为100 纳米。
在酸或凝乳酶的作用下酪蛋白会沉淀，加工后可制得干酪或干酪素。
本实验利用加酸，当达到酪蛋白等电点pH=4.6 时，酪蛋白沉淀。
脱脂乳中除去酪蛋白后剩下的液体为乳清，在乳清中含有乳白蛋白和乳球蛋白，还有溶解状态的乳糖，乳中糖类的99.8%以上是乳糖，可通过浓缩、结晶制取乳糖。
二、实验材料和试剂1．新鲜牛奶。
2．试剂：10%醋酸，95%乙醇，乙醚，碳酸钙，5%醋酸铅溶液，10%氯化钠，0.5%碳酸钠，0.1mol/L，氢氧化钠，0.2%盐酸，饱和氢氧化钙溶液，米伦试剂。
米伦试剂的配制：将汞100g 溶于140ml(密度1.42)的浓硝酸中(在通风橱内进行)。
然后加两倍量的蒸馏水稀释。
三、实验步骤1. 从牛奶中分离乳脂及转变为奶油取20 mL新鲜牛奶，于普通生化离心机上3500rpm 离心5分钟，取出离心管后，小心将乳脂层与脱脂乳分离，将乳脂层冻结，然后回放到室温下，将要重新融化前，快速搅动使脂肪球膜破裂以及脂肪球膜蛋白变性，倾出释放出的少量水后，继续搅动形成油包水式的奶油。
称量后计算得率。
2. 从牛奶中分离酪蛋白将脱脂乳在恒温水浴中加热至40℃,边轻轻搅拌边慢慢加入10%醋酸溶液,使牛奶pH = 4. 7,放置冷却、澄清后,用尼龙布过滤或直接用玻璃棒挑出酪蛋白粗品。
滤液（乳清）留作乳糖的分离。
将酪蛋白粗品转入另一烧杯，加20ml蒸馏水，用玻棒充分搅拌，洗涤除去其中的水溶性杂质（如乳清蛋白，乳糖以及残留的缓冲溶液），离心后弃去上层液，加15ml乙醇，洗涤除去其中的磷脂，离心后弃去上层液，加15ml乙醚洗涤除去其中的脂肪, 离心后弃去上层液，待酪蛋白充分干燥后称量其重量,并计算酪蛋白的得率。
[精品]牛奶中酪蛋白和乳糖的分离和鉴定
![[精品]牛奶中酪蛋白和乳糖的分离和鉴定](https://img.taocdn.com/s3/m/e99846f459f5f61fb7360b4c2e3f5727a5e924f7.png)
[精品]牛奶中酪蛋白和乳糖的分离和鉴定随着牛奶的广泛应用，对其中成分的研究越来越深入。
牛奶的主要成分包括蛋白质、乳糖、脂肪、微量元素等。
其中，蛋白质和乳糖是牛奶中的两个主要成分。
酪蛋白是牛奶中主要的蛋白质成分，而乳糖则是牛奶中独有的糖类成分。
本实验将介绍利用离心、沉淀、超滤和染色等技术，对牛奶中的酪蛋白和乳糖进行分离和鉴定的方法。
实验仪器：1. 离心机2. 沉淀管3. 超滤膜4. 热水浴5. 真空干燥装置6. 过滤纸7. 比色皿8. 比色计实验步骤：1. 样品制备取1 mL 牛奶放入离心管中，加入2 mL 85% 硫酸滴定至沉淀产生。
将沉淀离心5 min，弃去上清液，残留物称量并记录。
2. 酸解将沉淀物加入50 mL 的0.025 mol/L HCl 溶液中，放在水浴中煮沸10 min，冷却后过滤。
3. 超滤将过滤液倒入超滤装置中，以15000 rpm 的速度离心10 min，除去上清液。
4. 分离将上一步得到的膜筒用0.1 mol/L NaOH 溶液洗涤后插入新的容器中，加入适量纯水，以 5000 rpm 的速度离心10 min，除去洗涤液。
重复以上步骤，直到洗涤液 pH 值为7。
5. 紫外吸收分析取得样品过滤液后，比色皿中加入2 mL 样品和5 mL 乙醇，然后进行紫外吸收分析，记录吸收峰的波长。
结果分析：1. 酪蛋白的分离通过离心、沉淀和酸解等步骤，可将牛奶中的酪蛋白分离出来。
通过超滤和洗涤等步骤，可以得到纯的酪蛋白。
3. 酪蛋白和乳糖的鉴定通过紫外吸收分析，记录吸收峰的波长，可以鉴定出样品中酪蛋白和乳糖的含量。
总之，通过离心、沉淀、超滤和染色等技术，可以对牛奶中的酪蛋白和乳糖进行有效的分离和鉴定，提高对牛奶成分的认知。
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结合生成紫红色化合物，此反应称为双缩脲反应。
二、实验原理
蛋白质分子中有肽键，其结构与双缩脲相似，
也能发生此反应，因此该反应可用于蛋白质的定
性或定量测定。
N 端 C 端
三、仪器和试剂
1、仪器： 恒温水浴锅、低速离心机、电子天平、酒精灯等。
2、试剂：
乙酸-乙酸钠缓冲液（pH4.6）、1%氢氧化钠、 10%乙酸、蒸馏水、无水乙醇、10%氯化钠、0.5%碳 酸钠、0.1mol/L氢氧化钠、0.2%盐酸、饱和氢氧化钙、 尿素、10%氢氧化钠、1%硫酸铜。
2
二、实验原理
牛乳中主要的蛋白质是酪蛋白，含量约为 35g/L。酪蛋白是一些含磷蛋白质的混合物，等电 点为4.8。利用等电点时溶解度最低的原理，将牛 乳的pH调至4.8时，酪蛋白就沉淀出来。用乙醇洗 涤沉淀物，乙醚除去脂类杂质后便可得到纯的酪 蛋白。
二、实验原理
两分子尿素加热到180℃左右时，生成双缩脲
10
五、实验结果、计算与分析
1、酪蛋白含量（g/mL）=酪蛋白g/10mL ×100%
2、酪蛋白得率=测定含量/理论含量×100%
3、酪蛋白溶于哪些溶液？ 4、酪蛋白的双缩脲反应分析。
11
12
六、思考题
1、为什么调整溶液的pH值可以将酪蛋白沉淀 出来？
2、氨基酸是否能发生双缩脲反应Байду номын сангаас为什么？
13
实验三 牛乳中酪蛋白的制备与鉴定
温馨提示：请将教室水浴锅打开，温度调至
40℃。并将乙酸-乙酸钠缓冲液（1瓶/室）放入水
浴锅内，预热至40℃。
1
一、实验目的
（1）学习从牛乳中制备酪蛋白的方法。 （2）了解从牛奶中制取酪蛋白的原理。 （3）验证蛋白质的双缩脲反应性质。 （4）学习和掌握蛋白质双缩脲反应的原理和方法。
各管中酪蛋白的溶解度。
9
四、实验步骤
3、酪蛋白的颜色反应（双缩脲反应）： 取少量尿素结晶，放入干燥的试管，微火加热使尿素熔
化，熔化的尿素开始硬化时停止加热，尿素放出氮，形成双 缩脲。冷却后，加入1mL 10％NaOH溶液，振荡混匀，再加 入数滴 1％CuSO4溶液，振荡，观察实验现象。（此步骤由 教师演示。） 向另一支试管中加入少量酪蛋白溶液，加入 2mL 10％ NaOH溶液，摇匀，再加入数滴1％CuSO4溶液，随加随摇， 观察实验现象。
6
四、实验步骤
1、酪蛋白的制备： （1）量取10mL牛奶置于25mL刻度试管中，水浴中加 热至40℃。在搅拌下慢慢加入10mL预热至40℃的乙酸-乙 酸钠缓冲液（pH4.6）。用精密试纸调pH值至4.8（可选择 1%氢氧化钠或10%乙酸溶液进行调整）。40℃保温10min， 使沉淀完全。 （ 2）将上述悬浮液冷却至室温。 2000r/min离心 5min ，
弃去上清液。
7
四、实验步骤
1、酪蛋白的制备： （ 3 ）往沉淀物中加入 5mL 蒸馏水，混匀后 2000r/min 离心5min， 弃去上清液。 （ 4 ） 将 洗 净 的 沉 淀 物 加 入 3mL 无 水 乙 醇 ， 混 匀 后
2000r/min离心5min， 弃去上清液，得酪蛋白粗制品。
（ 5 ）将沉淀物全部摊开在已称过重的滤纸上，置于 25℃烘箱中烘干。
（6）准确称重，计算牛乳中酪蛋白含量（g/100mL）, 并与理论含量为3.5g/100mL牛乳相比较，求出实际得率。
8
四、实验步骤
2、酪蛋白的溶解度鉴定： 取6支试管，分别加入蒸馏水、10%氯化钠、0.5%碳 酸钠、0.1mol/L氢氧化钠、0.2%盐酸及饱和氢氧化钙各 1mL。于每管中加入少量酪蛋白，不断摇荡，观察并记录