血液生理特性的测定

2.采血
用5ml移液管吸取3.98ml红细胞稀释液并放入小试管中备用。
拔去应注射部位的被毛，用75%的酒精棉球消毒兔耳外缘静脉，用左手的食指和中指夹住耳缘静脉近心端，并用左手拇指固定兔耳。待耳缘静脉充血后，用针刺破血管，让血自然流出。
3.稀释
擦去第一滴血后，用一次性毛细血管取20ul血，轻轻吹入盛有红细胞稀释液的试管底部，并用上清液洗毛细血管2至3次，轻摇试管2min
试管3内放少许棉花
试管4置于有冰块的小烧杯中
试管5内加肝素8U
试管6内加肺组织浸液0.1mL
放开动脉夹，每管加入血液2mL。将多余的血盛于小烧杯中，并不断用竹签搅动直至纤维蛋白纤维蛋白形成。
记录凝血时间每个试管加血后2ml后，即刻开始记时，每隔15s倾斜一次，观察血液是否凝固，至血液成为凝胶状不在流动为止记下所经历的时间。5、6、7号试管加入血液后，用拇指盖住试管口将试管颠倒两次，使血液与药物混合。
0.90
0.65
0.60
0.55
0.50
0.45
0.40
0.35
0.30
0.25
H2O
0.10
0.35
0.40
0.45
0.50
0.55
0.60
0.65
0.70
0.75
3、加抗凝血用滴管吸取抗凝血，在各试管中各加1滴，摇匀，静置30min。
4、观察结果根据各管中液体颜色和浑浊度的不同，判断红细胞脆性。
针尖挑血，应朝一个方向横穿直挑，勿多方向挑动和挑动次数过多，以免破坏纤维蛋白网状结构，造成不凝血假象。
思考题：
出血时间和凝血时间延长的临床意义。
试述正常的生理止血过程。
四、影响血液凝固的因素
实验原理：
根据血液凝固过程中凝血酶原激活物形成途径的不同，可将血液凝固分为内源性激活途径和外源性激活途径。内源性凝血是指参与凝血过程的因子全部在血浆中，由因子Ⅶ的激活开始；外源性凝血是由于血管、组织受损，血管壁及组织中的组织因子（因子Ⅲ）进入血管内，与血管内的凝血因子共同作用而启动的。本实验采用兔颈总动脉放血、取血，血液几乎未与组织因子接触。凝血过程主要是有內源凝血系统发动。肺组织浸液中含有丰富的组织因子，在试管中加入肺组织浸液，以观察外源性凝血系统的作用。
注意事项：
配制不同浓度的低渗溶液时，小试管应干燥。加抗凝血量要准确一致，只加1滴。
混匀时，用手堵住试管口，轻轻倾斜1~2次，减少机械振动，避免人为的溶血。
抗凝血剂最好用肝素，其他抗凝剂可改变溶液的渗透压。
思考：
红细胞的形态特点与生理特征有何关系？
根据结果分析血浆晶体渗透压保持相对稳定的生理意义。
二、家兔红细胞计数
实验对象：
兔
实验器材：
抗凝剂(肝素)、兔血、10 mL小试管、滴管、吸管、1%NaCl溶液、蒸馏水
实验步骤：
1、制备抗凝血
2、溶液配制取小试管10个，编号后排列在试管架上，按照下表向各试管内加入不同体积的1%NaCl溶液和蒸馏水，配制出10种不同的NaCl的低4
5
6
7
8
9
10
NaCl
目的要求
学习、掌握应用稀释法计数红细胞的方法
基本原理：
采用稀释法计数单位容积血液内的红细胞数。由于血液中红细胞数很多无法直接计数，故需用适当的溶液将血液稀释，然后将稀释血滴入血细胞计数板上，在显微镜下计数。
材料与器械
家兔、显微镜、擦镜纸、血细胞计数板、计数器、小试管、一次性定量毛细取血管20ul、5mL移液管、红细胞稀释液、蒸馏水、75%酒精
5、重复2-4，两次。
A.未发生溶血的试管（-）：液体下层为浑浊红色，上层为无色，表明无细胞破裂
B.部分溶血的试管（±）：液体下层为浑浊红色，上层出现透明红色，表明红细胞已破裂，称为不完全溶血。
C.全部溶血的试管（+）：液体完全变为透明红色，表明红细胞完全破裂，称为完全溶血。
实验结果：
记录红细胞渗透脆性的范围。
实验步骤：
静脉注射20%氨基甲酸乙酯溶液，按5mL/kg的量将兔麻醉，仰卧于兔手术台上。正中切开颈部，分离一侧颈总动脉，远心端用线结扎阻断血液，近心端夹上动脉夹，在动脉当中斜向剪一小口，插入细塑料导管，结扎固定导管，以备取血。
准备好试管（试管的口径与大小一致）
试管1不加任何处理（对照管）
试管2用液状石蜡润滑整个试管内表面
4．充液
将盖玻片盖在计数板上，吸取血液，然后将取血管口轻轻斜置盖玻片边缘。滴出少量稀释血液，使溶液借毛细血管现象而流入计数室内，使之灌满，静置2至3min后，待细胞下沉后计数
5.计数
用低倍镜检查计数室的血细胞是否均匀，分布均匀可计数。把计数室中央的大方格置于视野内，转用高倍镜，计算中央大方格四角的和正中的共5个中央方格内的红细胞总数。计数时应循一定的路径以免遗漏或重复。依照“数上不数下，数左不数右”的原则进行计数。
2.凝血时间的测定操作同上，刺破耳垂或末节指端后，用玻片接下自然流出的第一滴血，立即记下时间，然后每隔30s用针尖挑血一次，直至挑起细纤维血丝止。从开始流血到挑起细纤维血丝的时间即为凝血时间。正常人的凝血时间为2~8min。
实验结果
注意事项：
采血针应锐利，让血自然流出，不可挤压。刺入深度要适宜，如果过深，组织受损过重，反而会使凝血时间缩短。
⑶红细胞数∕mm3=5个中方格数得的红细胞数×稀释倍数（200）×50
7.冲洗
测数完毕，取下盖玻片，用蒸馏水将计数板冲洗干净，切勿用硬物刷洗或抹擦，以免损坏网格刻度。洗净后自行晾干或用吹风机吹干，放入盒内保存。
8．实验结果观察与记录以及分析
思考题
1.本实验操作过程中，哪些因素会影响红细胞计数的准确性？
关键词：红细胞渗透脆性抗凝剂红细胞计数血细胞计数板出血时间凝血时间血液凝固
一、红细胞渗透脆性的测定
实验原理：
红细胞膜对低渗溶液具有一定的抵抗力，这一特征为红细胞的渗透脆性。红细胞膜对低渗溶液所具有的抵抗力越大，红细胞在低渗溶液中越不易发生溶血，即红细胞渗透脆性越小。将血液滴入不同浓度的低渗溶液中，可检查红细胞膜对于低渗溶液的抵抗能力，开始出现溶血现象的低渗溶液浓度为该血液红细胞的最小抵抗力，即最大脆性；出现完全溶血时的低渗溶液浓度则为该血液红细胞的最大抵抗力，即最小脆性。
综合实验
《血液生理特性的测定》
一、红细胞渗透脆性的测定
二、家兔红细胞计数
三、出血时间与凝血时间的测定
四、影响血液凝固的因素
班级：
组别：
学号：
姓名：
日期：
综合性实验——血液生理特性的测定
摘要：血液是流动在心脏和血管内的不透明的红色液体，主要成分为血浆、血细胞。生物体的生理变化和病理变化往往引起血液成分的改变，所以了解血液的生理特性有重要意义。经过几个实验，我们得出红细胞渗透脆性的范围大概是______溶液开始溶血，______溶液完全溶血；家兔红细胞每升_______个；正常人的出血时间约为_______,凝血时间约为_______；以及影响血液凝固的几个因素。
实验对象：
人
实验器材：
采血针、75%酒精棉球、干棉球、秒表、滤纸条、玻片及大头针等。
实验步骤：
1.出血时间的测定以75%酒精棉球消毒耳垂或末节指端后，用消毒的采血针快速刺入皮肤2~3mm深，让血自然流出。立即记下时间，每隔30秒用滤纸条轻触血液，吸去流出的血液，使滤纸上的血点依次排列直到无血液流出为止，记下开始出血到停止出血的时间，或以滤纸条上血点数除以2即为出血时间。正常人约为1~4min。
6．计算
红细胞数∕mm3=5个中方格数得的红细胞总数×104
红细胞数∕L=红细胞数∕mm3×106
计算原理：
⑴加20ul血液于3.98ml红细胞稀释液中，使血液稀释200倍。
⑵因一个中方格的容积为0.2×0.2×0.1=0.004mm3；5个中方格的容积为0.004×5=0.02mm3，换算成每mm3时应乘50。
2、滴入计数室的细胞悬液不能过多或过少，为什么？
三、出血时间与凝血时间的测定
实验原理：
出血时间是指从小血管破损出血所需的时间，实际是测量微小血管口封闭所需时间。出血时间的长短小血管的收缩、血小板的粘着、聚集、释放以及收缩等功能有关。出血时间的测定，可检测生理止血过程是否正常及血小板的数量和功能状态。凝血时间是指血液流出血管到出现纤维蛋白细丝所需的时间，测定凝血时间主要反映有无凝血因子缺乏或减少。
实验方法与步骤
1.熟悉血细胞计数板的构造
血细胞计数板系一长方形厚玻片，常用的改良牛氏计数板在中央横沟的两边各有一计数室，
两计数室结构完全相同。计数室较两边的盖玻片支柱低0.1mm。因此，放上盖玻片时，计数板与其间距即计数室空间的高为0.1mm。在低倍显微镜下可见计数室被双线划分成９个边长为１mm的大方格。四角的大方格又各分为１６个中方格，这是用来计数白的。中央大方格被划分为２５个中方格，每一中方格又划分成１６个小方格,称２５×１６，也有的计数板为１６×２５，小方格面积一致。中央大方格的四角及中心５个中方格(１６×２５)则为四角上的中方格为红细胞或血小板计数范围。
实验对象：
兔
实验器材：
兔手术台、哺乳动物手术器械一套。动脉夹、细塑料管（或静脉插管）、注射器、20%氨基甲酸乙酯溶液、试管8支、小烧杯2个、试管架、竹签1束、冰块。液状石蜡、肝素（取12500U/2ml肝素一支，加生理盐水至1562.5ml，即成8U/ml浓度的肝素）、2%草酸钾溶液、生理盐水、肺组织浸液（取兔肺剪碎，洗净血液，浸泡于3~4倍量的生理盐水中过夜，过滤收集的滤液即肺组织浸液存于冰箱中备用）。
实验结果：
将实验结果及各种条件下的凝血时间按下表填写，并进行解释。
血液凝固及其影响因素
试管编号
实验处理
实验结果及凝血时间
1