项目八 食品中亚硝酸盐含量的测定
食品中检测亚硝酸盐的含量
肉制品中亚硝酸盐的含量检测摘要：在弱酸条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后，再与盐酸萘乙二胺偶合形成紫红色染料 ,建立了一种简易快速的测定食品中微量亚硝酸盐的方法。
分光光度法抗干扰能力强，根据朗伯-比耳定律能较快地测定自制食品中香肠中亚硝酸盐的含量。
关键字：亚硝酸盐亚硝酸盐测定引言亚硝酸盐是一种有毒物质，半致死量为22mg/kg，对于体重60kg的人来说是1.32g。
亚硝酸盐与蛋白质分解产物在酸性条件下发生反应，易产生亚硝胺类致癌物。
胃中的酸碱度适宜亚硝胺的形成。
亚硝胺类化合物在腌肉、香肠、熏肉、鱼干、虾皮、鱿鱼丝等动物性食品中含量较高，有强烈的致胃癌作用。
在胃酸不足的情况下，胃中细菌繁殖使食物中原本无毒的硝酸盐还原成亚硝酸盐，更会加大胃癌的危险。
一、亚硝酸盐的相关性质1亚硝酸盐的性质护色剂又称呈色剂或发色剂，是食品加工中为使肉与肉制品呈现良好的色泽而适当加入的化学物质。
发色剂在食品中的作用：(1)可发色作用；(2)抑菌作用；(3)产生风味。
2中毒后症状过量亚硝酸盐进入人体，会氧化血液中的血红蛋白为高铁血红蛋白，后者无携氧功能，导致组织缺氧，引起肠原性青紫症，皮肤青紫是本病的特征，尤以口唇青紫最为普遍。
口服亚硝酸盐10分钟至3小时后，可出现头晕、恶心、呕吐等症状。
严重者出现意识丧失、昏迷、呼吸衰竭，甚至死亡。
二．亚硝酸盐含量测定（α-萘胺法）2.1 实验原理自样品中抽提分离出亚硝酸盐，亚硝酸盐在酸性条件下与对氨基苯磺酸发生重氮化反应生成重氮盐，此重氮盐再与α-萘胺试剂发生偶合反应，生成紫红色偶氮化合物。
其颜色的深度与样液中亚硝酸含量成正比，可比色测定。
反应式如下： N H 2SO 3H N +N SO 3H NO 2-H +O H 2+++ NSO 3H N NH 2N +N SO 3H +NH 2肉制品中亚硝酸盐含量==50150040100010001⨯⨯⨯⨯m X （mg/kg ） 式中：X 为由测得的吸光度什在标准曲线上对应的亚硝酸钠质量浓度（μg/mL ）；m 为样品质量（g ）。
亚硝酸盐含量测定方法
亚硝酸盐测定1、原理样品经沉淀蛋白质、除去脂肪后，在弱酸条件下亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后，再与N－1－萘基乙二胺偶合形成紫红色染料，与标准比较定量。
2、试剂实验用水为蒸馏水，试剂不加说明者，均为分析纯试剂。
2.1氯化铵缓冲液：1L容量瓶中加入500mL水，准确加入20.0mL盐酸，振荡混匀，准确加入50mL氢氧化铵，用水稀释至刻度。
必要时用稀盐酸和稀氢氧化铵调试至pH9.6～9.7。
2.2硫酸锌溶液(0.42mol/L)：称取120g硫酸锌(ZnSO4·7H2O)，用水溶解，并稀释至1L。
2.3氢氧化钠溶液(20g/L)：称取20g氢氧化钠用水溶解，稀释至1L。
2.4对氨基苯磺酸溶液：称取10g对氨基苯磺酸，溶于700mL 水和300mL冰乙酸中，置棕色瓶中混匀，室温保存。
2.5N－1－萘基乙二胺溶液(1g/L)：称取0.1gN－1－萘基乙二胺，加60%乙酸溶解并稀释至100mL，混匀后，置棕色瓶中，在冰箱中保存，一周内稳定。
2.6显色剂：临用前将N－1－萘基乙二胺溶液(1g/L)和对氨基苯磺酸溶液等体积混合。
2.7亚硝酸钠标准溶液：准确称取250.0mg于硅胶干燥器中干燥24h的亚硝酸钠，加水溶解移入500mL容量瓶中，加100mL氯化铵缓冲液，加水稀释至刻度，混匀，在4℃避光保存。
此溶液每毫升相当于500μg的亚硝酸钠。
2.8亚硝酸钠标准使用液：临用前，吸取亚硝酸钠标准溶液1.00mL，置于100mL容量瓶中，加水稀释至刻度，此溶液每毫升相当于5.0μg亚硝酸钠。
3仪器3.1小型粉碎机。
3.2分光光度计。
4操作方法4.1样品处理称取约10.00g(粮食取5g)经绞碎混匀样品，置于打碎机中，加70mL水和12mL氢氧化钠溶液(20g/L)，混匀，用氢氧化钠溶液(20g/L)调样品pH＝8，定量转移至200mL容量瓶中加10mL硫酸锌溶液，混匀，如不产生白色沉淀，再补加2～5mL氢氧化钠，混匀。
亚硝酸盐含量测定方法
亚硝酸盐测定1、原理样品经沉淀蛋白质、除去脂肪后，在弱酸条件下亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后，再与N－1－萘基乙二胺偶合形成紫红色染料，与标准比较定量。
2、试剂实验用水为蒸馏水，试剂不加说明者，均为分析纯试剂。
2.1氯化铵缓冲液：1L容量瓶中加入500mL水，准确加入20.0mL盐酸，振荡混匀，准确加入50mL氢氧化铵，用水稀释至刻度。
必要时用稀盐酸和稀氢氧化铵调试至pH9.6～9.7。
2.2硫酸锌溶液(0.42mol/L)：称取120g硫酸锌(ZnSO4·7H2O)，用水溶解，并稀释至1L。
2.3氢氧化钠溶液(20g/L)：称取20g氢氧化钠用水溶解，稀释至1L。
2.4对氨基苯磺酸溶液：称取10g对氨基苯磺酸，溶于700mL 水和300mL冰乙酸中，置棕色瓶中混匀，室温保存。
2.5N－1－萘基乙二胺溶液(1g/L)：称取0.1gN－1－萘基乙二胺，加60%乙酸溶解并稀释至100mL，混匀后，置棕色瓶中，在冰箱中保存，一周内稳定。
2.6显色剂：临用前将N－1－萘基乙二胺溶液(1g/L)和对氨基苯磺酸溶液等体积混合。
2.7亚硝酸钠标准溶液：准确称取250.0mg于硅胶干燥器中干燥24h的亚硝酸钠，加水溶解移入500mL容量瓶中，加100mL氯化铵缓冲液，加水稀释至刻度，混匀，在4℃避光保存。
此溶液每毫升相当于500μg的亚硝酸钠。
2.8亚硝酸钠标准使用液：临用前，吸取亚硝酸钠标准溶液1.00mL，置于100mL容量瓶中，加水稀释至刻度，此溶液每毫升相当于5.0μg亚硝酸钠。
3仪器3.1小型粉碎机。
3.2分光光度计。
4操作方法4.1样品处理称取约10.00g(粮食取5g)经绞碎混匀样品，置于打碎机中，加70mL水和12mL氢氧化钠溶液(20g/L)，混匀，用氢氧化钠溶液(20g/L)调样品pH＝8，定量转移至200mL容量瓶中加10mL硫酸锌溶液，混匀，如不产生白色沉淀，再补加2～5mL氢氧化钠，混匀。
实验二食品中亚硝酸盐含量的测定
实验二食品中亚硝酸盐含量的测定一、实验目的1. 了解亚硝酸盐的危害，掌握测定食品中亚硝酸盐含量的方法。
2. 掌握色谱法和分光光度法的原理和操作方法，学会利用这两种方法测定食品中亚硝酸盐的含量。
二、实验原理1. 亚硝酸盐的危害亚硝酸盐是一种常见的致癌物质，它在在一定条件下可以转化为亚硝胺，而亚硝胺是一种强致癌物。
人体摄入过量的亚硝酸盐会导致亚硝胺的形成，从而增加患癌症的风险。
2. 色谱法测定亚硝酸盐含量色谱法测定亚硝酸盐含量的原理是利用反相色谱分离亚硝酸盐，并通过紫外检测器检测样品中亚硝酸盐的含量。
具体步骤如下：（1）样品制备：将待测样品加入水中，同时加入明矾和硫酸铜，使亚硝酸盐被还原为亚硝酸钠。
（2）色谱柱处理：用反相色谱柱，在样品进样口处注入样品，经过一定的进样残留时间后，以一定的流速进行柱洗脱。
柱洗脱时，先用无机盐水拉平基线，再用有机溶剂进行洗脱。
（3）检测：用紫外检测器检测亚硝酸盐的吸光度，从而得到亚硝酸盐的含量。
分光光度法测定亚硝酸盐含量的原理是利用亚硝酸盐和硫酸铁（Ⅱ）发生化学反应，在一定的酸性条件下生成的重氮化合物与磺基苯二胺反应，生成紫色产物，其最大吸收波长为540 nm。
具体步骤如下：（2）反应：加入磺基苯二胺后，放置反应10-30min，其间温度保持在5℃-25℃之间。
（3）检测：利用分光光度计测定紫色产物在540nm处的吸光度，计算出亚硝酸盐的含量。
三、实验步骤1. 应注意的问题（1）亚硝酸钠充分还原后，一定要在酸性环境下进行测定。
（2）在反应中要控制好温度，以保证反应的准确性。
（3）样品应尽量少受光照，以防止光照影响样品的含量。
2. 实验器材和试剂（1）色谱仪、分光光度计（2）无水乙醇、对乙酰胺、对乙酰苯胺等试剂（3）标准亚硝酸钠（4）食品样品（2）色谱柱处理：将反相柱的一端用具有无机盐的水洗涤，并用有机溶剂过渡洗脱，直到出现白色较少的沉淀为止，这表明柱已达到欧拉。
（1）样品准备：取适量待测样品，加入约150mL的水中，用硫酸酸化使亚硝酸盐转化为硝酸盐，加入对乙酰苯胺拌匀，静置10min。
食品中亚硝酸盐含量的测定
［６］范亚娜，盖 轲．几种腌制蔬菜中亚硝酸盐含量的测定［Ｊ］．宝鸡文 理学院学报（自然科学版），２００８，２８（１）：４１－４３．
［７］路桂华，李贤新．食品中亚硝酸盐的格里斯试剂比色测定法的实践 体会［Ｊ］．职业与健康，２００４，２０（９）：４８－４９．
临用前，吸取亚硝酸钠标准溶液 ５．００ ｍＬ，置于 ２００ ｍＬ 容量瓶中，加水稀释至刻度，此溶液为每毫升 相当于 ５．０ μｇ 的亚硝酸钠。 1. 4 试样的预处理[7]
称取约 ５．０ ｇ 经绞碎混匀的试样，置于 ５０ ｍＬ 烧 杯中，加 １２．５ ｍＬ 硼酸钠饱和溶液，搅拌均匀，以 ７０ ℃左右的水将试样洗入 ２５０ ｍＬ 容量瓶中，于沸水 浴中加热 １５ ｍｉｎ，取出后冷至室温，然后一边转动， 一边加入 ５ ｍＬ 亚铁氰化钾溶液，摇匀，再加入 ５ ｍＬ 乙酸锌溶液，以沉淀蛋白质。加水至刻度，摇匀，放置 ０．５ ｈ，除去上层脂肪，清液用滤纸过滤，弃去初滤液 ２０ ｍＬ，滤液备用。 1. 5 测定 1. 5. 1 标准曲线的绘制
［８］食品卫生国家标准［Ｓ］．北京：中国标准出版社，２００６．
The Determination of the Nitrite Content of Several Foods
ＹＵ Ｂａｏ－ｘｉａ
（Ｌｉｇｈｔ Ｉｎｄｕｓｔｒｙ Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｈｅｎａｎ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ，Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ ４５０００６，Ｃｈｉｎａ） Abstract:Ｎｉｔｒｉｔｅ ｒｅａｃｔ ｗｉｔｈ ４－ａｍｉｎｏｂｅｎｚｅｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ ｉｎ ｗｅａｋ ａｃｉｄｉｃ ｍｅｄｉａ ｔｏ ｐｒｏｄｕｃｅ ４－ｓｕｌｆｏｂｅｎｚｅｎｅｄｉａｚｏｎｉｕｍ， ｗｈｉｃｈ ｒｅａｃｔｅｄ ｗｉｔｈ Ｎ′－（ｎａｐｈｔｈａｌｅｎ－１－ｙｌ）ｅｔｈａｎｅ－１，２－ｄｉａｍｉｎｅ ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ ｔｏ ｐｒｏｄｕｃｅ ａ ｒｅｄ ｄｉａｚｅｎｅ ｃｏｍｐｏｕｎｄ．Ｔｈｅ ｒｅｄ ｃｏｍｐｏｕｎｄ ｗａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒ．Ｔｈｅ ｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎ ｇｒａｐｈ ｆｏｒ ａｑｕｅｏｕｓ ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ ｗａｓ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｂｙ ｐｌｏｔｔｉｎｇ ａｂｓｏｒｂａｎｃｅ ｖａｌｕｅｓ ａｔ ５５０ ｎｍ ａｇａｉｎｓｔ ｎｉｔｒｉｔｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ． Ｂｅｅｒ＇ｓ ｌａｗ ｗａｓ ｏｂｅｙｅｄ ｏｖｅｒ ｔｈｅ ｒａｎｇｅ ０～２５ μｇ ｎｉｔｒｉｔｅ ｉｎ ａｎ ｏｖｅｒａｌｌ ａｑｕｅｏｕｓ ｖｏｌｕｍｅ ｏｆ ２５ ｍＬ． Ｔｈｅ ｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎ ｇｒａｐｈ ｉｓ ａ ｓｔｒａｉｇｈｔ ｌｉｎｅ， ｏｂｅｙｉｎｇ ｅｑｕａｔｉｏｎ Ａ＝０．０１３ ２ ｘ， ｗｈｅｒｅ Ａ ｉｓ ｔｈｅ ａｂｓｏｒｂａｎｃｅ ａｎｄ ｘ（μｇ） ｉｓ ｔｈｅ ａｍｏｕｎｔ ｏｆ ｎｉｔｒｉｔｅ． Ｔｈｅ ｎｉｔｒｉｔｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｉｎ ｓｅｖｅｒａｌ ｐｉｃｋｌｅｄ ｖｅｇｅｔａｂｌｅｓ ｓｏｌｄ ｉｎ ｔｈｅ ｍａｒｋｅｔ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ． Ｔｈｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｌｅｖｅｌ ｏｆ ｎｉｔｒｉｔｅ ｉｎ ｔｈｅ ｐｉｃｋｌｅｄ ｖｅｇｅｔａｂｌｅｓ ｗａｓ ｗｉｔｈｉｎ ｔｈｅ ｒａｎｇｅ ｏｆ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｆｏｏｄ Ｓｔａｎｄａｒｄ．Ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｉｓ ａｃｃｕｒａｔｅ， ｒａｐｉｄ， ｓｉｍｐｌｅ，ａｎｄ ｔｈａｔ ｃａｎ ｂｅ ａｐｐｌｉｅｄ ｉｎ ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ ｔｈｅ ｎｉｔｒｉｔｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｔｈｅ ｆｏｏｄｓ． Key words:ｆｏｏｄｓ；ｎｉｔｒｉｔｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ；ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒ
亚硝酸盐的测定
亚硝酸盐的测定引言亚硝酸盐（NO2-）是一种常见的无机化合物，广泛存在于自然界和工业生产中。
亚硝酸盐具有一定的毒性和致癌性，因此对于食品、饮用水和环境中的亚硝酸盐含量的测定具有重要意义。
本文将介绍几种常见的亚硝酸盐测定方法。
一、萘乙酰氯法萘乙酰氯法是一种常用的亚硝酸盐测定方法。
该方法基于亚硝酸盐与萘乙酰氯反应生成偶氮化合物的特性。
具体步骤如下：1.准备样品溶液：将待测样品溶解于适量的蒸馏水中，并进行必要的预处理（如过滤和稀释）。
2.反应：将样品溶液与萘乙酰氯溶液混合，在酸性条件下反应。
3.萘乙酰亚硝酰胺的生成：亚硝酸盐与萘乙酰氯反应生成萘乙酰亚硝酰胺（偶氮化合物）。
4.测定：使用紫外可见光谱仪测定偶氮化合物的吸光度，利用标准曲线计算样品中亚硝酸盐含量。
萘乙酰氯法是一种灵敏度较高的测定方法，但由于偶氮化合物的产生需要较长的反应时间，因此该方法不适用于对亚硝酸盐含量要求较高的分析。
二、笨二腈法笨二腈法是一种常用的快速测定亚硝酸盐含量的方法。
该方法基于亚硝酸盐与笨二腈反应生成稳定的三唑化合物的特性。
具体步骤如下：1.准备样品溶液：将待测样品溶解于适量的蒸馏水中，并进行必要的预处理。
2.笨二腈处理：将样品溶液与笨二腈处理液混合，在酸性条件下反应。
3.反应生成三唑化合物：亚硝酸盐与笨二腈反应生成稳定的三唑化合物。
4.测定：使用紫外可见光谱仪测定三唑化合物的吸光度，利用标准曲线计算样品中亚硝酸盐含量。
笨二腈法是一种快速、简便的测定方法，适用于对亚硝酸盐含量要求较高的分析。
三、电化学法电化学法是一种基于电化学原理测定亚硝酸盐含量的方法。
该方法通过测定亚硝酸盐与电极的反应产生的电流或电势变化来确定亚硝酸盐的含量。
常用的电化学测定方法包括极谱法、循环伏安法和恒电流法等。
电化学法具有灵敏度高、选择性好、操作简便等优点，但也存在仪器设备成本高和对操作人员要求较高的缺点。
在实际应用中，根据实验要求和设备条件选择合适的电化学测定方法。
食品中亚硝酸盐含量的测定
对未来研究的展望
01
深入研究影响因素
未来研究可进一步探讨食品加工、保存过程中影响亚硝酸盐含量的各种
因素，为优化食品加工工艺和储存条件提供理论依据。
02 03
开发快速检测方法
针对现有测定方法存在的操作繁琐、耗时较长等问题，未来可研究开发 更加快速、简便的亚硝酸盐含量检测方法，以满足现场快速检测的需求 。
结果展示
03
将处理后的数据以表格、图表等形式展示，便于直观比较和分
析。
结果分析与讨论
样品间比较
比较不同样品间的亚硝酸盐含量差异，分析可能的原因。
与标准值比较
将测定结果与国家标准或行业标准进行比较，评估样品的合规性 。
结果可靠性分析
根据实验方法、操作过程等因素，分析结果的可靠性。
误差来源及改进措施
06 结论与展望
实验结论总结
成功建立测定方法
本研究成功建立了准确、可靠的 食品中亚硝酸盐含量的测定方法 ，为食品安全监管提供了有力支 持。
验证方法准确性
通过对实际样品进行检测，验证 了本测定方法的准确性和实用性 ，表明该方法可用于实际生产和 监管中的亚硝酸盐含量著差异，可能与 食品加工方式、保存条件等因素 有关。
试剂
包括显色剂、缓冲液、掩 蔽剂等，用于优化实验条 件和提高测定准确性。
实验仪器与设备
分光光度计
用于测定吸光度，从而 计算亚硝酸盐含量。
恒温水浴锅
用于控制实验温度，保 证反应在恒定温度下进
行。
离心机
用于分离样品中的固体 和液体成分，便于后续
测定。
移液器及吸头
用于准确移取液体样品 和标准溶液。
实验原理与方法
第二季度
第三季度
第四节 食品中亚硝酸盐与硝酸盐的含量测定
第四节食品中亚硝酸盐与硝酸盐的含量测定一、亚硝酸盐测定(格里斯试剂比色法)(一)目的熟悉食品中亚硝酸盐的卫生标准，掌握食品中亚硝酸盐含量测定的基本方法。
(二)原理样品经沉淀蛋白质、除去脂肪后，在弱酸性条件下亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后，在与N-1-萘基乙二胺偶合形成紫红色染料后，与标准比较定量。
(三)试剂实验用水为蒸馏水，试剂不加说明者，均为分析纯试剂。
1．氯化胺缓冲液：1L容量瓶中加入500ml水，准确加入20.0ml盐酸，振荡混匀，准确加入50ml氢氧化铵，用水稀释至刻度。
必要时用稀盐酸和稀氢氧化铵调试至pH9.6～9.7。
2．0.42mol/L硫酸锌溶液：称取120g 硫酸锌(ZnSO4·7H2O)，用水溶解，并稀释至1000ml。
3．20g/L氢氧化钠溶液：称取20g氢氧化钠用水溶解，稀释至1L。
4．对氨基苯磺酸溶液：称取10g 对氨基苯磺酸，溶于700ml水和300ml冰乙酸中，置棕色瓶中混匀，室温保存。
5．0.1% N-1-萘基乙二胺溶液：称取0.1g N-1-萘基乙二胺，加60%乙酸溶解并稀释至100ml，混匀后，置棕色瓶中，在冰箱中保存，一周内稳定。
6．显色剂：临用前将0.1% N-1-萘基乙二胺溶液和对氨基苯磺酸溶液等体积混合。
7．亚硝酸钠标准溶液：准确称取250.0mg于硅胶干燥器中干燥24h的亚硝酸钠，加水溶解移入500ml容量瓶中，加100ml氯化胺缓冲液，加水稀释至刻度，混匀，在4℃避光保存。
此溶液每毫升相当于500μg的亚硝酸钠。
8．亚硝酸钠标准使用液：临用前，吸取亚硝酸钠标准溶液1.00ml，置于100ml 容量瓶中，加水稀释至刻度，此溶液每毫升相当于5.0μg亚硝酸钠。
(四)仪器1．小型粉碎机2．分光光度计(五)操作方法1．样品处理称取约10.00g(粮食取5g)经绞碎混匀样品，置于打碎机中，加70ml水和12ml 2%氢氧化钠溶液，混匀，用2%氢氧化钠溶液调样品至pH8，定量转移至200ml容量瓶中加10ml硫酸锌溶液，混匀，如不产生白色沉淀，再补加2～5ml氢氧化钠，混匀。
食品中亚硝酸盐含量的快速测定方法研究
食品中亚硝酸盐含量的快速测定方法研究食品安全一直是人们非常关注的话题之一，而食品中的亚硝酸盐含量对健康的影响也备受关注。
亚硝酸盐是一种常见的食品添加剂，用于防腐和着色，但高含量的亚硝酸盐对人体健康产生负面影响，甚至可能致癌。
因此，快速准确地测定食品中亚硝酸盐的含量对于保障食品安全具有重要意义。
传统的亚硝酸盐测定方法通常采用化学分析技术，例如硫胺素法、巴巴苏瓦法等。
这些方法对仪器设备要求较高，操作复杂，且耗时耗力。
为了解决这些问题，科学家们不断探索开发出更快速便捷的亚硝酸盐测定方法。
一种常用的快速测定方法是基于分光光度法。
该方法利用亚硝基苯胺和亚硝酸钠在酸性条件下反应生成偶氮染料，形成特征的吸收峰，通过测定吸光度来确定亚硝酸盐的含量。
与传统的化学分析方法相比，分光光度法具有操作简便、准确度高、快速等优点。
该方法能在短时间内得到结果，使得食品生产企业能够及时调整生产过程，以降低亚硝酸盐的含量。
除了分光光度法，一些基于电化学分析原理的快速测定方法也被广泛研究。
例如，离子选择性电极法和循环伏安法。
离子选择性电极是一种基于测定电位变化的方法，可以通过测定样品中亚硝酸盐离子的电位变化来确定含量。
循环伏安法则是利用电化学技术，通过测定亚硝酸盐在电极上的氧化还原电流，来快速测定亚硝酸盐的含量。
这些电化学方法具有灵敏度高、分析速度快的优点，但仪器设备成本较高，需要专业人员操作。
此外，近年来，还有一些基于光谱学原理的快速测定方法被提出。
例如，近红外光谱法和拉曼光谱法。
近红外光谱法利用样品在近红外波段的吸收和散射信息，通过建立相关的数学模型，来预测亚硝酸盐的含量。
而拉曼光谱法则通过测定样品中分子振动的强度和频率，来快速准确地测定亚硝酸盐含量。
这些光谱学方法具有非接触、无损、高效等特点，可以在不破坏样品的情况下进行快速测定。
综上所述，食品中亚硝酸盐含量的快速测定方法为食品安全监管提供了有效的手段。
分光光度法、电化学分析法和光谱学法等方法各有优劣，可以根据实际需求选择适合的方法。
食品中亚硝酸盐的含量测定
一、实验目的 1.掌握样品制备、提取的基本操作技能。 1.掌握样品制备、提取的基本操作技能。 掌握样品制备 2.进一步熟练掌握分光光度计的结构和使用方法。 2.进一步熟练掌握分光光度计的结构和使用方法。 进一步熟练掌握分光光度计的结构和使用方法 3.掌握比色法测定食品中亚硝酸盐的原理和方法。 3.掌握比色法测定食品中亚硝酸盐的原理和方法。 掌握比色法测定食品中亚硝酸盐的原理和方法 二、实验原理 样品经沉淀分离蛋白质，除去脂肪后， 样品经沉淀分离蛋白质，除去脂肪后，在弱酸的条 件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸起重氮化反应， 件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸起重氮化反应，生成 重氮化合物，再与盐酸萘乙二胺偶合， 重氮化合物，再与盐酸萘乙二胺偶合，形成紫红色的
2.测定 2.测定 吸取上述滤液40ml 50ml容量瓶中 同时吸取0.0 40ml于 容量瓶中， 0.0、 吸取上述滤液40ml于50ml容量瓶中，同时吸取0.0、 0.1、0.2、0.3、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0ml亚硝酸 0.1、0.2、0.3、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0ml亚硝酸 钠标准使用液（相当于0.0 1.0、2.0、3.0、4.0、 0.0、 钠标准使用液（相当于0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、 8.0、12.0、16.0、20.0ug的亚硝酸钠 的亚硝酸钠） 8.0、12.0、16.0、20.0ug的亚硝酸钠）分别置于 50ml容量瓶中 各加水至25ml 容量瓶中， 25ml处 50ml容量瓶中，各加水至25ml处。在样品管及标准管 中分别加入0.4%对氨基苯磺酸溶液4ml 0.4%对氨基苯磺酸溶液4ml， 中分别加入0.4%对氨基苯磺酸溶液4ml，混匀后静置 分钟，然后又在各管及标准管中分别加入0.2% 0.2%盐 3～5分钟，然后又在各管及标准管中分别加入0.2%盐 酸萘乙二胺溶液2ml 加水至刻度，摇匀，静置15 2ml， 15分 酸萘乙二胺溶液2ml，加水至刻度，摇匀，静置15分 钟后， 1cm的比色皿 以零管调节零点， 的比色皿， 钟后，用1cm的比色皿，以零管调节零点，于波长 538nm处 测吸光度， 538nm处，测吸光度，绘制标准曲线并查出待测液的 亚硝酸盐含量。 亚硝酸盐含量。
香肠中亚硝酸盐含量测定
二、亚硝酸钠含量的检测原理
样品经沉淀蛋白质，除去脂肪后，在弱酸条件下亚 硝酸盐与氨基苯磺酸重氮后，再与N-1-萘基乙二胺 偶合形成紫红色染料，在538nm处有最大的吸收通 过测定其吸光度与标准比较定量。
三、亚硝酸盐的护色作用
亚硝酸盐所产生的一氧化氮与肉类中的肌红蛋白和 血红蛋白结合，生成一种具有鲜艳红色的亚硝基肌 红蛋白和亚硝基血红蛋白所致。
系列1
线性 (系列1)
八、数据处理
A 1000 0.6539 1000 X 1.3mg / k g V2 20 m 1000 5 1000 V1 200
X—样品中亚硝酸盐的含量 mg/kg m—样品质量 5g A—测定用样液中亚硝酸盐的质量 6ug V —样液总体积 200mL V —测定用样液体积 20mL
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四、实验仪器及药品
亚铁氰化钾溶液、乙酸锌溶液、饱和硼砂溶液、 对氨基苯磺酸溶液、盐酸萘乙二胺溶液、亚硝酸 钠标准溶液 分光光度计
五、实验操作——样品处理
测定
六、实验数据
NaNO2标准 溶液的体 0.00 积mL NaNO2的含 量 μg/50mL 吸光度 0 0.20 0.40 0.60 0.80
2
4
6
8
空白
样品
0.000 0.016 0.041 0.063 0.097 0.011 0.074
七、标准曲线
亚硝酸钠标准吸光曲线 y = 0.120x - 0.004 R² = 0.984 0.12 0.1 0.08 吸光度 0.06 0.04 0.02 0 0 -0.02 亚硝酸钠标准溶液的体积/mL 0.2 0.4 0.6 0.8 1
香肠中亚硝酸含量的检测
分光光度法测食品中的亚硝酸盐
第二法分光光度法8 原理亚硝酸盐采用盐酸萘乙二胺法测定，硝酸盐采用镉柱还原法测定。
试样经沉淀蛋白质、除去脂肪后，在弱酸条件下亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后，再与盐酸萘乙二胺偶合形成紫红色染料，外标法测得亚硝酸盐含量。
采用镉柱将硝酸盐还原成亚硝酸盐，测得亚硝酸盐总量，由此总量减去亚硝酸盐含量，即得试样中硝酸盐含量。
9 试剂和材料除非另有规定，本方法所用试剂均为分析纯。
水为GB/T 6682 规定的二级水或去离子水。
9.1 亚铁氰化钾（K4Fe(CN)6·3H2O）。
9.2 乙酸锌（Zn(CH3COO)2·2H2O）。
9.3 冰醋酸（CH3COOH）。
9.4 硼酸钠（Na2B4O7·10H2O）。
9.5 盐酸（ρ＝1.19 g/mL）。
9.6 氨水（25 %）。
9.7 对氨基苯磺酸(C6H7NO3S）。
9.8 盐酸萘乙二胺(C12H14N2·2HCl）。
9.9 亚硝酸钠（NaNO2）。
9.10 硝酸钠（NaNO3）。
9.11 锌皮或锌棒。
9.12 硫酸镉。
9.13 亚铁氰化钾溶液(106 g/L)：称取106.0 g 亚铁氰化钾（9.1），用水溶解，并稀释至1000 mL。
9.14 乙酸锌溶液(220 g/L)：称取220.0 g 乙酸锌（9.2），先加30 mL 冰醋酸（9.3）溶解，用水稀释至1000 mL。
9.15 饱和硼砂溶液(50 g/L)：称取5.0 g 硼酸钠（9.4），溶于100 mL 热水中，冷却后备用。
9.16 氨缓冲溶液（pH 9.6～9.7）：量取30 mL 盐酸（9.5），加100 mL 水，混匀后加65 mL 氨水（9.6），再加水稀释至1000 mL，混匀。
调节pH 至9.6～9.7。
9.17 氨缓冲液的稀释液：量取50 mL 氨缓冲溶液（9.16），加水稀释至500 mL，混匀。
9.18 盐酸(0.1 mol/L)：量取5 mL 盐酸，用水稀释至600 mL。
项目八食品中亚硝酸盐含量的测定
在食品加工过程中，经常使用某些化学物质和食品中某 些成份作用，而使产品呈现良好旳色泽，这些物质称发色剂。 常用旳是硝酸盐和亚硝酸盐。
发色剂在食品中旳作用： 发色作用、抑菌作用、产生风味。
亚硝酸盐毒性 亚硝酸盐是添加剂中急性毒性较强旳物质之一，是一种 剧毒药，可使正常旳血红蛋白变成高铁血红蛋白，失去携带 氧旳能力，造成组织缺氧。 其次亚硝酸盐为亚硝基化合物旳前体物，具致癌性。 最大使用量0.15g/kg，残留量（以亚硝酸钠计）为30mg/kg
⑥亚硝酸钠原则溶液：精密称取0.1000g于硅胶干燥器中干燥二十 四小时亚硝酸钠，加水溶解移入500 ml容量瓶中，并稀释至刻度。 此溶液每ml相当于200ug亚硝酸钠。（7组）
⑦亚硝酸钠原则使用溶液：临用前，吸收亚硝酸钠原则溶液5.00 ml, 置于100 ml容量瓶中，加水稀释至刻度。此溶液每ml相当于 10ug亚硝酸钠。（8组）
②醋酸锌溶液：称取220g醋酸锌，加30ml冰醋酸，溶于水并定容 至1000ml。（2组）
③硼砂饱和溶液：称取5g硼砂溶于100 ml热水中，冷却后备用。 （3、4组各配置100ml）
④0.4%对氨基苯磺酸溶液：称取0.4g对氨基苯磺酸，溶于100 ml 20%旳盐酸中，避光保存。（5组）
⑤0.2%盐酸萘乙二胺溶液：称取0.2g盐酸萘乙二胺,溶于100 ml水 中，避光保存。（6组）
反应如下：
2HCl+ NaNO2 + H2N-
-SO3H 重氮化
Cl- -
-SO3H + NaCl+ 2H2O
--
--
2HCl .H 2 NH 2 CH 2 CHN-
盐酸萘乙二胺
2HCl .H 2 NH 2 CH 2 CHN-
食品中亚硝酸盐含量测定操作规程
食品中亚硝酸盐含量测定操作规程1 目的对公司泡菜类亚硝酸盐含量测定制定标准操作规程，检验室操作人员按本规程操作，保证公司亚硝酸盐含量检测结果准确。
2 范围适用于所有泡菜类亚硝酸盐含量的测定3 依据GB 5009.33-2016《食品安全国家标准食品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定》第二法分光光度法4 实验原理试样经沉淀蛋白质、除去脂肪后，在弱酸条件下亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后，再与盐酸萘乙二胺偶合形成紫红色染料，外标法测定亚硝酸盐含量。
5 仪器和设备5.1 比色管5.2 电子天平：感量为0.1mg。
5.5 紫外分光光度计6 试剂除非另有规定，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的二级水或去离子水。
6.1亚铁氰化钾溶液（106g/L）：称取106.0g亚铁氰化钾，用水溶解，并稀释至1000mL。
6.2乙酸锌溶液（220g/L）：称取220.0g乙酸锌，加30mL冰乙酸溶解，并用水稀释至1000mL。
6.3饱和硼酸钠溶液（50g/L）：称取5.0g硼酸钠，溶于100mL热水中，冷却后备用。
6.4对氨基苯磺酸钠溶液（4g/L）：称取0.4g对氨基苯磺酸，溶于100mL20%（V/V）盐酸中，置于棕色瓶中混匀，避光保存。
6.5盐酸萘乙二胺溶液（2g/L）：称取0.2g盐酸萘乙二胺，溶于100mL水中，混匀后，置于棕色瓶中，避光保存。
6.6亚硝酸钠标准溶液：准确称取0.1000g于110-120℃干燥恒重的亚硝酸钠，加水溶解移入500mL容量瓶中，加水至刻度，混匀。
此溶液每毫升相当于200ug的亚硝酸钠。
6.7亚硝酸钠标准使用液：吸取亚硝酸钠标准溶液5.00mL，置于200mL容量瓶中，加水至刻度，此溶液每毫升相当于5.0ug亚硝酸钠。
7 实验步骤7.1 样品制备取有代表性样品用粉碎机粉碎或用研钵研细，不易研磨的样品应尽可能切碎。
7.2 操作步骤标准曲线的绘制：分别吸取亚硝酸钠标准使用液0.00、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00、1.50、2.00、2.50mL 于50mL 带塞比色管中，（相当于0、1、2、3、4、5、7.5、10、12.5ug 亚硝酸钠），分别置于50mL 带塞比色管中。
实验报告 午餐肉中亚硝酸盐含量的测定
实验报告：午餐肉中亚硝酸盐含量的测定一、实验内容用盐酸萘乙二胺法测定午餐肉中亚硝酸盐的含量。
二、实验目的与要求（1）熟悉掌握样品制备，提取的基本操作技能；（2）进一步学习并熟练地掌握分光光度计的使用方法和技能；（3）学习盐酸萘乙酸二胺比色法测定亚硝酸盐的原理及操作要点。
三、实验原理样品经沉淀蛋白质，除去脂肪后，在弱酸条件下，亚硝酸盐与对安吉苯磺酸重氮化后，再与盐酸萘乙二胺偶合形成紫红色染料，其最大吸收波长为550nm，可测定吸光度并标准比较定量分析。
四、试剂1、亚铁氰化钾溶液：称取106克亚铁氰化钾[K4Fe9(CN)5.3H2O]，溶于水后，稀释至1000毫升。
2、乙酸锌溶液：称取220克乙酸锌[Zn(CH2C00)2·2H20]，加30毫升冰乙酸溶于水，并稀释至1000毫升。
3、饱和硼砂溶液：称取5克硼酸钠(Na2B07·10H20)，溶于100毫升热水中，冷却后备用。
4、0.4％对氨基苯磺酸溶液：称取0.4克对氨基苯磺酸，溶于100毫升20％的盐酸中，避光保存。
5、0.2％盐酸萘乙二胺溶液：称取0.2克盐酸萘乙二胺，溶于100毫升水中，避光保存。
6、亚硝酸钠标准溶液：精密称取0.1000克于硅胶干燥器中干燥24小时的亚硝酸钠，加水溶解移入500毫升容量瓶中，并稀释至刻度。
此溶液每毫升相当于200微克亚硝酸钠。
7、亚硝酸钠标准使用液：临用前，吸取亚硝酸钠标准溶液5.00毫升，置于200毫升容量瓶中，加水稀释至刻度，此溶液每毫升相当于5微克亚硝酸钠。
五、仪器小型绞肉机、分光光度计、25ml闭塞管六、操作方法1、样品处理：称取2.5克经绞碎混匀的样品，置于50毫升烧杯中，加入6.3毫升硼砂饱和溶液，搅拌均匀，以70℃左右的水约150毫升将样品全部洗入250毫升容量瓶中，置沸水浴中加热15分钟，取出后冷至室温，然后一面转动一面加入2.5毫升亚铁氰化钾溶液，摇匀，再加入2.5毫升乙酸锌溶液以沉淀蛋白质，加水至刻度，混匀，放置0.5小时，除去上层脂肪，清液用滤纸过滤弃去初滤液20毫升，滤液备用。
食品中亚硝酸盐的测定
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实验室测定食品中亚硝酸盐
离子色谱法-----亚硝酸盐的测定
1、原理 试样经沉淀蛋白质、除去脂肪后，采用相应的方
法提取和净化，以氢氧化钾溶液为淋洗液，阴离 子交换柱分离，电导检测器检测。以保留时间定 性，外标法定量。
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第14页，共22页。Байду номын сангаас
能够容纳2 倍试样体积的带盖容器中，通过反复摇晃和颠倒容器使样 品充分混匀直到使试样均一化。
发酵乳、乳、炼乳及其他液体乳制品：通过搅拌或反复摇晃和颠倒 容器使试样充分混匀。
干酪：取适量的样品研磨成均匀的泥浆状。为避免水分损失，研磨过程中应 避免产生过多的热量。
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标准溶液，含亚硝酸根离子浓度为0.00 mg/L、0.02 mg/L、
0.04 mg/L、0.06 mg/L、0.08 mg/L、0.10 mg/L、0.15 mg/L、0.20 mg/L；标准溶液，从低到高浓度依次进样。
得到各浓度标准溶液的色谱图。以亚硝酸根离子的浓度
（mg/L）为横坐标，以峰高（μS）或峰面积为纵坐标，绘
制标准曲线或计算线性回归方程。
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实验室测定食品中亚硝酸盐
食品安全亚硝酸盐与硝酸盐的测定-
四、样品的制备和保存
（一）样品的制备 （二）样品的保存
（一）样品的制备
已粉碎的样品（盐菜末等），应使用圆锥四分法（堆成圆锥体— —压成扁平圆形——划两条交叉直线分成四等份——取对角部分 ）进行缩分。
未粉碎的样品（腌咸菜、腌萝卜条等），应间隔一定的距离取多 份小块四分法进行缩分。
已切成片或块的禽肉类样品（排骨、鸡爪等），先室温解冻 ，四 分法缩分。
、乙酸锌[Zn(CH3COO)2.2H2O]、硼酸钠
[Na2B4O7.10H2O]、对氨基苯磺酸[C6H7NO3S]、 盐酸萘乙二胺[C12H14N2.2HCL]
氨缓冲溶液：量取 30mL 盐酸，加 100mL 水，混匀后加65mL 氨水，再加 水稀释至 1000mL，混匀。调节 pH 至 9.6～9.7（用PH计）。
若内壁仍不够清洁，可用下述洗液洗涤： （1）重铬酸钾-浓硫酸的混合液（100g/L）。 （2）等量的30g/L的高锰酸钾溶液和1mol/L的氢氧化 钠的混合溶液。
然后用自来水冲洗，直至洗涤液全部冲净，再用纯水 洗三次。
一般洗净后的玻璃量器应自然风干。若急用，建议玻
璃量器烘干温度不得超过150℃ 。
镉柱不用时，必须用水封盖，随时都要 保持水平面在镉层之上，不得使镉层夹 有气泡。
如无上述镉柱玻璃管时，可以 25mL 酸 式滴定管代替。
三、样品接收
收样人应认真检查样品的包装和状态，若发 现异常，应与送样人达成处理决定。
送样量不能少于规定数量，至少不能少于测 试用量的三倍。
样品应编号登记，加施唯一性标识，保证不 同检测状态和传递过程中样品不被混淆。
当贮液漏斗中的样液流完后，再加 5mL 水置换柱内留存的样液。
（1）镉柱还原效率的测定
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4
二、仪器与试剂
1.仪器 ①小型绞肉机 ②分光光度计 2.试剂 ①亚铁氰化钾溶液：称取106g亚铁氰化钾溶于水， 并定容至1000ml。 ②醋酸锌溶液：称取220g醋酸锌，加30ml冰醋酸， 溶于水并定容至1000ml。 ③硼砂饱和溶液：称取5g硼砂溶于100 ml热水中， 冷却后备用。
④0.4%对氨基苯磺酸溶液：称取0.4g对氨基苯磺 酸，溶于100 ml 20%的盐酸中，避光保存。 ⑤0.2%盐酸萘乙二胺溶液：称取0.2g盐酸萘乙二胺, 溶于100 ml水中，避光保存。 ⑥亚硝酸钠储备液：精密称取0.1000g于硅胶干 燥器中干燥24小时亚硝酸钠，加水溶解移入500 ml容 量瓶中，并稀释至刻度。此溶液每ml相当于200ug亚 硝酸钠。 ⑦亚硝酸钠标准使用溶液：临用前，吸取亚硝酸钠 标准溶液5.00 ml, 置于100 ml容量瓶中，加水稀释
注意事项
1、显色后稳定性与室温有关，一般显色温度为15～30℃时， 在20～30分钟内比色为好。
2、饱和硼砂的作用有二：一是亚硝酸盐的提取剂，二是蛋白 质沉淀剂。
3、盐酸萘乙二胺有一定的毒性作用，使用时注意安全。
4、当亚硝酸盐含量过高时，过量的亚硝酸盐可以使偶氮化合 物氧化，生成黄色，而使红色消失，这时应将样品处理液 稀释后再做，最好是样品的吸光度落在标准曲线的吸光度 之内。
40 250
—测定时吸取样品液的体积与样品定容体 积之比。
9
五、结果表述
以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值 表示，计算结果保留两位有效数字。 精密度：在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝 对差值不得超过算术平均值的10%。 本方法亚硝酸盐检出限为1 mg/kg。
第三部分 工作任务
第一部分 引入
在食品加工过程中，经常使用一些化学物质和食品中某 些成分作用，而使产品呈现良好的色泽，这些物质称发色剂。 常用的是硝酸盐和亚硝酸盐。 发色剂在食品中的作用： 发色作用、抑菌作用、产生风味。 亚硝酸盐毒性 亚硝酸盐是添加剂中急性毒性较强的物质之一，是一种 剧毒药，可使正常的血红蛋白变成高铁血红蛋白，失去携带 氧的能力，导致组织缺氧。 其次亚硝酸盐为亚硝基化合物的前体物，具致癌性。 最大使用量0.15g/kg，残留量（以亚硝酸钠计）为30mg/kg
第六部分 操作
1.配制试剂 2.样品预处理（处理完毕后将样液贴标保存） 3.分光光度计的使用练习
任务 8.2 香肠中亚硝酸亚含量测定操作
1.绘制标准曲线 各组按方案进行标准曲线的测定，由组长将测得的亚硝 酸钠含量（质量）与吸光度，交到老师处，算出回归方程。 2.样品测定 测出样品吸光度，根据回归方程算出亚硝酸钠含量（质 量）。
至刻度。此溶液每ml相当于10ug亚硝酸钠。
三、步骤
1.样品处理 称取经绞碎并混合均匀的样品20克于100ml烧杯中，加硼 砂饱和溶液 40ml ，搅拌均匀后，以 70 ℃以上的热水 100 ～ 150ml将样品全部洗入250ml容量瓶中，放入沸水浴中加热15 分钟，取出冷却后，边转动容量瓶边加入亚铁氰化钾溶液 20ml，摇匀后，再加入醋酸锌溶液20ml，以沉淀蛋白质。然 后，加水至刻度，混匀，放置半小时后，弃去上层脂肪，清 液用滤纸或脱脂棉过滤，弃去初滤液5～10ml，滤液备用。
16
吸取上述滤液 10ml 于比色管中，重复上述步骤，于波长 538nm处，测吸光度，根据标准曲线得到待测液的亚硝酸盐含量。
四、结果计算
X=
A 1000 40 m 1000 1000 250
式中：X—样品中亚硝酸盐的含量，g/kg；
A—样品溶液中亚硝酸盐的含量，ug； m—样品的质量，g。
项目八 食品中亚硝酸盐 含量测定
食品安全国家标准GB 5009.33-2010
任务8.1 实验准备
2
第二部分 基础知识
一、原理
样品经沉淀分离蛋白质，除去脂肪后，在弱酸的条件下， 亚硝酸盐与对氨基苯磺酸起重氮化反应，生成重氮化合物， 再与盐酸萘乙二胺偶合，形成紫红色的染料，其颜色的深浅 与亚硝酸盐的含量成正比，可与标准比较定量。通过分光光 度计比色测定，计算出样品中亚硝酸盐的含量。
任务：香肠中亚硝酸盐含量测定 1.试剂配制 2.样品处理 3.标准曲线绘制 4.样品测定及计算。
第四部分 分组讨论 设计方案
要求在30分钟内完成，注意按照真实的实验过程来写方 案，特别是实验的先后顺序。完成后由组长交到老师处，进 行评阅。
第五部分 任务布置
①亚铁氰化钾溶液：称取 106g 亚铁氰化钾溶于水，并定容至 1000ml。（1组） ②醋酸锌溶液：称取220g醋酸锌，加30ml冰醋酸，溶于水并定容 至1000ml。（2组） ③硼砂饱和溶液：称取 5g硼砂溶于100 ml热水中，冷却后备用。 （3、4组各配置100ml） ④0.4%对氨基苯磺酸溶液：称取0.4g对氨基苯磺酸，溶于100 ml 20%的盐酸中，避光保存。（5组） ⑤0.2%盐酸萘乙二胺溶液：称取0.2g盐酸萘乙二胺,溶于100 ml水 中，避光保存。（6组） ⑥亚硝酸钠标准溶液：精密称取0.1000g于硅胶干燥器中干燥24小 时亚硝酸钠，加水溶解移入500 ml容量瓶中，并稀释至刻度。此 溶液每ml相当于200ug亚硝酸钠。（7组） ⑦亚硝酸钠标准使用溶液：临用前，吸取亚硝酸钠标准溶液 5.00 ml, 置于100 ml容量瓶中，加水稀释至刻度。此溶液每ml相当于 10ug亚硝酸钠。（8组）
2.测定
标准曲线绘制： 吸取0.0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0ml亚 硝酸钠标准使用液（相当于 0.0 、 1.0 、 2.0 、 3.0、 4.0 、 8.0 、 12.0、16.0、20.0ug的亚硝酸钠）分别置于25ml比色管中，各加 水至12.5ml处。在样品管及标准管中分别加入0.4%对氨基苯磺酸 溶液4ml，混匀后静置3～5分钟，然后又在各管及标准管中分别 加入0.2%盐酸萘乙二胺溶液2ml，加水至25ml刻度，摇匀，静置 15分钟后，用1cm的比色皿，以零管调节零点，于波长538nm处， 测吸光度，绘制标准曲线。 样品测定：
反应如下：
2HCl+ NaNO2 + H 2N-
-SO3H
重氮化
盐酸萘乙二胺
2HCl .H 2 NH 2 CH 2 CHN紫红色
-N- N -
-
2HCl .H 2 NH 2 CH 2 CHN-
-
Cl- -
-SO3H + NaCl + 2H 2O
+ Cl- NN -SO3H
偶合
-SO3H + HCl