植物脱毒苗组织培养技术的研究
太子参脱毒苗培养、化学成分及指纹图谱研究进展
究等方面进行综述ꎬ以期为该资源的种植栽培、药物研发、质量标准建立等提供参考ꎮ
关键词:太子参ꎻ脱毒苗ꎻ太子参多糖ꎻ环肽 Ｂꎻ指纹图谱
中图分类号:Ｒ２８４ 文献标志码:Ａ 文章编号:２０９５－５３７５(２０２４)０３－０２７４－００８
基金项目:福建省农业引导性项目( Ｎｏ.２０２０Ｎ００７９)
品名单 [２] ꎮ 太子参功效逐渐被大众肯定ꎬ多地大力
参栽培地区扩大及流通品系增多ꎬ亦出现了一些问
题ꎬ如太子参病毒病呈逐年加重趋势ꎬ严重时导致优
质太子参品种退化 [３] ꎻ品种混乱、内在质量参差不
作者简介:郭慧慧ꎬ女ꎬ硕士ꎬ副研究员ꎬ研究方向:植物组织培养ꎬＥ－ｍａｉｌ:ｐａｎｓｙｇ１２＠ １６３.ｃｏｍ
－１
ＧＡ ３ ꎬ加入 ０.１ ~ ０.２ ｍｇＬ
率ꎬ约提高 ８.０ 个百分点
－１
ＧＡ ３ 可提高出芽
[６]
１.２ 种胚剥取脱毒 种胚剥取脱毒的原理是太子
参种子繁殖不传播病毒ꎮ 叶祖云等 [８] 的研究表明
剥去种皮和外胚乳的太子参裸胚在培养基 ＭＳ ＋ １.０
ｍｇＬ
－１
ｍｇＬ
－１
６ －ＢＡ ＋ ０.２ ｍｇＬ
ｖｉｇｏｒｏｕｓｌｙ ｐｒｏｍｏｔｅｄ ｉｎ ｍａｎｙ ｐｌａｃｅｓ ｔｏ ｂｕｉｌｄ ａ ＧＡＰ ｂａｓｅ ｆｏｒ Ｐｓｅｕｄｏｓｔｅｌｌａｒｉａ ｈｅｔｅｒｏｐｈｙｌｌａ.Ｈｏｗｅｖｅｒꎬｓｏｍｅ ｐｒｏｂｌｅｍｓ ｈａｖｅ ａｒｉｓ￣
ｅｎꎬｓｕｃｈ ａｓ ｔｈｅ ａｇｇｒａｖａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｓｅｕｄｏｓｔｅｌｌａｒｉａ ｈｅｔｅｒｏｐｈｙｌｌａ ｖｉｒｕｓ ｄｉｓｅａｓｅ ｙｅａｒ ｂｙ ｙｅａｒꎬｃｏｎｆｕｓｉｏｎ ｏｆ ｖａｒｉｅｔｉｅｓꎬａｎｄ ｕｎｅｖｅｎ ｉｎ￣
植物组织培养的研究现状
素处 理， 可使染 色体加倍 ， 成为纯合 二倍体 植株 ， 这种 培养技 术在 病毒 ， 从而 获得 脱病毒苗 ， 再用脱毒苗 进行 繁殖 ， 则种 植 的作物就 育种上 的应用称 为单倍 体育种 。在单倍体育种方面 ， 我国科学家做 不会 或极 少发生病毒 。目前组织培养在甘蔗 、 菠萝、 香蕉 、 草莓等主
植物组织培 养 的研 究现状
李洪
（ 陕西国际商 贸学院 ）
愈伤 组 织 ， 有 些 还 进 而 分 化 成 苗 。目前 ， 采 用 原 【 摘要】 本 文综述 了植物组 织培养 的基 本定义 ， 在植 物育种上 、 植物 科 间 的 体 细 胞 杂 种 、
脱毒和快速繁 殖、 植物代谢 产物、 植 物种质资 源保存和 交换 、 遗传、 生 质 体 融 合 技 术 已 经 能 从 不 杂 交 的植 物 中 如 番 茄 和 马 铃 薯 、烟 草 芥菜等获得 属问杂种 ， 但 这些杂种 尚无实 际应用价值 。随 生理 、 生化和病理研 究上的进展及存在 的问题 ， 并对植 物组 织培 养 和龙葵 、
个振奋人心 的消息从美国传 向世界各地 ，美 国植物学家斯 蒂瓦特 问题 。 等人 ， 用胡 萝 卜 韧皮 部的细胞 进行培 养 ， 终于得 到 了完整 植株 ， 并 （ ５ ） 培养细胞突变 体无论是愈伤组织培 养还是细 胞培养 ， 培养
且这一植株 能够 开花结果 ，证实 了哈伯兰特 在五十多年前 关于细 细 胞 均 处 在 不 断 分 生 状 态 ， 容 易受培养 条件和 外界压 力 （ 如射线 、
浅谈组培苗的脱毒及应用
浅谈组培苗的脱毒及应用植物在生长过程中几乎都会受到病毒的侵染，尤其是无性繁殖的植物，病毒严重影响果树、蔬菜、花卉和树木等植物的生长发育，造成产量降低、品质下降，严重时甚至造成植物的死亡，给农业生产造成巨大的经济损失，全世界每年因病毒造成的经济损失中，粮食作物达200 亿美元，经济作物达600 亿美元[1]。
第九次国际病毒委员会公布的病毒数量达到了2000 多种，归属于6 个目87 个科19 个亚科349 个属。
1 植物病毒的传播方式及为害病毒的传播途径多种多种，如昆虫传播、土壤传播、机械传播、无性繁殖材料传播，甚至有些病毒可以通过种子传播。
植物感染病毒之后主要表现为内部症状和外部症状2 个方面：内部症状主要有组织病变坏死、茎部微管组织和叶部坏死、产生激素、引起组织增生或产生各种类型的内含体，植物正常的生理代谢受到干扰，叶绿素、花青素及激素等的产生受到改变；外部症状主要有变色、坏死、畸形等相应的异常症状。
植物感染病毒造成的经济损失是比较大的，如葡萄的扇叶病毒可使葡萄每年减产10%～15%，非洲可可树的肿枝病可使产量减少50%以上，马铃薯的退化病毒可使产量减少50%～70%。
对于观赏性的植物，病毒导致花朵变少变小，甚至畸形、变色，从而失去观赏价值。
2 植物脱毒的方式2.1 茎尖分生组织培养脱毒1952 年Morel 等从感染花叶病毒和斑萎病毒的大丽花植株上切取茎尖分生组织进行培养，并获得脱毒苗。
茎尖分生组织培养脱毒苗是利用了病毒在植物体内分布不均匀的特点，病毒主要通过微管组织进行转移，而茎尖不含有微管系统，茎尖中的叶原基能分泌生长素抑制病毒的增殖，所以茎尖几乎不含有病毒或病毒的浓度很低，通过剥离茎尖或根尖进行培养，可获得脱毒苗。
剥去茎尖的大小是脱毒的关键，一般剥取0.1～1mm 茎尖进行培养，茎尖太小难于成活，茎尖太大脱毒效果差。
何新民等[2]对“红姑娘2 号”甘薯进行培养和脱毒研究，结果表明，剥去茎尖0.3～0.5mm 时，脱毒率为100%，当剥去茎尖0.6～0.8mm 时，脱毒率为93.3%。
植物组培脱毒技术及在花卉上的应用
组织培养技术在名贵花卉上的应用前景摘要：综述了组织培养技术的形成、研究进展、意义及其应用植物组培脱毒技术的培养条件，并重点阐述了组织培养方法及其在名贵花卉上的应用以及病毒检测的重要性，最后浅析了组织培养技术存在的问题及展望。
关键词：组织培养；名贵花卉；应用；病毒检测；前景1组织培养技术概述1．1组织培养技术的形成危害植物的病毒、植物菌原体、类细菌有几百种，果树、花卉、蔬菜等植物病毒也不下500多种，绝大多数植物种类是靠无性繁殖的，由于病毒通过无性繁殖传递，在母体内逐代积累，种性退化严重，表现为植物生长受到抑制，形态畸变，产量下降，品质变劣，严重时只好拔除病株，因而造成很大经济损失，而目前生产上对病毒病的防治尚无特效药物。
自从2O世纪5O年代发现通过植物组织培养的方法，可以脱除严重患病毒病植物的病毒，恢复种性，提高产量、质量，组织培养脱毒技术便在生产实践中得到广泛应用，且有不少国家已将其纳入常规良种繁育体系，有的还专门建立了大规模的无病毒苗生产基地。
1．2组织培养技术研究进展white于1943年首先发现，在感染烟草花叶病毒的烟草植株生长点附近病毒的浓度很低，甚至没有病毒，并且病毒的含量随植株部位和年龄而异。
Morel等在这个启示下，于1952年利用感染花叶病毒的大丽菊茎尖分生组织培养，得到了无毒植株。
自1952年以来，通过茎尖分生组织培养或热处理与分生组织培养结合的方法获得成功的实例有100余种，其中最成功的实例之一是马铃薯的脱毒培养Ⅲ。
随着植物细胞培养技术的发展，2O世纪5O年代末通过愈伤组织培养脱毒获得成功。
7O年代初植物原生质体培养成完整的植株，为利用原生质体培育无毒植株提供了可能性。
1975年Shepard_5 通过对瘟染病毒的烟草原生质体的培养得到了无毒植株。
1972年Navarro等将果树嫁接方法与茎尖分生组织培养法两者有机结合，创立了一种新的植物组织培养脱毒技术，即茎尖显微嫁接法。
柑橘脱毒苗培育技术
柑橘脱毒苗培育技术热带地区高温多湿，多发柑桔病害，特别是危险性病害威胁极大。
育脱毒苗是解决这一问题的重要途释。
柑橘脱毒苗培育技术主要方法有哪些呢？下面我们一起来了解一下柑橘脱毒苗培育技术，让我们一起来看看吧。
1、柑橘脱毒苗优势与传统的裸根苗相比，柑桔无病毒苗具有以下优点，可全年种植。
由于土壤和根系发达，造林后成活率可达100%，生长不停止，苗期不会缓慢。
以卡里佐橙为原料，柑桔生长快，果实早挂一年。
第三，结合点高，不易生病，冷冻；第四，无毒柑桔的产量比有毒树木高出30%以上，经济树龄(经济效益年限)延长10~15年。
2、柑橘脱毒苗培育技术将热处理后的根茎种子用56度热水处理50分钟，用蒸汽处理45分钟，蒸汽对春季自动前苗木进行50分钟的处理对春季的自动前苗木进行50分钟的处理，将抗生素处理，用链霉素700u/ml液浸泡，将四环素1000u/ml液浸泡2小时将四环素1000u/ml液加热到46度，浸泡时间缩短到20min。
茎尖培养是应用组织培养技术，将穗穗品种的尖端除去叶原基后，其约0.1~0.2mm的茎尖(没有维管束组织的圆锥分生组织)放入适当的培养基中培育出苗。
采用微嫁接热处理和试管播种方法培养无毒性砧木苗后，将接穗品种的盆栽苗置于人工气象室，保持2~4周，促进新梢。
新树梢长到几公分，取下来携带不同病毒的柑橘需要不同的方法来去除病毒。
目前有很多研究方法：茎尖嫁接、热处理、热处理和茎尖嫁接。
其中，茎尖的解毒主要有两种方法：茎尖培养法和茎尖嫁接法。
其原理是病毒在植物中分布不均匀，缺乏能够在顶端生长点(约0.1~0.5mm)传播病毒的维管束系统，并且存在一个高活性的病毒钝化系统。
同时，茎尖还含有较高水平的内源激素，可抑制病毒的繁殖。
所以茎的顶端几乎没有或很少含有病毒。
主要采用茎尖微芽嫁接法去除柑桔腐烂病病毒，嫁接方法为改良的压力法，该方法快速、简便，能克服创伤大，成活率60×80%的缺点。
上面的文章中我们详细的介绍了柑橘脱毒苗的培育技术。
组织培养第九章植物脱毒技术
•显微镜下 获取茎尖
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•接种
•盖好瓶塞
组织培养第九章植物脱毒技术
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•脱毒马铃薯试管苗
组织培养第九章植物脱毒技术
3．培养
25+2℃ ，1500-5000LX，10-16h 一般光照培养比暗培养效果好。其间应更换新 鲜培养基。提高培养基中BA的浓度可形成大量从 生芽。 4．生根诱导 诱导生根的方法是将2-3cm高的无根苗转入生 根培养基继续培养1-2个月可生根。
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组织培养第九章植物脱毒技术
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组织培养第九章植物脱毒技术
四、分子生物学鉴定 1、双链RNA法
通过提取纯纯化待测植物RNA，并对其进行电 泳分析，可确定dsRNA存在，从而判断待检植物是 否带病毒。 2、互补DNA（c DNA）检测法
也叫DNA分子杂交法
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叶片上产生黄斑、沿叶脉条斑
叶和茎干锈斑、坏死斑 叶片出现褪绿斑点、线纹斑及环斑、 局部坏死、畸形；叶脉间出现星状 透明斑
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组织培养第九章植物脱毒技术
葡萄卷叶病毒 葡萄茎沟病毒 葡萄栓皮病毒 葡萄金黄病毒
欧亚种葡萄 Kober 5BB LN33 Baco 22A
葡萄脉坏死病 110R
葡萄脉斑驳病 河岸葡萄
苹果 柑橘 葡萄 草莓
桃 梨
感染病 毒种类
36 23 26 24 23 11
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组织培养第九章植物脱毒技术
• 所谓脱毒就是采用一定的方法除去植 物体内病毒的技术。 • 无病毒苗：指不含该种植物的主要危 害病毒，即经检测主要病毒在植物体内的 存在表现阴性反应的苗木。
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脱毒苗培养
2、指示植物鉴定法：利用特定的易于感染某些 病毒的指示植物的特征进行病毒鉴定。
指示植物
CMV病毒感染的植株叶片
3、抗血清鉴定法：利用抗原和抗体的特异性反应原理 进行病毒鉴定。用已知病毒的抗血清（antiserum）鉴 定未知病毒。
近年来又在此基础上发展出酶联免疫法（Enzyme Linked Immunosorbent Assay，ELISA），方法是将抗 原固定在支持物上，加入待检血清，然后加入酶（过氧 化物酶或碱性磷酸酶）标记的抗体，使待检血清与对应 抗原的特异性抗体结合，最后用分光光度计进行诊断。
二、脱毒方法：
（一）茎尖分生组织培养脱毒： 1. 脱毒原理：病毒在植物体内的分布不均匀，越靠近
顶端区域，带毒越少，顶端分生组织（0.2-0.5 mm）不带 病毒或含病毒量极低。因此，分离分生组织细胞进行培 养，可以获得无病毒种苗。
2. 茎尖分生组织培养脱毒的基本程序：
一般包括培养基选择和制备、带脱毒材料的表面、灭 菌、茎尖分生组织分离、接种和培养、诱导芽分化和小 植株增殖、诱导生根、驯化移栽等环节。 茎尖分生组织的分离需要在超净工作台上借助体视显 微镜进行。茎尖放在培养皿内进行解剖，一只手用镊子 固定，另一手用解剖针将叶片和叶原基层层剥掉，当露 出半圆形顶端分生组织时，将分生组织切下，接种与培 养基上。
（四）其他脱毒方法：
1. 花器官培养脱毒：由植物的花器官培养脱分化形成愈伤 组织，然后再分化不定芽，可以获得无毒苗。如草莓花 药培养。 2. 珠心胚培养脱毒：柑橘类珠心胚与微管组织没有联系，一 般不带毒，可以利用珠心胚进行培养获得。
3.化学脱毒:采用病毒唑等试剂处理材料或添加到培养基中可 以钝化病毒，达到一定的脱毒效果。
（2）茎尖嫁接：在超净工作台上，将幼苗的上胚轴和子叶去掉， 根系截短，在离上胚轴顶端越0.5cm处斜向下切一深达木质 部，长2-3cm的切口，在斜切口末端横切一刀，用去掉切下 部分。在体视显微镜下，从待脱毒样品上切取0.2mm的茎尖 分生组织，小心放于切口的水平面上，切面向下并与砧木切 口形成层组织紧密贴合，然后接于培养基上。
植物组织培养脱毒技术
植物病毒大部分属于单链RNA病毒，少数为DNA病毒。其基 本形态有杆状、丝状和等轴对称的近球形二十面体。植物病 毒虽是严格的细胞内寄生物，但专一性并不强，往往一种病 毒可寄生在不同种、属甚至不同科的植物上。如烟草花叶病 毒能侵染十多个科，200多种草本和木本植物。
已知的植物病毒种类有600多种，绝大多数种子植物易发生 病毒病。植物被病毒感染后，一般表现出三类症状：①因寄 主细胞的叶绿素或叶绿体被破坏，使植物出现花叶或黄化病 症。②阻碍植株发育，使植株发生矮化、丛枝或畸形等。③ 杀死植物细胞使植株出现枯斑或坏死。
三、植物病毒对植物的侵染途径
由于植物病毒一般无专门吸附结构，而且植物细胞表面至今也 未发现有病毒特异性受体部位，因而植物病毒的侵染途径主要 是通过伤口。如：①借昆虫刺吸式口器损伤植物而侵入细胞。 ②借带病汁液与植物伤口相接触而侵入。③借人工嫁接时的伤 口而侵入。
植物病毒侵入植物细胞后，病毒按其各自的核酸类型进行复制。 其增殖过程因病毒类型不同其细节也很不相同，但步骤大致相 似。
热处理有一定的局限性，一方面热处理只能降低植株内病毒的 含量，单独处理难以获得无毒材料；另一方面热处理时间过长， 会造成植株代谢紊乱，加大品种变异的可能性。生产上通常采 用热处理结合茎尖培养的脱毒方式，获得较高
二、茎尖脱毒
研究表明，茎尖和根尖 的分生组织中一般是无 毒或仅含极低浓度的病 毒粒子。
茎尖由顶端分生组织及 其下的1～3个叶原基构 成。一般大小在0.1～1 ㎜之间.
四、植物病毒病的防治
目前防治植物病毒病的基本策略是：防重于治和综合防治。 一般采取以下措施：
1、选育抗病品种 选育病毒不能侵入或即使侵入也无法复 制的抗病品种和对病毒感染有较强适应性的耐病品种。
植物组织培养项目六 植物脱毒技术
2）在旺盛分裂的分生细胞中，代谢活性高，竞争抑制
了病毒的复制；
3）在植物体内，可能存在着病毒钝化系统，它在分生 组织中比其他任何区域具有更高的活性。 4）在茎尖存在高水平内源生长素，也可能抑制病毒的 增殖 。
二、植物脱毒的方法
1. 茎尖培养脱毒
通过茎尖培养脱毒的原理 1）病毒在植物体内的分布：茎尖、根尖顶端分生组织病毒 浓度低，甚至不带病毒。（茎尖、根尖无维管束系统，病毒 无法运动）
获得的再生植株无病毒。
珠心胚培养对柑橘鳞皮病、速衰病、裂皮病、
脉突病等十分有效。
柑橘珠心胚培养：取花后约7 周的幼果胚囊， 接种在25±2 ℃黑暗条件下培养 1个月，再转光 培养（1000 lx，12 h/d）。
3-4 周发生球形胚和愈伤组织，9-10 周分化子
叶，苗高 3 cm左右移植到营养钵蛭石基质中培
全世界植物病毒近788种，病毒对寄主植物造成
毁灭性危害，导致大幅度减产。
2. 植物病毒病的症状
1）变色
2）坏死 3）畸形 4）萎蔫
3. 植物病毒的侵染特性
1）有性生殖退化、仅用无性繁殖方法繁殖的植物，
极易受病毒病的侵染。
2）大多植物病毒不经种子传播（专化性强的病毒除 外）。 3）病毒在生长旺盛的部位繁殖速度较慢。
4）生根诱导：
将 2-3 cm 的无根苗转入生根培养基（ 1/2MS+IBA 0.10.2 mg/L）继续培养1-2 个月就可形成根。 极难生根的（桃、苹果等）通过微体嫁接法获得完整 植株。 二次茎尖培养，脱毒率达100%
培养基与培养方式
1）MS培养基适于多种植物茎尖培养，White、Morel培
葵、紫罗兰等；块根、块茎、鳞茎为繁殖器官的作物
培养脱毒苗用什么技术,为什么取茎尖
培养脱毒苗用什么技术，为什么取茎尖回答一般会用组织培养技术来培养脱毒苗，组织培养技术是在无菌的环境下，将从植物体中分离出的组织接种在有各种营养物质的培养基上进行培养，通过培养后就会有再生的完整植株。
因为植物感染了病毒后会导致农作物品质衰退，所以为了获得高产，就必须要培养出无病毒的苗木。
一、培养脱毒苗用什么技术
1、培养脱毒苗的技术
常用组织培养技术来培养脱毒苗，组织培养技术是从植物体中分离出符合需要的组织、器官或者细胞以及原生质体等，并通过无菌操作，在无菌条件下把植物接种在含有各种营养物质以及植物激素的培养基上进行培养，通过培养后会获得再生的完整植株或者生产具有经济价值的其他产品的技术。
2、脱毒苗的概念
（1）据研究表明，导致农作物品质衰退的原因是因为植物感染了病毒，而为了获得高产，就必须要培养出无病毒苗木，既脱毒苗木。
（2）脱毒苗因为施用植物组培技术培养植物幼嫩芽等部位所获得的小苗，因为新长小苗未受到母本病毒感染，所以叫脱毒苗。
二、脱毒苗为什么取茎尖
1、取茎尖的原因
因为相对于根尖来说，茎尖的更容易大量的持续获得，对植株的损伤也较小，而且茎尖通常也不带病毒，所以常用茎尖培养脱毒苗。
和培养其他器官一样，在进行茎尖培养时，首要需要表面不带病原菌的外植体，而茎尖分生组织由于有彼此重叠的叶原基的严密保护，只要仔细解剖，无须表面消毒就能够得到无菌的外植体。
2、脱毒苗的应用
脱毒苗技术运用到了花卉、果树、魔芋等农业生产中，从而生产出优质无毒的花卉球种、无病毒果树苗木等植物。
组织培养脱毒
组织培养脱毒植物组织培养脱毒是目前广泛应用和正在继续发展的主要脱毒方法。
依据的原理是病毒在植物体内分布的不均匀及细胞全能型，如在植物茎尖等分裂旺盛、生长迅速的组织细胞往往检测不到病毒的存在。
采用不含病毒的植物组织或细胞进行组织培养，获得无病毒的植株。
将组织培养脱毒技术与基因工程、品种改良和植物快繁结合起来，利用工厂化育苗，达到快速获得品性优良的无毒种源，具有广阔的开发和应用前景。
3.3.2.1茎尖组织培养脱毒Morel等（1952）从侵染花叶病毒的大丽花的茎尖组织培养获得无病毒的植株，从此茎尖培养成为脱毒的一个有效途径，在马铃薯、兰花、百合、鸢尾、苹果等植物中获得了脱毒成功。
利用茎尖脱毒技术，能够将很多不能通过热处理脱除的病毒脱掉，同时茎尖脱毒获得的植株遗传变异小，能够很好的保持品种的特性。
葡萄脱毒与快繁工艺流程图(摘自曹孜义，2001)3.3.2.2茎尖微芽嫁接脱毒茎尖微芽嫁接脱毒是将组织培养与嫁接相结合，来获得无毒植株的一种新方法，它是将0.1-0.3mm的茎尖作为接穗嫁接到组织培养获得的无毒实生砧木上，再进行试管培养，愈合成为完整的脱毒植株。
该方法可以解决一些果树茎尖组培成苗的困难。
另外，在柑橘等茎尖培养过程中可能发生芽变，出现返祖现象，而茎尖嫁接则不出现这些想象。
3.3.2.3其他组培脱毒方法植株中除茎尖含病毒较少外，花药、胚、胚珠及珠心等组织器官都几乎不含病毒，以这些组织器官为外植体进行组织培养也可以获得无病毒植株。
3.3.2.3.1花药培养法大泽胜次等(1974)首先发现草毒花药培养可脱除病毒，且草莓花药培养与热处理、茎尖组织培养比较，具有脱毒率高，安全可靠等优点。
其后对枸杞、苹果、葡萄、莴苣、玉米等药用植物、果树及蔬菜、农作物进行花药脱毒取得了成功。
3.3.2.3.2珠心胚培养法柑桔的种子具有多胚性，其中有一个胚是受精后产生的有性胚，其余是珠心细胞形成的无性胚，称为珠心胚。
珠心胚经培养后可以得到无病毒的珠心胚苗。
脱毒草莓组培苗的培育方法与生产技术研究
脱毒草莓组培苗的培育方法与生产技术研究作者：关荣智来源：《农业与技术》2015年第24期摘要：草莓种植随着设施栽培年限的延长，以红中柱根腐病、黄萎病、枯萎病为代表的土传病害发生频率增加，土壤连作障碍也成为制约产业健康发展的瓶颈因子。
植物组织培养脱毒技术是草莓脱除病毒病的一种最有效的途径之一。
通过植物组织培养技术进行草莓的脱毒与试管苗繁殖，缩短了草莓繁殖周期，去除体内积累的病毒含量，保持亲本的优良性状，提高了繁育能力和繁殖系数。
关键词：脱毒；草莓；驯化；管理中图分类号：S-3 文献标识码：A DOI：10.11974/nyyjs.201512320281 脱毒草莓组培苗的培育方法1.1 茎尖分生组织培养茎尖分生组织培养过程：品种为九九、章姬、宝交等。
在其生长盛期从生长健壮、无病虫危害的植株上选取新抽生的、生长充实的葡匐茎作外植体。
用流水冲洗4h，无菌条件下，用70%酒精表面消毒30s，再用0.1%L汞消毒5～10min，并不停地搅动，然后用无菌水冲洗4次，在解剖镜下剥取1.0mm大小的茎尖立即接种于培养基MS+0.1～0.5mg/L6-BA+0.1mg/LIBA+7g/L琼脂+30g/L白糖，pH6，培养温度为23～25℃，光照强度2500 lx，光照13h/d。
1.2 组培快繁组织培养快速繁殖脱毒苗不仅能够加速良种繁育，保持亲本的优良性状，而且不受季节、时间和病虫害的影响，不占用较大的土地又节省材料，可全年生产试管苗，大大提高了繁殖系数和工作效率。
组培快繁方法为，试管苗每月继代快繁培养1次，继代快繁培养基为MS+0.3～0.8mg/L6-BA+0.1mg/LIBA0.5～1.0mg/LGA3+7g/L琼脂+30g/L白糖，培养温度为24℃，光照强度为2500lx，每天光照9h。
每年12月份或1月份要把试管苗转入生根培养基，经过30d以内便长出根系。
1.3 组培苗的移栽组培苗由人为培养环境转移到天然生长环境中，环境条件发生巨大变化，湿度大幅度降低，温度不恒定，光照强烈，微生物多，故需炼苗过渡。
植物脱毒方法
植物脱毒方法
1、茎尖培养脱毒:病毒在植物体内的分布并不均匀,越靠近茎端的病毒的感染深度越低,生长点则几乎不含或含病毒很少。
2、愈伤组织培养脱毒法:通过植物的器官和组织的培养,脱分化诱导产生愈伤组织,然后从愈伤组织再分化产生芽,长成小植株,可以得到无病毒苗。
3、珠心胚培养脱毒:病毒一般不通过种子传播,由珠心细胞发育成的胚再生的植株是无毒的,并具有与母本相同的遗传特性。
4、茎尖微体嫁接:将实生苗砧木在人工培养基上种植培育,再从成年无病树枝上切取0.4—1.0mm茎尖,在砧木上进行试管微体嫁接,以获得无病毒幼苗。
5、花药培养脱毒。
6、热处理脱毒:一些病毒对热不稳定,在高于常温的温度下(35-40°C),即钝化失活。
7、化学处理:抑制或杀死病毒。
草莓种苗的脱毒技术试验研究
草莓(Fragaria ananassa Duch.)属蔷薇科草莓属多年生草本植物,是一种重要的经济作物[1],在我国很多地方被广泛栽培,具有较好的经济效益。
草莓是一种以匍匐茎无性繁殖的作物,因长期种植,体内病毒逐年积累加重,病毒病发生严重[2]。
一旦草莓感染了病毒后,植株生长缓慢、叶皱缩、果实逐年变小、畸形、品质差,一般减产30%~80%[3],草莓病毒病已成为了草莓生产中的一大危害。
草莓病毒病,目前还没有一种比较好的药剂可用于防治。
培育无病毒母本苗,栽培无病毒苗木,是防治草莓病毒病的根本对策[4]。
目前世界上生产草莓无毒苗最普通、最有效的方法是用茎尖培养法培育草莓无病毒苗[5]。
草莓脱毒技术的研究,国内已有很多报道,上海交通大学农业与生物学院何欢乐等的研究结果[2]表明,最适宜的草莓脱毒法为改良热处理+茎尖培养法,即先将草莓匍匐茎放在40℃热水中处理4h,再剥取≤0.5mm 大小的茎尖进行培养,脱毒效果良好;高山林[3]的研究结果表明,把切取的草莓芽洗净后经过高温短时间热处理,然后用茎尖培养法获得无病毒草莓苗;刘健等[6]的研究表明,经40~42℃高温处理草莓匍匐茎后再剥取茎尖,得到的试管苗能达到100%脱毒率;顾地周等[7]的研究表明,利用试管内高温处理(在温度35~50℃条件下,培养30~80d)结合茎尖脱毒的方法可以完全脱除草莓病毒,从而建立了草莓脱毒体系;覃兰英等[8]的研究表明,将草莓在35℃下热处理7d 后,逐步升温至38℃,在湿度40%~68%、光照度4000~5000lx 条件下热处理35d 后,将长出的新茎茎尖再行组培,可获得100%的脱毒苗;童尧明等[9]的研究表明,以草莓茎尖分生组织0.2~0.4mm 一次性培养出组培苗,出苗率83%~90%,脱毒率达100%;高遐虹、李梅[10]的研究结果表明,采用草莓的茎尖2次脱毒法,对宝交早生等6个草莓品种的茎尖进行组培脱毒,经检测可全部脱除草莓斑驳病毒、草莓轻型黄边病毒、草莓镶脉病毒和草莓皱缩病毒,茎尖2次脱毒法操作简便、易掌握,脱毒率达100%,分化率达79%。
脱毒苗
脱毒苗在农业生产中，一些农作物经过几代种植，品质一般都同现不同程度的退化，在马铃薯、蔬菜、果树、花卉等农作物上表现得尤为突出。
根据科学家的长期研究，农作物品质衰退的原因主要是植物病毒的感染。
为获得高产，生产中就必须培养出无病毒苗木，即脱毒苗木，这就是脱毒苗的概念。
我国的农业科技工作者，利用生物技术措施，从感染病毒的植株中获得了无病毒种植的苗木材料。
如马铃薯植株的顶端分生组织很少或没有病毒，常采用顶端分生组织培养技术得到无病植株，即脱毒马铃薯。
用这种植株结出的薯块来作原种，繁殖更多的无病毒种薯，供生产中大面积推广使用。
脱毒苗技术现在也运用到了花卉、果树、魔芋等农业生产中，从而生产出优质无毒花卉球种、无病毒果树苗木等。
再议果树“脱毒苗”发布: 2009-11-20 10:02 | 作者: 于新刚| 来源: 水果邦[i=s] 本帖最后由于新刚于2009-11-27 07:32 编辑又是一个苗木销售的大好季节！不法商家“隆重”推出“脱毒苗”（实际上应该是无毒苗，国家没有脱毒苗的生产技术规程。
因为，目前基本没有无毒苗，所以称为脱毒苗），老百姓纷纷上当。
市场上的所谓“脱毒苗”，好的是用脱毒母株采集接穗，嫁接而成。
相当一部分的，就是普通嫁接苗而已。
真正的意义上的“脱毒苗”（无毒苗），是用植物的茎尖，切片，组培而成。
或用砧木组培小苗，在无菌、无毒条件下，显微嫁接上脱毒的品种茎尖。
这些，都需要组培设备，及营养钵，在温室内培养，后移栽大田，培养而成。
造价基本上在10元左右。
你要买脱毒苗：一看：是否有组培实验室。
二看：是否有温室或大棚内的营养钵小苗三看：大田移栽的苗木（看不出嫁接口）若没有上述的三个条件；祝贺你，购买假苗成功！我反复的讲，若栽培脱毒苗必须：1. 在500m，最好20~25km内没有同类树种，或寄主相同的螨类、蚜虫类、蝉等刺吸式口器的害虫（目前在中国不易找到）2. 地下挖深度为1.2~1.5m左右沟，并用水泥灌沟，以阻挡地下线虫。
脱毒苗技术原理
脱毒苗技术原理一、脱毒苗技术的概述脱毒苗技术是指通过一定的方法将病毒或细菌等病原体从植物组织中去除，制作出无病原体的植物苗，以达到防治病害的目的。
该技术被广泛应用于农业生产中，可以有效地控制和预防许多植物病害。
二、脱毒苗技术的原理1. 植物繁殖体组织培养脱毒苗技术主要是通过植物繁殖体组织培养来实现。
在培养过程中，将含有病原体的植物材料切割成小块，并在含有营养物质和生长调节剂的培养基上进行培养。
经过一段时间后，可以得到新生的无菌组织，并通过不断地分离和传代，最终得到无菌苗。
2. 热处理法该方法是通过高温处理来去除植物材料中的病原体。
将含有病原体的材料置于高温环境下进行处理，在适当的时间内使其达到致死温度，从而去除病原体。
该方法适用于一些比较耐高温的病原体，如烟草花叶病毒等。
3. 化学处理法该方法是通过化学药剂来去除植物材料中的病原体。
将含有病原体的材料浸泡在药剂溶液中，经过一段时间后，药剂可以杀灭植物材料中的病原体。
该方法适用于一些比较耐药剂的病原体，如西红柿黄化曲叶病毒等。
4. 生物处理法该方法是通过利用其他生物来去除植物材料中的病原体。
例如，可以利用寄生菌、拮抗细菌等生物来对抗植物材料中的病原体，并最终将其去除。
该方法适用于一些比较难以通过其他方法去除的病原体。
三、脱毒苗技术的应用脱毒苗技术在农业生产中具有广泛的应用价值。
例如，在果树育种中，可以利用脱毒苗技术来制作出无菌果树苗，并进行育种繁殖。
在蔬菜生产中，可以利用脱毒苗技术来预防和控制一些病害，如番茄黄化曲叶病等。
此外，在花卉生产中，也可以利用脱毒苗技术来制作出无菌花卉苗，并进行花卉育种。
四、脱毒苗技术的优势1. 可以有效地控制和预防植物病害，提高农业生产效益。
2. 可以减少化学农药的使用量，保护环境和人类健康。
3. 可以提高植物品质和产量，增加经济效益。
4. 可以为植物育种提供无菌材料和条件。
五、总结脱毒苗技术是一种重要的农业生产技术，通过去除植物材料中的病原体，制作出无菌植物苗，并应用于农业生产中。
植物组织培养技术第七章植物脱毒快繁技术
鉴定方法：
抗原的制备 →→抗血清的采收，分离→→ 把稀释的抗血清与未知的病毒植物的汁液在小 试管内混合→→根据沉淀反应来鉴定病毒种类。
植物无病毒苗的培育
3. 特点：
特异性高（这种抗血清是高度专一 性的试剂），测定速度快，一般几小时甚 至几分钟就可以完成。所以抗血清法成为 植物病毒鉴定中最有用的方法之一。
葡萄扇叶病毒
苹果花叶病毒
（二）茎尖培养脱毒
1、茎尖培养脱毒原理 2、培养基 3、茎尖培养方法 4、影响微茎尖培养的因素
①外植体大小 ②培养条件 ③外植体的生理状态
植物的去病毒技术，实质上就是采取不含 病毒颗粒或病毒颗粒含量甚少的0.1～0.5mm 带1～2个叶原基的茎尖作为外植体，进行微繁 殖，使其培养成完整的无病毒小植株的技术。
1、茎尖培养脱毒原理
病毒在植物体内分布不均匀，其数量随植株 部位及年龄而异，越靠近茎顶端区域，病毒感染 的程度越低，生长点即分生组织（约0.1-1mm） 几乎不含或含病毒很少。
分生组织不带病毒，可能有4方面的原因：
1、植物体病毒的移动主要靠2条途径：一是通过维管 系统，而分生组织中尚未形成维管系统；二是通过胞间连 丝，但这条途径病毒移动速度非常慢，赶不上茎尖和根尖 细胞不断分裂和活跃的生长速度。
活，并加快分裂和生长。
A
B
C
低 温 生长区
热处理区 高 温
寄主无损伤
病原微生物被消除 寄主被杀死
2、热处理脱毒方法
(1)温汤浸渍处理 (2)热空气处理
（1）. 温汤浸渍处理 适用：休眠器官、剪下的接穗或种植的
材料
方法：50℃左右的温水中浸渍10min
至数小时
特点：方法简便易行，但易使材料受伤。
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植物脱毒苗组织培养技术的研究
本论文对菊花、郁金香和康乃馨进行了脱除病毒培育无毒苗的适用技术研究。
现将主要结果摘要如下：菊花脱毒苗培育试验中，以患花叶病“国庆”菊花幼嫩茎尖长0.5-0.8mm为外植体。
外植体愈伤组织的诱导和生长及分化出芽均受到BA和NAA配比的影响。
在MS+BA2.0mg／1+NAA0.1mg／1培养基上培养，愈伤组织诱导效果最好，诱导率达96.0％；愈伤组织分化出芽以MS+BA3.0mg／1+NAA0.1mg／1效果最佳，分化率达60.0％，每块愈伤组织平均分化出4个芽。
幼苗2cm长时切割转接到1／2MS培养基上培养，10天后长出白色小根，生根率达78.0％；在含有NAA0.1-0.5mg／1培养基上生根率可达92.0％以上，在
1／2MS+NAA0.1mg／1中培养的每株生根数最多。
郁金香脱毒组织培养，以
0.3-0.5mm茎尖为外植体。
茎尖愈伤组织的诱导在MS+NAA2.0mg／1+BA1.5mg／1培养基上诱导率达
94.0％；愈伤组织分化出芽在MS+NAA0.5mg／1+BA1.5mg／1培养基分化率达
86.0％；用茎尖直接分化芽的试验中，在MS+NAA0.1mg／1+2，4-D0.1mg／1上茎尖成活率达90.0％，分化率达60.0％；郁金香组培苗生根培养，在1／
2MS+NAA0.5mg／1培养基中生根率达80.0％，平均每苗生根5.2条。
康乃馨脱毒组培试验表明，用0.3mm茎尖接种，以MS+BA0.7mg／1+NAA0.1-0.2mg／1为培养基诱导愈伤组织效果好，诱导率为90.0％；愈伤组织分化出芽以MS+BA0.8mg／
1+NAA0.2mg／1培养分化最好，分化率为74.0％，平均每块愈伤组织有芽5.9个。
在1／2MS+NAA0.01mg／1+IBA0.05-1.0mg／1上诱导生根时间短，根条数适
中，生根率为86.0-94.0％；在康乃馨组培试验中采取降低培养温度、增加光照强度，在培养基中加入20万单位青霉素可减轻玻璃苗现象。
三种花卉的组培苗，经症状观察、汁液传染试验、内含体染色检查等病毒学试验检测，以后两种方法结果为依据，菊花脱毒苗有19株，脱毒率63.3％；郁金香、康乃馨脱毒苗均有13株，脱毒率均为65％。