植物组织培养技术

初代培养（ culture） 初代培养（primary culture）：指在组织 培养过程中，最初建立的外植体无菌培 养阶段。由于首批外植体来源复杂，携 带较多细菌，要对培养条件进行适应， 因此，初代培养一般比较困难。 继代培养（ subculture） 继代培养 （ subculture ） ： 在组织培养过 程中，当外植体被接种一段时间后，将 已经形成愈伤组织或已经分化根、茎、 叶、花等的培养物重新切割，转接到其 它培养基上以进一步扩大培养的过程称 为继代培养。
另一为药物和生物制品的工业生产，探索 天然药物生产工业化的途径是当前药物生产 的一个新方向，有可能用组织培养法来代替 全植物提取有效成分。组织培养应用在药学 方面的工作虽然历史不长，但发展很迅速， 它具有如下一些优点： 1．利用组织培养代替原植物的栽培以获得 所需的有效成分，达到产量高，成本低的目 的，还可节约土地。 2．除了应用于产生次生物质外，还可应用 于生物转化。例如烟草组织培养中蒂巴因去 甲基后可能生成吗啡。
目前中国已成功地将麦角菌、灵芝、猴 头菇等真菌进行工业化生产，高等植物组织 培养在工业化中的应用也正在研究。 总之，植物组织培养这一新技术在中草药 方面应用的前途是无限广阔的，它不仅有利 于探讨和阐明药用植物生理、遗传和成分生 物合成等一系列理论问题，而且一旦工业化 生产问题得到解决，将可以为防病治病做出 很大的贡献。
2 培养基的种类 MS培养基、B5培养基、White培养基、N6培养基等等。 3 培养基的配制 （1）混和培养基中的各成分 （2）融化琼脂 （3）调整pH为5.8 （4）分装 （5）灭菌 （6）放置备用
二组织培养操作的一般流程
1 2 3 4 5 6 器皿的洗涤 培养基的配制和灭菌 接种室及用具消毒 材料灭菌：70％酒精、氯化汞 接种 无菌培养
脱分化（ dedifferentiation） 脱分化 （ dedifferentiation ） ：指已分化的组织 又恢复到无分化的状态。在组织培养过程中，将 已经分化的茎、叶、花等外植体进行培养，令其 形成愈伤组织，回到没有分化的状态，称为脱分 化。 再分化（ redifferentiation） 再分化 （ redifferentiation ） ： 指在植物组织培 养中，对处于脱分化状态的愈伤组织进行培养， 诱导其形成新的植物体的过程。
外植体（explant） 在植物组织培养过程中， 外植体（explant）：在植物组织培养过程中，从 植物体上被分离下来的， 接种在培养基上， 植物体上被分离下来的 ， 接种在培养基上 ， 供 培养用的原生质体、 细胞、 组织、 培养用的原生质体 、 细胞 、 组织 、 器官等成为 外植体。 外植体。 愈伤组织（ callus） 愈伤组织 （ callus ） ： 植物受伤后的伤口处或在 植物组织培养中外植体切口处不断增殖产生的 一团不定形的薄壁组织。 一团不定形的薄壁组织 。 愈伤组织可使伤口愈 使表面细胞呈木栓化而起到保护作用； 合 ， 使表面细胞呈木栓化而起到保护作用 ； 植 物扦插时， 愈伤组织可形成不定根； 物扦插时 ， 愈伤组织可形成不定根 ； 植物嫁接 愈伤组织可使接穗和砧木愈合； 时 ， 愈伤组织可使接穗和砧木愈合 ； 在植物组 织培养中，愈伤组织常可形成不定芽。 织培养物组织培养的理论依据 ： 植物细胞全能 性。 植物细胞全能性（totipotency） 植物细胞全能性（totipotency）：指植物 的每个细胞都包含着该物种的全部遗传 信息，从而具备发育成完整植株的遗传 能力。在适宜条件下，任何一个细胞都 可以发育成一个新个体。
一植物组织培养一些的概念 植物组织培养一些的概念
（三）渗透压： 渗透压对植物组织的生长和分化 很有关系。在培养基中添加食盐、蔗糖、甘露 醇和乙二醇等物质可以调整渗透压。通常1～2 个大气压可促进植物组织生长，2个大气压以上 时，出现生长障碍，6个大气压时植物组织即无 法生存。 （四）酸碱度： 一般植物组织生长的最适 宜pH为5～6．5。在培养过程中pH可发生变化， 加进磷酸氢盐或二氢盐，可起稳定作用。 （五）通气： 悬浮培养中细胞的旺盛生长 必须有良好的通气条件。小量悬浮培养时巨常 转动或振荡，可起通气和搅拌作用。大量培养 中可采用专门的通气和搅拌装置。
运用组织培养方法可以在比较简单易观 察的条件下研究细胞、组织或器官的繁殖、 生长和分化，以及各种外界因素对它们的影 响，从而为解决农业生产和药物生产中的某 些问题开辟了广阔的前景。目前已有若干重 要成果应用于生产实践中，一为营养繁殖系 的快速繁殖，如以甘蔗为例；原来每亩要用 蔗种0.5～1吨，用组织培养快速繁殖的幼苗 进行栽培可节省大量蔗种。又如贝母繁殖率 非常低，而用组织培养分化出的三个月左右 的鳞茎，其大小就相当于用种子繁殖二年生 的鳞茎。
三、选材和灭菌方法
从低等的藻类到苔藓、蕨类、种子植物等高等植物的 各类、各部分都可采用作为组织培养的材料，一般裸子 植物多采用幼苗、芽、韧皮部细胞，被子植物采用胚、 胚乳、子叶、幼苗、茎尖、根、茎、叶、花药、花粉、 子房和胚珠等各个部分。 由于植物在自然条件下，表面常被霉菌和细菌污染， 故材料必须进行灭菌处理。一般用漂白粉溶液（1～10 ％）、次氯酸钠溶液（0．5～10％）、升汞溶液 （0．01％）、乙醇（70％）或过氧化氢（3～10％）等 处理后，再用无菌水反复冲洗至净，然后在无菌室内， 将所取的组织迅速培养在固体培养基上。在适宜的条件 下，受伤组织切口表面不久即能长出一种脱分化的组织 堆块，称为愈伤组织（Callus）。
植物组织培养技术
植物组织培养（ 植物组织培养 （ plant tissue culture） ： ） 是指在无菌条件下，将离体的植物器官 （如根、茎、叶、茎尖、花、果实等）， 组织（如形成层、表皮、皮层、髓部细 胞、胚乳等），细胞（如大孢子、小孢 子、体细胞等）以及原生质体，在人工 控制的环境里培养成完整植株的一门生 物学技术。
一、培养基的组成和配制法
1 培养基的成分 （1）无机营养物 （2）有机物质 （3）植物生长刺激物质 （4）其它 附加物 （5）其它对生长有益的未知复合成分：如椰子汁、酵母提 取液、麦芽浸出液等。 培养基中如加入0．5～1％的琼脂即为静止培养的固体 培养基，否则为悬浮培养的液体培养基。不同植物材料常 需要改变配方，如维持生长和诱导细胞分裂和分化的培养 基配方就不同，因此配方的种类很多，目前以Ms （Murashige and Skoog）培养基配方为最常用的一种基 本培养基，它利于一般植物组织和细胞的快速生长。
四、培养条件 （一）温度： 对大多数植物组织 20～28℃即可满足生长所需，其中26～ 27℃最适合。 （二）光： 组织培养通常在散射光 线下进行。光的影响可导致不同的结果。 有些植物组织在暗处生长较好，而另一 些植物组织在光亮处生长较好，但由愈 伤组织分化成器官时，则每日必须要有 一定时间的光照才能形成芽和根。有些 次生物质的形成，光是决定三因素。
番茄无菌苗愈伤组织培养
1 培养基配制 2 接种和培养 接种－－在无菌条件下，将灭过菌的材料，经适 当切割，转移到培养基上。
植株再生（ regeneration） 植株再生（plant regeneration）：指通过 组织培养技术将植物的细胞、组织、器官 培养成完整植株的过程。 试管苗（testplantlet） 试管苗（test-tube plantlet）：指在无菌 条件下的人工培养基上，对植物细胞、组 织或器官进行培养所获得的再生植株。