Rh(D)阴性冰冻解冻去甘油红细胞的质量分析及产科应用

Rh（D）阴性冰冻解冻去甘油红细胞的质量分析及产科应用

摘要目的分析本站冰冻解冻去甘油红细胞质量及临床应用疗效。方法采用ACP125全自动血细胞处理仪对48袋（96 U）Rh（D）阴性冰冻红细胞进行去甘油化和复苏洗涤，使用前检测血红蛋白含量、甘油残留量及游离血红蛋白含量等指标，检测32例产妇输注前后血红蛋白（Hb）、红细胞比容（Hct）、总胆红素（TB）、直接胆红素（DB）和尿胆原（UBG）水平，评估临床疗效。结果48袋（96 U）冰冻解冻去甘油红细胞各项质控指标均达到GB18469-2012《全血及成分血的质量要求》。32例产妇输注后，均达到满意的疗效，无输血不良反应的发生。输注后Hb为（86±3.2）g/L、Hct为（35.0±1.8）%，均高于输注前的（72±2.5）g/L、（27.5±1.1）%，比较差异具有统计学意义（P＜0.05）；而输注前后TB和DB比较差异无统计学意义（P>0.05）；输注前后UBG均为阴性。结论ACP125全自动血细胞处理仪制备冰冻解冻去甘油红细胞质量合格，可以用于Rh（D）阴性患者的临床输血。

关键词Rh（D）阴性冰冻解冻去甘油红细胞；质量控制；应用疗效

目前，国际输血协会确认的血型系统有33种，其中，Rh血型是除了ABO 血型系统外最重要的血型系统，但我国Rh（D）阴性人群比例仅约为0.4%。故此，血站该血液库存很少。当有Rh（D）阴性患者急救大量用血时，难以在短时间内招募Rh（D）阴性献血者，影响了患者的救治。但同时由于采集时机与临床需求对应不上而造成血源的浪费。自1970年Meryman等将甘油保存红细胞技术应用于人体输血后，冷冻血液在临床输血治疗中开始得到推广应用[1]，Rh（D）阴性患者用血问题逐步得到了解决。本站自2013年开展该项技术，制备的Rh（D）阴性红细胞大部分在医院的产科中使用。现将2015年1月～2016年12月在花都区妇幼保健院产科中使用的48袋（96 U）Rh（D）阴性冰冻解冻去甘油红细胞质量控制及应用疗效报告如下。

1 材料与方法

1. 1 血液来源选取符合GB18467-2011《献血者健康检查要求》[2]，从日常采集并经血型血清学检测确定为Rh（D）阴性的合格血液，确认方法按《全国临床检验操作规范》[3]进行操作。在（4±2）℃的血液专用保存箱中保存6 d 内的全血（CPD-A保养液）或悬浮红细胞（MAP红细胞添加剂）。

1. 2 病例来源通过查阅2015年1月～2016年12月在花都区妇幼保健院产科中收住院的32例输注Rh（D）阴性冰冻解冻去甘油红细胞产妇的病历，对有关输血资料和数据进行统计分析。产妇平均年龄31岁，其中输注A型9例，B型8例，O型13例，AB型2例。全部治愈出院。

1. 3 设备及材料ACP125全自动血细胞处理仪、KR-4I大容量冷冻离心机、无菌接管机（费森尤斯）、三洋-80℃超低温血液保存箱、恒温水浴箱、Kx-21全自动血细胞分析仪、CS-600A 全自动生化分析仪、全自动细菌培养仪、SE-260

热合机、225型加甘油耗材、235型去甘油耗材、PVC血液转移袋（四川南格尔）、57.1%甘油、9%氯化钠（NaCl）、0.9%NaCl。

1. 4 制备方法

1. 4. 1 冰冻红细胞制备方法全血或懸浮红细胞经离心[温度（4±2）℃，离心力4036 g，时间8 min]制备成浓缩红细胞，将浓缩红细胞通过无菌接管机转移到800 ml空袋中，与225型加甘油耗材连接。利用ACP125全自动血细胞处理仪自动甘油化。加甘油完毕在室温静置30 min后离心[温度（22±2）℃，离心力2516 g，时间8 min]，移除上清液后热合，将制备好的冰冻红细胞装入盒子置于-80℃超低温血液保存箱中保存。

1. 4. 2 冰冻红细胞复苏洗涤方法将冰冻红细胞置于已预温37～42℃的振荡水浴箱中5 min内溶解完毕，计算出红细胞的净重量。将235型去甘油耗材通过无菌接管机与冰冻红细胞连接。开启ACP125全自动血细胞处理仪，安装去甘油耗材后自动完成红细胞的复苏及洗涤程序。洗涤完毕后热合成品袋及配血标本。在电子天平上称重，记录复苏后红细胞的重量。

1. 4. 3 质控标本的留取方法洗涤完成后，从血细胞处理仪上取下成品袋，轻轻摇匀。将血液顺着管道回流至远端分叉处，热合分离管道末端，再将充满血液的管道热合成两段，远端保留一段≥20 cm的管道作为质控标本。

1. 5 冰冻解冻去甘油红细胞血液质量的检测用全自动血细胞分析仪检测Hb含量、白细胞计数；邻联甲苯胺法检测游离Hb；过碘酸钠法检测甘油残留量；全自动细菌培养仪作细菌培养。

1. 6 观察指标Rh（D）阴性产妇产前Hb0.05）；输注前后UBG均为阴性。见表2。3 讨论

随着输血技术的快速发展，临床对Rh（D）阴性血的需求量日益增加，如何保障Rh（D）阴性等稀有血型血液的供应，为临床急救诊疗缩短时间是临床急需解决的问题。特别是事故抢救和产妇大出血，短时间内需求的血量较多[5]。如不及时输血，将严重威胁患者、产妇或胎儿的生命。开展冰冻红细胞制备技术，使Rh（D）阴性红细胞超低温甘油化冰冻保存，可大幅度延长红细胞在体外存活时间，为储备稀有血型应急血液提供了条件。

本文研究可知，使用ACP125全自动血细胞处理仪制备冰冻解冻去甘油红细胞，其制品质量明显高于国家标准《全血及成分血的质量要求》。稀有血型血液在采集后甘油化深低温保存备用，使用时冰冻血液从复苏到洗涤结束，仅需约1 h。主要是冰冻红细胞洗涤的程序简化，也能使红细胞体积缩小而缩短冻成和解冻时间。解冻后红细胞的2，3-二磷酸甘油酸（2，3-DPG）水平与冰冻前区别不大，红细胞虽有轻微变形，但不影响携氧功能。同时，同种异体冰冻红细胞在制备时白细胞、血小板、抗凝剂、细胞外钾离子、游离Hb等物质因多次洗涤几乎被洗去，减少了因输注异体血引起的输血免疫反应及白细胞相关病

毒传播的发生率，也减少了输血免疫抑制[6]，即使大量输注也不易产生酸中毒和高钾血症，也可防止免疫球蛋白A（IgA）缺乏的患者因输入含有IgA抗体的血液而发生过敏反应，提高了输血的安全性。

本文研究显示，32例产妇输注Rh（D）阴性冰冻解冻去甘油红细胞后，Hb 及Hct能达到理论值：60 kg体重的成人每输入1单位全血约可提高血红蛋白5 g/L[7]，而TB、DB 及UBG与输注前没明显变化，证明冰冻解冻去甘油红细胞复苏洗涤后红细胞质量保证，输注后未发生溶血等输血不良反应。

目前，红细胞的冰冻保存是现代输血中唯一能长期保存红细胞的方法，可以使红细胞有效保存10年[8]。开展冰冻解冻去甘油红细胞制备技术，不仅避免宝贵血液资源的浪费，更重要的是为稀有血型患者的输血提供了方便，为抢救赢得了时间，也为臨床提供了更符合国家质量标准的血液产品，更有效地保障了临床用血的安全。

参考文献

[1] 马庆. 深低温长期保存红细胞的效果评价. 中国输血杂志，2012，25（9）：837-840.

[2] 王宇骁，王涛，王宇航. 《献血者健康检查要求》（GB18467-2011）在日常工作中的心得体会. 中国输血杂志，2012，25（s1）：31.

[3] 叶应妩，王毓三，申子瑜，等. 全国临床检验操作规程. 第3版. 南京：东南大学出版社，2006：249-250.

[4] 周静宇. 全血及成分血质量要求和临床输血技术规范的差异. 临床血液学杂志：输血与检验，2013（2）：265-266.

[5] 唐秋民，莫秋红，申卫东，等. 稀有血型血液冷冻血库的建立及临床意义. 广西医学，2008，30（9）：1400-1401.

[6] 沈武，陆瑶，徐雪瑾，等. 温度对冰冻红细胞保存的影响. 临床输血与检验，2005，7（2）：105-106.

[7] 胡丽华，王学锋，阎石，等. 临床输血学检验技术（临床输血部分）. 北京：人民卫生出版社，2015：113.

[8] 魏亚明，刘景汉，兰炯采，等. 基础输血学. 北京：人民卫生出版社，2011：458-463.