9章 工业微生物菌种的分离

1.微生物菌种工作有哪些任务
在微生物工业应用中， 微生物菌种工作主要包括以下四方面：

① 菌种的分离筛选：挑选符合生产要求的菌种，这是选种工作的任务。
② 菌种培育： 改良已有菌种的生产性能，使产品的质和量不断提高，或使它更适应于工艺的要求，这是育种工作的任务。
③ 菌种的保藏： 一切生产菌种都要使它避免死亡和生产性能的下降，这是菌种保藏工作的任务。
④ 退化菌种的复壮： 如果发现菌种的生产性能下降，就要设法使它恢复，这便是菌种复壮工作的任务。
2.举例工业上常用微生物的种类及用途
（1）、常用的细菌：乳酸杆菌
应用：乳酸、干酪、奶子酒、发面、泡菜、酸奶等的制作
大肠杆菌
应用：对谷氨酸定量分析，生产天冬氨酸、苏氨酸、缬氨酸
枯草芽孢杆菌
应用：生产淀粉酶
（2）种类：酒精酵母、啤酒酵母、假丝酵母 红酵母、面包酵母
应用：生产酒精、啤酒、石油发酵脱蜡和制取蛋白质、生产脂肪
（3）、霉菌 曲霉属 应用：生产有机酸、生产淀粉酶、果胶酶、葡萄糖氧化酶
黄曲霉，应用：酱油、酱类（淀粉酶）
米曲霉，应用：产糖化酶和蛋白酶、主要用于酿酒制曲和酱油制曲
土曲霉，应用：生产甲义丁二酸
毛 霉，应用：可以产生蛋白酶，我国多用于豆腐乳、豆豉等的制作
根霉，种类：米根霉、华根霉、少根根霉、爪哇根霉，应用：酿酒

青霉菌，应用：生产青霉素、葡萄糖氧化酶
（4）、放线菌
种类：龟裂链霉菌、金霉素链霉菌、灰色链霉菌、红霉素链霉菌
应用：各类抗生素，土霉素、四环素、链霉素、红霉素
3.设计实验分离筛选能降解石油的菌株
一）采样：采集油田附近土壤；富集：以石油为唯一碳源进行富集；分离：用添加石油的培养基进行筛选；发酵性能检测：进行生产性能检测，这些特性包括形态培养特征，营养要求，生理生化特性，发酵周期，产品品种和产量，耐受最高温度，生长和发酵最是温度，最适PH，提取工艺等
4.请说明一种最适宜保藏细菌放线菌霉菌的保藏方法及特点
1）斜面保藏法：
斜面保藏是一种短期、过渡的保藏方法，用新鲜斜面接种后，置最适条件下培养到菌体或孢子生长丰满后，放在4℃冰箱保存。一般保存期为三个月到六个月。
优点：方法简单、存活率高，具有一定的保藏效果。
缺点：菌种仍有一定的强度的代谢活动条件，保存时间不长，传代多，菌种容易变异。
适用菌种：细菌、酵母、防线菌、霉菌

5.成功的分离培养方法，培养分离中要解决的问题
1)认真考虑所需产品的特征和生产过程

；
(2)制订初步的筛选标准；
(3)将生态学方法运用到分离和筛选过程。
（1、“分离什么和从哪里分离?”
（2、必须充分考虑所分离微生物的生产能力、生长速度、生物群体培养和产品生产工艺及其提纯的难易和费用，工业生产发酵罐中稳定性及遗传操作的难易程度等。
（3、选择适宜的培养分离方法和检测方法。
6.将生态学方法用于培养分离的一般思路要点
（1．列出所要分离的微生物类群；
（2．根据所采集样本的各种生态参数，描述所要分离的微生物之生态系统或栖息地：
（3．将若干样本分成若干类型，如植物和植物各部，土壤(类型和土层)、岩石、水、昆虫和发酵食品等；
（4．列出所要考察和测量的环境参数，如pH、盐分、水分、氧化还原电势及温度等；
（5．列出生物系统中有用的自然底物，如森林土壤中的几丁质、葡萄表皮的果胶；
（6．根据上述1-5项中所获得的数据，设计分离方法，即选择适宜的稀释液、底物、试样、天然浸出汁和培养条件；
（7．用标准方法作对照来评价生态学分离方法；
（ 8．根据待检材料的生态参数需要，修改已知的方法；
（ 9．运用特定的富集方法，富集那些可能具有筛选意义的微生物类群。
7.采样的注意事项
（1、采样时应尽可能保持相对无菌；
（2、所采集的样本必须具有某种代表性；
（3、采好的样必须完整地标上样本的种类及采集日期、地点以及采集地点的地理、生态参数等；
（4、应充分考虑采样的季节性和时间因素，因为真正的原地菌群的出现可能是短暂的；
（5、采好的样应及时处理，暂不能处理的也应贮存于4℃下，但贮存时间不宜过长。这是因为一旦采样结束，试样中的微生物群体就脱离了原来的生态环境，其内部生态环境就会发生变化，微生物群体之间就会出现消长。