2012年微生物检验技术考试要点(中级)

检验技术资格考试考点精要——微生物学检验（中级）1. 生物学按界门纲目科属种分类，种是最小单位。

超净工作台应采用层流技术净化空气、选择垂直气流通风方式。

2. 结核菌可利用甘油为碳源，梭状芽胞菌可以氨基酸为碳源，流感嗜血杆菌要Ⅴ，Ⅹ因子才能生长。

3. 药物敏感试验：纸碟法、小杯法、凹孔法、试管法。

常用：单片纸碟法、试管稀释法（以抗菌药物的最高稀释度仍能抑制细菌生长或杀菌管为终点，该管含药浓度为最低抑菌浓度MIC或最低杀菌浓度MBC），两值越低则表示越敏感。

MIC与抑菌圈呈负相关，即抑菌环直径越大，MIC越小。

4.常用的免疫技术：酶免疫技术（EIA）、协同凝集试验、免疫荧光技术（IF）、对流免疫电泳（CIE）、免疫印迹技术。

病原菌核酸的检测：核酸杂交、PCR技术、基因芯片技术。

PCR技术—是选择DNA或RNA体外扩增技术，用标本提取DNA为扩增模板，选用一对特异寡核苷酸为引物，PCR一般要经历三十多次循环，经不同温度变性93-94℃（作用1min氢键断裂形成单链DNA）、退火40-60℃（迅速冷却30-60s引物与DNA模板结合，形成局部双链）、延伸70-75℃（在TaqDNA聚合酶作用下，以A、T、G、C四种脱氧核苷酸为原料，从引物5‘端→3‘端延伸，合成与模板互补的DNA链。

），扩增产物用溴乙啶染色的凝胶电泳。

其具有特异、快速、灵敏、特异性强、操作简便、能够定量。

基因芯片技术（DNA芯片、DNA微阵列）—主要过程：DNA微阵列的制备、样品的制备、靶分子和探针之间的杂交、杂交信号的检测与分析。

具有快速、敏感、高通量检测平台。

核酸杂交（基因探针杂交技术）--是指单链RNA和DNA或DNA和DNA或RNA和RNA，根据碱基配对原则，借氢键相连而形成杂交分子的过程。

杂交百分率＞70%（≥69%）为高度同源性，同源性在60%以上是一个种，同源性在60%--70%是同一种内不同亚种，同源性在20%--60%同一属内不同菌种，同源性20%≤不同属的菌种。

AFLP的含义是----扩增片段长度多态性。

有很大功能的DNA指纹技术。

一种是罕见切割酶，一种是常用切割酶。

具有RFLP技术的可靠性和PCR技术的高效性。

5.细菌诊断流程有：双岐索引法，表解法，数字编码鉴定法。

致病性岛：由基因编码决定的一团与致病性相关的基因组。

6. 病原细菌确定原则：（郭霍Koch原则）1、从一种疾病病人中能有规律地发现一种细菌2、能够分离这种细菌获得纯培养3、把这种细菌的培养物引入易感动物体内，可以引起与病人类似的疾病4、在实验感染引起的疾病中仍然能够分离同一种细菌。

7. 杆菌肽用于A（敏感）与非A群链球菌的鉴定。

O/129抑菌试验对弧菌有用而对气单胞菌无用。

8. 奥普托欣试验：肺炎链球菌敏感。

半数致死量（LD50）--导致半数动物死亡的细菌感染量。

最小全数致死量（MLD）--引起全部动物死亡的最小感染剂量。

半数感染量（ID50）--导致半数组织培养细胞发生感染的细菌数量或毒素剂量。

9. 杂交分：斑点，菌落原位，Southern（DNA）印迹，Northern（RNA，DNA）印迹。

10. L型细菌：细胞壁缺陷（形态多样，染色不定，可过滤，渗透压敏感，生化减弱等）培养应高渗透压（3-5%氯化钠、20%蔗糖），染色多为G染阴性，形态不一（巨球形是特征），固定要用10g/L鞣酸不能用火焰。

增殖：以二分裂、出芽、巨形体释放颗粒方式。

一般菌落有：油煎蛋样（L），颗粒型（G），丝状菌落（F），鉴定要点：染色易变多形性，生长在增菌液中微浑，颗粒样沉淀或沿试管壁生长，返祖现象。

致病特点：慢性和反复发作性感染。

L型细菌在体内体外都可形成。

原生质体与原生质球都是细胞壁缺陷的细菌。

11. 细菌的突变：基因突变（又称点突变；有碱基对的置换、插入、或缺失、错码）、染色体畸变（易位、倒位、重复、缺失）。

突变：自发突变、诱发突变。

质粒在细菌的自发突变中起重要作用。

12.噬菌体--是感染细菌、真菌、放线菌或螺旋体等微生物的病毒，具有病毒的基本特性，专性胞内寄生，有严格的宿主特异性。

由核酸和蛋白质组成。

大多数DNA噬菌体的DNA为线状双链（有尾噬菌体的核酸）；RNA噬菌体的RNA为线状单链（无尾噬菌体的核酸为环状单链DNA或线状单链RNA）。

对紫外线敏感10-15分钟失去活性。

噬菌体分毒性噬菌体、温和噬菌体（溶原性噬菌体）；毒性噬菌体以复制方式增殖，过程吸附、穿入、生物合成、成熟与释放，少脱壳。

在液体培养基中使混浊菌液变澄清，在固体培养基上形成噬斑。

温和噬菌体---是噬菌体基因组整合于宿主菌染色体中，有溶原性周期、溶菌性周期。

13. 肽聚糖的结构由聚糖骨架，四肽侧链和五肽交联桥（G－无交联桥）。

磷壁酸为G＋特有，分壁和膜两种。

外膜层由脂多糖，脂质双层，脂蛋白组成。

细胞质内有核蛋白体（蛋白合成地），核质（主要遗传物质）质粒，胞质颗粒，是细菌蛋白质和酶类合成的重要场所。

鞭毛是由细胞质伸出的蛋白性丝状物。

性菌毛仅有1～10根，毒力和耐药质粒都能通过它转移，有致病性。

14. 免疫器官：骨髓、胸腺、脾、淋巴结、扁桃体、小肠集合淋巴结、阑尾和黏膜免疫系统。

免疫细胞：淋巴细胞、单核吞噬细胞、中性粒细胞、嗜酸嗜碱性粒细胞、肥大细胞、血小板。

免疫分子：补体、免疫球蛋白、细胞因子中枢免疫器官：骨髓、胸腺、鸟类法氏囊。

外周免疫器官：淋巴结、脾和粘膜相关淋巴组织特异性免疫：体液免疫、细胞免疫。

体液免疫（B淋巴细胞介导，CD4+Th辅助，Th2细胞能分泌细胞因子IL-4、IL-5、IL-6、IL-10）；效应是抗体（Ab）；1、病毒中和抗体（不能直接灭活病毒，IgG、IgM、IgA）2、血凝抑制抗体（HLAb）3、补体结合抗体。

IgG在体液中含量最多，分子量小是唯一能通过胎盘的抗体。

IgM分子量大，是最早产生的抗体，中作早期诊断。

IgA存在黏膜分泌液中，在局部可阻止病毒侵入。

细胞免疫（T淋巴细胞介导，效应细胞：细胞毒性T细胞（CTL）、CD4+Th1细胞、CD8+毒性T细胞CTL）。

Th1细胞诱导产生迟发型超敏反应（DTH）15. G＋菌等电点pI=2～3，G－菌等电点pI=4～5。

RNA主要存在于细胞质中占细菌干重的10%，DNA存在于染色体和质粒中。

16. 细菌营养转运的方式有：离子，透性酶，磷酸酶。

营养物质进入机体的方式：易化扩散、主动运转（由透性酶完成）、基团移位（糖类由磷酸酶磷酸化进入胞内，不能再透出菌体）。

17. 细菌生长繁殖的条件:充足的营养、适宜的温度、合适的酸碱度、必须的气体环境。

细菌生长的温度极限-7--90℃：嗜冷菌最适温为10～20℃，嗜温菌为20～40℃，嗜热菌为50～60℃。

适宜的酸碱度PH7.2—7.6。

细菌生长繁殖分为四期：迟缓期、对数期、稳定期、衰亡期18.（肠道杆菌）细菌的四种生化反应：吲哚（I）、甲基红（M）、VP（V）、枸橼酸盐利用（C），合称为IMViC。

杆菌呈++--，产气杆菌呈--++。

细菌代谢所需能量主要以生物氧化作用而来。

细菌代谢新陈代谢的产物：热原质、毒素与酶、色素、抗生素、细菌素。

热原质除去的最好方法---蒸馏。

内毒素（G-脂质A）、外毒素（G+产生的毒性蛋白质产物，具有抗原性强、毒性强、作用特异性强、不耐热、人工化学可脱毒性，0.4%甲醛脱毒后形成类毒素进行人工免疫）。

据亲和性及作用靶点分为:神经毒素、细胞毒素、肠毒素。

细菌的内毒素一般由：脂质A（主要成份），非特异性核心多糖，菌体特异性多糖。

一般7～10天后机体产生特异性免疫。

IgG和IgM能在血中直接中和病毒。

19. 细胞壁的作用：承受胞内高渗压、支持细胞膜、维持细菌形态；是鞭毛运动的支点。

细胞壁的主要成份：肽聚糖（又称黏肽、胞壁质），是原核生物特有的成份，能破坏肽聚分子结构或抑制其合成的物质，都有抑菌和杀菌作用。

G-菌细胞壁的主要成份：肽聚糖、脂蛋白、外膜、脂多糖（LPS）（类脂A、核心多糖、特异性多糖），菌体脂多糖（LPS）能引起发热故称热原质，又称为细菌的内毒素。

细胞膜的主要功能：物质纳泄、生物合成、呼吸作用、形成中介体细胞质中的异染颗粒主要成份：RNA、多偏磷酸盐20. 饮用水中1ml菌落总数不超过100个，1000ml水中大肠杆菌群不超过3个。

土中的厌氧芽胞杆菌是创伤感染病原菌的主要来源。

21. 有芽胞破伤风菌需沸水煮3h才杀死。

水中加入2%碳酸钠能将沸点提到105℃又能防止金属生锈。

22. 紫外线波长265～266nm时杀菌力最强。

无芽胞菌一般的致死为1800～6500微瓦/cm，杀死芽胞要十倍。

23. 滤菌器用于除菌的孔径是0.22µm，另外以石棉板为滤板的金属滤器称Seitz滤器（蔡氏滤器）按滤孔大小分K：最大，澄清用，EK-S最小，可阻止大病毒通过EK：居中，除去一般细菌。

玻璃滤菌器分G1～G6，G5，G6两型能阻止细菌通过。

24. 高压灭菌指示物：嗜热脂肪芽胞杆菌（ATCC 7053），紫外线杀菌指示物：枯草芽胞杆菌黑色变种（ATCC 9372）。

25. 细菌遗传物质主要在于染色体、质粒和转位因子中。

质粒：不依赖染色体而复制，不相容性，转移性，指令性。

主要有耐药质粒，Col质粒（编码肠毒素）Vi质粒（编码细菌与致病性有关的蛋白）。

转位因子为存在于细菌染色体或质粒上的一特异的核苷酸序列可在DNA中移动，主要有三类：插入顺序（最小的转位因子），转座子，转座噬菌体。

26.病毒的特性：1、只含一种核酸2、基因组复制3、缺乏完整的酶系统4、RNA病毒的RNA经反转录合成互补DNA（CDNA）。

甘油（10％）或10%二甲基亚砜的血清作悬浮细胞的液体在液氮中保存细胞，在干冰温度（-70℃）和液态氮温度（-196℃）下长期保存其感染性；将冻存在小管或安瓿里的细胞以较慢的冷冻速率（1℃／分钟）冷冻，直至—150℃，再将这些小管贮存在—150～－196℃的液氮中，解冻做法是：将封口的小管迅速放入37℃的水中，直至所有的冰融化，然后打开管口，将内容物移入培养基。

PH5-9稳定；射线和紫外线、X线、r线能灭活病毒。

病毒学上常用的细胞类型：原代细胞、二倍体细胞、传代细胞。

29. 病毒分类：目、科、亚科、属、种。

属名--VRir us结尾的单词,亚科名--VRir inae结尾的单词,科名--VRir idae结尾的单词。

目名—Vrir ales。

2004年ICTV公布病毒分为：73个科、11个亚种、289个属。

30. 病毒吸附蛋白（VAP）；血凝素（HAs）。

病毒的复制周期：吸附、穿入、脱壳、生物合成及组装、成熟和释放31. 病毒突变株分：条件致死性突变株，空斑和宿主依赖性。

遗传型变异机制有突变，基因转移，重组。

突变：突变率由复制的准确度，DNA发生损伤的机会，及对损伤DNA修复程度来决定。