中国炭疽芽胞杆菌中11个串联重复序列位点的特征和分布
炭疽芽胞杆菌染色体特异序列的筛选及实时定量检测
炭疽芽胞杆菌 （ !"#$%%&’ "()*+"#$’ ） 是引起人类及 动物烈性传染病— — —炭疽的病原体， 由于其致命的 致病力和炭疽芽胞对自然环境强大的抵抗力， 炭疽 一直是世界上研究最多分布最广的生物战剂。早期 快速特异地检测空气、 土壤、 水源以及可疑标本中的 炭疽芽胞杆菌有助于降低感染人群死亡率、 切断传染 源、 阻断病原更大规模扩散等， 具有非常重要的意义。 炭疽芽胞杆菌与自然界中广泛分布的腊样芽胞 杆菌、 苏云金芽胞杆菌、 枯草芽胞杆菌同属于腊样芽 胞杆菌群， 在核酸水平， 它们之间最大的区别是炭疽
" 通讯作者。 2*3： 4"5#%5#($6$7%#； 85,9:3： ;:<=> ?,,@ A *B@ A +C
作者简介： 荣光华（%&4$ D ） ， 男， 山东人， 硕士研究生， 主要从事微生物检测研究。 85,9:3： ?E*CFG9CB9H*.*C> %#"I +J, 收稿日期： 接受日期： 修回日期： #$$"5$%5#$； #$$"5$!5$"； #$$"5$"5#!
（ F*CJ,:+ ?:FC9=@.*?） ， 其中 " 条符合设计 29;K9C 探针建立实时定量 LMN 的要求， 根据常规 LMN 检测结果选择其中 M$! 片段与炭疽芽胞杆菌毒性质粒 OP$%、 OP$# 上的 ,"-. 、 #",! 基因建立实时定量 LMN 检测体系。经试验证实这一 体系检测灵敏度达到每 LMN 反应 %$ ’ %$$ 个拷贝。利用 %# 种相关菌株评价后获得 %$$Q 特异性， 对 %$ 份模拟污染 所有污染标本均被检出， 所有对照标本均为阴性。此方法特异、 灵敏、 高效， 在炭疽芽 标本和 #$ 份对照标本检测， 胞杆菌感染的诊断和环境污染的检测等领域有潜在的应用前景。 关键词：炭疽芽胞杆菌； 染色体特异序列； 实时定量检测； LMN 中图分类号： R64 文献标识码： S 文章编号： $$$%5"#$&（#$$"）$"5$&$$5$"
炭疽芽孢杆菌——总结
炭疽芽孢杆菌1•形态及染色特性革兰阳性大杆菌，芽孢椭圆形，位于菌体中心。
在动物组织和血液中，菌体单在或呈2? 5个相连的短链，相连的菌端平截而呈竹节状，围绕以丰厚的荚膜。
在牛、绵羊体内形成的荚膜，经染色后镜检最明显，马、骡次之，猪则史次，往往轮廊不淸。
荚膜具有较强的抗腐败能力，当菌体因腐败而消失后，仍有残留荚膜显示，称为菌蜕。
动物体内的炭疽杆菌只有当露接触空气中的氧气之后，方能形成芽胞。
2•培养特性本菌为需氧菌，i但在厌氧条件下也可生长。
可生长温度范围为15? 4C,最适生长温度30? 37C。
最适PH为7.2? 7.6。
营养要求不高，普通培养基中即能生长良好。
培养24h 后，强毒菌株形成灰白色、表面干燥、边缘呈卷发状的粗糙（R）型菌落），无毒或弱毒菌株形成稍小而隆起、表面较为光滑湿润、边缘比较整齐的光滑（S）型菌落。
在培养基中常形成长链，并于培养18? 24h后开始形成芽胞。
在普通培养基中不形成荚膜，但若在血液，血清琼脂或碳酸氢钠琼脂上，于10%? 20% CQh中培养，则形成荚膜。
在明胶穿剌培养中，细菌沿穿刺线生长，形成倒立的雪松状。
培养2? 3d后，明胶上部逐渐液化呈漏斗状。
在含青霉索0.5IU/ ml的培养基中，由于细胞壁的肽聚糖合成受到抑制，原生质体相互链接成串，若培养基中青霉索含量加至IOIU/ml,则可能完全不生长。
此特点可与其他需氧需氧芽孢杆菌鉴别。
3.生化特性发酵葡萄糖产酸而不产气，不发酵阿拉伯糖、木糖和甘露醇。
水解淀粉、明胶和酪蛋白。
VP试验阳性，不产生吲哚和H2S，还原硝酸盐。
牛乳经2 —4h凝固，然后缓慢胨化。
卵磷脂酶阳性或弱反应，笨丙氨酸脱氧酶和磷酸酶阴性，触媒阳性。
不能活微弱还原美兰。
4•细菌菌落形态5.炭疽杆菌在显微镜下的形态。
炭疽芽孢杆菌遗传特征(二)
炭疽芽孢杆菌遗传特征(二)炭疽芽孢杆菌遗传特征简介炭疽芽孢杆菌（Bacillus anthracis）是一种致命的病原体，由其细菌感染引起的炭疽病在人类和动物中广泛存在。
该细菌具有一系列特征，使其成为研究和监测的重要对象。
遗传特征1.基因组：炭疽芽孢杆菌基因组由一个染色体组成，大小约为 Mb。
该基因组含有多个编码疾病相关蛋白质的基因。
2.类似质粒：炭疽芽孢杆菌基因组中发现了多个与质粒类似的DNA片段。
这些类似质粒可能有助于炭疽菌的适应性和耐药性。
3.毒力基因：炭疽芽孢杆菌具有多个毒力基因，包括致病性保护性抗原基因（protective antigen, PA）、草藥毒素（lethal toxin, LT）和水肿毒素（edema toxin, ET）。
这些毒力因子使得炭疽杆菌具有高度的致病性。
4.毒力岛：炭疽芽孢杆菌基因组中存在多个毒力岛，这些岛状结构含有多个与病原性相关的基因。
毒力岛对于炭疽杆菌的毒力表达起到重要作用。
5.同源基因：炭疽芽孢杆菌基因组中存在多个同源基因，这些基因与其他细菌的基因具有高度保守性。
研究这些同源基因可以帮助我们更好地了解炭疽杆菌的进化和遗传背景。
研究意义对炭疽芽孢杆菌遗传特征的研究有助于深入了解该病原体的致病机制以及抗药性的形成。
研究者可以通过分析炭疽杆菌基因组中的毒力基因和毒力岛，开发新的药物和疫苗。
此外，通过研究同源基因，我们可以了解炭疽菌的进化历史以及可能的传播途径。
结论炭疽芽孢杆菌作为研究和监测的对象，在遗传特征上具有一系列独特的特点。
了解这些特征对于更好地理解该病原体的致病机制和抗药性的形成至关重要。
这些研究成果有望为炭疽病的防治提供新思路和解决方案，以保护人类和动物的健康安全。
参考文献： - Keim P, et al. (2015). Molecular Evolution and Diversity in Bacillus anthracis as Revealed by Comparative Genome Analysis. J Bacteriol. :. - Read T, etal. (2003). The genome sequence of Bacillus anthracis Ames and comparison to closely related bacteria. Nature. :81-6.。
北医李睿医考：医学考研炭疽芽孢杆菌微生物学特点
官网：
炭疽芽孢（胞）杆菌微生物学特点：炭疽芽孢（胞）杆菌属包含93个种和亚种，其中炭疽芽孢（胞）杆菌可引起严重的动物源性疾病——炭疽，蜡样芽孢（胞）杆菌可引起食物中毒。
1.形态和染色：炭疽芽孢（胞）杆菌是致病菌中最粗大的杆菌，两端平切，无鞭毛，在体内或含血清培养基中可形成荚膜，在有氧条件下可形成椭圆形芽孢（胞），位于菌体中央且直径不大于菌体，呈竹节样排列的长链。
2.对外界抵抗力：由于该菌的芽孢（胞）抵抗力很强，l21.3℃高压蒸气灭菌或140℃干热3小时，才能杀灭芽孢（胞）。
细菌芽孢（胞）在干燥土壤或皮毛中能存活数年至数十年。
芽孢（胞）对化学消毒剂的抵抗力也很强，但对碘及氧化剂敏感，1：2500碘液10分钟，3%H202 1小时，0.5%过氧乙酸10分钟，均可杀灭。
3.所致疾病：炭疽芽孢（胞）杆菌致病物质为荚膜和炭疽毒素，它主要是绵羊、牛等食草动物炭疽病的病原菌，也可传给人和食肉动物。
人类主要通过接触病畜及其皮毛等，患皮肤炭疽；食人未煮熟的病畜肉类，病畜奶或被污染的食物，引起肠炭疽；吸入含有大量炭疽菌芽孢（胞）的尘埃，可发生肺炭疽。
各型炭疽均可并发败血症，并因为引起急性出血性脑膜炎而死亡。
感染炭疽后，可获得持久的免疫力。
4.炭疽的防治原则
（1）预防重点应放在家畜感染的防治和牧场的卫生防护上。
病畜应严格隔离或处死焚毁或深埋2m以下，病畜、死畜严禁剥皮或煮食。
（2）特异性预防：应用炭疽减毒活疫苗皮上划痕接种，免疫力可持续1年。
接种对象是疫区皮革和毛纺业职工、牧民、屠宰牲畜人员、兽医等。
（3）治疗以青霉素类药物为首选，也可选用其他抗生素。
中国贵州、云南、广西炭疽菌属真菌多基因分子系统学研究的开题报告
中国贵州、云南、广西炭疽菌属真菌多基因分子系统学研究的开题报告标题：中国贵州、云南、广西炭疽菌属真菌多基因分子系统学研究摘要：炭疽菌属真菌是一类重要的植物病原菌，对农业经济产生了严重影响。
本研究旨在通过多基因分子系统学方法，对中国贵州、云南、广西地区的炭疽菌属真菌进行分析和研究。
采用PCR扩增和测序方法，对ITS、tef1和rpb2三个基因进行分析，推断其系统发育关系，并结合形态学特征进行系统学分类。
同时，还将对炭疽菌属真菌对各种植物的寄主选择进行分析、对其形态进行研究、并进行致病力的测定。
关键词：炭疽菌属真菌；多基因分子系统学；致病力；系统学分类；生物多样性一、研究背景和意义炭疽菌属真菌是一类重要的植物病原菌，对农业经济产生了严重影响。
它们能侵染多种作物，如烟草、棉花、豆类等，引起大范围的病害，严重破坏农作物增产和农民的经济利益。
当前，针对炭疽菌属真菌的病害防治主要是化学药剂喷洒和卫生处理，但这些方法会对环境造成污染和破坏生态平衡，因此需要探索新的炭疽菌属真菌防治方法。
多基因分子系统学是一种基于多个基因序列数据进行物种系统发育关系推断的方法，与传统的形态学分类相比，具有分辨率高、分类信息丰富等优点。
通过对炭疽菌属真菌进行多基因分子系统学研究，可以对其物种分类、亲缘关系和生物多样性进行深入分析研究。
同时，对其致病力和寄主选择等方面的研究，也能为炭疽菌属真菌的防治提供基础资料。
二、研究内容和方法本研究将采集贵州、云南、广西地区的炭疽菌属真菌标本，通过PCR扩增和测序方法，对ITS、tef1和rpb2三个基因进行分析，并对其系统发育关系进行推断。
同时，结合形态学特征，对炭疽菌属真菌进行系统学分类。
另外，还将对炭疽菌属真菌对各种植物的寄主选择进行分析和研究，并对其形态进行研究，最终进行致病力的测定。
三、研究预期结果和意义本研究预期能够获得贵州、云南、广西地区炭疽菌属真菌的分类信息，以及不同地区、不同寄主间的系统发育关系和生物多样性特征。
《医学微生物学》备考地点：炭疽芽孢杆菌
《医学微生物学》备考地点：炭疽芽孢杆菌2017年《医学微生物学》备考地点：炭疽芽孢杆菌炭疽芽胞杆菌是人类历史上第一个被发现的病原菌，为芽胞杆菌属主要致病菌。
以下是店铺带来的详细内容，欢迎参考查看。
(一)生物学特性1、形态与染色G+ 粗大杆菌，为致病菌中最大者，两端平齐，呈竹节状排列。
有芽胞，小于菌体，椭圆形，位于菌体中央，有氧条件下形成(空气中)。
有荚膜——本菌特征(其它芽胞杆菌无荚膜)。
2、培养特性需氧或兼性厌氧(厌氧几乎不长)，营养要求不高，典型菌落为R型——卷发样菌落。
串珠试验(+)，在含微量青霉素培养基上，发生形态变异，为大而均匀圆球形，呈串珠状(以区别其它芽胞杆菌)3、抗原构造结构抗原：①荚膜多肽抗原;②菌体多糖抗原;③芽孢抗原。
炭疽毒素——三种不同成分蛋白质组成复合毒素4、抵抗力在干燥的`土壤或皮毛中可存活数年至20年，对化学消毒剂的抵抗力也比较强，对青霉素敏感。
(二)致病性与免疫性1、致病物质：荚膜和炭疽毒素，荚膜抗吞噬，有利于细菌在组织内繁殖扩散。
炭疽毒素直接损伤微血管内皮细胞组织水肿、微循环障碍、血液呈高凝状态、引起休克、DIC、死亡。
2、所致疾病：炭疽(人和食草动物牛、羊、马等)传染源：病畜、死畜传播途径：多途径传播临床类型：①皮肤炭疽——微小伤口侵入，接触患病动物或毛发，皮肤黑色凝固样坏死、焦痂，故名，最多见②肠炭疽——经口感染，食入未煮熟的病畜的肉、奶等，呕吐、肠麻痹、血便。
③肺炭疽——吸入芽胞，血痰等三种类型均可引起败血症，炭疽性脑膜炎，死亡率高病后可获得牢固免疫(三)微生物学检查与防治1、标本采集皮肤炭疽——病灶渗出液肠炭疽——粪便肺炭疽——痰动物尸体严禁室外解剖，避免形成芽胞，取少量组织送检2、检验炭疽为烈性传染病属国际检疫范围，病原学诊断极为重要直接涂片——G+竹节状大杆菌，有荚膜分离培养——卷发样菌落，串珠试验阳性等3、防治a、死畜焚毁或深埋2m以下b、预防接种疫区易感人群【2017年《医学微生物学》备考地点：炭疽芽孢杆菌】。
炭疽病原
致病性
炭疽杆菌对绵羊、山羊致病力最强，牛、 马、驴、骡、驼、鹿等草食动物皆很易感，猪、 犬、猫等杂食动物亦可感染；虎、狮、豹、狼 等肉食动物，误食炭疽病畜肉，亦可引起感染 而死亡。猪常无症状，仅在宰后肉检时才被发 现。或仅局部出现淋巴结炎、咽峡炎，个别出 现肺炎及败血症。
致病性
前苏联一家动物园因喂食病马肉，使一些 豺、獾、貂、黄鼬、美洲豹、山猫、豹死亡， 白熊感染发病。家畜改良品种较土种易感，幼 龄家畜较老龄家畜易感。 人对炭疽杆菌中等敏感、介于草食和肉食动 物之间。实验动物猴、兔、羊、豚鼠、大鼠、 小鼠对炭疽人工感染皆相对敏感，其中猴、兔、 羊、较豚鼠、大鼠、小鼠敏感。在感染濒死阶 段（临死前10-14h），血中菌数倍增时间：小 鼠、豚鼠为50min，羊95min，大鼠115min。
抗原结构
庄汗澜、牟兆钦等探讨了保护性抗原（PA） 的免疫机制，发现： 1、PA免疫后，动物产生抗PA抗体、血中吞噬 细胞被激活，抗PA抗体除中和作用外，在体内 能直接杀灭炭疽芽孢杆菌； 2、PA免疫动物抑制入侵的炭疽芽孢出芽，在 炭疽强毒芽孢攻击后1-3天内，PA免疫兔的肝、 脾、淋巴结切片中只见少量芽孢而无繁殖体， 而对照兔组织内细菌以繁殖体为主；
变异性
在自然条件下，炭疽杆菌易受物理、 化学、生理因素影响而发生变异。 实验时会出现形状不一的光滑型或黏 液型菌落、无明显卷发状边菌落、显示 色素的菌落、不产生荚膜的菌株、毒力 减弱或消失的菌株。
变异性
巴斯德（Pasteur1881年）通过42.5℃高温 连续培育研制出兽用菌苗即炭疽杆菌减毒疫苗。 Vodkin和Leppla(1983年)首先发现了炭疽杆菌 毒素质粒，Green等（1985年）又发现了炭疽 杆菌荚膜质粒，后分别命名为Pxo1和Pxo2。
快速检测炭疽杆菌的实时荧光定量PCR方法的建立及评价
快速检测炭疽杆菌的实时荧光定量PCR方法的建立及评价杜清春;董珊珊;丁奕博;张艳;李伟;王鹏【摘要】为建立一种能快速鉴定炭疽杆菌的检测技术,本研究根据炭疽杆菌染色体上的TJHP和BA53452个靶点,分别设计4对引物和2个探针,对10份已知浓度的炭疽杆菌DNA和阴性对照菌株DNA进行检测,将浓度最大的炭疽杆菌DNA进行10倍倍比稀释,用于检测4对引物及其探针的灵敏度,并选出2个针对TJHP和BA5345靶点的特异性强及灵敏度高的引物和探针进行重复性实验.结果显示,4对引物及其探针特异性较强,FP2/RP2和FP4/RP42对引物的灵敏度为4.513×10-5 ng/μL;该荧光定量PCR方法重复性好(t=1.178,P=0.332).FP2/RP2和FP4/RP42对引物及其探针可用于炭疽杆菌感染初期的快速筛查以及临床辅助诊断.【期刊名称】《中国动物传染病学报》【年(卷),期】2019(027)004【总页数】7页(P43-49)【关键词】炭疽杆菌;实时荧光定量PCR;TJHP;BA5345【作者】杜清春;董珊珊;丁奕博;张艳;李伟;王鹏【作者单位】大理大学公共卫生学院,大理 671000;云南省地方病防治所云南省自然疫源性疾病防控技术重点实验室,大理 671000;云南省地方病防治所云南省自然疫源性疾病防控技术重点实验室,大理 671000;大理大学公共卫生学院,大理671000;中国疾病预防控制中心传染病预防控制所,北京 102206;云南省地方病防治所云南省自然疫源性疾病防控技术重点实验室,大理 671000【正文语种】中文【中图分类】S852.616炭疽是由炭疽杆菌（Bacillus anthracis，B.anthracis）感染而引起的自然疫源性和人兽共患传染病，炭疽杆菌为革兰阳性杆菌[1-2]。
在空气中容易形成芽孢[2-3]，即使在恶劣的环境中依然可以存活数十年甚至更久[4-6]，在条件适宜时重新萌发生长，因此常被用作生物战剂[1-2]。
炭疽芽孢杆菌
目录
0
1
形态：杆状，两端钝圆
生物学特性
结构：细胞壁、细胞膜、细胞质、
0
细胞核
2
0
3
繁殖：二分裂繁殖
0
代谢：需氧或兼性厌氧
4
0
生长条件：适宜温度、湿度、pH
5等
0
致病性：产生毒素，引起炭疽病
6
分类及分布
01
炭疽芽孢杆菌属于芽孢杆菌属， 是一种革兰氏阳性菌。
03
炭疽芽孢杆菌可以通过空气、 水源和食物传播，引起炭疽病。
接触传播：直接接触炭疽芽孢杆菌污染 的物体或土壤，可能导致感染。
食物传播：食用被炭疽芽孢杆菌污染的 食物，如肉类、奶制品等，可能导致感 染。
水传播：饮用被炭疽芽孢杆菌污染的水， 可能导致感染。
动物传播：接触被炭疽芽孢杆菌感染的 动物，如牛、羊等，可能导致感染。
风险评估与预警
01
炭疽芽孢杆菌的传播途径：空气、水源、食 物等
炭疽芽孢杆菌广泛分布于土壤、 水源和动植物中，尤其是在干 旱和半干旱地区。
02
炭疽芽孢杆菌具有较强的抗逆 性，可以在恶劣环境中生存， 如高温、干旱和紫外线辐射等。
0引起炭疽病
症状：炭疽病 表现为皮肤溃 疡、发热、头 痛、肌肉疼痛
等症状
传播途径：主 要通过皮肤接 触、呼吸道吸 入等方式传播
及时就医：出 现疑似症状， 及时就医，避 免延误病情
治疗措施
01
抗生素治疗：首选青霉素类药物， 如青霉素G、氨苄西林等
02
免疫治疗：注射炭疽疫苗，提高免 疫力
03
隔离治疗：对患者进行隔离，防止 传染
04
辅助治疗：保持患者营养和水分平 衡，减轻症状
炭疽芽孢杆菌检测鉴定技术研究进展
RIA 灵敏度高 (可测定 ng 或 pg 量) 、特异性好 、 样品用量少 (011 ml 左右) 、操作方法易标准化 。双 抗体夹心法及生物素亲和素系统的引入 ,既减少了 本底干扰 ,提高了实验灵敏度 ,又能缩短反应时间 , 而且可实现自动连续测定 。
RIA 也分为直接法和间接法 。直接与间接放射 免疫分析法检测固定于多点显微镜玻片的炭疽芽孢 杆菌的对比研究表明〔8〕: 直接检测法的缺点在于一 种标记物只能检测相应的抗原 (或抗体) ,使其使用 效果受到了一定的限制 ;间接法可以利用一种标记 物 ,即标记抗抗体 ,检测多种其它抗体 ,较直接法能 结合的抗体数目多 ,由此可增加敏感性 ,扩大了使用 范围 。间接法并不能增强信号强度 ,但信噪比增加 。 可用于监测超免疫状态实验动物的循环抗体 。 214 免疫荧光检测法
免疫荧光试验 ( IF) 用于炭疽与蜡样芽孢杆菌繁 殖体的鉴别表明〔9〕: 对于吸附反应能否完全消除交 叉反应 ,目前报道不一 。IF 与其他血清学诊断方法 相比优势在于 ,能检测菌群抗原异质性 。遗憾的是 , 人工微量流式记数速度太慢 ,敏感性也随之下降 。 为提高其敏感性 ,采用流式细胞记数仪进行记数 。
蜡样芽胞杆菌在不同标本中的毒力基因分布特征
蜡样芽胞杆菌在不同标本中的毒力基因分布特征张慧娟; 张恩民; 贺金荣; 李伟; 魏建春【期刊名称】《《中国人兽共患病学报》》【年(卷),期】2019(035)008【总页数】5页(P683-687)【关键词】蜡样芽胞杆菌; 毒力基因; 疾病相关标本; 分布特征【作者】张慧娟; 张恩民; 贺金荣; 李伟; 魏建春【作者单位】传染病预防控制国家重点实验室中国疾病预防控制中心传染病预防控制所北京 102206【正文语种】中文【中图分类】R378.8蜡样芽胞杆菌(简称蜡样杆菌)在自然界广泛分布，常存在于土壤、灰尘和昆虫中，植物和许多生熟食品中也常见，临床上该菌被认为是一种机会致病菌常引起食源性疾病，也被认为是一种污染菌引发外伤性眼内炎、骨科创面感染以及在肿瘤等免疫低下人群中引起院内感染等肠道外感染疾病[1]。
研究表明，无论是肠道内还是肠道外感染，发病均与该菌分泌的毒素导致组织破坏或胞外酶活性产物有关，编码这些毒素的毒力基因主要包括溶血性BL基因(hblC、hblD、hblA、hblB)、非溶血性基因(nheA、nheB、nheC)、肠毒素FM基因和T 基因(entFM、bceT)、细胞毒素K基因(cytK)和呕吐毒素相关基因(ces)[2]。
但并不是所有蜡样杆菌都含有全部毒力基因，而是存在菌株间的差异，不同的毒力基因分布与疾病的严重程度呈相关性[3]。
我国部分地区已在食品的常规监测中开展了蜡样杆菌的污染与毒力基因的检测工作，本研究中采集了我国12个省的不同分离来源的标本进行了毒力基因的检测，以期深入了解临床相关蜡样杆菌的遗传分布特征，为相关疾病的诊断处置提供科学的参考依据。
1 材料与方法1.1 菌株菌株包括分离自中国河北、海南、云南、内蒙、四川、陕西、福建等12个省的蜡样杆菌330株和购买的模式菌株3株(ATCC10876、ATCC13061和CMCC63301)，分离来源分为环境监测标本(常规食品微生物监测及土壤)和疾病相关标本(食物中毒食品及肠道外感染)2大类，具体包括米粉(96株)、奶粉(125株)、土壤(92株)、米饭(8株)、凉皮(5株)、眼内炎(2株)或肿瘤患者(2株)等6种标本，所有菌株均由本室保存。
炭疽芽孢杆菌遗传特征
炭疽芽孢杆菌遗传特征炭疽芽孢杆菌（Bacillus anthracis）是一种革兰氏阳性杆菌，引起炭疽病的主要病原体。
炭疽病是一种严重的感染性疾病，可影响人类和动物，对公共卫生和畜牧业造成严重威胁。
本文将介绍炭疽芽孢杆菌的遗传特征。
炭疽芽孢杆菌具有许多独特的遗传特征，这些特征使其成为一种高度适应和致病的病原体。
首先，炭疽芽孢杆菌的基因组相对较大，约为5.23Mb，其中包含了许多编码蛋白质的基因。
这些基因编码了各种各样的蛋白质，包括毒力因子、抗生素抗性基因和细菌感染所需的其他基因。
炭疽芽孢杆菌具有三个主要的毒力因子：炭疽毒素、保护性抗原和可变性外膜抗原。
炭疽毒素是炭疽病的主要致病因子之一，由三个组分组成：致病因子PA（Protective Antigen）、致病因子LF （Lethal Factor）和致病因子EF（Edema Factor）。
PA结合到宿主细胞表面的受体上，形成一个复合物，然后LF和EF进入宿主细胞内部，造成细胞死亡和水肿。
保护性抗原是一种表面蛋白，可以诱导宿主产生免疫反应，并提供对炭疽芽孢杆菌的保护。
可变性外膜抗原是一种表面蛋白，可以改变其表达的外膜抗原，从而避免宿主免疫系统的识别。
炭疽芽孢杆菌的基因组中还包含了许多抗生素抗性基因。
这些基因可以使炭疽芽孢杆菌对多种抗生素具有耐药性，包括青霉素、四环素和氯霉素等常用抗生素。
这些抗生素抗性基因的存在使得炭疽芽孢杆菌在临床治疗中更加具有挑战性，因为常规抗生素可能无法有效杀灭这种病原体。
炭疽芽孢杆菌的基因组中还存在许多其他的遗传特征，如转座子、质粒和溶菌酶等。
转座子是一种能够在基因组中移动的DNA片段，可以导致基因的插入、删除和重排，从而影响炭疽芽孢杆菌的基因表达和适应性。
质粒是一种小型的环状DNA分子，可以独立复制和传递给后代细菌，其中可能携带了一些重要的基因，如抗生素抗性基因。
溶菌酶是一种能够降解其他细菌细胞壁的酶，炭疽芽孢杆菌可以利用溶菌酶来破坏宿主细胞和其他细菌的防御机制。
炭疽芽孢杆菌PCR检测体系的建立及评价
炭疽芽孢杆菌PCR检测体系的建立及评价[摘要]炭疽是一种烈性传染病，17世纪欧洲曾发生过一次炭疽大流行，导致约6万人丧生。
2001年炭疽首次被真正作为生化武器用于恐怖袭击。
建立一种快速敏感特异的检测体系对于炭疽诊断是十分必要的。
本研究中我们建立了快速鉴别炭疽芽孢杆菌的PCR体系，用相关菌种进行了特异性评价，并用模拟粪便标本对该体系开展了临床应用价值的评价。
目的建立高敏感高特异性的PCR反应体系，并将该体系应用于模拟标本的检测，探索其实际应用价值。
方法设计引物和探针，构建质粒标准品进行PCR 反应，建立检测体系，评价其敏感性和特异性，用不同标本的基因组DNA对其进行应用价值的评价。
结果该体系在三种标本上都达到了较高的敏感度；在检测其他蜡样杆菌群细菌时未出现非特异性扩增。
整个反应时间1h内，适宜快速检测。
结论本研究建立的PCR反应体系可作为炭疽的快速检测手段。
关键词炭疽芽孢杆菌；PCR反应；模拟标本炭疽是一种多见于在动物间传播的传染性疾病，其传染源为炭疽芽孢杆菌的芽孢。
1823年炭疽的传染性首次被发现；1849年炭疽芽孢杆菌被发现。
本研究中我们对炭疽芽孢杆菌全基因序列进行了序列分析，获得了主基因组特异性序列片段 (GS)，同时结合国内外以毒力岛基因序列为基础建立炭疽杆菌基因检测体系的经验，选择毒力岛pagA基因序列为靶基因，开发了一种可快速检测炭疽芽孢杆菌的定量PCR检测体系，对其进行了敏感度特异性的评价；并将其应用于模拟标本的检测中。
材料和方法引物和探针设计首先选择2个靶序列，一个是炭疽芽孢杆菌pXO1质粒上毒力岛中的pagA基因[1,2]；另一个是经Blast分析后，在主基因组上发现的一段特异的保守区域，将其称为GS序列。
根据两个靶序列设计了引物及探针序列。
PCR反应体系通过对探针、引物的浓度以及PCR条件等进行系统化优化，建立了炭疽芽孢杆菌基因双重PCR检测体系。
结果1、检测炭疽芽孢杆菌质粒标准品利用制备的1.0×1010~10-1copies/ul 浓度的pagA和GS质粒双重标准品，进行PCR检测。
炭疽菌附着胞形成的影响因素及形态特征比较
炭疽菌附着胞形成的影响因素及形态特征比较陈玉森;叶乃兴;许文耀;刘威;魏日凤;刘伟【摘要】研究了炭疽菌属的孢子萌发率、附着胞形成率及形态等受孢子龄、叶汁种类和孢子悬液浓度影响的情况.结果表明,5d菌龄的孢子以水配成3.4×105个·mL-1左右的孢子悬液,在25℃光照下培养12h,附着胞的形态特征稳定,较适宜孢子萌发与附着孢形态的观察.对附着胞形态观察发现,11种炭疽菌产生的附着胞特征均存在一定的差异;胶孢炭疽菌的12个菌株中,除寄生于雷公藤的炭疽菌外,其余11个菌株的附着孢形态差异不明显.%The effects of spore ages, spore concentrations and different leaf liquors on speculation rate, appressorium formation rate and morphology in Colletotrichum were investigated. The results showed that when 5 days old spores diluted 3.4 x 105 individuals · mL" spore concentration with water were incubated for 12 h under 25 ℃with light, appressoria were formed with stable morphology. The above conditions were considered suitable for sporulation and appressorium observation. On one hand, the appressorium morphology was found slightly different in the 11 different Colletotrichum species. On the other hand, the differences of appressorium morphology were similar in the 12 strains of C. gloeosporioides, except the one from Tripterygium wilfordii.【期刊名称】《福建农林大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2013(042)002【总页数】6页(P137-142)【关键词】炭疽菌;附着胞;形态特征;影响因素【作者】陈玉森;叶乃兴;许文耀;刘威;魏日凤;刘伟【作者单位】福建农林大学茶叶科技与经济研究所;宁德师范学院,福建宁德352100【正文语种】中文【中图分类】S436.67炭疽菌(Colletotrichum Corda)是一类重要的植物病原菌，其地理分布和寄主范围广泛，严重危害多种瓜果、蔬菜、林木及药材等.该属已被描述的种超过1000个，但不同学者的划分标准不同.von Arx［1－3］以形态学特征为主要依据划分种;Sutton［4］主张加入纯培养学特征;Mordue［5－6］则提出以形态学、培养学、生理学、病理学及地理分布等综合指标划分种;von Arx et al［7］和Kendrick［8］强调全型(holomorph)真菌概念，认为种的划分应建立在有性态和无性态的联系上，种级鉴定标准应以分生孢子和附着胞形态为主、培养特性为辅、寄主范围作参考的综合特征来确定［9］.附着胞是炭疽菌产生的能穿透寄主组织的特殊侵染结构［10］，其形态特征既然作为种划分的依据之一，就有必要了解影响其稳定的因素.据报道，孢子悬浮液pH、水的硬度、葡萄糖和乙烯浓度会影响炭疽菌附着胞的生长发育［11－14］，其他因素则未明确.因此，本文研究孢子龄、叶汁种类和孢子悬液浓度对炭疽菌孢子萌发、附着胞形成及形态的影响，为探明不同菌株附着胞发育过程中的差异及了解其作为物种鉴定的适用范围奠定基础.1 材料与方法1.1 供试菌株从福州、泉州等地的茉莉、香蕉、番石榴、大豆等22种作物上分离获得22个炭疽病原菌株，经鉴定［12－25］确认后，将各菌株保存在4－8℃冰箱内，使用时移入外加4 g·L－1KNO3的PSA培养基平板上培养产孢.1.2 孢子萌发形成附着胞过程观测用寄主为茉莉的菌龄5 d的炭疽菌孢子，配成4.2×105个·mL－1孢子水悬液，在凹玻片上滴60 μL孢子悬液，置于皿底垫有湿润滤纸的培养皿内，放在25℃光照培养箱中，经12、24、48、72、96 h后分别观测附着胞大小并统计附着胞率. 1.3 活体寄主上和用寄主汁诱导产生的附着胞形态特征观测将寄主为杧果的炭疽菌孢子用水和杧果汁配成3.4×105个·mL－1孢子悬液.各取60 μL，孢子水悬浮液滴于成熟完好的杧果表面上，孢子果汁悬浮液滴于凹玻片上，25℃、光照下保湿培养12 h，观察活体寄主上和用寄主汁诱导产生的附着胞形态特征，测量其大小.果汁制法:杧果25 g，水1000 mL，沸煮30 min后过滤去渣，经高压灭菌后使用.1.4 不同菌龄孢子萌发及附着胞观测将寄主为茉莉的炭疽菌在培养基上培养，再将菌龄达5、7、9、11、13、15、17 d的孢子，分别用水和茉莉叶汁配成1.7×105个·mL－1孢子悬液，按1.2方法，观测并统计25℃下光照12 h后的孢子萌发率和附着胞率.叶汁制法:茉莉叶片200 g，水1000 mL，沸煮30 min后过滤去渣，经高压灭菌后使用.1.5 不同种类叶汁孢子悬液附着胞形态特征观测采集杧果、番石榴、茶树、白菜、枇杷、刺桐、豇豆、烟草、柑橘、甜瓜、桃树、花生、大豆、红麻及葡萄的叶片，按1.4方法制成叶汁.将寄主为大豆的炭疽菌在培养基上培养6 d，用以上15种叶汁及水分别配成3.4×105个·mL－1孢子悬液，按1.2方法，观测并统计25℃下光照12 h后的附着胞形状和大小、孢子萌发率、附着胞率.1.6 不同菌株不同浓度孢子悬液中的孢子萌发及附着胞观测将胶孢炭疽菌(C.gloeosporioides)6个菌株以及壳皮炭疽菌(C.crassipes)、芸薹炭疽菌(C.higgisianum)、黑线炭疽菌(C.dematium)、豆类炭疽菌(C.truncatum)、毁灭炭疽菌(C.destructivum)各 1 个菌株［12－20］，分别用培养基培养6 d，各菌株孢子用水分别配成3.4 ×107、3.4 ×106、3.4 ×105、3.4 ×104 和3.4×103个·mL－1等5个梯度悬液.按1.2方法，观测并统计25℃下光照12 h后各菌株孢子萌发率和附着胞率.1.7 不同菌株附着胞形态特征观测将胶孢炭疽菌12个菌株以及辣椒炭疽菌(C.capsici)、壳皮炭疽菌、芸薹炭疽菌、黑线炭疽菌、豆类炭疽菌、毛豆炭疽菌(C.boninense)、瓜类炭疽菌(C.orbiculare)、葡萄刺盘孢菌(C.ampelinum)、芭蕉炭疽菌(C.musae)和毁灭炭疽菌各1个菌株［12－25］，分别用培养基培养6 d，各菌株孢子分别用水配成3.4×105个·mL－1孢子悬液.按1.2方法，观测25℃下光照12 h后的附着胞形态特征.上述6个试验所用的水均为无菌水，pH 6.8，每个处理重复3次.2 结果与分析2.1 寄生于茉莉的炭疽菌孢子萌发和附着胞形成规律结果(图1、表1)表明，孢子在水中萌发产生芽管后，不断长出分枝，后形成卵形、梨形、姜瓣形等暗褐色的附着胞，胞内分布黑色颗粒状物，边缘光滑.该菌孢子常形成1个附着胞，但随水培时间延长，单个孢子可逐渐形成多个附着胞，96 h后可见单个孢子产生7个附着胞且有继续增长的趋势，但附着胞大小均无明显差异. 图1 单个孢子产生7个附着胞(400×)Fig.1 Seven appressoria generated from a single spore(400 ×)表1 寄生于茉莉的炭疽菌孢子形成附着胞的规律Table 1 Appressorium formation regulation of C.gloeosporioides from Arabian jasmine水培时间h单个孢子上的附着胞率/%1个 2个 3个 4个 5个 6个 7个附着胞长(平均)×宽(平均)μm2 12 15.2 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 6.8－8.4(7.5)× 5.3－6.3(5.9)24 18.8 1.5 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 6.8－8.6(7.5)× 5.3－6.4(5.9)48 19.6 7.6 2.4 0.0 0.0 0.0 0.0 6.5－8.7(7.5)× 5.4－6.5(5.9)72 19.5 10.1 3.3 1.2 0.0 0.0 0.0 6.6－8.7(7.6)× 5.2－6.6(6.0)96 14.1 7.8 5.7 4.4 3.1 1.3 1.1 6.4－8.8(7.6)× 5.4－6.7(6.0)2.2 炭疽菌在寄主上与用寄主汁诱导产生的附着胞形态差异炭疽菌在活体寄主上与用寄主汁诱导产生的附着胞形态存在一定差异.寄生于杧果的炭疽菌孢子悬液滴于杧果表面，其发育的附着胞为卵形、梨形、姜瓣形，暗褐色、灰色，长×宽为5.7－11.4(7.9)μm ×5.9－7.5(5.6)μm;用果汁配的孢子悬液，在凹玻片上离体培育，其诱导产生的附着胞为梨形、卵形、姜瓣形，褐色，长× 宽为8.4－14.9(9.7)μm ×5.9－8.1(7.2)μm.2.3 菌龄和寄主叶汁对寄生于茉莉的炭疽菌孢子萌发及附着胞形成的影响由表2看出，寄生于茉莉的炭疽菌孢子在水中的萌发率相对较低，且随菌龄增大而快速下降;附着胞率则均大于81%，且随菌龄增大而上升.菌龄5 d的孢子悬液萌发率达51.7%，附着孢率81.8%，适合于附着孢形态的观察.表2 菌龄和寄主叶汁对孢子萌发率及附着胞形成率的影响1)Table 2 Effects of spore age and host leaves juice on spore germination rate and appressorium formation rate of C.gloeosporioides1)同列数据后附不同小写字母者表示在P＜0.05水平上差异显著.方差分析:F水孢子悬液 =0.7507;F叶汁孢子悬液 =2.812.培养菌龄d水孢子悬液萌发率/% 附着胞率/%茉莉叶汁孢子悬液萌发率/% 附着胞率/%5 16.4 87.9 95.5 32.6 51.7a 81.8a 99.1a 0.0c 7 37.2ab 83.5a 98.8a 0.0c 9 11.8bc 84.9a 95.6a 30.7b 11 7.8c 85.8a 94.6a 43.1ab 13 2.6c 90.2a 94.0a 48.0ab 15 2.1c 92.9a 93.4a 51.1ab 17 1.7c 96.8a 93.0a 55.0a平均炭疽菌孢子在茉莉叶汁中的萌发率相对较高;但附着孢率明显低于水培，菌龄5－7 d的孢子萌发后未形成附着胞，虽然随菌龄增大附着胞率上升，但17 d的附着胞率也仅55.0%.这说明营养虽能促进孢子萌发，但抑制了附着胞的形成，不适合作为附着孢形态观察的介质.这可能与是否需要附着胞作为病菌侵染工具有关，叶汁中的丰富营养物质可供孢子吸收萌发、菌丝分枝生长，不需要附着胞建立侵染点. 2.4 不同植物叶汁对寄生于大豆的炭疽菌孢子萌发和附着胞形态特征的影响结果(图2、表3)表明，与水培相比，白菜、枇杷、花生、甜瓜、豇豆、杧果、桃树、刺桐及柑橘等9种植物叶汁均能与大豆叶汁一样促进寄生于大豆的炭疽菌孢子萌发，同时不同程度地抑制附着胞形成;茶、番石榴、烟草、葡萄等4种植物叶汁对孢子萌发和附着胞形成有显著抑制作用，致使孢子不萌发或萌发后芽管畸形，不产生附着胞.经生物学统计，寄生于大豆的炭疽菌孢子萌发率与附着胞率相关系数r=0.5311，说明二者间相关性不显著.观测还表明，寄生于大豆的炭疽菌在缺乏营养物质的水中形成的附着胞，形态稳定，大小均匀，主要为梨形、卵形，暗褐色，长× 宽为 7.4－9.9(8.6)μm ×5.3－6.4(5.6)μm.在大豆、白菜等10种供试植物叶汁中该菌附着胞个体相对较大且大小不均一，部分附着胞形态发生变异，出现半椭圆形、姜瓣形等，大豆汁、杧果汁诱发的附着胞较水培颜色浅，为淡褐色(表3).综合上述试验结果，用菌龄5 d的孢子水培诱发附着孢，萌发率、附着孢率适中，形态稳定，适合于炭疽菌种的比较鉴定.图2 寄主大豆的炭疽菌附着胞形态(400×)Fig.2 Appressorium morphology of C.truncatum(400 × )表3 不同植物叶汁对寄生于大豆的炭疽菌附着胞形态特征的影响1)Table 3 Effects of some plant juices on morphological characteristics ofC.truncatum1)同列数据后附不同小写字母者表示在P＜0.05水平上差异显著.方差分析:F=5.500.叶汁萌发率附着胞率2%%形状颜色长(平均)×宽(平均)/μm水(CK) 63.1a 97.8a 梨形、卵形暗褐色 7.4－9.9(8.6)×5.3－6.4(5.6)大豆 98.1a 16.8cd 半椭圆形、姜瓣形淡褐色 9.4－25.7(20.1)×8.4－10.3(9.1)白菜 91.4a 96.2a 梨形、姜瓣形、半椭圆形暗褐色 15.6－29.9(19.4)×7.4－8.7(7.8)枇杷91.3a 60.6ab 半椭圆形、姜瓣形暗褐色 12.4－15.3(13.4)×7.4－10.4(8.6)花生88.8a 39.9bcd 半椭圆形、姜瓣形暗褐色 12.3－22.5(13.2)×7.4－8.7(8.1)甜瓜87.3a 40.7bcd 梨形、姜瓣形暗褐色 7.4－14.8(12.4)×7.4－10.1(9.2)豇豆 86.3a 53.4bc 梨形、卵形、姜瓣形暗褐色 7.4－12.4(9.8)×6.4－7.2(6.7)杧果 81.9a3.2d 姜瓣形、梨形淡褐色 5.2－17.8(11.3)×4.8－8.9(6.9)桃78.0a 31.1bcd 梨形、半椭圆形、姜瓣形暗褐色 15.3－17.8(16.7)×7.7－9.2(8.3)刺桐 69.0a 96.4a 梨形、半椭圆形暗褐色 12.4－15.3(13.4)×7.5－8.9(8.0)柑橘 65.3a 53.1bc 梨形、姜瓣形暗褐色 11.1－18.5(15.5)×7.4－9.9(8.3)红麻 67.6a 0.0d 未见(芽管畸形) 未见0葡萄 3.7b 0.0d 未见(芽管畸形) 未见 0烟草 2.2b 0.0d 未见(芽管畸形) 未见 0番石榴 0.0b 0.0d 未见未见 0茶0.0b 0.0d 未见未见02.5 不同菌株不同孢子悬液浓度对孢子萌发和附着胞形成的影响表4显示，悬液浓度高时炭疽菌孢子不萌发或仅极个别萌发，附着胞率低，甚至为0;随悬液浓度降低，孢子萌发率均有不同程度的上升，附着胞率则在悬液浓度为3.4×106个·mL－1时出现一个峰值后下降;悬液浓度低时虽然孢子萌发率很高，但附着胞率极低.综合来看，观测附着胞形态特征的孢子悬液浓度应以3.4 ×105个·mL－1左右为宜.表4 不同菌株不同孢子悬液浓度对孢子萌发和附着胞形成的影响1)Table 4 Effects of spore concentrations on conidium germination and appressorium formation1)同列数据后附不同小写字母者表示在P＜0.05水平上差异显著.方差分析:F萌发率=2.369;F附着孢率=38.29.供试菌株寄主萌发率/%3.4 ×107个·mL－1 3.4 ×106个·mL－1 3.4 ×105个·mL－1 3.4 ×104个·mL－1 3.4 ×103个·mL －1附着胞率/%3.4 ×107个·mL－1 3.4 ×106个·mL－1 3.4 ×105个·mL－1 3.4 ×104个·mL－1 3.4 ×103个·mL －1胶孢炭疽菌C.gloeosporioides 茉莉 0.8a 3.9c 87.4a 96.5a 99.6a 25.0ab 64.1bc 49.4bcd1.2d 0.0a胶孢炭疽菌 C.gloeosporioides 油茶 0.4a 0.6c 44.6b 99.2a 98.5a 0.0b 66.7b 15.2ef 4.5c 0.0a胶孢炭疽菌 C.gloeosporioides 枇杷 0.0a 4.8c 87.5a 81.1a 94.9a 0.0b 75.0ab 8.2f 8.0c 0.0a胶孢炭疽菌 C.gloeosporioides 桃树 0.0a 0.7c 16.1c 73.3a 93.8a 0.0b 57.1cd 52.8abc 6.4c 6.0a胶孢炭疽菌C.gloeosporioides 刺桐 7.9a 84.2a 87.2a 99.4a 100.0a 43.0a 87.4ab 70.1ab1.2d 0.0a胶孢炭疽菌 C.gloeosporioides 鱼尾葵 0.0a 9.4c 18.9c 52.0b 94.4a 0.0b 92.9a 74.1a 39.4ab 8.6a毁灭炭疽菌 C.destructivum 烟草 0.0a 11.6c 65.4a 71.6a 82.1a 0.0b 75.0ab 71.0ab 46.5a 16.1a壳皮炭疽菌 C.crassipes 茶树 0.0a 4.8c 92.3a 94.5a 97.8a 0.0b 89.6ab 28.1df 18.2bc3.2a芸薹炭疽菌C.higgisianum 白菜 2.6a 4.4c 90.8a 92.7a 95.8a 23.1ab 69.9ab 34.4cd21.6bcd 5.1a黑线炭疽菌 C.dematium 红麻 0.0a 12.0c 65.1a 93.0a 95.0a 0.0b 76.7ab 11.1f 2.5d 1.1a豆类炭疽菌 C.truncatum 大豆 6.9a 59.5b 73.2a 84.3a 91.8a 12.3b 40.5d 35.5cde 27.1ac 17.9a2.6 22株炭疽菌附着胞形态特征比较由表5看出，12个胶孢炭疽菌株中，寄主为茉莉、油茶等的11个菌株的附着孢形状类型和色泽基本相同，在一个视野内可见梨形、卵形或姜瓣形等附着胞;各菌株附着胞大小相似;未成熟的附着胞为无色或灰色，成熟时则为暗褐色.这些菌株单凭附着胞形态难以被区别开来.寄生于雷公藤的炭疽菌附着胞形状类型较多，胞内灰色颗粒物明显，周边粗齿状，黑褐色，相对容易识别.其他10个菌株产生的附着胞形状多样，有姜瓣形、球形、不规则形、梨形及卵形等，色泽类型也较多，有灰色、褐色、黑色等，胞内颗粒物凸出或无，与孢子形态相结合，能将菌株初步区别开来.表5 22株炭疽菌附着胞形态特征Table 5 Appressorium morphological characteristics of Colletotrichum species from 22 hosts供试菌株寄主形状颜色长(平均)×宽(平均)/μm2胶孢炭疽菌C.gloeosporioides 茉莉梨形、姜瓣形、卵形暗褐色 6.9－14.8(9.9)×5.1－9.9(6.4)胶孢炭疽菌C.gloeosporioides 油茶姜瓣形、梨形、卵形暗褐色 7.7－12.4(8.9)×5.4－7.5(6.5)胶孢炭疽菌C.gloeosporioides 番石榴姜瓣形、梨形、卵形暗褐色 6.7－9.9(7.7)×6.1－8.5(6.6)胶孢炭疽菌C.gloeosporioides 刺桐梨形、姜瓣形、卵形暗褐色 5.7－8.9(7.3)×5.6－7.2(6.6)胶孢炭疽菌C.gloeosporioides 枇杷梨形、卵形、姜瓣形暗褐色 5.4－7.5(6.6)×2.2－6.9(5.1)胶孢炭疽菌C.gloeosporioides 桃树梨形、卵形、姜瓣形暗褐色 5.3－6.9(6.2)×3.7－4.9(4.2)胶孢炭疽菌C.gloeosporioides 鱼尾葵梨形、姜瓣形、卵形暗褐色 7.4－9.9(7.7)×5.1－7.4(6.6)胶孢炭疽菌C.gloeosporioides 葡萄姜瓣形、梨形、卵形暗褐色 6.4－9.9(8.1)×4.3－5.7(5.1)胶孢炭疽菌C.gloeosporioides 杧果卵形、梨形、姜瓣形暗褐色 5.4－11.2(7.8)×4.2－7.4(5.5)胶孢炭疽菌C.gloeosporioides 柑橘卵形、梨形、姜瓣形暗褐色 5.0－8.4(7.0)×5.0－6.3(5.6)胶孢炭疽菌C.gloeosporioides 柿子卵形、梨形、姜瓣形暗褐色 7.4－8.4(7.9)×5.6－6.9(6.3)胶孢炭疽菌C.gloeosporioides 雷公藤不规则形、姜瓣形黑褐色 6.4－10.1(8.4)×4.5－7.7(6.5)毁灭炭疽菌C.destructivum 烟草不规则形、梨形黑褐色 6.9－12.4(8.2)×3.7－5.8(5.5)豆类炭疽菌C.truncatum 大豆梨形、卵形暗褐色 5.2－5.4(5.3)×4.9－5.7(5.1)辣椒炭疽菌C.capsici 辣椒梨形、卵形灰褐色 7.7－9.6(9.1)×6.3－8.2(7.2)黑线炭疽菌C.dematium 红麻球形、梨形黑褐色 5.4－7.5(7.1)×5.1－7.5(6.3)芸薹炭疽菌C.higgisianum 白菜梨形暗褐色 6.3－10.2(8.5)×5.4－7.2(6.2)毛豆炭疽菌C.boninense 豇豆姜瓣形、梨形灰褐色 4.9－10.6(7.7)×3.0－8.7(6.9)瓜类炭疽菌C.orbiculare 甜瓜梨形、卵形灰褐色 5.3－6.9(6.2)×5.4－7.4(5.7)芭蕉炭疽菌C.musae 香蕉姜瓣形、不规则形暗褐色6.7－10.4(8.8)×5.0－7.5(6.4)壳皮炭疽菌C.crassipes 茶树梨形、姜瓣形暗褐色6.3－7.7(7.3)×4.8－7.5(6.8)葡萄刺盘孢菌C.ampelinum 云南黄素馨梨形、卵形、姜瓣形暗褐色 5.3－7.5(5.9)×4.5－4.8(4.7)3 结论与讨论5 d菌龄的孢子以水配成3.4×105个·mL－1左右的孢子悬液，在25℃光照下培养12 h，附着胞的形态特征稳定，该条件较适宜孢子萌发与附着孢的观察.用该方法诱导22株炭疽菌产生附着孢，对其形态特征观察发现，11种炭疽菌产生的附着胞形态特征存在一定的差异，与孢子形态相结合，能将这些菌株初步区分出来;胶孢炭疽菌的12个菌株中，除寄生于雷公藤的炭疽菌外，其余11个菌株的附着孢形态差异不明显，单凭肉眼观察难以区别.Crouch et al［26－27］指出，胶孢炭疽菌复合类群下包括许多具有明显系统发育分化及生理病理特征分化的不同物种，仅根据形态和寄主，已经不足以准确鉴定种.Damm et al［28］认为，物种鉴定必须是基于基因型与表型相结合的更为完整而科学的物种概念.因此，附着胞形态差异只能作为种间鉴定的依据之一，通过观察不同寄主的炭疽菌附着胞形态更有助于理解其病理特征的分化.参考文献【相关文献】［1］von ARX J A.Die arten der guttung Colletotrichum Corda［J］.Phytopathol Z，1957，29:413－468.［2］von ARX J A.The Fungi Aporulating in Pure Culture［M］.Lehre，New York:J Cramer，1970:288－290.［3］von ARX J A.A Revision of Fungi Classified as Gloeosporium［M］.2d ed.Lehre，New York:J Cramer，S-H Service Agency，1970:170－180.［4］SUTTON B C.The Coelomycetes:Fungi Imperfecti with Pycinidia，Acervuli and Stromata［M］.London:Commonwealth Mycological Institute，1980:523－537.［5］MORDUE J E M.Colletotrichum graminicola［M］.London:CMI Description of Pathogenic Fungi and Bacteria，1967:131－145.［6］MORDUE J E M.Colletotrichum lindemuthianum［M］.London:CMI Descriptions of Pathogenic Fungi and Bacteria，1971:280－292.［7］von ARX J A，WEIJMAN A C M.Conidiation and carbohydrate composition in some Candida and Torulopsis［J］.Antonie van 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炭疽芽孢杆菌PPT课件
流行病学 • 1.传染源：患病的牛、马、羊、骆驼等食草动物是人类炭疽的主要传染源。
猪可因吞食染菌青饲料；狗、狼等食肉动物可因吞食病畜肉类而感染得病， 成为次要传染源。炭疽患者的分泌物和排泄物也具传染性。
• 2.传播途径：人感染炭疽杆菌主要通过工业和农业两种方式。接触感染是 本病流行的主要途径。皮肤直接接触病畜及其皮毛最易受染，吸入带大量 炭疽芽胞的尘埃、气溶胶或进食染菌肉类，可分别发生肺炭疽或肠炭疽。 应用未消毒的毛刷，或被带菌的昆虫叮咬，偶也可致病。
十年，在皮毛制品中培养特性 • 条件：需氧或兼性厌氧（有氧或无氧均可），最适温度30-35℃，有毒株
在NaHCO3的血脂平板或5%的血清的营养基内，5%CO2孵箱培养24-48小时， 形成粘液样菌落（有荚膜），而无毒菌株则为粗糙状。
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焦痂而得名。 • 炭疽杆菌能引起羊、牛、马等动物及人类的炭疽病。第二次世界大战时，
炭疽杆菌曾被日本帝国主义作为致死战剂之一；2001年美国发生生物恐 怖袭击，通过邮寄含炭疽杆菌的信件导致5人死亡，17人感染。 • 炭疽为《中华人民共和国传染病防治法》规定的乙类传染病。
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炭疽的流行现状 • 炭疽是由炭疽杆菌所致，一种人畜共患的急性传染病。 • 炭疽散布于世界各地，尤以南美洲、亚洲及非洲等牧区较多见，呈地方
炭疽杆菌对碘特别敏感，对
等敏感。
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炭疽的发病机制
• 当一定数量的芽胞进入皮肤破裂处，吞入胃肠道或吸入呼吸道，加上人体抵抗力减弱时， 病原菌借其荚膜的保护，首先在局部繁殖，产生大量毒素，导致组织及脏器发生出血性 浸润和严重水肿，形成原发性皮肤炭疽、肠炭疽及肺炭疽等。当机体抵抗力降低时致病 菌即迅速沿淋巴管及血循环进行全身播散，形成败血症和继发性脑膜炎。皮肤炭疽因缺 血及毒素的作用，真皮的神经纤维发生变性，故病灶处常无明显的疼痛感。如人体健康， 而进入体内的芽胞量少或毒力低，则可以不发病或出现隐性感染。
炭疽芽孢杆菌的分离鉴定及其与疫苗株的鉴别诊断
Ａｂｓ ｔ ｒ ａｃ ｔ ： Ｔｈｅ ｄｉ ｆ ｆ ｅ ｒ ｅ ｎｔ ｉ ａ ｌ ｄ ｉ ａ ｇｎｏ ｓ ｉ ｓ ｍｅ ｔ ｈｏ ｄｓ ｗｅ ｒ ｅ ｄｅ ｖｅ ｌ ｏｐ ｅ ｄ ｔ ｏ ｉ ｄｅ ｎ ｔ ｉ ｆ ｙ ｔ ｈ ｅ Ｂａｃ ｉ ｌ ｌ ｕｓ ａｎｔ ｈｒ ａ ｃ ｉ ｓ ｃ ｌ ｉ ｎｉ ｃ ａ ｌ ｓ ｔ ｒ ａ ｉ ｎｓ ａ ｎｄ ｖ ａ ｃ ｃ ｉ ｎｅ
炭疽芽孢杆菌 的分 离鉴定及其 与疫 苗株 的鉴别诊断
祝 令伟 ， 郭 学军 ， 李 吉平 ， 顾 贵 波。 ， 刘 军 ， 纪 雪 ， 冯 书章 ， 孙 洋
摘 要 ： 目的 建 立 炭 疽 芽 孢 杆 菌 临 床 分 离株 和 疫苗 株 的 鉴 别 诊 断 方 法 ， 为炭疽疫情判断和疾病控制提供依据
ｕｍ ｃ ｏ ｌ ｌ ａ ｇｅ ｎ — ｌ ｉ ｋｅ ｐｒ ｏｔ ｅｉ ｎ． Ｉ ｔ ｗａ ｓ ｆ ｏ ｕｎ ｄｅ ｄ ｔ ｈａ ｔ ｔ ｈ ｅ ＰＣＲ ａ ｍ ｐｌ ｉ ｆ ｉ ｃ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｆ ｒ ａ ｇｍ ｅ ｎｔ ｌ ｅ ｎ ｇｔ ｈ ｏ ｆ ｔ ｈｅ ｔ ＷＯ ｉ ｓ ｏ ｌ ａ ｔ ｅ ｄ ｓ ｔ ｒ ａ ｉ ｎ ｓ ｗａ ｓ ｄｉ ｆ ｆ ｅ ｒ ｅ ｎ ｔ ｆ ｒ ｏｍ ｔ ｈｅ Ｉ Ｉ ｖ ａ ｃ ｃ ｉ ｎｅ ｓ ｔ ｒ ａ ｉ ｎ ａ ｎｄ ｎ ｏｎ — ｃ ａｐ ｓ ｕｌ ａ ｔ ｅ ｄ ｖ ａｃ ｃ ｉ ｎ ｅ ｓ ｔ ｒ ａ ｉ ｎ． Ｔｈｅ Ｂｃ ｌ Ａ ｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｉ ｎ ｏ ｆ ｉ ｓ ｏ ｌ ａ ｔ ｅ ｄ ｓ ｔ ｒ ａ ｉ ｎ ｃ ｏｎｔ ａ ｉ ｎ ６ ６ ｃ ｏｐ ｉ ｅ ｓ ｏ ｆ ＧＸ Ｘ ｒ ｅ Ｐ ｅ ａ ｔ ａ ｎ ｄ ｆ ｉ ｖｅ ｃ ｏ ｐｉ ｅ ｓ ｏ ｆ（ ＧＰＴ） ｓ ＧＤ ＴＧＴ Ｔ （ Ｂｃ ｌ Ａ ｒ ｅ ｐ ｅ ａ ｔ ） ． Ｓｅ ｃ ｏ ｎｄｌ ｙ， ｔ ｈｅ ｂ ａ ｃ ｔ ｅ ｒ ｉ ａ ｌ ｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｉ ｎ ｅ ｘｐ ｒ ｅ ｓ ｓ ｉ ｏ ｎ ｌ ｅ ｖ ｅｌ ｏ ｆ ｉ ｓ ｏｌ ａ ｔ ｅ ｄ ｓ ｔ ｒ ａ ｉ ｎ ｗａ ｓ ａ ｌ ｓ ｏ
中国炭疽芽胞杆菌中11个串联重复序列位点的特征和分布
中国炭疽芽胞杆菌中11个串联重复序列位点的特征和分布魏建春;张恩民;张慧娟;张建华【期刊名称】《中国人兽共患病学报》【年(卷),期】2012(28)8【摘要】目的检测炭疽芽胞杆菌中可变数量串联重复序列(VNTR)的变化,分析我国菌株中VNTR的特征和分布规律.方法 PCR扩增.琼脂糖电泳和毛细管电泳,测序验证,BLAST比对等.结果 11个VNTR位点中有4个在所有菌株中没有差别,另外7个位点只在个别菌株中检测到差别,有差别的菌株多分布在新疆；11个VNTR位点均位于基因编码区内,编码对细菌生存重要的蛋白和一些功能不明蛋白.结论结果提示新疆的菌株类型较复杂；本研究中的VNTR位点比较保守,可能不能用于区别不同的炭疽芽胞杆菌,但对于了解炭疽芽胞杆菌的基因组特征以及鉴定炭疽芽胞杆菌具有一定的作用.%To study the characteristics and distribution of the variable number tandem repeat (VNTR) of Bacillus an-thracis in China, we selected 109 strains isolated from 17 provinces, and the polymorphism of 11 VNTR loci were studied by polymerase chain reaction (PCR). The PCR products were detected by agarose electrophoresis or capillary electrophoresis, and different DNA fragment in each VNTR locus were sequenced. The results showed no difference was found in 4 of 11 VNTR loci in tested strains; a few strains were detected different from most strains in 7 VNTR loci. All of VNTR loci were located in genes encoding important protein and some hypothetical protein. The results suggest that these strains isolated from Xinjiang were complicated. Although theseVNTR loci varied too lightly to distinguish Bacillus anthracis strains, it's useful to understand the genome characteristics and identify Bacillus anthracis strains from other Bacillus species.【总页数】4页(P765-768)【作者】魏建春;张恩民;张慧娟;张建华【作者单位】中国疾病预防控制中心传染病预防控制所,传染病预防控制国家重点实验室,北京 102206;中国疾病预防控制中心传染病预防控制所,传染病预防控制国家重点实验室,北京 102206;中国疾病预防控制中心传染病预防控制所,传染病预防控制国家重点实验室,北京 102206;中国疾病预防控制中心传染病预防控制所,传染病预防控制国家重点实验室,北京 102206【正文语种】中文【中图分类】R378.8【相关文献】1."中国罪犯DNA数据库"模式库-13个STR位点基因在中国人群中的分布 [J],杜志淳;李莉;林源;阙庭志;程大霖;沈渭忠;严品华;柳燕;何根兰;赵珍敏;沈敏2.内蒙古炭疽芽胞杆菌多位点串联重复序列分型分析 [J], 海岩;王文瑞;郭卫东;李昕;跃华;张慧娟;魏建春;武利涛3.POC5基因罕见突变位点在中国汉族人群特发性脊柱侧凸患者中的分布研究 [J], 徐启明;邱贵兴;吴南;陈易新;崔丽嘉;牛宇辰;李孝鑫;沈建雄;仉建国;吴志宏4.中国正常人群中先天性代谢疾病相关基因的\rDNA变异位点分布频率的研究 [J], 韦雨琦;秦胜营;孙一丹;王艳菁;刘逸晨;周伟;沈陆;周晨希;贺林;怀聪5.SULT4A1基因4个位点在中国北方汉族群体中的分布及法医学意义 [J], 吴军胜;丁梅;雍梦馨;赵梦阳;邢佳鑫;王保捷因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
炭疽芽孢杆菌芽孢适配子的结构与亲和性分析
炭疽芽孢杆菌芽孢适配子的结构与亲和性分析宋亚军;王津;郭兆彪;甄蓓;张敏丽;杨瑞馥【期刊名称】《解放军医学杂志》【年(卷),期】2001(026)006【摘要】为了对炭疽芽孢杆菌疫苗株A.16R芽孢的适配子进行亲和性分析，体外构建了78个碱基的随机DNA库，以炭疽芽孢杆菌疫苗株A.16R芽孢为靶标，用SELEX技术进行了15轮的筛选，将筛选到的适配子库进行克隆、测序，用Macaw 2.05和DNA sis v2.5软件对每一适配子的保守序列和二级结构进行分析，并用生物素-链酶亲和素-辣根酶系统检测，根据OD值的高低判定亲和力的大小，对每一适配子进行亲和力测定。
结果表明，适配子的亲和力高低不一，OD值最高为1.2，最低为0.25，二级结构分析结果显示，茎环和茎等二级结构可能是适配子与芽孢结合的基础；其一级结构提示有AGGGG、CCCCG、GGGTT、ACACT等保守序列，上述分类与OD值的高低分布基本吻合。
【总页数】4页(P419-422)【作者】宋亚军;王津;郭兆彪;甄蓓;张敏丽;杨瑞馥【作者单位】军事医学科学院微生物流行病研究所,;军事医学科学院微生物流行病研究所,;军事医学科学院微生物流行病研究所,;第一军医大学流行病教研室;第一军医大学流行病教研室;第一军医大学流行病教研室【正文语种】中文【中图分类】R378.72【相关文献】1.人慢性粒细胞白血病融合蛋白BCR－ABL适配子筛选及结构分析 [J], 平娟;赵娜;申智慧;阴明星;张倩;张伟;马雪姗;陈传波2.炭疽芽孢DNA适配子结构与长度对亲和力的影响 [J], 甄蓓;宋亚军;郭兆彪;王津;俞守义;杨瑞馥3.抗体-适配子混合夹心法检测炭疽芽孢杆菌芽孢的研究 [J], 甄蓓;张敏丽;宋亚军;郭兆彪;王津;杜宗敏;俞守义;杨瑞馥4.添加芽孢杆菌对池塘中理化因子和细菌群落结构的影响分析 [J], 陆洋; 郁二蒙; 谢骏; 王广军; 张凯; 李志斐5.枯草芽孢杆菌蛋白酶结构与表达载体分析 [J], 张荣宗;江丁文;陈锦香因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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中没 有 差 别 ， 外 ７个 位 点 只 在 个 别 菌 株 中检 测 到 差 别 ， 差 别 的 菌 株 多 分 布 在 新 疆 ； １个 ＶＮ 另 有 １ ＴＲ 位 点 均 位 于 基 因编 码 区
内 ， 码 对 细 菌 生 存 重 要 的蛋 白和 一 些 功 能 不 明蛋 白 。结 论 结果 提 示 新 疆 的菌 株 类 型 较 复 杂 ； 研 究 中 的 ＶＮＴ 位 点 比 较 编 本 Ｒ
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中图 分 类 号 ： ３ ８ ８ Ｒ ７ 文 献 标 识 码 ： Ａ 文 章 编 号 ：０ ２ ６ ４ ２ １ ）８ ７ ５ ４ １ ０ —２ ９ （ ０ ２ ０ —０ ６ —０
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中 国 人 兽 共 患 病 学 报
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ＤＯＩ １ ３ ６ ／ ｊ ｓ ｎ １ ０ ：０ ９ ９ ｃｚ ｊｉｓ ． ０ ２～２ ９ ２ １ ０ Ｏ １ ６ ４． ０ ２ ８． ０
保 守 ， 能 不 能 用 于 区别 不 同 的炭 疽 芽胞 杆 菌 ， 对 于 了解 炭 疽 芽 胞 杆 菌 的 基 因 组 特 征 以及 鉴 定 炭 疽 芽 胞 杆 菌 具 有 一 定 的 可 但
作用 。
关 键 词 ： 疽 芽 胞 杆 菌 ； 变 数 量 串联 重 复 序 列 ； 征 ； 布 炭 可 特 分
中 国炭 疽 芽胞 杆 菌 中 １ 个 串联 １ 重 复 序 列 位 点 的特 征 和 分 布 ＊
魏 建 春 ， 恩 民 ， 慧 娟 ， 建 华 张 张 张
摘 要 ： 的 检 测 炭 疽 芽 胞 杆 菌 中可 变 数 量 串 联 重 复 序 列 （ ＴＲ） 变 化 ， 析 我 国 菌 株 中 ＶＮ Ｒ 的 特 征 和 分 布 规 目 ＶＮ 的 分 Ｔ 律。方法 Ｐ Ｒ 扩 增 ， 脂 糖 电泳 和 毛 细 管 电泳 ， 序 验 证 ， Ｉ Ｔ 比对 等 。 结 果 １ Ｃ 琼 测 Ｂ ＡＳ １个 ＶＮ ＴＲ 位 点 中 有 ４个 在 所 有 菌 株
ｇ ｎ ｓｅ ｃ ｄｎ ｍｐ ｒａ ｔｐ ｏ ｅｎ ａ ｄｓ ｍｅｈ ｐ ｔ ｅｉａ ｐ ｏｅｎ Ｔｈ ｅ ｕｔ ｕ ｇ ｓ ｈ ｔｔ ｅ ｅｓｒ ｉｓ ｉｏａｅ ｒｍ ｎ ｎ ｅ ｅ ｎ ｏ ｉｇ ｉ ｏ ｔｎ ｒ ｔｉ ｎ ｏ ｙ ｏ ｈ ｔ ｌ ｒ ｔｉ． ｃ ｅ ｒｓ ｌｓｓ ｇ ｅ ｔｔ ａ ｈ ｓ ｔａｎ ｓ ｌｔｄ ｆｏ Ｘｉｊａ ｇ ｉ
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