【CN110055255A】切除炭疽芽胞杆菌中pXO1和pXO2质粒的方法【专利】
炭疽芽孢杆菌EA1蛋白的融合表达和纯化
炭疽芽孢杆菌EA1蛋白的融合表达和纯化高美琴;刘先凯;冯尔玲;朱力;陈福生;王恒樑【期刊名称】《生物技术通讯》【年(卷),期】2009(020)005【摘要】目的:原核表达重组炭疽芽孢杆菌EA1蛋白.方法:用PCR方法从炭疽芽孢杆菌A16R疫苗株染色体中扩增编码EA1蛋白的eag基因序列,经过纯化、酶切后克隆到含有GST标签的原核表达载体pGEX-6P-2中,构建重组载体pGEX-EA1;将空载体(作为对照)、重组载体转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株获得表达工程菌株,对其表达和纯化条件进行优化;利用Western印迹检测融合蛋白的表达.结果:构建了EA1蛋白的融合表达载体,并在大肠杆菌中获得高效表达;经Glu-tathione Sepharose 4B纯化获得了EA1蛋白;Western印迹表明,此蛋白可与GST标签抗体反应.结论:在原核表达系统中表达并纯化得到EA1融合蛋白,为进一步对其进行功能研究奠定了基础.【总页数】4页(P647-650)【作者】高美琴;刘先凯;冯尔玲;朱力;陈福生;王恒樑【作者单位】军事医学科学院,生物工程研究所,北京100071;华中农业大学食品科技学院,湖北,武汉430070;鄂尔多斯市疾病控制中心,内蒙古,鄂尔多斯017000;军事医学科学院,生物工程研究所,北京100071;军事医学科学院,生物工程研究所,北京100071;军事医学科学院,生物工程研究所,北京100071;华中农业大学食品科技学院,湖北,武汉430070;军事医学科学院,生物工程研究所,北京100071【正文语种】中文【中图分类】Q78【相关文献】1.自剪切重组麦芽糖结合蛋白-人鼻病毒3C 蛋白酶融合蛋白在大肠杆菌表达系统中表达、纯化及活性检测 [J], 董哲君;赵海舰;许小毛;方保民;郭健;肖飞2.人血清白蛋白-睫状神经营养因子突变体融合蛋白基因在毕赤酵母中的表达及表达产物的纯化和活性鉴定 [J], 赵洪亮;薛冲;熊向华;张伟;杨秉芬;刘志敏3.利用GST融合蛋白表达系统表达与纯化人N-Ras蛋白 [J], 张云静;张蓉;叶棋浓;冯滢滢;徐小洁;梁迎春;张立;王涛;李玲;郭靖;纪贝贝4.胱天蛋白酶募集域蛋白9-麦芽糖结合蛋白融合蛋白的原核表达及纯化 [J], 邓东灵;孔庆涛;胡青原;刘海波;魏天彪;黄善青;陈浩;桑红5.类弹性蛋白多肽-红色荧光蛋白融合蛋白的表达纯化及细胞相容性 [J], 刘宁;崔梅英;王明月;杨泽斌;王浩;毛禹;方楷漪;夏薇;关新刚因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
炭疽毒素受体CMG2胞外区的截短表达、纯化及鉴定分析
ｒ ｏ ｂ ａｔ ｒｅ ｓ ｅ ｕｆｄａｄｔ ｎｉ ｎｆｄｂ ｔ ｒｅｔｎａ ａ ａｄＷｅｔｎｂ ｔ ｇ 【 ｅ ｕｓ Ｔｒ ｃｍ ｉ ｎ ｅ ｍ ｉ ｏ ｉ ｒ ｐｒｉ ｎ ｅ ｅｔ ｅ ｙｃ ｏ ｏ ｃｏ ｓ ｙ ｎ ｓ ｒ ｌｔ ． Ｒ ｓｌ 】 ｈｅ ｒ ｏ ｂ ａｔ ｃ ｎ ｐ ｔｎ ｗ ｅ ｉｅ ｎ ｈ ｄ ｉ ｉ ｙｐｔ ｉ ｓ ｅ ｏｉ ｎ ｔ ｅｅ ｎ
ｔ ｎａｅ ｏ ａ ｓｏ ＭＧ ｅｅ ｃ ｎｄ ｉｔ ｐ Ｅ ０ ｖｃ ｒｒｓｅｔ ｅｙａｄ ｉｄ ｃｄ ｔ ｅｐｅｓ ｈ ｅ ｒｔｉｓｂ Ｖ Ｇ ｈ ｒ ｃｔ ｄ ｍ ｉ ｆＣ ２ ｗ ｒ ｌ ｅ ｎ Ｑ ３ ｅｔ ｅｐ ｃｖｌ ｎ ｎ ｕｅ ｏ ｘｒｓ ｔ ｅ ｐｏｅ ｙＩ Ｆ ．Ｔ ｅ ｕ ｄ ｎ ｏ ｏ ｏ ｉ ｒ ｎ
依据 。方法】Ｊ ｐ Ｅ ０ 【 ￣ Ｑ ３ 表达质粒在大肠杆菌内表达长 短不 同的３ Ｃ ２ Ｊ 个 ＭＧ 胞外区截短 片段 ， 经纯化后 ， Ｗｅｔｒ ｌｔ ｇ 用 ｓ ｎ ｏ ｉ 和细 ｅ ｂ ｔｎ
胞保护性实验对 ３ 个重组蛋白进行分析。结果】 【 发现３ 个重组蛋白均可与４ ５ Ｂ 单抗结合， 但均没有细胞保护活性。结论】个截 【 ３
【 文献标识码】 Ａ
Ｓｔ ｄ ｎ ｔ ｅ ｔｕ ｃ ｔ ｄ ｅ ｐ ｅ ｓｏ ｆｐ ｒｉａ ｉｎ ａ ｄ ｉｅ ｔ ｉａ ｉ ｎ ｅ ｔａ ｅｌ ｌｒｒ ｇｏ ｆ ｕ ｙ ｏ ｈ ｒ ｎ ａ ｅ ｘ ｒ ｓ ｉｎ ｏ ｕ ｉｃ ｔ ｎ ｄ ｎ ｉｃ ｔ ｘ ｒ ｃ ｌ ａ ｅ ｉｎ ｏ ｆ ｏ ｆ ｏ ｕ ａ ｔ ｒ ｘｔ ｘｎ ｒ ｃ ｐ ｏ ｎｈａ ｉ ｅ ｅ ｔ ｒ ｏ ＣＭＧ２
ｐ ｔｎ ｔｎｄ ｏｌ ｂ ｄｔ Ｍ Ａ Ｂ ， ｕ ｔ ｙｏ ｅ ｙ ｐｏ ｃｏ ｔｉ． Ｃ ｎｌ ｉ ｓＩｗｓ ｏｃ ｄｄｔ ｔ ｅ ｎｎ ｒ ｅ ｓ ｂ ｉ ｕ ｉ ｃｂ４ ５ｂｔ ｅ ｌｔｈ ｔ ｒ ｅｔｎ ｃｖｙ 【 ｏ ｃ ｓ ｎ 】 ａ ｃｎｌ ｅ ａｔ ｌｏ ｏ ｉ ｏ ａｅ ｃ ｄ ｎ ｏ ｓｔ ｃ ｏ ｔ ｉ ａ ｉｔ ｈ ｕｏ ｔ ｕ ｈ ａｉ ｈ
一种地衣芽孢杆菌的基因编辑方法及应用[发明专利]
![一种地衣芽孢杆菌的基因编辑方法及应用[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/d4cf1b4200f69e3143323968011ca300a6c3f6ad.png)
(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201810884050.9(22)申请日 2018.08.06(71)申请人 江南大学地址 214122 江苏省无锡市滨湖区蠡湖大道1800号(72)发明人 石贵阳 李由然 张梁 丁重阳 徐沙 李宗文 (74)专利代理机构 南京经纬专利商标代理有限公司 32200代理人 何金锦(51)Int.Cl.C12N 15/75(2006.01)(54)发明名称一种地衣芽孢杆菌的基因编辑方法及应用(57)摘要本发明公开了一种地衣芽孢杆菌的基因编辑方法及应用，实现了基因敲除及基因敲入，属于基因工程领域。
该方法首先借助温度敏感型质粒PNZT1为载体构建温敏敲除(入)质粒；然后将敲除(入)质粒转化地衣芽孢杆菌经过变温传代实现敲除(入)盒同源替换靶基因；最后导入FLP重组酶表达质粒介导抗性基因的回收。
本发明首次在地衣芽孢杆菌基因编辑中运用FLP/FRT重组系统并实现了无标记基因敲除及基因敲入，为地衣芽孢杆菌的代谢工程改造提供了有效的技术手段。
权利要求书2页 说明书9页序列表8页 附图3页CN 108929882 A 2018.12.04C N 108929882A1.一种地衣芽孢杆菌的基因编辑方法，其特征在于：包括由温敏基因敲除质粒、及温敏基因敲入质粒介导的基因敲除及敲入，以及由FLP/ FRT系统介导的抗性回收；所述由温敏基因敲除质粒、及温敏基因敲入质粒介导的基因敲除及敲入是指：温敏基因敲除及敲入质粒转化至地衣芽孢杆菌中，之后通过变温传代过程实现敲除盒及敲入盒同源替换靶基因，得到基因敲除菌株及基因敲入菌株；所述由FLP/FRT系统介导的抗性回收是指：首先构建FLP重组酶表达质粒；构建的重组酶表达质粒转化至地衣芽孢杆菌的基因敲除菌株及基因敲入菌株中；质粒表达的FLP重组酶特异性识别FRT位点并介导2个FRT位点之间的抗性基因表达盒的删除。
一种炭疽杆菌γ噬菌体裂解酶的表达方法[发明专利]
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专利名称：一种炭疽杆菌γ噬菌体裂解酶的表达方法
专利类型：发明专利
发明人：陈薇,曹晓梅,李曼,付玲,候利华,李建民,张晓鹏,董大勇,宋小红
申请号：CN200710105978.4
申请日：20070605
公开号：CN101319195A
公开日：
20081210
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种表达炭疽杆菌γ噬菌体裂解酶的方法。
本发明采用毕赤酵母表达体系，利用已有知识产权的表达载体pMEX9K(ZL02117906.9)，将炭疽杆菌噬菌体基因与pMEX9K连接，构建成新的表达质粒pMEXplyG，经线性化后电转化宿主菌巴斯德毕赤酵母Pichia pastoris GS115，经过随机挑选和加压筛选，获得生产菌株G6，使γ噬菌体裂解酶在毕赤酵母工程菌Pichia pastoris
G6上清中获得表达，且表达产物不含多余氨基酸。
经离心、超滤、离子交换层析、疏水层析、凝胶层析获得纯度高于95％的γ噬菌体裂解酶。
该酶对炭疽杆菌及萌发时的芽孢有裂解活性，可用于炭疽洗消剂、炭疽治疗药物的开发。
申请人：中国人民解放军军事医学科学院微生物流行病研究所,北京爱柯森伦生物工程科技有限公司
地址：100071 北京市丰台区东大街20号
国籍：CN
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炭疽芽胞杆菌(Bacillus anthracis)检测质粒的构建及其应用
炭疽芽胞杆菌(Bacillus anthracis)检测质粒的构建及其应用吕和平;闵勇;杨东明;郑应华;李旭;武轶【期刊名称】《微生物学杂志》【年(卷),期】2007(27)3【摘要】根据炭疽芽胞杆菌(Bacillus anthracis)毒性质粒pX01和pX02上的2个毒力相关基因cya和capA的序列特点,以pIJ2925为出发载体,采用一步重叠延伸PCR技术(One-step Overlap Extension PCR,简称OOE-PCR)构建了包含cya 基因和capA基因保守区DNA片段的炭疽检测质粒pBIB2006.采用复合PCR对模拟炭疽危险品进行分析,结果表明pBIB2006可以为炭疽芽胞杆菌的检测提供准确、安全和方便的阳性参照品,从而为检测炭疽芽胞杆菌和炭疽芽胞杆菌灭活疫苗提供了便利.【总页数】4页(P38-41)【作者】吕和平;闵勇;杨东明;郑应华;李旭;武轶【作者单位】北京生物医药研究所,北京,100091;华中农业大学,农业微生物国家重点实验室,湖北,武汉,430070;北京生物医药研究所,北京,100091;北京生物医药研究所,北京,100091;北京生物医药研究所,北京,100091;北京生物医药研究所,北京,100091【正文语种】中文【中图分类】Q939.124【相关文献】1.转基因大豆MON89788检测质粒标准分子构建与应用 [J], 李飞武;邵改革;邢珍娟;李葱葱;夏蔚;张明2.环介导等温扩增技术在快速检测炭疽芽胞杆菌中的应用 [J], 段圣亮;陆晔;田桢干;王桂江3.转基因水稻检测用阳性质粒分子的构建及应用 [J], 李晓飞;谭小力;李俊;武玉花;曹应龙4.转植酸酶基因玉米phyA2基因标准质粒分子构建及其检测应用 [J], 张广远;孙红炜;李凡;杨淑珂;路兴波;赵蕾5.实时荧光PCR检测蜡样芽胞杆菌重组质粒标准的构建 [J], 田绿波;左浩江;陈肖潇;周倩;樊学军;吴志云;裴晓方因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
杀灭芽孢杆菌的方法及机理的研究综述
DOR—.14997/j.cv-P19-102/ts.020370杀灭芽抱杆菌的方法及机理的研究综述刘仁杰，梁珊，李哲，朴春红*(吉林农业大学食品科学与工程学院，吉林长春,9015)摘要芽q杆菌在不利条件下产生内生芽q,芽q壁厚且对外界环境有较强抵抗力，常规杀菌方法不易将其杀灭。
芽q在食&中萌发形成营养细胞，严重降低食品安全性，威胁消费者健康。
文章从芽q杆菌在食&中产生的危害出发，对热杀菌、高压杀菌、气体杀菌、化学杀菌以及促萌发杀菌等方法进行分析，比较其杀灭芽q杆菌的效果以及优缺点。
并对其杀菌机理进行探讨，指出膜受体、离子通道、核蛋白以及酶类对芽q杆菌的影响。
以期为芽q杆菌的研究和控制提供理论参考和技术支撑关键词芽q杆菌；杀菌方法；杀菌机理芽抱杆菌是广泛存在于植物中的一种内生菌。
内生菌是指个生长周期中一直存在于植物的根2茎、叶和花朵等部位-］,不会对宿主植物表现岀任何外部病症甚至对植物本身有益的菌株⑵。
芽抱杆菌为好氧或兼性厌氧菌,易产生内生芽抱。
含水量低具有多层，对光照、热和辐射等都具有较强抵抗力［7］。
芽抱杆菌菌体呈杆状，大小为(0.3~2.2)“mx(2.9~7.0)“m,鞭毛典型侧生，形成的内生抱子为抗热型［4］。
芽抱杆菌属的建立是根据征2卩经典法，根据的：(卵型或球型)以及的，芽抱为3大类：群R6大，芽抱椭圆，中生生，革兰性；群IR椭圆：抱，大，芽抱中生生，革兰性、阴性「变；群111,2大；芽抱通，端生到亚端生,革兰氏阳性、阴性或可变［5］。
常见的芽抱杆菌有蜡3、梭和产气芽等。
与蜡气、土壤中，2食品。
对于大豆作物而言，枯是一种植物内生菌，与食品的加工、生产及储，难以避免。
我们闻而色变的如病苏云金(B thuringiensis)，人畜病原菌炭疽芽抱杆菌(B.anthra-cis)2蕈状芽抱杆菌(B.mycoiSn))、韦氏芽抱杆菌(B weinenstephanenss))，也广泛存在于外部环境中［5］。
炭疽芽孢杆菌PCR检测体系的建立及评价
炭疽芽孢杆菌PCR检测体系的建立及评价[摘要]炭疽是一种烈性传染病，17世纪欧洲曾发生过一次炭疽大流行，导致约6万人丧生。
2001年炭疽首次被真正作为生化武器用于恐怖袭击。
建立一种快速敏感特异的检测体系对于炭疽诊断是十分必要的。
本研究中我们建立了快速鉴别炭疽芽孢杆菌的PCR体系，用相关菌种进行了特异性评价，并用模拟粪便标本对该体系开展了临床应用价值的评价。
目的建立高敏感高特异性的PCR反应体系，并将该体系应用于模拟标本的检测，探索其实际应用价值。
方法设计引物和探针，构建质粒标准品进行PCR 反应，建立检测体系，评价其敏感性和特异性，用不同标本的基因组DNA对其进行应用价值的评价。
结果该体系在三种标本上都达到了较高的敏感度；在检测其他蜡样杆菌群细菌时未出现非特异性扩增。
整个反应时间1h内，适宜快速检测。
结论本研究建立的PCR反应体系可作为炭疽的快速检测手段。
关键词炭疽芽孢杆菌；PCR反应；模拟标本炭疽是一种多见于在动物间传播的传染性疾病，其传染源为炭疽芽孢杆菌的芽孢。
1823年炭疽的传染性首次被发现；1849年炭疽芽孢杆菌被发现。
本研究中我们对炭疽芽孢杆菌全基因序列进行了序列分析，获得了主基因组特异性序列片段 (GS)，同时结合国内外以毒力岛基因序列为基础建立炭疽杆菌基因检测体系的经验，选择毒力岛pagA基因序列为靶基因，开发了一种可快速检测炭疽芽孢杆菌的定量PCR检测体系，对其进行了敏感度特异性的评价；并将其应用于模拟标本的检测中。
材料和方法引物和探针设计首先选择2个靶序列，一个是炭疽芽孢杆菌pXO1质粒上毒力岛中的pagA基因[1,2]；另一个是经Blast分析后，在主基因组上发现的一段特异的保守区域，将其称为GS序列。
根据两个靶序列设计了引物及探针序列。
PCR反应体系通过对探针、引物的浓度以及PCR条件等进行系统化优化，建立了炭疽芽孢杆菌基因双重PCR检测体系。
结果1、检测炭疽芽孢杆菌质粒标准品利用制备的1.0×1010~10-1copies/ul 浓度的pagA和GS质粒双重标准品，进行PCR检测。
【CN110055204A】一种敲除spoⅡQ和pcf基因提高地衣芽孢杆菌发酵产酶的方法及应用【专利
(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910389741.6(22)申请日 2019.05.10(71)申请人 齐鲁工业大学地址 250353 山东省济南市长清区大学路3501号(72)发明人 肖静 张虎 李子源 (74)专利代理机构 济南竹森知识产权代理事务所(普通合伙) 37270代理人 朱家富(51)Int.Cl.C12N 1/21(2006.01)C12N 15/90(2006.01)C12N 9/28(2006.01)C12R 1/10(2006.01)(54)发明名称一种敲除spo ⅡQ和pcf基因提高地衣芽孢杆菌发酵产酶的方法及应用(57)摘要本发明涉及一种敲除spo ⅡQ和pcf基因提高地衣芽孢杆菌发酵产酶的方法及应用，本发明通过敲除spo ⅡQ、pcf基因，获得重组菌地衣芽孢杆菌(B.licheniformis)DL -1Δspo ⅡQΔpcf，芽孢形成率降低至0.16％，摇瓶发酵培养重组菌α-淀粉酶酶活提高了10.9％，5L发酵培养时重组菌α-淀粉酶酶活提高了19.3％。
本发明在一定程度上提高了地衣芽孢杆菌目标酶的发酵活力，改善了菌株发酵生产性能，可以为工业微生物的基因工程育种提供思路和方法借鉴。
权利要求书2页 说明书7页序列表1页 附图4页CN 110055204 A 2019.07.26C N 110055204A权 利 要 求 书1/2页CN 110055204 A1.一种高产α-淀粉酶的重组菌，将产α-淀粉酶微生物中的芽孢形成相关基因spoⅡQ和溶菌相关基因pcf敲除后获得，所述的芽孢形成相关基因spoⅡQ核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，溶菌相关基因pcf核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
2.如权利要求1所述的重组菌，其特征在于，所述产α-淀粉酶微生物为地衣芽孢杆菌；进一步优选的，所述地衣芽孢杆菌为地衣芽孢杆菌(B.licheniformis)DL-1。
一种同时驱除炭疽杆菌毒力大质粒pXO1和pXO2的方法[发明专利]
![一种同时驱除炭疽杆菌毒力大质粒pXO1和pXO2的方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/adeae72f89eb172dec63b7ad.png)
专利名称：一种同时驱除炭疽杆菌毒力大质粒pXO1和pXO2的方法
专利类型：发明专利
发明人：王恒樑,刘先凯,王东澍,王华贵,冯尔玲
申请号：CN201110086469.8
申请日：20110407
公开号：CN102732510A
公开日：
20121017
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种同时驱除炭疽杆菌毒力大质粒pXO1和pXO2的方法。
本发明提供了一种DNA分子，其核苷酸序列为序列表中的序列1。
含有所述DNA分子的重组载体、转基因细胞系或重组菌。
所述重组载体为将所述的DNA分子插入穿梭质粒的HindIII和EcoRI识别位点间得到的载体。
本发明的实验证明，本发明根据质粒不相容原理构建一个不相容质粒，获得了一株不含毒力大质粒的菌株A16QT。
该方法具有简单、快速、特异性好、安全性高的特点。
该方法对于构建炭疽杆菌的质粒缺失株，从而研究大质粒pXO1和pXO2与染色体的相互作用具有极其重要的意义，对于构建新的疫苗株提供了新的实验手段，为炭疽杆菌的防治提供了新的思路。
申请人：中国人民解放军军事医学科学院生物工程研究所
地址：100071 北京市丰台区东大街20号军医科院生物工程研究所
国籍：CN
代理机构：北京纪凯知识产权代理有限公司
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炭疽芽胞杆菌基因芯片探针文库的构建
炭疽芽胞杆菌基因芯片探针文库的构建马晓冬;马文丽;肖维威;张宝;郑文岭【期刊名称】《生命科学研究》【年(卷),期】2004(008)002【摘要】为制备炭疽芽胞杆菌的基因芯片探针文库,以炭疽芽胞杆菌毒素质粒pX01和荚膜质粒pX02为原材料,用Sau3AI酶切pX01和pX02质粒DNA,TaqDNA聚合酶72℃补平加A,经AT克隆,PCR初步鉴定筛选出炭疽质粒片段的阳性克隆.DNA自动分析仪对克隆片段进行序列测定;用生物信息学方法对其片段进行同源性分析;并将克隆的探针打印于玻片上,制备成炭疽芽胞杆菌基因芯片,与炭疽杆菌质粒DNA样品进行初步芯片杂交的实验.杂交实验的阳性率达到了90%以上,证明大部分克隆探针属于炭疽芽胞杆菌.炭疽芽胞杆菌基因芯片探针文库的构建为基因芯片探针的制备摸索出一条简便、高效、可行的方法.【总页数】5页(P169-173)【作者】马晓冬;马文丽;肖维威;张宝;郑文岭【作者单位】第一军医大学,分子生物学研究所,中国广东,广州,510515;第一军医大学,分子生物学研究所,中国广东,广州,510515;第一军医大学,分子生物学研究所,中国广东,广州,510515;第一军医大学,分子生物学研究所,中国广东,广州,510515;广州军区总医院,医学实验科,中国广东,广州,510010【正文语种】中文【中图分类】R512.62:Q75【相关文献】1.炭疽芽孢杆菌基因芯片探针的制备 [J], 姜昌丽;刘凌;杜凌琳;李云;滕毅;王超;谭德勇;王惠萱2.炭疽杆菌保护性抗原基因芯片探针的制备 [J], 马晓冬;马文丽;吕梁;肖维威;孙朝晖;郑文岭3.武夷菌素产生菌Fosmid文库的构建及文库探针的获得 [J], 檀贝贝;孙蕾;张克诚;杨振娟;武哲;张俊4.制备炭疽芽胞杆菌检测基因芯片的初步研究 [J], 马晓冬;马文丽;孙朝晖;吕梁;郑文岭5.枯草芽胞杆菌基因文库的构建 [J], 罗进贤;廖武祥;谢朝晖因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
炭疽芽孢杆菌保护性抗原在大肠杆菌中的表达及纯化
炭疽芽孢杆菌保护性抗原在大肠杆菌中的表达及纯化展德文;刘向昕;陶好霞;王令春;张兆山【期刊名称】《生物技术通讯》【年(卷),期】2005(16)5【摘要】按照炭疽芽孢杆菌保护性抗原(PA)基因成熟肽编码序列设计引物,从炭疽杆菌pOX1质粒中扩增出PA基因片段,将该片段定向插入到原核表达载体pET-28a中;获得了pET-PA原核表达重组质粒,限制性酶切分析和DNA序列测定均证实该克隆插入片段为PA基因的成熟肽编码序列.将该重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,重组蛋白在大肠杆菌表达系统中获得了高效表达;Western印迹分析表明表达产物具有良好的免疫学活性.【总页数】2页(P503-504)【作者】展德文;刘向昕;陶好霞;王令春;张兆山【作者单位】军事医学科学院,生物工程研究所,北京,100071;军事医学科学院,生物工程研究所,北京,100071;军事医学科学院,生物工程研究所,北京,100071;军事医学科学院,生物工程研究所,北京,100071;军事医学科学院,生物工程研究所,北京,100071【正文语种】中文【中图分类】Q786【相关文献】1.大肠杆菌不耐热肠毒素(LT)无毒突变体mLT63在大肠杆菌中的融合表达及纯化[J], 白雪飞;郗园林;段广才2.hTNFR1在大肠杆菌中可溶性表达及纯化 [J], 韩平;盖园明;朱蓓薇;张大伟3.Pfu DNA聚合酶在大肠杆菌Rosetta(DE3)中的表达及快速纯化 [J], 何华华;胡晓韵;王婷;喻婵4.苦荞蔗糖合酶SuSy基因在大肠杆菌中的表达及其纯化 [J], 李慧婧;魏玉梅;吴慧昊5.恶性疟基因工程疫苗的研究Ⅲ．恶性疟原虫保护性抗原复合基因在大肠杆菌中的表达及产物分析 [J], 李全贞;李英杰;谢毅;任大明因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
炭疽芽胞杆菌mntA基因缺失突变株的构建及鉴定
炭疽芽胞杆菌mntA基因缺失突变株的构建及鉴定刁立鹏;王艳春;万秀坤;陶好霞;袁盛凌;杨百亮;刘纯杰【期刊名称】《生物技术通讯》【年(卷),期】2014(025)003【摘要】目的:通过同源重组的方法敲除炭疽芽胞杆菌减毒AP422株的mntA基因,使菌株进一步减毒,用于构建新的疫苗候选株.方法:利用PCR方法扩增mntA基因上下游同源臂后与温敏质粒连接,构建打靶载体,并转化炭疽芽胞杆菌减毒AP422株;利用抗生素和温度2种选择压力实现同源重组,敲除目标基因mntA,然后利用Cre-LoxP系统去除抗性筛选标记,得到无抗性标记的缺失突变株,并利用PCR和Western印迹等方法对重组菌进行系统鉴定,最后分析突变株的生物学性状.结果:敲除了AP422株的mntA基因,获得了无抗性标记的缺失突变株,突变株的生存竞争能力比原始菌株明显减弱.结论:突变株获得了进一步减毒,可用于构建新的疫苗候选株.【总页数】4页(P341-344)【作者】刁立鹏;王艳春;万秀坤;陶好霞;袁盛凌;杨百亮;刘纯杰【作者单位】天津农学院动物科学与动物医学学院,天津300384;军事医学科学院生物工程研究所,病原微生物与生物安全国家重点实验室,北京100071;军事医学科学院生物工程研究所,病原微生物与生物安全国家重点实验室,北京100071;军事医学科学院生物工程研究所,病原微生物与生物安全国家重点实验室,北京100071;军事医学科学院生物工程研究所,病原微生物与生物安全国家重点实验室,北京100071;天津农学院动物科学与动物医学学院,天津300384;军事医学科学院生物工程研究所,病原微生物与生物安全国家重点实验室,北京100071【正文语种】中文【中图分类】Q78【相关文献】1.炭疽芽胞杆菌A16D2株BA2380基因缺失突变株的构建 [J], 贾书骅;陈楠;王东澍;王甜甜;冯尔玲;朱力;王恒樑;彭清忠;刘先凯2.结核分枝杆菌H37Rv菌株Hsp16.3基因缺失突变株的构建与鉴定 [J], 田玺择;吴芳;章乐;曹旭东;张万江3.炭疽芽孢杆菌A16R株eag基因缺失突变株构建 [J], 高美琴;刘先凯;冯尔玲;唐恒明;朱力;陈福生;王恒樑4.单增李斯特菌膜裂解相关基因缺失突变株的构建及生物学特性鉴定 [J], 江玲丽;高有领;周向阳;白帆;方春;钱国英;方维焕5.胸膜肺炎放线杆菌血清7型apxIV基因缺失突变株的构建和鉴定 [J], 刘金林;郭毅;谭臣;陈砚;贝为成;陈焕春因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
布鲁氏菌病与炭疽病多重PCR方法的建立
布鲁氏菌病与炭疽病多重PCR方法的建立豆玲;贺奋义;周峰;豆思远;张登基;郭慧琳【摘要】根据GenBank上已发表的布鲁氏杆菌BM21基因序列和炭疽杆菌PX01,设计合成两对特异性引物,分别建立了布鲁氏菌病(Brucellosis)和炭疽病(Anthrax)单项PCR诊断方法.通过对扩增条件的筛选,并以棋盘法锁定了两条引物的最适反应条件,同时扩增出布病255 bp和炭疽329bp特异性片段.通过对多重反应体系的特异性、敏感性实验和重复性试验,最终确定了布病和炭疽病的多重PCR 诊断方法.【期刊名称】《畜牧兽医杂志》【年(卷),期】2017(036)002【总页数】3页(P96-98)【关键词】布鲁氏菌病;炭疽病布病;多重PCR【作者】豆玲;贺奋义;周峰;豆思远;张登基;郭慧琳【作者单位】甘肃省动物疫病预防控制中心,甘肃兰州730046;甘肃省动物疫病预防控制中心,甘肃兰州730046;甘肃省动物疫病预防控制中心,甘肃兰州730046;甘肃省动物疫病预防控制中心,甘肃兰州730046;甘肃省动物疫病预防控制中心,甘肃兰州730046;甘肃省动物疫病预防控制中心,甘肃兰州730046【正文语种】中文【中图分类】S855.1+2布鲁氏菌病(Brucellosis，布病)，也称波状热，可引起传染变态反应的人畜共患传染病。
2000年以后，畜间布鲁氏菌病逐步向全国蔓延，疫情范围涉及28个省份的946个县，主要分布于畜牧业较为发达的北方地区，近年逐渐向农区及南方省份扩散。
动物布病的实验室检测主要采用虎红平板凝集试验( RBPT)和试管凝集试验( SAT) 2种免疫学方法。
传统的免疫学检测方法均存在抗原、血清用量大，操作步骤复杂，容易给人感染等缺点，且SAT检测时间较长，不能实现现场检测。
炭疽是严重威胁人类健康的烈性传染病，其病原体为炭疽芽孢杆菌。
炭疽芽孢杆菌在我国公布的《人间传染的病原微生物名录》中被列为第二类病原微生物(高致病性病原微生物)，是一种对人畜危害严重的人畜共患传染病，对畜牧业的发展构成严重的威胁，对公共卫生安全亦具有重要影响。
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(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910379859.0
(22)申请日 2019.05.08
(71)申请人 中国人民解放军军事科学院军事医
学研究院
地址 100071 北京市丰台区东大街20号八
所二室
(72)发明人 刘先凯 王东澍 王晓景 冯尔玲
朱力 潘超 王恒樑
(74)专利代理机构 北京纪凯知识产权代理有限
公司 11245
代理人 魏少伟
(51)Int.Cl.
C12N 15/113(2010.01)
C12N 15/90(2006.01)
C12N 1/21(2006.01)
C12R 1/07(2006.01) (54)发明名称
切除炭疽芽胞杆菌中pXO1和pXO2质粒的方
法
(57)摘要
本发明公开了切除炭疽芽胞杆菌中pXO1和
pXO2质粒的方法。
本发明提供的切除炭疽芽胞杆
菌中pXO1和pXO2质粒的方法采用CRISPR/Cas9系
统进行，CRISPR/Cas9系统中包含名称分别为
sgRNA1和sgRNA2的两个sgRNA，sgRNA1识别的靶
序列为pXO1质粒含有而炭疽芽胞杆菌不含有的
特异序列；sgRNA2识别的靶序列为pXO2质粒含有
而炭疽芽胞杆菌不含有的特异序列。
本发明成功
得到了不含有pXO1和pXO2质粒的炭疽芽胞杆菌，
构建方法简单，切除效率高，且一次能筛选到三
种不同质粒丢失表型的菌株，为构建新的疫苗株
提供了更快捷、更方便新的手段，为炭疽芽胞杆
菌的防治提供了新的思路。
权利要求书2页 说明书10页序列表7页 附图3页CN 110055255 A 2019.07.26
C N 110055255
A
权 利 要 求 书1/2页CN 110055255 A
1.切除炭疽芽胞杆菌中pXO1和pXO2质粒的方法，其特征在于：所述方法采用CRISPR/ Cas9系统切除出发炭疽芽胞杆菌中pXO1和pXO2质粒，所述CRISPR/Cas9系统中包含名称分别为sgRNA1和sgRNA2的两个sgRNA，所述sgRNA1识别的靶序列为pXO1质粒含有而炭疽芽胞杆菌不含有的特异序列；所述sgRNA2识别的靶序列为pXO2质粒含有而炭疽芽胞杆菌不含有的特异序列。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：将所述sgRNA1识别的靶序列记为靶序列1，所述靶序列1为如下A1)、A2)或A3)：
A1)序列表中序列3的第1-20位所示的DNA片段；
A2)与A1)限定的DNA序列具有75％或75％以上同一性的由A1)衍生的DNA片段；
A3)在严格条件下与A1)限定的DNA序列杂交的由A1)衍生的DNA片段；
和/或，将所述sgRNA2识别的靶序列记为靶序列2，所述靶序列2为如下B1)、B2)或B3)：B1)序列表中序列4的第1-20位所示的DNA片段；
B2)与B1)限定的DNA序列具有75％或75％以上同一性的由B1)衍生的DNA片段；
B3)在严格条件下与B1)限定的DNA序列杂交的由B1)衍生的DNA片段。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述sgRNA1的序列为将序列表中序列3中的T替换为U得到的RNA序列；
和/或，所述sgRNA2的序列为将序列表中序列4中的T替换为U得到的RNA序列。
4.根据权利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于：所述方法包括向所述出发炭疽芽胞杆菌中导入含有所述sgRNA1和所述sgRNA2的编码基因的表达盒，使所述sgRNA1和所述sgRNA2得到表达，得到切除pXO1和pXO2质粒的炭疽芽胞杆菌。
5.根据权利要求1-4中任一所述的方法，其特征在于：所述CRISPR/Cas9系统还包括Cas9蛋白质。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述方法还包括将含有Cas9蛋白质的编码基因的表达盒导入所述出发炭疽芽胞杆菌中，使Cas9蛋白质得到表达。
7.成套sgRNA，由权利要求1-3中任一所述sgRNA1和所述sgRNA2组成。
8.成套生物材料，由名称分别为生物材料1和生物材料2的两种生物材料组成；
所述生物材料1为下述C1)至C4)中的任一种：
C1)编码权利要求1-3中任一所述sgRNA1的核酸分子；
C2)含有C1)所述核酸分子的表达盒；
C3)含有C1)所述核酸分子的重组载体、或含有C2)所述表达盒的重组载体；
C4)含有C1)所述核酸分子的重组微生物、或含有C2)所述表达盒的重组微生物、或含有C3)所述重组载体的重组微生物；
所述生物材料2为下述D1)至D4)中的任一种：
D1)编码权利要求1-3中任一所述sgRNA1的核酸分子；
D2)含有D1)所述核酸分子的表达盒；
D3)含有D1)所述核酸分子的重组载体、或含有D2)所述表达盒的重组载体；
D4)含有D1)所述核酸分子的重组微生物、或含有D2)所述表达盒的重组微生物、或含有D3)所述重组载体的重组微生物。
9.成套产品，为下述X1)或X2)：
2。