病毒感染的微生物学检查方法
简述病毒微生物学诊断的方法和流程
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病毒感染的检查方法与防治原则
效抑制 HIV gp120与 T 细胞 CD4 分子结合；新霉素 B 是一种氨基糖苷类抗生素，可作
3. 蛋白酶抑制剂：沙奎那韦、茚地那韦、利托那韦、替拉瑞韦、波普
瑞韦、西咪匹韦 4. 整合酶抑制剂：拉替拉韦、艾维雷韦
5. 神经氨酸酶抑制剂：奥司他韦、扎那米韦
医学微生物学（第9版）
二、干扰素和干扰素诱生剂
1. 干扰素（IFN）
具有广谱抗病毒作用，毒性小，使用同种IFN无抗原性，主要用于 HBV、HCV 人类疱疹病毒和乳头瘤病毒等感染的治疗。
用病毒复制中的调控因子，阻断 RNA 与蛋白质的结合，从而干扰病毒 RNA 的复制。
医学微生物学（第9版）
五、治疗性疫苗
是一种以治疗疾病为目的的新型疫苗，主要有 DNA 疫苗和抗原抗体复合物
第二节
病毒感染的特异性预防 prevention of viral infection
医学微生物学（第9版）
一、人工主动免疫常用生物制品
1. 灭活疫苗（inactivaed vaccine） 通过理化方法将具有毒力的病毒灭活后制成灭活疫苗，这种疫苗失去了感染
性但仍保留原病毒的抗原性，常用的有肾综合征出血热疫苗、狂犬病疫苗、甲型
炎病毒VP1结构蛋白、HBsAg及狂犬病病毒刺突糖蛋白等。
4. 基因工程疫苗（genetically engineering vaccine） 采用DNA重组技术，提取编码病毒保护性抗原基因，将其插入载体，并导入细
菌、酵母菌或哺乳动物细胞中表达、纯化后制成的疫苗。例如目前已广泛使用的重
病毒的检测方法
病毒的检测方法病毒是一种微生物，它可以侵入宿主细胞并利用宿主细胞的生物合成系统复制自己。
病毒的检测是非常重要的，它可以帮助人们及时发现病毒的存在，采取相应的措施来控制和治疗病毒感染。
目前，病毒的检测方法有很多种，包括免疫学方法、分子生物学方法、细胞学方法等。
下面将详细介绍几种常见的病毒检测方法。
首先，免疫学方法是一种常用的病毒检测方法。
这种方法利用人体免疫系统产生的抗体来检测病毒的存在。
常见的免疫学方法包括ELISA法、免疫荧光法和免疫印迹法。
这些方法可以通过检测血清、唾液、尿液等样本来确定病毒感染的情况。
免疫学方法具有操作简单、结果快速的特点，因此被广泛应用于临床诊断和流行病学调查中。
其次，分子生物学方法也是一种常用的病毒检测方法。
这种方法利用PCR、实时荧光定量PCR、核酸杂交等技术来检测病毒的核酸。
分子生物学方法具有高灵敏度和高特异性的特点，可以检测到病毒的极低浓度，因此被广泛应用于病毒性疾病的诊断和研究中。
另外，细胞学方法也是一种常用的病毒检测方法。
这种方法利用细胞培养和显微镜技术来检测病毒的存在。
通过观察细胞的形态和结构变化，可以判断细胞是否受到病毒感染。
细胞学方法具有直接观察病毒感染的优势，可以帮助人们更直观地了解病毒的生物学特性。
总的来说，病毒的检测方法有很多种，每种方法都有其特点和适用范围。
在实际应用中，可以根据具体情况选择合适的检测方法来进行病毒检测。
同时，随着科学技术的不断发展，病毒的检测方法也在不断更新和完善，相信在不久的将来，会有更多更准确、更快速的病毒检测方法出现，为人们的健康保驾护航。
第十五章 病毒感染的检查方法与防治原则
第十五章 病毒感染的检查 方法与防治原则
吉林医药学院 鞠晓红
重点难点
重点 • 病毒培养标本采集与处理原则 • 病毒分离培养方法 • 病毒在培养细胞中的增殖指标 • 病毒感染特异性预防方法 难点 • 病毒鉴定技术 • 病毒感染的诊断方法
第一节 病毒感染的检查方法来自录一、标本的采集与处理 二、病毒的分离培养与鉴定 三、病毒感染的诊断
二、病毒感染的治疗
1.抗病毒化学制剂 • 核苷类药物：碘苷、阿昔洛韦、阿糖腺苷等 • 非核苷类反转录酶抑制剂 • 蛋白酶抑制剂 • 其他：金刚烷胺、磷甲酸钠等 2.干扰素及诱生剂 3.其他 • 中草药、新抗生素、治疗性疫苗、治疗性抗体等
一、标本的采集与处理
原则基本与细菌相似，但应注意： 1.污染标本用“双抗”或两性霉素B处理 2.低温保存，尽快送检 3.血清学诊断采集双份血清（早期和恢复期）
二、病毒的分离培养与鉴定
（一）病毒的分离培养
1.动物接种 2.鸡胚培养 3.细胞培养
1.动物接种 • 目前较少应用 • 常用动物：小鼠、大鼠、豚鼠、家兔、鸡等 • 接种途径：皮内、皮下、肌肉、腹腔、静脉等 • 应用：无敏感细胞培养的病毒
（2）病毒在培养细胞中生长的表现 • 细胞代谢改变：pH值改变 • 细胞病变效应（CPE）：细胞聚集、融合、坏死、脱 落溶解或形成包涵体等 • 红细胞吸附：与加入的脊椎动物红细胞结合 • 干扰作用：抑制其后加入病毒的增殖，阻抑后者特有 的CPE
（二）病毒的鉴定
• 形态学鉴定：电子显微镜 • 血清学鉴定：用已知抗体鉴定病毒种、型和亚型。常
2.鸡胚培养 一般选用9～14d孵化鸡胚 • 卵黄囊接种：乙脑病毒 • 羊膜腔接种：流感病毒初次分离 • 尿囊腔接种：流感病毒传代培养 • 绒毛尿囊膜接种：疱疹病毒 • 脑内接种：狂犬病病毒
病毒感染的微生物学检查方法
临床微生物学检验
临床微生物学检验引言临床微生物学检验是一种通过检测和分析患者体内微生物的存在和活动水平来帮助诊断和治疗感染性疾病的方法。
微生物学检验可以确定感染的原因和类型，并确定适当的抗生素治疗方案。
本文将介绍临床微生物学检验的概念、常见的检验方法和其在临床实践中的应用。
临床微生物学检验的概念临床微生物学检验是通过收集患者样本（如血液、尿液、血液培养物等）并对其中的微生物进行培养、分离和鉴定来确定感染病原体的方法。
它涉及一系列实验室操作和技术，包括细菌培养、抗生素敏感性测试、鉴定和分子生物学方法等。
这些方法可以帮助确认感染病原体的存在、确定其感染类型（细菌、真菌、病毒等）以及选择适宜的治疗药物。
临床微生物学检验的常见方法细菌培养细菌培养是一种常见的微生物学检验方法，它涉及将患者样本置于培养基中以促进微生物的生长。
不同类型的培养基可以支持不同类型的微生物生长，如常见的血液琼脂培养基可用于细菌培养。
细菌培养的时间可以从几小时到几天不等，具体取决于患者样本中微生物的增殖速度和种类。
抗生素敏感性测试抗生素敏感性测试是一种用于确定感染病原体对不同抗生素的敏感性和抵抗性的方法。
常见的抗生素敏感性测试方法包括纸片扩散法和微量稀释法。
这些测试可以帮助医生选择最适合的抗生素治疗方案，以避免抗生素的滥用和抵抗性的产生。
分子生物学方法分子生物学方法在临床微生物学检验中也扮演着重要的角色。
这些方法可以通过检测微生物的核酸（如DNA或RNA）来快速鉴定微生物的存在和类型。
其中常用的方法包括PCR （聚合酶链反应）和实时荧光定量PCR。
分子生物学方法具有高度的特异性和敏感性，可以快速准确地检测微生物。
临床微生物学检验的应用临床微生物学检验在临床实践中具有广泛的应用。
它可以帮助确定感染的病原体，指导治疗方案的制定和调整，并监测治疗的疗效。
以下是临床微生物学检验在不同感染疾病中的应用示例：细菌感染在细菌感染的诊断和治疗中，临床微生物学检验可以帮助确定感染的菌种、菌株的数量和敏感性，从而选择适当的抗生素治疗方案。
病原微生物检测方法 汇总
病原微生物检测方法汇总病原微生物检测方法是现代医学领域中的重要技术，它可以帮助医生准确诊断和治疗各种与微生物感染相关的疾病。
本文将介绍一些常见的病原微生物检测方法，以帮助读者更好地了解和理解这一领域的技术进展。
一、细菌检测方法1. 细菌培养：这是一种传统的细菌检测方法，通过将样本在富含营养物的培养基上培养，可以使细菌生长繁殖并形成可见的菌落。
然后，通过菌落的形状、颜色和生长速度等特征来鉴定细菌种类。
2. PCR技术：PCR技术是一种通过扩增DNA片段来检测细菌的方法。
它利用特定引物将目标DNA扩增成大量的复制品，然后通过凝胶电泳等方法进行检测和鉴定。
二、病毒检测方法1. 细胞培养：病毒检测的一种方法是通过细胞培养来检测病毒的存在。
将样本接种到特定的细胞培养物中，如果存在病毒，它将感染并破坏细胞，形成明显的细胞病变。
2. 免疫学检测：利用抗体与病毒抗原的特异性结合来检测病毒。
例如，ELISA和免疫荧光等技术可以检测病毒抗原或抗体的存在。
三、真菌检测方法1. 镜检法：通过显微镜观察样本中的真菌形态特征，如菌丝、孢子等来进行鉴定。
这是一种简单而常用的真菌检测方法。
2. PCR技术：PCR技术也可以应用于真菌检测。
通过扩增真菌特定基因序列的方法，可以检测和鉴定真菌的存在。
四、寄生虫检测方法1. 寄生虫镜检：通过显微镜观察样本中的寄生虫形态特征来进行鉴定。
不同的寄生虫具有不同的形态特征，可以通过镜检来确定寄生虫的种类。
2. 分子生物学方法：例如PCR技术和基因测序等方法可以用于寄生虫的检测和鉴定。
通过扩增寄生虫特定基因序列或进行基因测序，可以准确地确定寄生虫的种类。
病原微生物检测方法包括细菌、病毒、真菌和寄生虫等不同类型的检测方法。
这些方法在临床医学中起着重要的作用，可以帮助医生准确诊断和治疗与微生物感染相关的疾病。
通过不断的技术创新和方法改进，相信病原微生物检测方法将在未来发展中发挥更大的作用。
细菌与病毒的病原学检查法
凝集试验、对流免疫电泳、酶免疫技术、免疫荧光技 术
核酸检测：
1.核酸杂交技术:Southern印迹杂交、Northern印迹 杂交、原位杂交
2.PCR技术 3.基因芯片 4.16rRNA基因序列分析：编码rRNA，保守区、可变 区
三、抗体的检测（血清学诊断）
凝集试验：直接、间接、协同、冷凝集 沉淀试验：环状、絮状、双向、对流电泳 补体结合试验： 酶联免疫吸附试验（ELISA）：
取双份血清，抗体效价比早期高4倍以上有意
义。
第二节 病毒感染的微生物学检查法
一、形态学检查
1.电子显微镜检查
直接镜检法：107颗粒/ml，电镜观察病毒
颗粒的形态和结构
免疫电镜法（IEM）：
标本+特异性抗体 病毒颗粒聚集 电镜 观察
轮状病毒的粪便、HAV、HBV的血清、疱疹 病毒的疱疹液，可早期诊断。
三、病毒在培养细胞中增殖的鉴定指标
细胞的变化：CPE 红细胞吸附（HAd）： 红细胞凝集： 病毒干扰作用：风疹病毒，埃可病毒,Vero细
胞。
中和试验（NT）：是病毒在活体内或细胞培
养中被特异性抗体中和而失去感染性的一种试验
空斑形成试验：蚀斑形成单位（PFU），感染
性病毒的滴度用PFU/ml表示。
四、病毒成分的检测
血凝抑制试验
病毒+红细胞 血凝现象
病毒+抗体+红细胞 血凝现象消失
用于流感病毒、副流感病毒的诊断、流行 病学调查及鉴定病毒的型和亚型。
ELISA法：HSV、CMV、EB病毒等
蛋白印迹技术：用已知病毒蛋白检测未
知病毒
病毒抗原的检测：HIV和HBV抗原
病毒核酸的检测
病毒的检测方法
病毒的检测方法
病毒是一种微生物，它可以侵入人体，引起各种疾病。
为了及时发现和治疗病毒感染，科学家们研究出了多种病毒检测方法。
下面我们来详细了解一下这些方法。
首先，最常见的病毒检测方法之一是血清学检测。
这种方法通过检测血液中的抗体和抗原来判断是否感染了某种病毒。
例如，ELISA（酶联免疫吸附法）就是一种常用的血清学检测方法，它可以快速、准确地检测出病毒感染的情况。
其次，分子生物学检测方法也是一种常用的病毒检测手段。
这种方法通过检测病毒的核酸来确定感染情况。
例如，PCR（聚合酶链反应）技术可以在体外放大病毒核酸的数量，从而快速准确地检测出病毒感染。
除此之外，还有一种新兴的病毒检测方法——免疫荧光检测。
这种方法利用荧光标记的抗体来检测病毒颗粒或感染细胞，具有高灵敏度和高特异性的优点，可以在短时间内准确判断出病毒感染的情况。
此外，还有一些其他的病毒检测方法，如快速抗原检测、核酸杂交检测等。
这些方法各有特点，可以根据具体情况选择合适的方法进行检测。
总的来说，病毒的检测方法多种多样，每种方法都有其独特的优势和适用范围。
在实际应用中，我们可以根据具体情况选择合适的检测方法，及时发现和治疗病毒感染，保障人们的健康。
希望以上内容对您有所帮助。
病毒感染的实验诊断
病毒感染的实验诊断● 考点病毒的生物学性状病毒的实验室检查方法常见病毒的感染【内容讲解】第一节概述一类非细胞型微生物，个体极小，可通过细菌滤器，需用电子显微镜观察。
仅含一种核酸作为遗传物质，外被蛋白质衣壳或还有包膜。
病毒只能在活细胞内寄生，以复制的方式进行增殖。
在临床微生物感染中，近75%的传染病是由病毒引起的。
一、病毒的基本性状（一）形态结构1.大小和形状：大小：测量单位用纳米表示，一般在20-300nm之间。
形态大致可分为：球形或近似球形、杆状、弹形、砖形、蝌蚪形等。
2.结构（二）病毒的增殖病毒必须依赖宿主细胞，以特殊的自我复制方式进行增殖。
病毒的复制周期：吸附、穿入、脱壳、生物合成、组装与成熟、释放6个阶段。
异常增殖：顿挫感染：病毒进入细胞后的环境不利于它的复制，不能合成本身的成分或不能组装和释放有感染性的病毒颗粒。
缺陷病毒：由于病毒基因组不完整或基因位点改变而不能进行正常增殖的病毒。
干扰现象：当两种不同的病毒或两株性质不同的同种病毒，同时或先后感染同一细胞或机体时，可发生一种病毒抑制另一种病毒增殖的现象。
（三）噬菌体以细菌、真菌等为宿主，能引起细菌等裂解的病毒。
噬菌体特异性识别细菌表面受体，可用于进行细菌的鉴定与分型。
噬菌体感染细菌后产生两种后果：溶菌周期和溶源性周期。
（四）非寻常病毒比病毒更小更简单的致病因子，又称为亚病毒因子，包括类病毒、卫星病毒和朊粒等。
朊粒个体微小，不含核酸，其主要成分是一种蛋白酶抗性蛋白，对各种理化作用的抵抗力强，具有传染性，是引起传染性海绵状脑病的病原体。
朊粒致中枢神经系统退化性病变，引起牛海绵状脑病（疯牛病）。
克雅病（CJD）和Kuru病被认为与朊粒感染有关。
二、病毒的分类与命名科、属、种3级或科、亚科、属、种4级。
DNA病毒、RNA病毒、DNA和RNA逆转录病毒三大类。
按传播途径可分为呼吸道病毒、胃肠炎病毒、经性传播感染的病毒等。
按感染部位与症状特征可分为肝炎病毒、出血性热病毒、疱疹病毒等。
检验科常见病原微生物检测方法
检验科常见病原微生物检测方法在检验科工作中，常见的病原微生物检测方法是非常重要的。
通过准确、快速地检测出病原微生物，可以帮助医生进行更精准的诊断，从而有效地指导治疗措施。
本文将从细菌、病毒和真菌三个方面介绍检验科常见病原微生物的检测方法。
一、细菌检测方法1. 细菌培养法细菌培养法是最常用的细菌检测方法之一。
通过在富含营养物质的培养基上培养样本，观察细菌的生长情况，可以初步确定感染的细菌种类。
细菌培养法可以对细菌进行鉴定和药敏试验，为抗生素的选择提供参考依据。
2. 快速细菌检测方法为了缩短检测时间，提高诊断效率，现代医学发展了多种快速细菌检测方法，如PCR法、质谱法等。
这些方法可以在较短的时间内准确地鉴定出致病细菌，为临床治疗提供更及时的支持。
二、病毒检测方法1. 病毒抗体检测病毒感染后，机体会产生相应的抗体。
通过检测患者血清或其他体液中的病毒抗体水平，可以确定是否感染了某种病毒。
常用的方法包括ELISA法、免疫荧光法等。
2. 核酸检测病毒的核酸检测是一种非常敏感和特异性的检测方法，可以在感染初期就能够检测到病毒的存在。
PCR法是应用最广泛的核酸检测方法，可以快速准确地鉴定出病毒种类。
三、真菌检测方法1. 真菌培养法真菌培养法是检测真菌感染的常规方法之一。
通过在含有真菌营养物质的培养基上培养样本，观察真菌的生长情况，可以确定感染的真菌种类，并进行药敏试验。
2. 真菌抗体检测真菌感染后，机体会产生相应的抗体。
通过检测患者血清中的真菌抗体水平，可以确定感染的真菌种类。
免疫荧光法、免疫印迹法等是常用的检测方法。
综上所述，检验科常见病原微生物的检测方法包括细菌、病毒和真菌三个方面，每一种方法都有其独特的优势和适用范围。
在实际工作中，应根据具体情况选择合适的检测方法，以确保诊断的准确性和迅速性。
希望本文能对您有所帮助。
病毒感染的诊断方法
病毒感染的诊断方法随着科技的不断发展，病毒感染的诊断方法也得到了很大的提升。
传统的病毒检测方法主要包括细胞培养、病原体血清学检测和凝胶扩增反应（PCR）等。
但是这些方法不仅耗时、费力、成本高昂，而且其诊断结果通常需要等待数天或数周才能得到，这严重影响了治疗效果的实施。
近年来，基于分子诊断技术的病毒检测技术逐渐成为了病毒感染的重要诊断工具，其具有快速、准确、灵敏、特异性高等优点，常用的包括PCR、实时PCR、荧光定量PCR、LAMP等。
PCR技术是目前最常用的病毒检测方法之一，可以通过扩增DNA序列来检测病原体的存在。
其基本的扩增过程是依靠聚合酶链反应（PCR）引入寡核苷酸引物，把双链病毒基因组DNA针对性扩增为单链，然后由核酸杂交探针或测序鉴定实现病毒检测和鉴定。
PCR技术优点众多，扩增速度快、检测结果可靠、检测灵敏度高等；但同时也有一些不足之处，比如对于样品的污染容易造成假阳性结果、扩增过程中需要提取病毒RNA或DNA等等。
因此，PCR技术在实际应用中常常需要与其他分子诊断技术联合使用。
实时定量PCR技术是PCR技术的一种改进，通过同步扩增和检测，使得扩增反应和检测过程可以同时完成，从而显著节省检测时间和检测成本。
使用这种技术，可以在一小时之内查出细菌和其他微生物的存在与否，极大地提高了临床诊断效率和准确率。
近年来，LAMP技术也逐渐成为了一种有前途的病毒检测技术。
这种基于等温扩增的技术能够快速、高效地检测出微生物DNA片段，并具有极其高的检测敏感性和特异性，因此可以检出极低浓度的病毒。
与PCR技术不同的是，LAMP技术直接利用寡核苷酸引物在等温环境下扩增DNA，其运行温度相对比较低，热稳定性也更强一些。
此外，LAMP技术的反应体系比传统PCR技术更简单，可以拓宽检测范围，帮助诊断人员更好地监控和控制疫情。
总之，病毒感染的诊断方法的不断发展与完善给了我们更大的希望和更准确的诊断结果。
不过，由于病毒的变异和传播速度很快，因此更加复杂的病毒检测技术和方法需要得到更加深入地研究和应用。
微生物学知识点常见微生物感染的诊断与治疗
微生物学知识点常见微生物感染的诊断与治疗微生物学知识点常见微生物感染的诊断与治疗微生物感染是指人体被各种微生物引起的感染性疾病，包括细菌、病毒、真菌和寄生虫等。
这些微生物感染可以引起各种不同的疾病，严重时可能导致生命危险。
为了有效地诊断和治疗这些感染，了解微生物学知识点是非常重要的。
本文将介绍常见微生物感染的诊断与治疗方法。
一、细菌感染的诊断与治疗细菌感染是最常见的微生物感染类型之一，细菌可以引起肺炎、腹泻、尿路感染等疾病。
首先，诊断细菌感染需要进行病原学检查，包括细菌培养和药敏试验。
细菌培养可以在实验室中培养出细菌，并鉴定其种类，药敏试验则可以测试细菌对不同抗生素的敏感性。
基于这些检查结果，医生可以选择合适的抗生素进行治疗。
常用的抗生素包括青霉素、阿莫西林、头孢菌素等。
二、病毒感染的诊断与治疗病毒感染是另一种常见的微生物感染类型，病毒可以引起感冒、流感、肝炎等疾病。
与细菌感染不同，病毒感染的诊断比较困难，通常需要采用分子生物学检测方法，如聚合酶链式反应（PCR）检测病毒基因片段。
治疗病毒感染主要是针对症状进行对症治疗，如退烧、止咳等。
对一些病毒感染，如流感，也可以使用抗病毒药物，如奥司他韦。
三、真菌感染的诊断与治疗真菌感染可以引起皮肤感染、口腔念珠菌病等疾病。
诊断真菌感染主要是根据病变部位取样进行真菌涂片检查和真菌培养，可以确定感染菌株以及菌株的敏感性。
治疗真菌感染常使用抗真菌药物，如克霉唑、氟康唑等，可以口服或者局部使用。
对于一些顽固性真菌感染，也可以考虑使用静脉抗真菌药物。
四、寄生虫感染的诊断与治疗寄生虫感染包括疟疾、血吸虫病等，常见于热带地区。
寄生虫感染的诊断一般是通过血液检查，如血涂片或者血清学检测来确定感染。
治疗寄生虫感染常使用抗寄生虫药物，如氯喹、莫西沙星等。
治疗的同时，还需要注意症状的缓解和并发症的预防。
五、医院感染的诊断与防治医院感染是指在医疗机构中获得的感染，常与手术、留置导尿管等治疗操作相关。
微生物感染的病原学检查 PPT精品课件
1.ELISA(间接法)
Ag+Ab?+抗球蛋白*+酶底物→显色
2. 蛋白印迹法（Western Blot）
病毒Ag→电泳(SDS-PAGE)→转移至硝酸纤 维素膜→加Ab?→加抗Ab*→加底物→显色
3.血凝抑制试验
原理:
[病毒(HA)+Ab?]+RBC→血凝抑制
第二节 病毒感染的微生物学检查法
☛ 病毒及其抗原检测 显微镜观察 分离培养与鉴定 Ab→Ag?
☛ 核酸检测 ☛ 特异性Ab检测
一、显微镜检查
1.电镜 /免疫电镜 2.光镜：
包涵体/ 多核巨细胞等
二、病毒的分离培养与鉴定
(一)动物接种
☛ 选敏感动物 ☛ 适宜途径
乙脑病毒→小白鼠脑内 牛痘苗病毒→家兔角膜
☛ 观察发病情况 ☛ 标本检测
(二)鸡胚培养
☛ 选择胚龄/接种途径 ☛ 标本检测
绒毛尿囊膜10~13d
羊膜腔10~12d 卵黄囊5~8d 尿囊腔 9~11d
（三）组织培养(器官/组织/细胞)
1.细胞培养类型
(1) 原代细胞培养
动物/鸡胚/人胚组织 ↓剪碎/胰酶
单个细胞 ↓培养液
单层细胞(原代细胞) ↓胰酶
☛干扰现象:病毒1(风疹病毒 ) ？
↓先感染 细胞（猴肾细胞） → CPE(-) ↑后感染 病毒2 (ECHO病毒)
☛意义：可检查不引起CPE/血凝/血吸的病毒
（5）空斑形成试验（test of plaque formation）
稀释病毒→单层细胞 →覆盖一层营养琼脂 ↓37℃，3~5d 空斑
测定病毒数量：
微生物感染的病原学检查
感染病原微生物的分离和鉴定技术
感染病原微生物的分离和鉴定技术病原微生物是引起疾病的原因之一。
因此，当怀疑病人患有感染性疾病时，需要进行微生物分离和鉴定。
这项技术可以用于确定病原微生物的身份、了解病原微生物的潜在危险以及确定最佳治疗方案。
本文将介绍常见的微生物分离和鉴定技术。
1.细菌分离和鉴定细菌是最常见的病原体之一，因此需要进行细菌分离和鉴定。
一种常用的细菌分离技术是“血平板法”，该技术涉及到将病原体培养在含有富含营养物质的平板上。
之后，将血清添加到平板上，检测是否会有细菌菌落的形成。
如果有形成，则表明这个平板上有可能存在细菌。
鉴定细菌可以通过筛选一系列不同的培养基来实现，例如酸敏素、米斯敦抑制剂、麦康凯脱氧胆汁盐紫、以及气孔试验等。
这些试验基于细菌菌株的不同特征，根据这些特征，可以确定细菌的身份并提供最佳治疗方法。
2.真菌分离和鉴定真菌在感染中也扮演着关键角色，因此需要进行真菌的分离和鉴定。
真菌分离可以通过使用含有营养物质的试管培养基，以及空气稀释，将真菌放置在伏井玻璃中进行。
真菌会在此处生长，并形成真菌菌落。
然后，将这些菌落移动至可供鉴定的培养基上。
鉴定真菌通常涉及使用孢子分析、显微镜观察、以及通过生物技术方法应用基因测序等。
这些方法可以帮助确定真菌的身份，并提供治疗建议。
3.病毒分离和鉴定病毒分离是通过将病毒放入终端宿主细胞中，利用宿主细胞来复制病毒。
在病毒复制完成后，通过对复制物进行抽取和鉴定，可以确定病毒的身份。
病毒的鉴定可以通过许多方法来完成，包括免疫学方法、PCR、以及使用重组DNA技术等。
这些方法通常涉及到分析病毒抗原的特征，使用核酸杂交等技术来分析病毒的序列信息，以及将对病毒有抵抗力的DNA结合到相同的DNA中以产生抗体。
4.寄生虫的分离和鉴定寄生虫的分离通常涉及将其放置在带有试管中的培养基中，以便在培养基中生长和复制。
这提供了一种寄生虫的纯化方法，然后可以将其在不同的培养基上进行鉴定。
鉴定寄生虫方法包括孢子分析，通过显微镜观察寄生虫组织，以及使用PCR等技术。
病毒学病毒感染的检查方法和防治原则讲义
• 医学微生物学 （第9版）
三、病毒感染的诊断
（一）形态学检查
1. 电镜和免疫电镜检查：病毒形态和大小
（李凡主编的第 8 版医学微生物学 图 27-1，258 页）
• 医学微生物学 （第9版）
三、病毒感染的诊断
（一）形态学检查
2. 光学显微镜检查：病毒形成的包涵体、合胞体等
（李凡主编的第 8 版医学微生物学 图 33-2，314 页）
（二）病毒的鉴定
二、病毒的分离与鉴定
1. 病毒感染的常用鉴定方法
（2）病毒血清学鉴定：用已知特异性抗体对病毒进行种、型和亚型的鉴定
• 医学微生物学 （第9版）
（二）病毒的鉴定
二、病毒的分离与鉴定
1. 病毒感染的常用鉴定方法
（3）病毒分子生物学鉴定：对病毒的蛋白抗原和核酸进行检测，方法包括 蛋白印迹技术、核酸扩增、核酸杂交、基因芯片和基因测序等
• 医学微生物学 （第9版）
• 医学微生物学 （第9版）
三、病毒感染的诊断
（二）病毒成分检测
1. 病毒蛋白抗原检测 用已知特异性抗体对病毒抗原进行早期诊断，常用方法酶免疫测定
（enzyme immunoassay，EIA）、免疫荧光测定（immunofluorescence assay，IFA）、蛋白印迹（Western blot）
• 医学微生物学 （第9版）
二、病毒的分离与鉴定
（一）病毒的分离培养
1. 动物接种
（1）应用：无敏感细胞培养的病毒 （2）优点：结果易观察，可建立动物模型 （3）缺点：要有饲养条件，费用高，可能有潜伏病毒，对许多人类病毒不敏感
• 医学微生物学 （第9版）
二、病毒的分离与鉴定
（一）病毒的分离培养
医学微生物学(第9版)第二篇 病毒学 第二十四章 病毒感染的检查方法与防治原则
第一节
病毒感染的检查方法 diagnosis of viral infection
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医学微生物学（第9版）
一、标本的采集与送检
1. 采急性期标本 2. 抗生素处理易污染标本 3. 低温保存，尽快送检 4. 血清学诊断采双份血清（发病初期、病后 2~3 周）
医学微生物学（第9版）
二、病毒的分离与鉴定
（二）病毒的鉴定
3. 病毒的感染性及数量测定 （3）空斑形成试验 （plaque forming test）：
原理：将适量病毒接种单层细胞，病毒增殖使感染的细胞脱落，形成肉眼可见的空斑， 一个空斑即一个空斑形成单位（plaque forming unit，PFU）：每个空斑是由一个感染 性病毒颗粒形成的。可测定活病毒数量（感染性病毒量的滴度可用 PFU/ml 表示）
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医学微生物学（第9版）
三、病毒感染的诊断
（一）形态学检查
1. 电镜和免疫电镜检查：病毒形态和大小
（李凡主编的第 8 版医学微生物学 图 27-1，258 页）
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医学微生物学（第9版）
二、病毒的分离与鉴定
（一）病毒的分离培养
2. 鸡胚培养 （1）孵化 9~14 天的鸡胚 （2）优点：对多种病毒敏感，条件易控制，操作简单，成本较低 （3）缺点：无病毒增殖指标；有些病毒可致鸡胚死亡
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标本采集与送检 病毒的分离鉴定 电镜技术 血清学试验 分子生物学技术
一、标本采集与送检
（一）供分离病毒、检出核酸及抗原的标本
原则： 1.尽早采取：发病初期 2.部位适宜：由感染部位采取 3.冷藏速送：装有冰块或干冰的容器内
（二）检测特异性抗体 的标本
采集双份血清，4-20℃保存
病毒材料采集与检验结果的关系
采取标本的时期 检查病毒及其成分 测定抗体
潜伏期及前驱期 刚发病或急性期
较难查见 最多查见
未增多
未增多或增 多不明显
恢复期及康复期
很难查见
明显增多 （常超过4倍）
二、常规分离与鉴定
病毒分离是诊断病毒感染的金标准，一旦阳性，即 可确诊。
不适用于快速诊断，操作复杂，实验成本高，阳性 检出率低等
（1）间接ELISA
（2）夹心ELISA
五、分子生物学技术
1. 聚合酶链反应 （PCR）
3′ 5′
3′ 5′
3′ 5′
5′
3′ 3′
3′ 5′ 3′ 5′
5′
模板DNA双链
3′
5′
变性
3′
5′
5′
退火
3′
5′
3′
形成新的双链 5′ DNA
3′
2. 核酸杂交技术
核酸探针（probe）是指能与特定核酸序列 发生特异性互补的已知核酸片段，可检测 待检样品中特定的基因顺序。
1. 形态学鉴定
观察CPE。常见的细胞形态学变化为细胞变圆、坏死、 溶解、脱落或形成合胞体。有些病毒能形成包涵体。
正常细胞
病变细胞
2. 血吸附和血凝作用 多见于以出芽方式释放的病毒。
感染细胞具有吸附红细胞的能力 感染细胞的培养液中有许多游离病毒存在，具有凝集红细胞
的作用
（1）血吸附作用
吸附试验可通过特异抗血清抑制来达到鉴定 具有吸附特性的病毒
有时不得不分离病毒，例如发现了一种新的病毒病， 必须分离病毒进行研究，或者分离株的鉴定对流行 病学有很大作用（如流感病毒），或者需要培育疫 苗，或者希望获得天然弱毒株等。
（一）病毒分离
标本采集
杀灭杂菌
（青链霉素）
接种
三大方法
易感动物 出现病状 鸡胚 病变或死亡 细胞培养 细胞病变
鉴定病毒种型
（二）病毒鉴定
口蹄疫病毒的电镜负染
负染法的优缺点毒结构 缺点：敏感性低，要求病毒量在107以上；所有样品应处
于悬浮状态
3.免疫电镜技术(Immune electron microscopy，IEM)
免疫电镜技术是将抗原抗体反应的特异性与电 子显微镜的高分辨力相结合，在亚细胞和超微 结构水平上对抗原物质进行定位分析的一种高 度精确、灵敏的方法。
（1）免疫凝集电镜技术
抗原与抗体凝集反应后，可使标本中病毒颗粒聚 集成团，再经负染直接在电镜下观察，提高了敏 感性，确定病毒的血清学性质。
（2）免疫电镜定位技术
特异性抗体用电子致密物质，如铁蛋白、过氧化物酶等标 记后，使之与组织超薄切片中的抗原结合，在电镜下观察 到标记物所在位置，即为抗原抗体反应的部位。
透射电子显微镜
1. 正染法：超薄切片法
取材
戊二醛 固定
四氧化锇
清洗与 脱水
切片
染色
铀染 铅染
浸透 包埋 聚合
鸡痘病毒（超薄切片）
超薄切片法的优缺点：
优点：可观察病毒形态和形态发生过程 缺点：操作复杂，费时，但标本可长时间保存
2.负染技术
负染是指通过重金属盐在样品四周的堆积而 加强样品外周的电子密度，使样品显示负的 反差，衬托出样品的形态和大小。
virus
2.补体结合反应
Ag
补体
Ab
红细胞
溶血素
溶血 （-）
Ag
补体
红细胞
不溶血 （+）
Ab
溶血素
3.免疫扩散
4.酶联免疫吸附试验 （ELISA）
将已知的抗体或抗原结合在某种固相裁体上，并 保持其免疫活性。测定时，将待检标本和酶标抗 原或抗体按不同步骤与固相载体表面吸附的抗体 或抗原发生反应。然后加入酶的作用底物催化显 色，进行定性或定量测定。
正常细胞
红细胞吸附
（2）血凝作用
血凝试验
血凝抑制试验
（3）病毒成分的直接检测
用免疫学或分子生物学技术直接检查感染 细胞或其上清液中病毒抗原（或核酸）。
三、 电子显微镜检查
病毒的很多特征如大小、形态、结构等必须借 助电子显微镜进行检查。对于目前尚难培养而形态 又非常典型的病毒，可直接从感染组织或分泌液， 或者接种病料的鸡胚和细胞培养收获的材料作电子 显微镜检查，直接观察病毒粒子。
酶标记染色
四、 血清学试验
是一种常用的诊断病毒病的方法。可采用 ELISA、琼脂扩散、中和试验、标记抗体技术 等免疫血清学方法检查病畜的抗体消长情况和 发病组织中的病毒抗原。
1.中和反应
观察特异性抗体能否保护易感的试验动物死亡，能否 抑制病毒的细胞病变效应。凡能与病毒结合，使其失 去感染力的抗体又称中和抗体。
六、 感染组织的组织学检查
病毒在光学显微镜下无法看到，但是在某些 病毒感染细胞内出现包涵体，或者细胞形态发生 变化，则对诊断有重要意义。如Negri氏包涵体 是狂犬病犬脑细胞的特征。病理组织或渗出液作 成涂片检查包涵体时，常用苏木紫-伊红染色法。
狂犬病毒包涵体（Negri body）