临床酶学检验技术PPT课件
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亚基以非共价键连接的酶 ● 多酶体系(multienzyme system)---由几种不同功能
的酶彼此聚合而成的多酶复合物 ● 酶的必需基团(essential group)---与酶的活性密
切相关的基团 ● 酶的活性中心(active center)---组成具有能与底
物结合并起催化反应的特定空间结构区域
2．米氏常数
9
(四)酶偶联反应
Ex
Ea
Ei
ABCD
Ei——指示酶
Ea——辅助酶
工具酶
酶学分析中作为试剂用于测定 化合物浓度或酶活性浓度的酶
10
11
第二节 血清酶变化的生理病理机制
一、血清酶的来源与去路 （一）血清酶的来源 1．血浆固有酶 2．非血浆固有酶 ①外分泌酶 ②细胞酶 （二）血清酶的去路 1．肾小球滤过从尿液中排出 2．网状内皮系统清除 3．血管内失活或灭活
19
第五节 酶活性测定的影响因素与最适条件的确定
一、方法因素的影响
（一）正向反应与逆向反应 （二）检测底物或检测产物 （三）底物启动模式与样品启动模式
20
二、测定条件的影响与最适条件的确定
（一）底物种类和浓度 （二）缓冲液种类、pH和离子强度 （三）反应温度 （四）辅助因子和激活剂 （五）抑制剂 （六）酶偶联法中的辅助酶和指示酶 （七）延滞期与线性期的确定 （八）样品与试剂比例
3
酶的命名、分类与编号
● 酶的命名---习惯命名法、系统命名法 ● 酶的分类---可分为六大类
氧化还原酶(oxido-reductases)、转移酶 (transferases)、水解酶(hydrolases)、裂解酶(或裂 合酶)(lyases)、异构酶(isomerases)、合成酶(或连 接酶)(synthetases或ligases) ● 酶的编号---用4个数字加以系统编号
丙氨酸氨基转移酶 ALT
2.6.1.2
（谷丙转氨酶） (GPT)
肌酸激酶
CK
2.7.3.2
碱性磷酸酶
ALP(AKP) 3.1.3.1
系统名
L乳酸：NAD+氧化还原酶 单胺：氧化还原酶 γ -谷氨酰肽：氨基酸γ -谷氨酰转移酶 L-门冬氨酸：α -酮戊二酸氨基转移酶
L-丙氨酸：α -酮戊二酸氨基转移酶
12
二、血清酶变化的生理病理机制
（一）血清酶的生理差异 1．性别 2．年龄 3．饮食 4．运动 5．妊娠
（二）血清酶变化的病理机制 1．酶合成异常 2．细胞内酶的渗漏 3．酶进入血液的方式 4．其他血管内的抑制作用、清除速度
13
第三节 酶含量的表示方法
一、酶活性浓度表示法
(一)酶活性单位
1．惯用单位 2．国际单位---在特定的条件下，一分钟内使底
第一个数字表示酶的类别，第二个表示亚类， 第三个表示亚-亚类，第四个表示酶的编号序数。
4
习惯用名
英文缩写 EC编号
乳酸脱氢酶
LD（LDH） 1.1.1.27
单胺氧化酶
MAO
1.4.3.4
γ -谷氨酰转移酶 γ -GT/GGT 2.3.2.2
门冬氨酸氨基转移酶 AST
2.6.1.1
（谷草转氨酶） (GOT)
三磷酸腺苷：肌酸转磷酸酶 正磷酸单酯磷酸水解酶
临床酶学分析中常用酶的名称与编号
5
6
三、酶促反应动力学
（一）酶促反应 方程
7
（二）酶促反应进程
8
（三）酶动力学参数
1．反应速度
(1)初速度 指在反应最初阶段底物的消耗量很小 （一般在50%以内）时的反应速度 (2)最大反应速度 指当酶的结合位点与底物结合饱和时的反应 速度
25
试剂1
试剂2
L-丙氨酸 ＋ α -酮戊二酸 ALT（样品）α -丙酮酸 ＋ L-谷氨酸
LD（试剂）
丙酮酸 ＋ NADH ＋ H+
乳酸 ＋ NAD+
α-酮酸 标本中
①
GLDH 标本中
②
酶耦联法测定ALT
340nm －△A/min
26
Biblioteka Baidu
27
二、肌酸激酶的测定 三、碱性磷酸酶的测定
28
四、γ-谷氨酰基转移酶的测定 五、乳酸脱氢酶及其同工酶的测定
不加抗CK-MM血清时样品的CK活性：CK-MM和CK-MB活性； 加入抗CK-MM血清时样品的CK活性：50％CK-MB的活性； 加入抗CK-MM血清时样品的CK活性×2：CK-MB活性；
所测CK-MM和CK-MB之总活性－CK-MB活性＝CK-MM活性。
24
第七节 目前常用诊断酶的酶活性测定
一、丙氨酸氨基转移酶与门冬氨酸氨基转移酶的测定
物转变一微摩尔的酶量为一个国际单位。 3．Katal单位---在规定条件下，每秒钟催化转化
一摩尔底物的酶量。1katal＝60×106U
14
（二）酶活性浓度
指单位体积样品中的酶活性单位
（三）正常上限升高倍数（ULN)
是指用测得的酶活性结果除以参考范围上限
15
16
二、酶蛋白质量浓度表示法 测定酶蛋白质量浓度优点 ：
①灵敏度高 ②特异性高 ③可测定无活性的酶 ④与酶活性测定一起，计算免疫比活性 ⑤在同工酶测定中更有价值
17
第四节 酶催化活性浓度测定的理论基础 一、定时法 二、连续监测法
18
（三）连续监测法的方法设计
1．以人工合成色素原做底物的连续监测 2．NAD( P)H的连续监测 3．以Trinder反应做指示反应的连续监测 4．特殊反应类型的连续监测
辅酶(coenzyme)
辅因子(cofactor)
辅基(prosthetic grou2p)
● 酶是蛋白质，具有一、二、三级结构，有些酶还具 有四级结构。
● 单体酶(monomeric enzyme)---只由一条多肽链构成 ● 寡聚酶 (oligomeric enzyme)---由多个相同或不同
21
三、其他因素对测定结果的影响 （一）仪器 （二）校准物 （三）实验参数 （四）副反应
22
第六节 同工酶检测技术 一、电泳法 二、抑制法 三、其他方法
（一）热变性 （二）亲和层析法
23
免疫抑制法 利用同工酶的一种亚基与相应的抗 体结合后，酶活性受到抑制，测定加与不加抗体前后 样品中酶活性的变化，可以计算出该型同工酶的活性。
临床生物化学检验
临床酶学检验技术
1
第一节 酶学基本知识
● 酶的本质---绝大部分的酶是蛋白质，有些酶是核酸
和酶蛋白组成的复合体，极少数酶的本质是核酸。
● 酶的特性---极高的催化效率、高度的特异性
(specificity)以及催化作用的可调节性
● 酶的结构与功能
单纯酶
酶蛋白(apoenzyme)
结合酶
的酶彼此聚合而成的多酶复合物 ● 酶的必需基团(essential group)---与酶的活性密
切相关的基团 ● 酶的活性中心(active center)---组成具有能与底
物结合并起催化反应的特定空间结构区域
2．米氏常数
9
(四)酶偶联反应
Ex
Ea
Ei
ABCD
Ei——指示酶
Ea——辅助酶
工具酶
酶学分析中作为试剂用于测定 化合物浓度或酶活性浓度的酶
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第二节 血清酶变化的生理病理机制
一、血清酶的来源与去路 （一）血清酶的来源 1．血浆固有酶 2．非血浆固有酶 ①外分泌酶 ②细胞酶 （二）血清酶的去路 1．肾小球滤过从尿液中排出 2．网状内皮系统清除 3．血管内失活或灭活
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第五节 酶活性测定的影响因素与最适条件的确定
一、方法因素的影响
（一）正向反应与逆向反应 （二）检测底物或检测产物 （三）底物启动模式与样品启动模式
20
二、测定条件的影响与最适条件的确定
（一）底物种类和浓度 （二）缓冲液种类、pH和离子强度 （三）反应温度 （四）辅助因子和激活剂 （五）抑制剂 （六）酶偶联法中的辅助酶和指示酶 （七）延滞期与线性期的确定 （八）样品与试剂比例
3
酶的命名、分类与编号
● 酶的命名---习惯命名法、系统命名法 ● 酶的分类---可分为六大类
氧化还原酶(oxido-reductases)、转移酶 (transferases)、水解酶(hydrolases)、裂解酶(或裂 合酶)(lyases)、异构酶(isomerases)、合成酶(或连 接酶)(synthetases或ligases) ● 酶的编号---用4个数字加以系统编号
丙氨酸氨基转移酶 ALT
2.6.1.2
（谷丙转氨酶） (GPT)
肌酸激酶
CK
2.7.3.2
碱性磷酸酶
ALP(AKP) 3.1.3.1
系统名
L乳酸：NAD+氧化还原酶 单胺：氧化还原酶 γ -谷氨酰肽：氨基酸γ -谷氨酰转移酶 L-门冬氨酸：α -酮戊二酸氨基转移酶
L-丙氨酸：α -酮戊二酸氨基转移酶
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二、血清酶变化的生理病理机制
（一）血清酶的生理差异 1．性别 2．年龄 3．饮食 4．运动 5．妊娠
（二）血清酶变化的病理机制 1．酶合成异常 2．细胞内酶的渗漏 3．酶进入血液的方式 4．其他血管内的抑制作用、清除速度
13
第三节 酶含量的表示方法
一、酶活性浓度表示法
(一)酶活性单位
1．惯用单位 2．国际单位---在特定的条件下，一分钟内使底
第一个数字表示酶的类别，第二个表示亚类， 第三个表示亚-亚类，第四个表示酶的编号序数。
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习惯用名
英文缩写 EC编号
乳酸脱氢酶
LD（LDH） 1.1.1.27
单胺氧化酶
MAO
1.4.3.4
γ -谷氨酰转移酶 γ -GT/GGT 2.3.2.2
门冬氨酸氨基转移酶 AST
2.6.1.1
（谷草转氨酶） (GOT)
三磷酸腺苷：肌酸转磷酸酶 正磷酸单酯磷酸水解酶
临床酶学分析中常用酶的名称与编号
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三、酶促反应动力学
（一）酶促反应 方程
7
（二）酶促反应进程
8
（三）酶动力学参数
1．反应速度
(1)初速度 指在反应最初阶段底物的消耗量很小 （一般在50%以内）时的反应速度 (2)最大反应速度 指当酶的结合位点与底物结合饱和时的反应 速度
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试剂1
试剂2
L-丙氨酸 ＋ α -酮戊二酸 ALT（样品）α -丙酮酸 ＋ L-谷氨酸
LD（试剂）
丙酮酸 ＋ NADH ＋ H+
乳酸 ＋ NAD+
α-酮酸 标本中
①
GLDH 标本中
②
酶耦联法测定ALT
340nm －△A/min
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二、肌酸激酶的测定 三、碱性磷酸酶的测定
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四、γ-谷氨酰基转移酶的测定 五、乳酸脱氢酶及其同工酶的测定
不加抗CK-MM血清时样品的CK活性：CK-MM和CK-MB活性； 加入抗CK-MM血清时样品的CK活性：50％CK-MB的活性； 加入抗CK-MM血清时样品的CK活性×2：CK-MB活性；
所测CK-MM和CK-MB之总活性－CK-MB活性＝CK-MM活性。
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第七节 目前常用诊断酶的酶活性测定
一、丙氨酸氨基转移酶与门冬氨酸氨基转移酶的测定
物转变一微摩尔的酶量为一个国际单位。 3．Katal单位---在规定条件下，每秒钟催化转化
一摩尔底物的酶量。1katal＝60×106U
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（二）酶活性浓度
指单位体积样品中的酶活性单位
（三）正常上限升高倍数（ULN)
是指用测得的酶活性结果除以参考范围上限
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二、酶蛋白质量浓度表示法 测定酶蛋白质量浓度优点 ：
①灵敏度高 ②特异性高 ③可测定无活性的酶 ④与酶活性测定一起，计算免疫比活性 ⑤在同工酶测定中更有价值
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第四节 酶催化活性浓度测定的理论基础 一、定时法 二、连续监测法
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（三）连续监测法的方法设计
1．以人工合成色素原做底物的连续监测 2．NAD( P)H的连续监测 3．以Trinder反应做指示反应的连续监测 4．特殊反应类型的连续监测
辅酶(coenzyme)
辅因子(cofactor)
辅基(prosthetic grou2p)
● 酶是蛋白质，具有一、二、三级结构，有些酶还具 有四级结构。
● 单体酶(monomeric enzyme)---只由一条多肽链构成 ● 寡聚酶 (oligomeric enzyme)---由多个相同或不同
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三、其他因素对测定结果的影响 （一）仪器 （二）校准物 （三）实验参数 （四）副反应
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第六节 同工酶检测技术 一、电泳法 二、抑制法 三、其他方法
（一）热变性 （二）亲和层析法
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免疫抑制法 利用同工酶的一种亚基与相应的抗 体结合后，酶活性受到抑制，测定加与不加抗体前后 样品中酶活性的变化，可以计算出该型同工酶的活性。
临床生物化学检验
临床酶学检验技术
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第一节 酶学基本知识
● 酶的本质---绝大部分的酶是蛋白质，有些酶是核酸
和酶蛋白组成的复合体，极少数酶的本质是核酸。
● 酶的特性---极高的催化效率、高度的特异性
(specificity)以及催化作用的可调节性
● 酶的结构与功能
单纯酶
酶蛋白(apoenzyme)
结合酶