细胞生物学的研究技术和方法线粒体活体染色和观察培训课件
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实验六 线粒体的活体染色和观察PPT课件
二、实验原理： 健纳绿B（Janus Green B）对线粒体具有专一性染
色、毒性最小的碱性染料，由于线粒体中细胞色素酶 系的作用，使它始终保持氧化状态，并呈现蓝绿色， 在线粒体周围的细胞质中的染料被还原为无色的色基。
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• 三、实验材料：常规解剖器、大白鼠肝细胞 • 四、步骤及方法 • 1、鼠肝边沿较薄组织小块，放入盛有Ringer
鼠肝边沿较薄组织小块放入盛有ringer15000janusgreen染液倒入另一培养皿中将肝组织移入其内但不可将组织块完全淹没要让组织上面部分半裸露在染液外面这样细胞内的线粒体的酶系可充分得到氧化线粒体才易染色一般染3040分钟组织块边缘染成蓝绿色即可
实验七、线粒体的活体染色和观察
一、实验目的： 了解线粒体在细胞中的分布及形态、掌握研究方法。
• 3、染色后，用两根解剖针，同时用左右两手， 用一手的针压住组织块，然后用另一手的针稍 稍用力拉肝组织块边缘，就会有一些细胞或细 胞群和组织块分离。
• 4、用吸管将分离的细胞吸起，放在载玻片中央 的Ringer氏液中。垫两根头发，盖上盖玻片， 液体不要太多。
• 5、油镜观察：观察时，不断地上下微调节螺旋， 使盖玻片上下稍稍移动，这样所观察到的材料 总得到充足的氧气，线粒体的染色才显示得非 常清楚。
氏液的培养皿内，洗去血液。 • 2、将1/5000Janus Green B 染液倒入另一培
养皿中，将肝组织移入其内，但不可将组织块 完全淹没，要让组织上面部分半裸露在染液外 面，这样，细胞内的线粒体的酶系可充分得到 氧化，线粒体才易染色，一般染30-40分钟 （组织块边缘染成蓝绿色即可）。
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• 6、结果：油镜下，可见肝细胞质中线粒体被染成蓝绿色，呈颗粒状或线 条状，在细胞核周围分布得特别多。
色、毒性最小的碱性染料，由于线粒体中细胞色素酶 系的作用，使它始终保持氧化状态，并呈现蓝绿色， 在线粒体周围的细胞质中的染料被还原为无色的色基。
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• 三、实验材料：常规解剖器、大白鼠肝细胞 • 四、步骤及方法 • 1、鼠肝边沿较薄组织小块，放入盛有Ringer
鼠肝边沿较薄组织小块放入盛有ringer15000janusgreen染液倒入另一培养皿中将肝组织移入其内但不可将组织块完全淹没要让组织上面部分半裸露在染液外面这样细胞内的线粒体的酶系可充分得到氧化线粒体才易染色一般染3040分钟组织块边缘染成蓝绿色即可
实验七、线粒体的活体染色和观察
一、实验目的： 了解线粒体在细胞中的分布及形态、掌握研究方法。
• 3、染色后，用两根解剖针，同时用左右两手， 用一手的针压住组织块，然后用另一手的针稍 稍用力拉肝组织块边缘，就会有一些细胞或细 胞群和组织块分离。
• 4、用吸管将分离的细胞吸起，放在载玻片中央 的Ringer氏液中。垫两根头发，盖上盖玻片， 液体不要太多。
• 5、油镜观察：观察时，不断地上下微调节螺旋， 使盖玻片上下稍稍移动，这样所观察到的材料 总得到充足的氧气，线粒体的染色才显示得非 常清楚。
氏液的培养皿内，洗去血液。 • 2、将1/5000Janus Green B 染液倒入另一培
养皿中，将肝组织移入其内，但不可将组织块 完全淹没，要让组织上面部分半裸露在染液外 面，这样，细胞内的线粒体的酶系可充分得到 氧化，线粒体才易染色，一般染30-40分钟 （组织块边缘染成蓝绿色即可）。
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• 6、结果：油镜下，可见肝细胞质中线粒体被染成蓝绿色，呈颗粒状或线 条状，在细胞核周围分布得特别多。
细胞生物学-第六章-线粒体PPT课件
五、其它
如辅酶Q、黄素单核苷酸（FMN）、黄素腺嘌 呤二核苷酸（FAD）以及烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（ NAD+）等。这些物质均参与电子传递的氧化还原 过程，它们与内膜密切关联。
2021
第三节 线粒体的功能
➢ 主要功能：是对各种能源物质的氧化和能量转换，
为细胞氧化作用提供场所。
• 物质氧化：细胞内氨基酸、脂肪酸、单糖等供能
三、酶（掌握）
外膜：合成脂类的酶类。特征酶为单胺氧化酶。 内膜：执行呼吸链氧化反应的酶系和ATP合成酶系。特征酶
为细胞色素c氧化酶。 基质：高浓度的多种混合物，特征酶为苹果酸脱氧酶。
2021
2021
四、脂类
脂类含量占线粒体干重的25%~30%。以磷脂为 主，其中以磷脂酰胆碱（卵磷脂）和磷脂酰乙醇胺 （脑磷脂）为主，还含有一定量的心磷脂（内膜） 和较少的胆固醇（外膜）。
已发现的有100多种线粒体病。例如线粒体心肌病、线粒 体肌病、线粒体脑肌病等。这类病的共同特点都是mtDNA 异常，导致肌细胞内线粒体缺少某些酶，引起线粒体基质的 转运、氧化磷酸化障碍，使肌细胞功能改变，发生疾病。
2021
人心肌细胞的线粒体
线粒体肿胀
线粒体空泡化（心肌缺氧20）21 线粒体增生显著
物质在一系列酶的作用下，消耗O2，产生CO2和水， 放出能量的过程称为细胞氧化作用，此过程中细胞
要 摄 取 O2 排 出 CO2 ， 故 又 称 为 细 胞 呼 吸 （ cellular
respiration）作用。
酶
• 能量转换：物质的化学能
高能磷酸键（ATP）
2021
❖ 动物细胞80%的ATP来源于线粒体。
2021
2021
第五节 线粒体的生物发生
如辅酶Q、黄素单核苷酸（FMN）、黄素腺嘌 呤二核苷酸（FAD）以及烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（ NAD+）等。这些物质均参与电子传递的氧化还原 过程，它们与内膜密切关联。
2021
第三节 线粒体的功能
➢ 主要功能：是对各种能源物质的氧化和能量转换，
为细胞氧化作用提供场所。
• 物质氧化：细胞内氨基酸、脂肪酸、单糖等供能
三、酶（掌握）
外膜：合成脂类的酶类。特征酶为单胺氧化酶。 内膜：执行呼吸链氧化反应的酶系和ATP合成酶系。特征酶
为细胞色素c氧化酶。 基质：高浓度的多种混合物，特征酶为苹果酸脱氧酶。
2021
2021
四、脂类
脂类含量占线粒体干重的25%~30%。以磷脂为 主，其中以磷脂酰胆碱（卵磷脂）和磷脂酰乙醇胺 （脑磷脂）为主，还含有一定量的心磷脂（内膜） 和较少的胆固醇（外膜）。
已发现的有100多种线粒体病。例如线粒体心肌病、线粒 体肌病、线粒体脑肌病等。这类病的共同特点都是mtDNA 异常，导致肌细胞内线粒体缺少某些酶，引起线粒体基质的 转运、氧化磷酸化障碍，使肌细胞功能改变，发生疾病。
2021
人心肌细胞的线粒体
线粒体肿胀
线粒体空泡化（心肌缺氧20）21 线粒体增生显著
物质在一系列酶的作用下，消耗O2，产生CO2和水， 放出能量的过程称为细胞氧化作用，此过程中细胞
要 摄 取 O2 排 出 CO2 ， 故 又 称 为 细 胞 呼 吸 （ cellular
respiration）作用。
酶
• 能量转换：物质的化学能
高能磷酸键（ATP）
2021
❖ 动物细胞80%的ATP来源于线粒体。
2021
2021
第五节 线粒体的生物发生
(2021)线粒体和液泡系的超活染色与观察完美版PPT
(1) 实验前，把黄豆培养在培养皿内潮湿的滤纸上，使其发芽，胚根伸长到1cm以上。
詹纳斯绿B染液。 (2) 实验者用牙签宽头在自己口腔颊粘膜处稍用力刮取上皮细胞，将刮下的粘液状物放入载玻片的染液滴中，染色10~l5min(注意不可
使染液干燥，必要时可再加滴染液)，盖上盖玻片，用吸水纸吸去四周溢出的染液，置显微镜下观察。
(3) 吸去染液，滴一滴Ringer液，盖上盖玻片，并用镊子轻轻地下 压盖玻片，使根尖压扁，利于观察。
(4) 进行镜检。
实验结果
1.人口腔粘膜上皮细胞线粒体的光镜观察。 2.黄豆根尖细胞液泡系的光镜观察。
3. 器材：显微镜、恒温水浴锅、剪刀、镊子、双 面刀片、载玻片、盖玻片、表面皿、吸管、牙 签、吸水纸。
实验方法
1. 人口腔粘膜上皮细胞线粒体的超活染色与观察
1/5000 詹纳斯绿B溶液
(3) (1)
在 实低验倍前镜，(1下把)，黄取选豆择培清平养洁展在的培载口养腔皿玻上内片皮潮细湿放胞的，滤在换纸3高上7倍，℃镜使或其恒油发镜芽温进，水行胚观根浴察伸。长锅到的1cm金以上属。 板上，滴2滴1/5000
观1/3察00动0、中植性(物2红活)溶细实液胞验内线者粒体用、牙液泡签系的宽形头态、在数量自与己分布口；腔颊粘膜处稍用力刮取上皮细胞，将
观器察材动 ：、显植微物镜活、刮细恒胞温下内水线浴的粒锅粘体、、剪液液刀泡、状系镊物的子形、放态双、面入数刀载量片与、玻分载布玻片；片的、盖染玻片液、滴表面中皿、，吸染管、色牙签1、0吸~水l5纸m。 in(注意不
人口腔粘膜(上3皮) 细在胞低线粒倍体的镜超下活染，色与选观择察 平展的口腔上皮细胞，换高倍镜或油镜进行观
察。
实验方法
2. 黄豆根尖细胞液泡系的超活染色与观察
3、实验三 细胞内液泡系和线粒体的活体染色.ppt
实验三
细胞内液泡系和线粒体 的活体染色
一、实验目的 1. 了解活体染色的定义及原理； 2. 熟悉液泡系和线粒体活体染色的方法 和步骤。
二、定义及原理
• 所谓活体染色，是指利用某些无毒或毒性较小的染色 剂显示出细胞内某些天然构造存在的真实性，而不影 响细胞的生命活动，不产生任何物理化学变化以致引 起细胞的死亡的染色方法。即在染色和观察过程中， 细胞或组织始终保持其生命状态。
三、操作程序
• 用镊子撕取莴笋叶片下表皮细胞，置于中性红中染色10分钟，可见 许多大小不同的液泡。
•
用解剖针破坏蛙的脊髓，然后把腹部皮肤剪开，使露出胸骨的剑突 部分，剪取一小块剑突软骨边缘最薄的部分，放入载片中央的中性 红染液中，染色10—30分钟，盖上盖玻片。用高倍镜观察，可见软 骨细胞为椭圆形、细胞核及核仁清楚易见，在细胞核的上方有许多 被染成玫瑰红大小膜泡，此区即液泡系。
• 活染法弥补了活观察法不能显示细胞精细结构的不足， 也避免了固定染色法对细胞结构的破环和造成人为假 象的弊病。遗憾的是，适宜活体染色的染料较少，能 显示出的结构和种类也不多。
• 活体染色分为体内活染和体外活染两种。前者是将 染料注射于生物体内，染色后再取材观察。后者是 取材后，对离体的活细胞进行染色。为保持离体细 胞的正常存活，染色时需供给细胞以正常的温度， 渗透压，PH等。 • 关于活染的机制，一般认为，线粒体能被健那绿-B 染成蓝色，是由线粒体内的细胞色素氧化酶使染料 保持在氧化状态，即有色状态，而在周围的细胞质 中，这些染料被还原成无色的色基，液泡系被中性 红染色，则主要是染料的堆积作用。中性红为碱性 染料，其胶粒表面带阳离子，被染部分具阴离子， 它们彼此之间就发生了电吸附作用（静电吸附）。
•
细胞内液泡系和线粒体 的活体染色
一、实验目的 1. 了解活体染色的定义及原理； 2. 熟悉液泡系和线粒体活体染色的方法 和步骤。
二、定义及原理
• 所谓活体染色，是指利用某些无毒或毒性较小的染色 剂显示出细胞内某些天然构造存在的真实性，而不影 响细胞的生命活动，不产生任何物理化学变化以致引 起细胞的死亡的染色方法。即在染色和观察过程中， 细胞或组织始终保持其生命状态。
三、操作程序
• 用镊子撕取莴笋叶片下表皮细胞，置于中性红中染色10分钟，可见 许多大小不同的液泡。
•
用解剖针破坏蛙的脊髓，然后把腹部皮肤剪开，使露出胸骨的剑突 部分，剪取一小块剑突软骨边缘最薄的部分，放入载片中央的中性 红染液中，染色10—30分钟，盖上盖玻片。用高倍镜观察，可见软 骨细胞为椭圆形、细胞核及核仁清楚易见，在细胞核的上方有许多 被染成玫瑰红大小膜泡，此区即液泡系。
• 活染法弥补了活观察法不能显示细胞精细结构的不足， 也避免了固定染色法对细胞结构的破环和造成人为假 象的弊病。遗憾的是，适宜活体染色的染料较少，能 显示出的结构和种类也不多。
• 活体染色分为体内活染和体外活染两种。前者是将 染料注射于生物体内，染色后再取材观察。后者是 取材后，对离体的活细胞进行染色。为保持离体细 胞的正常存活，染色时需供给细胞以正常的温度， 渗透压，PH等。 • 关于活染的机制，一般认为，线粒体能被健那绿-B 染成蓝色，是由线粒体内的细胞色素氧化酶使染料 保持在氧化状态，即有色状态，而在周围的细胞质 中，这些染料被还原成无色的色基，液泡系被中性 红染色，则主要是染料的堆积作用。中性红为碱性 染料，其胶粒表面带阳离子，被染部分具阴离子， 它们彼此之间就发生了电吸附作用（静电吸附）。
•
实验二-线粒体超活染色技术及观察PPT课件
• （4）染色10～15min，盖上盖玻片，吸去周围染液， 显微镜下观察。
• （5）计数50个细胞中线粒体数目，得出平均值。
• ２、洋葱鳞茎内表皮细胞线粒体的超活染色与观察
• （1）取载玻片于37℃恒温水浴：
• （2）1/5000詹纳斯绿Ｂ溶液 2滴
• （3）洋葱鳞茎内表皮 镊子撕取
• （4）染色10～15min，吸去染液，加Ringer溶液１ 滴，盖上盖玻片，显微镜下观察．
-
2
• 【实验用品】
• 材料：
• 人口腔上皮细胞、洋葱鳞茎内表皮细胞
• 器材：
• 显微镜、恒温水浴锅、刀片、镊子、载玻片、盖玻片、牙 签、吸水纸、洋葱
• ２、试剂：
• （1）Ringer溶液
• 氯化钠
0.85 g
• 氯化钾
0.25 g
• 氯化钙
0.03 g
• （2）1/5000詹纳斯绿Ｂ溶液：
• 称取0.5g詹纳斯绿Ｂ溶于5ml Ringer溶液中，稍加热(3040℃)溶解，用滤纸过滤后，即为1%原液。
• 但不是任何染料都可作为活体染色剂使用,一般应 选择那些无毒或毒性小的碱性染料(易溶于类脂质) 并配成较稀的溶液来使用.詹纳斯绿Ｂ是活体染色 中重要的染料，对线粒体有专一性．詹纳斯绿Ｂ可 专一性地对对线粒体进行活染，这是由于线粒体内 的细胞色素氧化酶系的作用,使染料始终保持氧化 状态(即有色状态),呈蓝绿色;而线粒体周围的细胞 质中,这些染料被还原为无色的色基。
-
1
• 根据所用染色剂的性质和染色方法的不同, 活体染 色可分为体内活染与体外活染两类.体内活染是以 胶体状的染料溶液注入动植物体内,染料的胶粒固 定于细胞内某些特殊结构内以达到易于识别的目的. 体外活染又称超活染色，是由活的动植物分离出部 分细胞或组织小块，以染料溶液浸染，染料因其 “电化学”特性与被染部分相互吸引被选择固定在 活细胞的某种结构中而显色。
细胞生物学第七章 线粒体ppt课件
■ 两套遗传体系的协同性
通过离体实验发现两套 遗传体系的遗传机制不 同。 如放线菌酮是细胞质蛋 白质合成抑制剂，但是 对细胞器蛋白质的翻译 却没有作用。另外，一 些抗生素，如氯霉素、 四环素、红霉素等能够 抑制线粒体蛋白质的合 成，但对细胞质蛋白质 合成没有多大影响。 通过对转录的抑制研究， 发现线粒体基因转录的 RNA聚合酶也是特异 的(图)。
线粒体蛋白转运
图 线粒体蛋白转运的部位
分子伴侣（molecular chaperon）
概念：一类在序列上没有相关性但有共同功能的蛋白质，它 们在细胞内帮助其他含多肽的结构完成正确的组装，而且在 组装完毕后与之分离，不构成这些蛋白质结构执行功能时的 组份。 种类：伴侣素家族（chaperonin, Cpn）、热休克蛋白 家族 （ Hsp family ）、 核质素、T 受体结合蛋白 (TRAP) 等 特征：1、分子伴侣对靶蛋白没有高度专一性，同一分子伴 侣可以促进多种氨基酸序列完全不同的多肽链折叠成为空间 结构、性质和功能都不相关的蛋白质。 2、它的催化效率很低。行使功能需要水解ATP，以改 变其构象，释放底物，进行再循环。 3、它和肽链折叠的关系，是阻止错误折叠，而不是促 进正确折叠。 4. 多能性（胁迫保护防止交联聚沉，转运，调节转录 和复制，组装细胞骨架） 5. 进化保守性
细胞生物学第七 章 线粒体
第一节、 线粒体的生物学特征
线粒体是能够在光学显微镜进行 观察的显微结构。 ● 1890年，德国生物学家 Altmann第一个发现线粒体。 ● 1897年对线粒体进行命名。 ● 1900年，Leonor Michaelis用 染料Janus green对肝细胞进行 染色，发现细胞消耗氧之后，线 粒体的颜色逐渐消失了，从而提 示线粒体具有氧化还原反应的作 用。
细胞生物学线粒体PPT课件
CoQH2
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铁硫蛋白
+e 传递电子机理：Fe3+ -e
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Fe2+
2．电子载体的排列顺序
◆电子传递方向按氧化还原电势递增的方向传递 (NAD+/NAD最低，H2O/O2最高)
◆ 电子传递起始于NADH脱氢酶催化NADH氧化，形成高 能电子 (能量转化)， 终止于O2形成水。
第一节 线粒体与氧化磷酸化
● 线粒体的形态结构 ● 线粒体的化学组成及酶的定位 ● 氧化磷酸化 ● 线粒体与疾病
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1. 线粒体的形态、大小、数量与分布
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2.
◆ 外膜(outer membrane）：含孔蛋白(porin)，通透 性较高。 ◆ 内膜（inner membrane）：高度不通透性，向内折 叠形成嵴（cristae）。含有与能量转换相关的蛋白 ◆ 膜间隙（intermembrane space）：含许多可溶性 酶、底物及辅助因子。 ◆ 基质（matrix）：含三羧酸循环酶系、线粒体基因
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2．能量耦联与ATP合酶的作用机制
几个假说 •1953年 Edward Slater 化学耦联假说 •1961年 Peter Mitchell 化学渗透假说
•1979年 Paul B1o9y7e8r 年结合获变诺构假贝说尔化学奖
1997年获诺贝尔化学奖
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化学渗透假说原理示意图
(一)线粒体中的氧化代谢
1.三大物质代谢 2.NADH的进入线粒体的两种“穿梭”途径
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细胞质
苹果酸-天冬氨酸穿梭途径
线粒体内膜
线粒体和液泡系的超活染色与观察(分析“染色”文档)共9张PPT
Fra bibliotek五、作业
• 1 ．绘出人口腔上皮细胞示线粒体的形态与 分布并简要分析。
• 2 ．绘出绿豆幼根根尖组织液泡系的形态与 分布并简要分析 。
• 2 ．洋葱鳞茎内表皮细胞线粒体的超活染色与观察 3 ．材料：人口腔上皮细胞、洋葱鳞茎内表皮细胞、绿豆幼根根尖
1/5000詹纳斯绿Ｂ1-2滴，口腔上皮细胞（牙签刮取），载玻片于３７℃恒温染色10-15min，显微镜下观察．
2 1
．．洋口葱腔•鳞上茎皮1内细/表胞5皮线0细粒0胞体0线的詹粒超体活纳的染超色斯活染绿色与Ｂ观察溶液１-2滴，洋葱鳞茎内表皮，载玻片于
察1/5．000詹• 纳斯1绿/Ｂ510-20滴，0口詹腔上纳皮斯细胞绿（牙Ｂ签刮1取-2）滴，载，玻片口于３腔７℃上恒皮温染细色10胞-15（min，牙显签微镜刮下观取察．），载玻片于３
1 2
．．绘了出解人细口胞７腔和上细℃皮胞细器恒胞的示超温线活粒染染体色色的技形术1态0与-分1布5并m简要in分，析。显微镜下观察．
（一）线粒体的超活染色与观察
中性红对液泡3系7的℃染色恒具有温专一水性，浴将活染细胞色中的1液0泡-系1染5成m红i色n。，显微镜下观察．
1 ．观察动植物活细胞内线粒体、液泡系的形态、发育和分布；
• （二） 绿豆幼根根尖液泡系的中性红染色观察 实验三 线粒体和液泡系的超活染色与观察
1 ．观察动植物活细胞内线粒体、液泡系的形态、发育和分布；
实验三 线粒体和液泡系的超活染色 与观察
一、实验目的
• 1 ．观察动植物活细胞内线粒体、液泡系的 形态、发育和分布；
• 2 ．了解细胞和细胞器的超活染色技术
二、实验原理
• 詹纳斯绿Ｂ可专一性地对对线粒体进行活染,这是由于 线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保
• 1 ．绘出人口腔上皮细胞示线粒体的形态与 分布并简要分析。
• 2 ．绘出绿豆幼根根尖组织液泡系的形态与 分布并简要分析 。
• 2 ．洋葱鳞茎内表皮细胞线粒体的超活染色与观察 3 ．材料：人口腔上皮细胞、洋葱鳞茎内表皮细胞、绿豆幼根根尖
1/5000詹纳斯绿Ｂ1-2滴，口腔上皮细胞（牙签刮取），载玻片于３７℃恒温染色10-15min，显微镜下观察．
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．．洋口葱腔•鳞上茎皮1内细/表胞5皮线0细粒0胞体0线的詹粒超体活纳的染超色斯活染绿色与Ｂ观察溶液１-2滴，洋葱鳞茎内表皮，载玻片于
察1/5．000詹• 纳斯1绿/Ｂ510-20滴，0口詹腔上纳皮斯细胞绿（牙Ｂ签刮1取-2）滴，载，玻片口于３腔７℃上恒皮温染细色10胞-15（min，牙显签微镜刮下观取察．），载玻片于３
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．．绘了出解人细口胞７腔和上细℃皮胞细器恒胞的示超温线活粒染染体色色的技形术1态0与-分1布5并m简要in分，析。显微镜下观察．
（一）线粒体的超活染色与观察
中性红对液泡3系7的℃染色恒具有温专一水性，浴将活染细胞色中的1液0泡-系1染5成m红i色n。，显微镜下观察．
1 ．观察动植物活细胞内线粒体、液泡系的形态、发育和分布；
• （二） 绿豆幼根根尖液泡系的中性红染色观察 实验三 线粒体和液泡系的超活染色与观察
1 ．观察动植物活细胞内线粒体、液泡系的形态、发育和分布；
实验三 线粒体和液泡系的超活染色 与观察
一、实验目的
• 1 ．观察动植物活细胞内线粒体、液泡系的 形态、发育和分布；
• 2 ．了解细胞和细胞器的超活染色技术
二、实验原理
• 詹纳斯绿Ｂ可专一性地对对线粒体进行活染,这是由于 线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保
液泡系线粒体的超活染色与观察及叶绿体的分离与观察ppt课件
液泡系、线粒体的超活染色与 观察
叶绿体的分离与观察
1
一、实验目的
• 1、观察植物活细胞内液泡系的形态、数量 、分布及演进过程
• 2、观察线粒体的形态 • 3、学习超活染色技术 • 4、掌握叶绿体的离心方法以及离心机的使
用 • 5、观察叶绿体的形态
2
二、实验原理
• 活体染色试纸对有机体的细胞或组织能 着色但又无毒害的一种染色方法，它的目 的是显示或细胞内的某些结构，而不影响 细胞的生命活动和产生任何物理、化学变 化以致引起细胞的死亡。活体染色技术可 用来研究生活状态下细胞形态和生理病理 状态。 活体染色分为体内活染和体外活染 ，后者又称为超活染色，是指从活的动植 物体内分离出细胞或组织，用染料浸染， 由于活细胞或组织内的某种结构对染料的 3
染料被还原成无色。
5
叶绿体是植物细胞中较大的一种细胞器 ，利用低速离心机可以分离叶绿体，其分 离在等渗溶液中进行，是为了防止渗透压 的改变引起叶绿体的损伤。将匀浆液在 1000r/min条件下离心，去除其中的组织残 渣和一些未被破碎的完整细胞，然后 3000r/min离心，可获得沉淀的叶绿体。在 室温下离心要迅速。
19
20
因为詹纳斯绿B染色,利用的是氧化线粒体, 使得线粒体的能量表现出
来。使得化学能转化成光能,让你发现.放置 一段时间后,由于线粒体
失去的活性,所以氧化效果不明显,因而不会 亮得那么明显.
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• 3、分离叶绿体时应注意什么问题？
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分离过程最好在0～4℃的条件下进行 ；如果 在室温下,要迅速分离和观察
9
四、实验方法
一、 液泡系的超活染色与观察
• 1.提前2-3天将小麦和黄豆培养在培养皿内 潮湿的滤纸上，使其发芽，胚根长到1cm以 上。
叶绿体的分离与观察
1
一、实验目的
• 1、观察植物活细胞内液泡系的形态、数量 、分布及演进过程
• 2、观察线粒体的形态 • 3、学习超活染色技术 • 4、掌握叶绿体的离心方法以及离心机的使
用 • 5、观察叶绿体的形态
2
二、实验原理
• 活体染色试纸对有机体的细胞或组织能 着色但又无毒害的一种染色方法，它的目 的是显示或细胞内的某些结构，而不影响 细胞的生命活动和产生任何物理、化学变 化以致引起细胞的死亡。活体染色技术可 用来研究生活状态下细胞形态和生理病理 状态。 活体染色分为体内活染和体外活染 ，后者又称为超活染色，是指从活的动植 物体内分离出细胞或组织，用染料浸染， 由于活细胞或组织内的某种结构对染料的 3
染料被还原成无色。
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叶绿体是植物细胞中较大的一种细胞器 ，利用低速离心机可以分离叶绿体，其分 离在等渗溶液中进行，是为了防止渗透压 的改变引起叶绿体的损伤。将匀浆液在 1000r/min条件下离心，去除其中的组织残 渣和一些未被破碎的完整细胞，然后 3000r/min离心，可获得沉淀的叶绿体。在 室温下离心要迅速。
19
20
因为詹纳斯绿B染色,利用的是氧化线粒体, 使得线粒体的能量表现出
来。使得化学能转化成光能,让你发现.放置 一段时间后,由于线粒体
失去的活性,所以氧化效果不明显,因而不会 亮得那么明显.
17
• 3、分离叶绿体时应注意什么问题？
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分离过程最好在0～4℃的条件下进行 ；如果 在室温下,要迅速分离和观察
9
四、实验方法
一、 液泡系的超活染色与观察
• 1.提前2-3天将小麦和黄豆培养在培养皿内 潮湿的滤纸上，使其发芽，胚根长到1cm以 上。
实验三线粒体和液泡系的ppt课件
实验三 线粒体和液泡系的 超活染色与观察
一 实验目的
1 观察动、植物活细胞内线粒体、液泡的 形态、数量和分布
2 了解细胞和细胞器的超活染色技术。
二 实验原理
活体染色是指对生活有机体的细胞或组 织能着色但又无毒的一种染色方法。
活体染色可用来研究生活状态下的细胞 形态结构和Fra bibliotek理、病理状态。
根据染色剂性质和染色方法不同，分为 体内活染和体外活染。
詹纳斯绿Ｂ可专一性地对对线粒体进行 活染,这是由于线粒体内的细胞色素氧化 酶系的作用，使染料始终保持氧化状态 (即有色状态),呈蓝绿色。
中性红对液泡系的染色具有专一性，将 活细胞中的液泡系染成红色。
三 实验用品
1 ．器材： 显微镜、恒温水浴锅、、剪刀、镊子、解剖刀、
载玻片、盖玻片、吸管、牙签、吸水纸 2 ．试剂： Ringer液、1/5000詹纳斯绿Ｂ、1/3000中性红
3 ．材料： 人口腔上皮细胞 洋葱鳞茎内表皮细胞 小麦或黄豆幼根根尖
2 洋葱鳞茎表皮细胞线粒体的 超活染色
载玻片→滴一滴詹纳斯绿B染液→撕取一 小片洋葱鳞茎内表皮→染色10-15分钟
吸去染液→加一滴Ringer液→盖上盖玻 片→观察
二 液泡系的超活染色与观察
中性红对液泡系的染色具有专一性，将 活细胞中的液泡系染成红色。
小麦液泡系的超活染色与观察
小麦根尖细胞液泡系的中性红染色观察 双面刀片→小麦或黄豆幼苗根尖→切一
纵切面→中性红染色5-10分钟 吸去染液→加一滴Ringer液→盖上盖玻
片→镊子轻轻下压盖玻片→观察
五 作业
1 ．画出你所观察到的线粒体和液泡的 图像.
2 ．总结实验成功或失败的原因.
活体染色之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部 分，主要是染料的“电化学”特性起重要作用。碱性 燃料的胶粒表面带阳离子，酸性染料的胶粒表面带有 阴离子，而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子， 这样，他们彼此就发生了吸引作用。但不是任何染料 都可以作为活体染色剂之用，应选择那些对细胞无毒 性或毒性极小的染料，而且总要配成稀淡的溶液来使 用。一般是以碱性染料最为适用，可能因为它具有溶 解在类脂质的特性，易于被细胞吸收，Janus green B 和中性红两种碱性染料是活体染色剂中最重要的染料， 对于线粒体和液泡系的染色各有专一性。
一 实验目的
1 观察动、植物活细胞内线粒体、液泡的 形态、数量和分布
2 了解细胞和细胞器的超活染色技术。
二 实验原理
活体染色是指对生活有机体的细胞或组 织能着色但又无毒的一种染色方法。
活体染色可用来研究生活状态下的细胞 形态结构和Fra bibliotek理、病理状态。
根据染色剂性质和染色方法不同，分为 体内活染和体外活染。
詹纳斯绿Ｂ可专一性地对对线粒体进行 活染,这是由于线粒体内的细胞色素氧化 酶系的作用，使染料始终保持氧化状态 (即有色状态),呈蓝绿色。
中性红对液泡系的染色具有专一性，将 活细胞中的液泡系染成红色。
三 实验用品
1 ．器材： 显微镜、恒温水浴锅、、剪刀、镊子、解剖刀、
载玻片、盖玻片、吸管、牙签、吸水纸 2 ．试剂： Ringer液、1/5000詹纳斯绿Ｂ、1/3000中性红
3 ．材料： 人口腔上皮细胞 洋葱鳞茎内表皮细胞 小麦或黄豆幼根根尖
2 洋葱鳞茎表皮细胞线粒体的 超活染色
载玻片→滴一滴詹纳斯绿B染液→撕取一 小片洋葱鳞茎内表皮→染色10-15分钟
吸去染液→加一滴Ringer液→盖上盖玻 片→观察
二 液泡系的超活染色与观察
中性红对液泡系的染色具有专一性，将 活细胞中的液泡系染成红色。
小麦液泡系的超活染色与观察
小麦根尖细胞液泡系的中性红染色观察 双面刀片→小麦或黄豆幼苗根尖→切一
纵切面→中性红染色5-10分钟 吸去染液→加一滴Ringer液→盖上盖玻
片→镊子轻轻下压盖玻片→观察
五 作业
1 ．画出你所观察到的线粒体和液泡的 图像.
2 ．总结实验成功或失败的原因.
活体染色之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部 分，主要是染料的“电化学”特性起重要作用。碱性 燃料的胶粒表面带阳离子，酸性染料的胶粒表面带有 阴离子，而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子， 这样，他们彼此就发生了吸引作用。但不是任何染料 都可以作为活体染色剂之用，应选择那些对细胞无毒 性或毒性极小的染料，而且总要配成稀淡的溶液来使 用。一般是以碱性染料最为适用，可能因为它具有溶 解在类脂质的特性，易于被细胞吸收，Janus green B 和中性红两种碱性染料是活体染色剂中最重要的染料， 对于线粒体和液泡系的染色各有专一性。
线粒体的活体染色PPT课件
精品实验者用牙签宽头在自己口腔颊粘膜处稍用力刮取上皮细胞将刮下的粘液状物放入载玻片的染液滴中染色1015分钟注意不可使染液干燥必要时可再加滴染液盖上盖玻片用吸水纸吸去四周溢出的染液置显微镜下观察
一、实验目的：
1、观察动物活细胞内线粒体的形态、数量与分布。 2、掌握线粒体的活体染色原理及方法。 3、小鼠肝脏细胞线粒体染色及观察。
3）在低倍镜下，选择平展的口腔上皮细胞，换高倍 镜进行观察。可见扁平状上皮细胞的核周围胞质中， 分布着一些被染成蓝绿色的颗粒状或短棒状的结构， 即是线粒体。
第7页/共14页
2、小白鼠肝细胞线粒体的活体染色观察 1) 用脊椎脱臼法处死小白鼠，置于解剖盘中，剪开腹腔，取小白鼠肝边 缘较薄的肝组织块，放入表面皿内。用吸管吸取Ringer 液，反复浸泡冲 洗肝脏，洗去血液。 2) 在干净的平皿中，滴加1/5000詹纳斯绿B溶液，再将肝组织块移入染 液，注意不可将组织块完全淹没，要使组织块上面部分半露在染液外，这 样细胞内的线粒体酶系可充分得到氧化，易被染色。当组织块边缘被染成 蓝绿色即成(一般需染20～30min)。
第2页/共14页
不同细胞中线粒体的形态和数目不同。在电子显 微镜下，线粒体的外形多样，如圆形、椭圆形、哑铃 形和杆状。线粒体的数目与细胞类型和细胞的生理状 态有关，线粒体多聚集在细胞生理功能旺盛的区域。
线粒体脊的数目与分布方式是多种多样的。一般 与线粒体长轴垂直排列，但也可见到与线粒体长轴平 行排列的脊。脊的横切面呈囊状或管状。脊的数量与 细胞呼吸机能的强度有很大关系。
第9页/共14页
五、作业：
1、绘口腔上皮细胞形态结构。
第10页/共14页
口腔上皮细胞 的线粒体分布
第11页/共14页
洋葱内表皮细胞的线粒体分布
一、实验目的：
1、观察动物活细胞内线粒体的形态、数量与分布。 2、掌握线粒体的活体染色原理及方法。 3、小鼠肝脏细胞线粒体染色及观察。
3）在低倍镜下，选择平展的口腔上皮细胞，换高倍 镜进行观察。可见扁平状上皮细胞的核周围胞质中， 分布着一些被染成蓝绿色的颗粒状或短棒状的结构， 即是线粒体。
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2、小白鼠肝细胞线粒体的活体染色观察 1) 用脊椎脱臼法处死小白鼠，置于解剖盘中，剪开腹腔，取小白鼠肝边 缘较薄的肝组织块，放入表面皿内。用吸管吸取Ringer 液，反复浸泡冲 洗肝脏，洗去血液。 2) 在干净的平皿中，滴加1/5000詹纳斯绿B溶液，再将肝组织块移入染 液，注意不可将组织块完全淹没，要使组织块上面部分半露在染液外，这 样细胞内的线粒体酶系可充分得到氧化，易被染色。当组织块边缘被染成 蓝绿色即成(一般需染20～30min)。
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不同细胞中线粒体的形态和数目不同。在电子显 微镜下，线粒体的外形多样，如圆形、椭圆形、哑铃 形和杆状。线粒体的数目与细胞类型和细胞的生理状 态有关，线粒体多聚集在细胞生理功能旺盛的区域。
线粒体脊的数目与分布方式是多种多样的。一般 与线粒体长轴垂直排列，但也可见到与线粒体长轴平 行排列的脊。脊的横切面呈囊状或管状。脊的数量与 细胞呼吸机能的强度有很大关系。
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五、作业：
1、绘口腔上皮细胞形态结构。
第10页/共14页
口腔上皮细胞 的线粒体分布
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洋葱内表皮细胞的线粒体分布
医用细胞生物学》课件线粒体ppt演示课件
25
个人观点供参考，欢迎讨论！
向内突起形成嵴 内膜与嵴的内表面遍布着基粒
• 膜间腔：含多种可溶性酶、底物和辅助因子。
• 基质腔：含线粒体DNA，核糖体及各种酶类
19
五、线粒体的半自主性
• 线粒体具有自身的遗传物质mtDNA， 可编码37个基因，其中13个编码蛋白 质。
• 具自身的核糖体、有蛋白质合成系统
• mtDNA的复制、转录所需的酶、构成 线粒体核糖体的蛋白质都是由核DNA 编码、在细胞质中合成运进线粒体的。
• 线粒体是细胞的供能中心。
14
真核细胞中碳水化合物代谢俯瞰 15
三 羧 酸 循 环
16
化学渗透假说 17
基粒-合成ATP的关键部位
葡萄糖、氨基
酸等在基质腔
分解脱H+和电
子，电子通过
内膜传递促使
“H+”质子泵
入膜间腔，通
过基粒返回在
其头部合成ATP
基粒合成ATP的过程
18
线粒体的超微结构
• 外膜：光滑平整 • 内膜：高蛋白膜、电子传递链有关的酶类
同时线粒体遗传系统受控于细胞核遗传系同时线粒体遗传系统受控于细胞核遗传系2324间壁分离间壁分离收缩分离收缩分离出芽分裂出芽分裂25一一线粒体基因突变与疾病线粒体基因突变与疾病母系遗传及各种外界因素的影响母系遗传及各种外界因素的影响线粒体脑肌病线粒体脑肌病二线粒体中某些组分的治疗作用二线粒体中某些组分的治疗作用细胞色素细胞色素cc已被作为一氧化碳中毒新生已被作为一氧化碳中毒新生儿窒息肺功能不全高山缺氧心肌炎及儿窒息肺功能不全高山缺氧心肌炎及心绞痛的急救药或辅助药
• 细胞内95%以上的能量来自线粒体。
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一、线粒体的形态
个人观点供参考，欢迎讨论！
向内突起形成嵴 内膜与嵴的内表面遍布着基粒
• 膜间腔：含多种可溶性酶、底物和辅助因子。
• 基质腔：含线粒体DNA，核糖体及各种酶类
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五、线粒体的半自主性
• 线粒体具有自身的遗传物质mtDNA， 可编码37个基因，其中13个编码蛋白 质。
• 具自身的核糖体、有蛋白质合成系统
• mtDNA的复制、转录所需的酶、构成 线粒体核糖体的蛋白质都是由核DNA 编码、在细胞质中合成运进线粒体的。
• 线粒体是细胞的供能中心。
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真核细胞中碳水化合物代谢俯瞰 15
三 羧 酸 循 环
16
化学渗透假说 17
基粒-合成ATP的关键部位
葡萄糖、氨基
酸等在基质腔
分解脱H+和电
子，电子通过
内膜传递促使
“H+”质子泵
入膜间腔，通
过基粒返回在
其头部合成ATP
基粒合成ATP的过程
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线粒体的超微结构
• 外膜：光滑平整 • 内膜：高蛋白膜、电子传递链有关的酶类
同时线粒体遗传系统受控于细胞核遗传系同时线粒体遗传系统受控于细胞核遗传系2324间壁分离间壁分离收缩分离收缩分离出芽分裂出芽分裂25一一线粒体基因突变与疾病线粒体基因突变与疾病母系遗传及各种外界因素的影响母系遗传及各种外界因素的影响线粒体脑肌病线粒体脑肌病二线粒体中某些组分的治疗作用二线粒体中某些组分的治疗作用细胞色素细胞色素cc已被作为一氧化碳中毒新生已被作为一氧化碳中毒新生儿窒息肺功能不全高山缺氧心肌炎及儿窒息肺功能不全高山缺氧心肌炎及心绞痛的急救药或辅助药
• 细胞内95%以上的能量来自线粒体。
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一、线粒体的形态
液泡系和线粒体的活体染色及观察课件PPT
线粒体是细胞内重要的细胞器，线粒体内膜上分布有细胞色素氧化酶，该酶能使詹姆斯绿B保持在氧化状态，呈现蓝绿色从而使线粒体
显液色泡， 系而和细线胞粒质体⑷中的的活染体料染在被色还及高原观成察倍无色镜。 下，先观察根尖部分的生长点的细胞，可见 细胞质中散在很多大小不等的染成玫瑰红色的圆形小泡， Ringer溶液混匀，装入棕色瓶备用。
三、实验用品
（一）器材 显微镜、恒温水浴锅、解剖盘、剪刀、镊 子、双面刀片、载玻片、凹面载玻片、盖 玻片、表面皿、吸管、牙签、吸水纸等。
（二）试剂
1、Ringer 溶液
氯化钠0.85g（变温动物用0.65g） ；氯化钾 0.25g ；
氯化钙 0.03g ；蒸馏水
100ml
2、10%、1/3000中性红溶液
1、线粒体是细胞进行呼吸作用的场所，其形态和 数量虽不同物种、不同组织器官和不同的生理 状态而发生变化。
1）人口腔粘膜上皮细胞线粒体的超活染色与观察
⑴取清洁载玻片放在37℃恒温水浴锅的金属板上， 滴2滴1/5000詹纳斯绿B染液。
四、实验步骤
⑵实验者用牙签宽头在自己口腔颊部粘膜处稍用 力刮取上皮细胞，将第一次刮下的粘液状物洗 去，将第二次刮下的粘液状物放入载玻片的染液 滴中，染色10～15min（注意不可使染液干燥， 必要时可再加滴染液），盖上盖玻片，用吸水纸 吸去四周溢出的染液，置显微镜下观察。 ⑶在低倍镜下，选择平展的口腔上皮细胞，换高 倍镜或油镜进行观察。可见扁平状上皮细胞的核 周围胞质中分布着一些被染成蓝绿色的颗粒状或 短棒状的结构，即线粒体。
2．液泡系的超活染色与观察
中性红为弱碱性.染料，对液泡系（即高 尔基体）的染色有专一性，只将活细胞中的 液泡系染成红色，细胞核与细胞质完全不着 色，这可能是与液泡中某些蛋白质有关。
显液色泡， 系而和细线胞粒质体⑷中的的活染体料染在被色还及高原观成察倍无色镜。 下，先观察根尖部分的生长点的细胞，可见 细胞质中散在很多大小不等的染成玫瑰红色的圆形小泡， Ringer溶液混匀，装入棕色瓶备用。
三、实验用品
（一）器材 显微镜、恒温水浴锅、解剖盘、剪刀、镊 子、双面刀片、载玻片、凹面载玻片、盖 玻片、表面皿、吸管、牙签、吸水纸等。
（二）试剂
1、Ringer 溶液
氯化钠0.85g（变温动物用0.65g） ；氯化钾 0.25g ；
氯化钙 0.03g ；蒸馏水
100ml
2、10%、1/3000中性红溶液
1、线粒体是细胞进行呼吸作用的场所，其形态和 数量虽不同物种、不同组织器官和不同的生理 状态而发生变化。
1）人口腔粘膜上皮细胞线粒体的超活染色与观察
⑴取清洁载玻片放在37℃恒温水浴锅的金属板上， 滴2滴1/5000詹纳斯绿B染液。
四、实验步骤
⑵实验者用牙签宽头在自己口腔颊部粘膜处稍用 力刮取上皮细胞，将第一次刮下的粘液状物洗 去，将第二次刮下的粘液状物放入载玻片的染液 滴中，染色10～15min（注意不可使染液干燥， 必要时可再加滴染液），盖上盖玻片，用吸水纸 吸去四周溢出的染液，置显微镜下观察。 ⑶在低倍镜下，选择平展的口腔上皮细胞，换高 倍镜或油镜进行观察。可见扁平状上皮细胞的核 周围胞质中分布着一些被染成蓝绿色的颗粒状或 短棒状的结构，即线粒体。
2．液泡系的超活染色与观察
中性红为弱碱性.染料，对液泡系（即高 尔基体）的染色有专一性，只将活细胞中的 液泡系染成红色，细胞核与细胞质完全不着 色，这可能是与液泡中某些蛋白质有关。
医学 细胞生物学 线粒体 公开课课件
• 线粒体功能部位的标志酶: • 外膜——单胺氧化酶 • 内膜——细胞色素氧化酶 • 膜间腔——腺苷酸激酶 • 基质——苹果酸脱氢酶
第三节 线粒体的功能
Function of mitochondrion
• 线粒体是细胞氧化的中心和动力站。其主要功能 是氧化磷酸化，合成ATP。
• 通过对三大营养物质（糖、脂肪、氨基酸）有氧 氧化释放能量，并将能量通过ADP磷酸化，储存于 ATP中，以ATP形式提供细胞生命活动所需能量的 95%以上。
﹛ 食物
糖 脂肪
蛋白质
单糖 糖
脂肪酸+甘油 酵 解
氨基酸
丙酮酸 线 粒 体
消化道内
细胞内 ATP
细胞氧化及其基本过程(Cell oxidation and its basic process)
• 细胞氧化：生物体从外界吸收O2，将细胞内各种 能源物质氧化分解，放出CO2和H2O，释放能量，供 生命活动的需要，又称细胞呼吸。
(五）基粒（elementary particle）
• 在内膜或嵴膜上存在许多与膜面垂直的带柄的球 形小体，由头、柄、基片三部分组成。又称为ATP 酶复合体，是线粒体功能发挥的关键结构。
基片：又称F0因子或F0-ATPase， 是镶嵌于内膜（嵴）脂双分子层 中的疏水蛋白复合体，由多亚基 组成，形成一个跨膜的质子通道 。其周围有呼吸链。是将氧化过 程中所释放的能量传递到头部催 化ADP 磷酸化生成ATP的中转站。
(五）基粒（elementary particle）
• 在内膜或嵴膜上存在许多与膜面垂直的带柄的球 形小体，由头、柄、基片三部分组成。又称为ATP 酶复合体，是线粒体功能发挥的关键结构。
柄部：连接头部（F1）和基片（ F0）的结构。有对寡霉素敏感的 蛋白（OSCP），作用是使F1因子 对寡霉素敏感，从而抑制ATP合 成。
线粒体-课件(PPT-精)
Hot
Shock
Protein
热休克蛋白Hsp（主要的分子伴侣） 体外Hsp70 解折叠 腔內Hsp60、mHsp70 重折叠、组装
防止相互作用产生凝聚或错误折叠
识别蛋白质解折叠后暴露出的疏水面并与之结合
MPP 线粒体加工肽酶 PEP 加工增强性蛋白 磷酸转运蛋白
Processing Enhancing Protein Phospholipid Exchange Protein
电子转运复合物
破坏线粒体内膜后，可分离出4种膜蛋 白复合物。线粒体中氧化过程是由这四种 膜蛋白复合物相继作用来完成的。
电子转运复合物 复合物I（质子泵）
• 即NADH脱氢酶 • 催化１对电子从NADH传递给泛醌，每传一 递１对电子，伴随４个质子从基质转移到 膜间隙
电子转运复合物 复合物II
• 即琥珀酸-辅酶Q还原酶 • 琥珀酸脱氢酶有两种，一种是以泛醌作为 受体的，另一种是作用于所有受体。 • 催化从琥珀酸来的１对低能电子经FAD和 Fe-S傳递给泛醌，使FADH2上的电子通过 还原泛醌进入呼吸链中。
电子载体
• 细胞色素 一种带有含铁血红素辅基而对可见光 具有特征性强吸收的蛋白。 血红素中的铁通过Fe3+和Fe2+两种状态 的变换,传递单个电子。
电子载体
• 铁硫蛋白 一类含非血红素铁的蛋白质。 在铁硫蛋白分子的中央结合的是铁和硫， 称为铁硫中心。最常见的是在蛋白质的中 央含有2个铁原子和2个硫原子或含有4个铁 和4个硫，分别称为[2Fe-2S]和[4Fe-4S]。 也是靠Fe3+和Fe2+两种状态的转换传递电子。
相原和
都 是 疏 水 性 分 子
都 具 有 氧 化 还 原 作 用
植物细胞液泡系和线粒体染色.ppt
实验九植物细胞液泡系和线粒体染色一.实验目的1.学习并了解线粒体和液泡系超活染色的基本原理、方法和注意事项；2.学习如何观察动、植物活细胞内线粒体、液泡系的形态、数量与分布。
3.学习并掌握线粒体和液泡系的超活染色技术。
4.了解植物细胞液泡系的发育过程。
二.实验原理活体染色是指对生活有机体的细胞或组织能着色但又无毒害的一种染色方法。
它的目的是显示生活细胞内的某些结构，而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞的死亡。
活染技术可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。
根据所用染色剂的性质和染色方法的不同，通常把活体染色分为体内活染与体外活染两类。
体内活染是以胶体状的染料溶液注入动、植物体内，染料的胶粒固定、堆积在细胞内某些特殊结构里，达到易于识别的目的。
体外活染又称超活染色，它是由活的动、植物分离出部分细胞或组织小块，以染料溶液浸染，染料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。
活体染料之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部分，主要是染料的“电化学”特性起重要作用。
碱性染料的胶粒表面带阳离子，酸性燃料的胶粒表面带阴离子，而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子，这样，它们彼此之间就发生了吸引作用。
但不是任何染料皆可以作为活体染色剂之用，应选择那些对细胞无毒性或毒性较小的染料，而且总是要配成稀淡的溶液来使用。
一般是以碱性染料最为适用，可能因为它具有溶解在类脂质（如卵磷脂、胆固醇等）的特性，易于被细胞吸收。
詹姆斯绿B（Janus green B）和中性红（neutral red）两种碱性染料是活体染色剂中最重要的染料，对于线粒体和液泡系的染色各有专一性。
三.实验用品1.器材显微镜、恒温水浴锅、解剖盘、剪刀、镊子、双面刀片、载玻片、凹面载玻片、盖玻片、表面皿、吸管、牙签、吸水纸。
2.试剂⑴Ringer 溶液氯化钠0.85g（变温动物0.65g）氯化钾0.25g氯化钠0.03g蒸馏水100ml⑵10%、1/3000中性红溶液称取0.5中性红溶于50ml Ringer溶液，稍加热（30~40）使之很快溶解，用滤纸过滤，装入棕色瓶于暗处保存，否则易氧化沉淀，失去染色能力。
实验五线粒体和液泡系的超活染色与观察ppt课件
细胞线粒体的超活染色与察看 1/5000詹纳斯绿Ｂ溶液１-2滴，洋葱鳞茎内表皮，
载玻片于37℃恒温水浴染色10-15min，显微镜下 察看． 〔二〕 小麦幼根根尖液泡系的中性红染色察看 初生小麦幼苗根尖〔１－２cm〕纵切面切片， 1/3000中性红溶液１滴染色5-10min，载玻片于 37℃恒温水浴，盖上盖玻片压扁根尖，显微镜下
三、实验用品
1. 器材： 显微镜、恒温水浴锅、、剪刀、镊子、解剖 刀、 载玻片、盖玻片、吸管、牙签、吸水纸
2. 试剂： Ringer液、1/5000詹纳斯绿Ｂ、1/3000中性红
3. 资料：洋葱鳞茎内表皮细胞、小麦幼根根尖
称取50mg詹纳斯绿B溶于5mL Ringer溶液中，稍加微热 〔30～40℃〕，使之溶解，用滤纸过滤后，即为1％原液。取1％原 液l mL参与49mL Ringer溶液，即成1/5000任务液装入瓶中备用。 最好现用现配，以坚持它的充沛氧化才干。
五、作业
绘出他所察看到的液泡及线粒体并简要分析
所 用的染料普通为碱性染料。由于它具有溶解在类脂质 〔如卵磷脂、胆固醇等〕的特性，易于被细胞吸收。 詹纳斯绿 〔Janus green B〕和中性红 〔neutral red〕是常用
的碱性染料。 詹纳斯绿Ｂ可专注性地对对线粒体进展活染,这是由于线粒体
内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料一直坚持氧化形状 〔即有色形状〕, 呈蓝绿色。 中性红对液泡系的染色具有专注性，将活细胞中的液泡系染 成红色。
实验五 线粒体和液泡系的超活染色与察看
杭州师范大学 刘姬艳
一、实验目的
1.察看动、植物活细胞内线粒体、液泡 系的形状、数量与分布；
2.学习一些细胞器的超活染色技术
二、实验原理
活体染色是运用无毒或毒性较小的染色剂真实地显示 活细胞内某些构造而又很少影响细胞生命活动的一种染色 方法。
载玻片于37℃恒温水浴染色10-15min，显微镜下 察看． 〔二〕 小麦幼根根尖液泡系的中性红染色察看 初生小麦幼苗根尖〔１－２cm〕纵切面切片， 1/3000中性红溶液１滴染色5-10min，载玻片于 37℃恒温水浴，盖上盖玻片压扁根尖，显微镜下
三、实验用品
1. 器材： 显微镜、恒温水浴锅、、剪刀、镊子、解剖 刀、 载玻片、盖玻片、吸管、牙签、吸水纸
2. 试剂： Ringer液、1/5000詹纳斯绿Ｂ、1/3000中性红
3. 资料：洋葱鳞茎内表皮细胞、小麦幼根根尖
称取50mg詹纳斯绿B溶于5mL Ringer溶液中，稍加微热 〔30～40℃〕，使之溶解，用滤纸过滤后，即为1％原液。取1％原 液l mL参与49mL Ringer溶液，即成1/5000任务液装入瓶中备用。 最好现用现配，以坚持它的充沛氧化才干。
五、作业
绘出他所察看到的液泡及线粒体并简要分析
所 用的染料普通为碱性染料。由于它具有溶解在类脂质 〔如卵磷脂、胆固醇等〕的特性，易于被细胞吸收。 詹纳斯绿 〔Janus green B〕和中性红 〔neutral red〕是常用
的碱性染料。 詹纳斯绿Ｂ可专注性地对对线粒体进展活染,这是由于线粒体
内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料一直坚持氧化形状 〔即有色形状〕, 呈蓝绿色。 中性红对液泡系的染色具有专注性，将活细胞中的液泡系染 成红色。
实验五 线粒体和液泡系的超活染色与察看
杭州师范大学 刘姬艳
一、实验目的
1.察看动、植物活细胞内线粒体、液泡 系的形状、数量与分布；
2.学习一些细胞器的超活染色技术
二、实验原理
活体染色是运用无毒或毒性较小的染色剂真实地显示 活细胞内某些构造而又很少影响细胞生命活动的一种染色 方法。
细胞生物学的研究技术和方法线粒体活体染色与观察
含有不同亲本细胞核的融合细胞
自然融合 人工诱导融合
物理 化学
生物
细胞融合技术是研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤
等的重要手段，尤其对单克隆抗体及细胞去分化
的研究开拓了一条新的途径
细胞组分的分离纯化技术 细胞组分的分级分离 cell fractionation 根据细胞内各种结构的比重和大小等不同，在同 一离心场内的沉降速度也不同的原理，用不同介 质或不同转速的离心，将细胞内各组分分级分离 出来，并进行分析的方法。
二、实验原理 线粒体上的细胞色素氧化酶系可保持詹纳斯绿B 染料始终处于氧化状态而呈绿色。 活体染色： 应用无毒或毒性较小的染色剂显示活细胞内 某些天然结构，是对细胞生命活动影响较小的 一种染色方法。
实验步骤
（点击图片查看详细介绍）
2008级临床K4班学生实验结果
20min
四、注意事项 1. 取材部位及力度； 2. 盖片的技巧； 3. 染液干后的处理。
实验室规则 1 #############。 2 #########。 3 ############。 4 ############# ######。 5 #############。 6 ######### 7 #########
实验室安全注意事项
1. 2. 3. 4. 实验完成后检查水电； 实验动物回收焚烧：填表责任制； 了解化学试剂毒性和安全使用规则； 突发情况处理及逃生，如各种原因起 火分别用关电闸、盖布、打开门窗、 报警，及其他突发情况，依次离开实 验室及大楼等。
组织匀浆Байду номын сангаас
差速离心
基本步骤
分级分离 密度梯度离心
分析
用细胞化学法或生物化学的 方法分析、鉴定得到的细胞 组分
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细胞生物学的研究技术和 方法线粒体活体染色和观
察
医学细胞生物学实验
李 姣 （吴明松） 1号综合楼2-25室 TEL：8609692
E-mail: 270378076@qq.aom
细胞生物学与遗传学教研室 2014.11～2014.12
细胞生物学的研究技术和方法线粒体活
体染色和观察
2
实验课要求
1. 预习；
细胞内过氧化物酶的原位显示 细胞有丝分裂的观察
设计性实验报告汇报及指导
动物细胞融合 细胞核的分离与鉴定
细胞生物学的研究技术和方法线粒体活
体染色和观察
5
第一次实验 Ⅰ 细胞生物学的研究技术和方法 Ⅱ 线粒体活体染色与观察
细胞生物学的研究技术和方法线粒体活
体染色和观察
6
I 细胞生物学的研究技术和方法
相差显微镜 phase contrast microscope 观察活细胞的微细结构和变化
细胞生物学的研究技术和方法线粒体活
体染色和观察
9
暗视野显微镜 dark field microscope
反差大、分辨力高（0. 04μm) 观察活细胞内细胞器以及液体介质中的细菌和真菌 等的存在和运动
细胞生物学的研究技术和方法线粒体活
体染色和观察
4
本学期实验教学进度安排
第一次 (验证性)
第二次 (验证性)
第三次 (验证性)
第四次 (验证性)
第五次 (设计性)
第六次 (设计性)
细胞生物学研究技术和方法 线粒体的活体观察
细胞内酸性蛋白和碱性蛋白的原位显示 细胞内DNA和RNA的原位显示
细胞膜的通透性观察 小白鼠腹腔巨噬细胞吞噬活动的观察
显微结构 microscopic structure 在光学显微镜下所观察到的细胞结构
亚微结构 submicroscopic structure 细胞内小于0.2μm的细微构造，通常 使用各种电子显微镜进行观察
细胞生物学的研究技术和方法线粒体活
体染色和观察
8
普通光学显微镜 light microscope，LM 最大分辨力一般为0.2μm 染色后可观察线粒体、中心体、细胞核等结构
细胞形态结构研究技术
显微观察 亚显微观察
细胞的培养技术
细胞组分的分离纯化技术
分级分离技术 层析法 电泳法
细胞和亚细胞组分的测定
细胞化学法 荧光细胞化学法 放射自显影技术
细胞生物学的研究技术和方法线粒体活
体染色和观察
7
细胞形态结构研究技术
分辨力（率） resolution 显微镜或人眼在25cm的明视距离处能够区分相近 两点最小距离的能力。
细胞生物学的研究技术和方法线粒体活
体染色和观察
14
细胞融合技术 细胞融合 cell fusion 又称为细胞杂交，指细胞彼此接触时，两个或两个 以上的细胞合并形成一个细胞的现象。
含有同一亲本细胞核的融合细胞 含有不同亲本细胞核的融合细胞
同核体 homokaryon
异核体 heterokaryon
2. 穿白大衣并扣好；
3. 认真操作；
4. 爱护仪器；
5. 保持卫生；
6. 保持安静。
实验室规则 1 #############。 2 #########。 3 ############。
4 ############# ######。
5 #############。
6 #########
7 #########
根据细胞内各种结构的比重和大小等不同，在同 一离心场内的沉降速度也不同的原理，用不同介 质或不同转速的离心，将细胞内各组分分级分离 出来，并进行分析的方法。
细胞生物学的研究技术和方法线粒体活
体染色和观察
18
组织匀浆
基本步骤 分级分离
差速离心 密度梯度离心
分析
用细胞化学法或生物化学的
方法分析、鉴定得到的细胞
细胞生物学的研究技术和方法线粒体活
体染色和观察
22
碱性蛋白显示
酸性蛋白显示
细胞生物学的研究技术和方法线粒体活
体染色和观察
23
I 细胞生物学的研究技术和方法
细胞形态结构研究技术
显微观察 亚显微观察
细胞的培养技术
细胞组分的分离纯化技术
分级分离技术 层析法 电泳法
细胞和亚细胞组分的测定
细胞化学法 荧光细胞化学法 放射自显影技术
组分
细胞生物学的研究技术和方法线粒体活
体染色和观察
19
差速离心
细胞生物学的研究技术和方法线粒体活
体染色和观察
20
密度梯度离心
细胞生物学的研究技术和方法线粒体活
体染色和观察
21
细胞和亚细胞组分的测定
细胞化学法 cytochemical method
在保持细胞结构的基础上，利用某些化学物质可 与细胞内某种成分发生化学反应，在局部范围形 成有色沉淀物（或电子密度高的物质）的原理， 对细胞的化学成分进行定性、定位和定量的研究。
细胞生物学的研究技术和方法线粒体活
体染色和观察
10
荧光显微镜 fluorescence microscope
光源——紫外线 细胞荧光化学，特别是免疫荧光技术中的重要工具， 可观察细胞或标本中的荧光现象
细胞生物学的研究技术和方法线粒体活
体染色和观察
11
透射电子显微镜 TEM
分辨力达0.08nm 观察细胞内部结构
二维平面图像
扫描电子显微镜 SEM
细胞生物学的研究技术和方法线粒体活
体染色和观察
3
实验室安全注意事项
1. 实验完成后检查水电； 2. 实验动物回收焚烧：填表责任制； 3. 了解化学试剂毒性和安全使用规则； 4. 突发情况处理及逃生，如各种原因起
火分别用关电闸、盖布、打开门窗、 报警，及其他突发情况，依次离开实 验室及大楼等。
细胞生粒体活
体染色和观察
16
自然融合 人工诱导融合
物理 化学 生物
细胞融合技术是研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤 等的重要手段，尤其对单克隆抗体及细胞去分化 的研究开拓了一条新的途径
细胞生物学的研究技术和方法线粒体活
体染色和观察
17
细胞组分的分离纯化技术
细胞组分的分级分离 cell fractionation
分辨力一般在3nm 观察细胞（样本）表面形貌
三维立体图像
细胞生物学的研究技术和方法线粒体活
体染色和观察
12
细胞生物学的研究技术和方法线粒体活
体染色和观察
13
细胞的培养技术
细胞培养 cell culture 细胞在体外的培养技术，即在无菌条件下，从机体 中取出组织或细胞，模拟机体内正常生理状态下生 存的基本条件，让它在培养器皿中继续生存、生长 和繁殖的方法。
察
医学细胞生物学实验
李 姣 （吴明松） 1号综合楼2-25室 TEL：8609692
E-mail: 270378076@qq.aom
细胞生物学与遗传学教研室 2014.11～2014.12
细胞生物学的研究技术和方法线粒体活
体染色和观察
2
实验课要求
1. 预习；
细胞内过氧化物酶的原位显示 细胞有丝分裂的观察
设计性实验报告汇报及指导
动物细胞融合 细胞核的分离与鉴定
细胞生物学的研究技术和方法线粒体活
体染色和观察
5
第一次实验 Ⅰ 细胞生物学的研究技术和方法 Ⅱ 线粒体活体染色与观察
细胞生物学的研究技术和方法线粒体活
体染色和观察
6
I 细胞生物学的研究技术和方法
相差显微镜 phase contrast microscope 观察活细胞的微细结构和变化
细胞生物学的研究技术和方法线粒体活
体染色和观察
9
暗视野显微镜 dark field microscope
反差大、分辨力高（0. 04μm) 观察活细胞内细胞器以及液体介质中的细菌和真菌 等的存在和运动
细胞生物学的研究技术和方法线粒体活
体染色和观察
4
本学期实验教学进度安排
第一次 (验证性)
第二次 (验证性)
第三次 (验证性)
第四次 (验证性)
第五次 (设计性)
第六次 (设计性)
细胞生物学研究技术和方法 线粒体的活体观察
细胞内酸性蛋白和碱性蛋白的原位显示 细胞内DNA和RNA的原位显示
细胞膜的通透性观察 小白鼠腹腔巨噬细胞吞噬活动的观察
显微结构 microscopic structure 在光学显微镜下所观察到的细胞结构
亚微结构 submicroscopic structure 细胞内小于0.2μm的细微构造，通常 使用各种电子显微镜进行观察
细胞生物学的研究技术和方法线粒体活
体染色和观察
8
普通光学显微镜 light microscope，LM 最大分辨力一般为0.2μm 染色后可观察线粒体、中心体、细胞核等结构
细胞形态结构研究技术
显微观察 亚显微观察
细胞的培养技术
细胞组分的分离纯化技术
分级分离技术 层析法 电泳法
细胞和亚细胞组分的测定
细胞化学法 荧光细胞化学法 放射自显影技术
细胞生物学的研究技术和方法线粒体活
体染色和观察
7
细胞形态结构研究技术
分辨力（率） resolution 显微镜或人眼在25cm的明视距离处能够区分相近 两点最小距离的能力。
细胞生物学的研究技术和方法线粒体活
体染色和观察
14
细胞融合技术 细胞融合 cell fusion 又称为细胞杂交，指细胞彼此接触时，两个或两个 以上的细胞合并形成一个细胞的现象。
含有同一亲本细胞核的融合细胞 含有不同亲本细胞核的融合细胞
同核体 homokaryon
异核体 heterokaryon
2. 穿白大衣并扣好；
3. 认真操作；
4. 爱护仪器；
5. 保持卫生；
6. 保持安静。
实验室规则 1 #############。 2 #########。 3 ############。
4 ############# ######。
5 #############。
6 #########
7 #########
根据细胞内各种结构的比重和大小等不同，在同 一离心场内的沉降速度也不同的原理，用不同介 质或不同转速的离心，将细胞内各组分分级分离 出来，并进行分析的方法。
细胞生物学的研究技术和方法线粒体活
体染色和观察
18
组织匀浆
基本步骤 分级分离
差速离心 密度梯度离心
分析
用细胞化学法或生物化学的
方法分析、鉴定得到的细胞
细胞生物学的研究技术和方法线粒体活
体染色和观察
22
碱性蛋白显示
酸性蛋白显示
细胞生物学的研究技术和方法线粒体活
体染色和观察
23
I 细胞生物学的研究技术和方法
细胞形态结构研究技术
显微观察 亚显微观察
细胞的培养技术
细胞组分的分离纯化技术
分级分离技术 层析法 电泳法
细胞和亚细胞组分的测定
细胞化学法 荧光细胞化学法 放射自显影技术
组分
细胞生物学的研究技术和方法线粒体活
体染色和观察
19
差速离心
细胞生物学的研究技术和方法线粒体活
体染色和观察
20
密度梯度离心
细胞生物学的研究技术和方法线粒体活
体染色和观察
21
细胞和亚细胞组分的测定
细胞化学法 cytochemical method
在保持细胞结构的基础上，利用某些化学物质可 与细胞内某种成分发生化学反应，在局部范围形 成有色沉淀物（或电子密度高的物质）的原理， 对细胞的化学成分进行定性、定位和定量的研究。
细胞生物学的研究技术和方法线粒体活
体染色和观察
10
荧光显微镜 fluorescence microscope
光源——紫外线 细胞荧光化学，特别是免疫荧光技术中的重要工具， 可观察细胞或标本中的荧光现象
细胞生物学的研究技术和方法线粒体活
体染色和观察
11
透射电子显微镜 TEM
分辨力达0.08nm 观察细胞内部结构
二维平面图像
扫描电子显微镜 SEM
细胞生物学的研究技术和方法线粒体活
体染色和观察
3
实验室安全注意事项
1. 实验完成后检查水电； 2. 实验动物回收焚烧：填表责任制； 3. 了解化学试剂毒性和安全使用规则； 4. 突发情况处理及逃生，如各种原因起
火分别用关电闸、盖布、打开门窗、 报警，及其他突发情况，依次离开实 验室及大楼等。
细胞生粒体活
体染色和观察
16
自然融合 人工诱导融合
物理 化学 生物
细胞融合技术是研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤 等的重要手段，尤其对单克隆抗体及细胞去分化 的研究开拓了一条新的途径
细胞生物学的研究技术和方法线粒体活
体染色和观察
17
细胞组分的分离纯化技术
细胞组分的分级分离 cell fractionation
分辨力一般在3nm 观察细胞（样本）表面形貌
三维立体图像
细胞生物学的研究技术和方法线粒体活
体染色和观察
12
细胞生物学的研究技术和方法线粒体活
体染色和观察
13
细胞的培养技术
细胞培养 cell culture 细胞在体外的培养技术，即在无菌条件下，从机体 中取出组织或细胞，模拟机体内正常生理状态下生 存的基本条件，让它在培养器皿中继续生存、生长 和繁殖的方法。