柱色谱和薄层色谱----预习报告
薄层色谱、柱色谱、纸色谱
西北农林科技大学薄层色谱柱色谱纸色谱化学与药学院有机化学教研室实验目的目录/CONTENTS 实验原理实验内容思考题01020304学习和掌握用薄层色谱法、柱色谱法、纸色谱法分离有机化合物的基本原理和实验技术。
色谱法的基本原理是利用混合物中各组分在某一物质中的吸附或溶解性能（即分配）的不同，或其他亲和作用性能的差异，使混合物的溶液流经该种物质，进行反复的吸附或分配等作用，从而将各组分分开。
流动的混合物溶液称为流动相；固定的物质称为固定相。
薄层色谱是把吸附剂或支持剂铺在玻璃或铝箔上，将样品点在其上，然后用溶剂展开，使样品中各组分相互分离的方法。
柱色谱是在一根玻璃管或金属管中进行的色谱技术，将吸附剂填充到管中使之成为柱状，混合样品加在色谱柱的上端，流动相从色谱柱顶端流经色谱柱从而将各组分分开。
纸色谱是以滤纸为支持物的色谱方法，原理比较复杂，一般认为属于分配色谱。
用薄层色谱法分离和鉴定醛酮制板洗净晾干4块载玻片备用；称取2克硅胶G倒入烧杯中，加入0.5%羧甲基纤维素钠溶液5-6 mL，充分搅拌，调成适宜的均匀糊状物，立即按湿铺法铺制薄层板，平放，晾干备用。
用薄层色谱法分离和鉴定醛酮点样在距薄板底端约1cm处，用铅笔轻轻画一条与底边平行的直线，并确定各样品点样位置。
然后分别用毛细管吸取香草醛溶液、茴香醛溶液、二者的混合溶液进行点样，样点直径小于3mm，三个样点之间的距离约0.7cm，距薄层两边距离约0.5cm，晾干。
样点点样线用薄层色谱法分离和鉴定醛酮展开和显色用上行法展开，待展开剂上升到距顶端1cm处时取出，用铅笔画出溶剂前沿，稍等，待溶剂挥发而未干时，喷洒0.4%2,4-二硝基苯肼溶液，有橙色斑点显示。
溶剂前沿用薄层色谱法分离和鉴定醛酮测量比移值（R f ）用铅笔将所有斑点的轮廓描出来，并确定出各斑点的重心位置，该点即为斑点位置。
分别量出点样点到溶剂前沿、各斑点位置的距离，按照R f 值定义计算各斑点的Rf 值。
色谱法(薄层色谱和柱色谱)
＞ 卤代烃、醚 ＞ 芳香烃 ＞ 烯 ＞ 环烷烃 ＞ 烷烃
二. 实验原理和实验技术
薄层色谱（TLC，薄层层析） 薄层色谱（TLC，薄层层析） 展开剂的选择：
选择展开剂时，要考虑样品各组分的极性、溶解度和吸附活性等因素。 一般情况下，溶剂的展开能力与溶剂的极性成正比。 溶剂的极性大 溶剂对化合物的解吸能力强 Rf 值大
二. 实验原理和实验技术
柱色谱 吸附柱色谱的工作原理： • 在色谱柱中填入表面积很大、经过活化的多孔 性粉状固体吸附剂（硅胶、氧化铝）。 • 分离的混合物溶液流过吸附柱时，各种成分同 时被吸附在柱的上端。 • 当洗脱剂流下时，由于不同化合物吸附能力不 同，往下洗脱的速度也不同，即溶质在柱中自 上而下按对吸附剂亲和力大小分别形成若干色 带。 • 再用溶剂洗脱时，已经分开的溶质可以从柱上 分别洗出收集。
四. 实验步骤
若松紧不均，特别是有断层时，影响流速和 色带的均匀，但如果装柱时过分敲击，色谱 柱色谱 当柱内溶剂或溶液液面流至固体中，就会 柱填装过紧，又使流速太慢。 使柱身干裂，影响渗滤和显色的效果。 （1）装柱（湿法） 安装好色谱柱（垂直），以50mL锥形瓶作洗脱液的接受器。向柱内倒入 （2）展开和洗脱 滴管尽量接近滤纸慢慢滴加入， 95%乙醇至柱高3/4处，打开活塞，控制滴出速度为l滴/秒，收集滴下的溶剂， 以避免将氧化铝溅起。 取甲基橙和亚甲基蓝溶液各4滴于一小试管内，混匀备用。 通过干燥的长颈玻璃漏斗慢慢加入15g中性氧化铝。用橡皮塞或手指轻轻敲打 △，使填装紧密均匀，不断补充乙醇（收集的），勿使氧化铝柱层变干， 柱身当溶剂液面下降至与滤纸面相近时 (勿使滤纸变干△)，关闭活塞，用长的 滴管将上述混合液小心△加入柱顶，打开活塞，当液面下降与滤纸相近时，关 关 让溶剂保持流动一段时间，至氧化铝顶部不再下降，将一张内径略小滤纸盖在 闭活塞，再小心加入2mL95%乙醇， 2mL95%乙醇 闭活塞，再小心加入2mL95%乙醇，重复上述操作两次，然后小心加入足量95% 氧化铝层顶部，以保护氧化铝层平面。 乙醇，打开活塞，使滴下速度为1～2滴/秒。蓝色的亚甲基蓝首先向柱子下端 移动，甲基橙则留在柱子上端。当蓝色的亚甲基蓝快从柱子里流出时，更换一 甲基橙 亚甲基蓝 个接受器立即计量收集 (用量筒)。继续洗脱，至滴出液体近无色为止（即蓝 色液全部流出后），再换一接受器，改用水洗脱至橙色的液体开始滴出，用另 一接受器计量收集被洗脱甲基橙水溶液，直至无色为止。这样两种组分就被分 开了。实验结束后，将氧化铝从柱顶倒置倒出，把柱子洗净归还。
柱色谱和薄层色谱
3、显色
凡可用于纸色谱的显色剂都可用于薄层色谱。薄层色谱还可使用腐蚀性的显色剂如浓硫酸、
浓盐酸和浓磷酸等。对于含有荧光剂（硫化锌镉、硅酸锌、荧光黄）的薄层板在紫外光下观
察，展开后的有机化合物在亮的荧光背景上呈有色斑点。也可用卤素斑点试验法来使薄层色
3
谱斑点显色。本实验样品本身具有颜色，不必在荧光灯下观察。
3、鉴定化合物 在条件完全一致的情况，纯碎的化合物在薄层色谱或纸色谱中都呈现一定
的移
学 动距离，称比移值（Rf 值），所以利用色谱法可以鉴定化合物的纯度或确定两种性
大 质相似的化合物是否为同一物质。但影响比移值的因素很多，如薄层的厚度，吸附剂颗粒的
大小，酸碱性，活性等级，外界温度和展开剂纯度、组成、挥发性等。所以，要获得重现的
化 洗脱液。待蓝色色带分离出来后，最后用冰醋酸洗脱，分离出黄色的色带。 学 六、实验关键及注意事项：
1、点样时，各样点间距 1—1.5cm，样点直径应不超过 2mm，
大 2、柱层析时，柱子要致密紧实，无气泡。 昌 七、实验结果
偶氮苯的 Rf 值＝4.3cm/5.4cm＝0.796
南 苏丹Ⅲ的 Rf 值＝2.2cm/5.4cm＝0.407
薄层色谱的展开，需要在密闭容器中进行。为使溶剂蒸气迅速达到平衡，可在展开槽内衬一
滤纸。在层析缸中加入配好的展开溶剂，使其高度不超过 1cm。将点好的薄层板小心放入层
析缸中，点样一端朝下，浸入展开剂中。盖好瓶盖，观察展开剂前沿上升到一定高度时取出，
尽快在板上标上展开剂前沿位置。晾干，观察斑点位置，计算 Rf 值。
实验名称:柱色谱、薄层色谱
一、实验目的
1、了解色谱法分离提纯有机化合物的基本原理和应用。 2、掌握柱层析、薄层层析的操作技术。
薄层色谱法实验报告
薄层色谱法实验报告
撰写时间：2023年5月
一、实验目的
本实验旨在熟悉薄层色谱（TLC）的原理，掌握TLC分析的步骤及操
作方法，用TLC技术分析指定药物样品中的组分，了解TLC方法的优越性。
二、原理
薄层色谱是一种微量分析技术，它利用高效液相色谱柱（TLC）的特点，将待分析样品在含有吸附剂的硅胶玻璃板上加以分析的技术。
样品在
硅胶玻璃板表面形成一个均匀的紧密层，经过注入一定量的浸液，通过管
升使浸液在表面上移动，当浸液含有离子的时候，将样品吸附和分离，样
品形成一条条的拖把形渗出线，被称为拖把线。
由于样品迁移速度不同，
拖把线之间也会出现差异，根据迁移距离的不同可以用荧光染料、紫外线
检测等方法对样品进行检测分析。
三、试剂
(1)硅胶玻璃板、（2）吸附剂（3）浸液（4）荧光染料（5）溶液（6）标准品。
四、实验步骤
1.准备样品：在清洁的硅胶玻璃板上，使用量筒和包络刀把样品放在
指定位置，加入活性炭（粉末），用包络刀将活性炭和样品紧密地混合搅拌，灌入溶剂搅拌，得到溶解液。
2.吸附剂处理：在硅胶玻璃板上膜的样品处加入吸附剂。
薄层色谱和柱层析
色谱系统 展开方式 流速控制 平衡时间 分析样品 样品量 板高（μ m） 有效板数 检测方式 溶剂用量 溶剂更换 固定相
12:25:49
薄层色谱与HPLC的对比 薄层色谱 HPLC 开放式 闭路 展开 洗脱 吸附剂的毛细管作用 由泵调节 短 不定 可同时分析多个 每次一个样品 高 低 30 2～ 5 < 600 ～5000 静态 动态 少 多 易 难 一次弃去 重复使用
12:25:49
薄层色谱中，Rf值与组分的分配系数K值有关：
K=Cs/CM =溶质在固定相中浓度/溶质在流动相中浓度
若该组分的移动距离为d1，流动相移动距离为dm ,
d2=dm－d1 Rf =d1/dm=d1/(d1+d2)
如果组分的分配系数大，则在水中分配量大，移动距离小， Rf小。因此，K与d1、d2有如下关系：
（ Ⅵ ）具有可逆的吸附性，既能吸附样品组分，又易于解析 （ Ⅶ ）为便于观察分离结果，吸附剂最好为白色。
常用的吸附剂有硅胶、氧化铝、聚酰胺、硅酸镁、而 CaO 、 MgO、Ca(OH)2、Mg(OH)2、CaSO4、Ca3(PO4)2、Mg3(PO4)2、 淀粉、蔗糖等，或因碱性太大，或吸附性太弱，用途有限，活 性炭因吸附性太强和黑色，使应用受到限制。
12:25:49
（Ⅲ）样品的极性 物质的极性愈大，氧化铝和硅胶吸附愈牢，物质极性大小 如下： 饱和烃 < 不饱和烃 < 醚 < 酯 < 醛 < 酮 < 胺< 羟基化合物 < 酸和碱 吸附太牢也不易分离，如果硅胶、氧化铝吸附性太强，可 掺入不同比例的硅藻土，或其它低吸附性物质。 （3）常用吸附剂 硅胶： 105～110℃ 活化，但不能高于170℃ 。 氧化铝：180～200 ℃活化
柱层析和薄层层析实验报告
柱层析和薄层层析实验报告篇一：柱层析实验报告柱层析分离色素一、【实验目的】1．了解柱层析的分类，掌握各种柱层析的原理。
2．熟练掌握吸附层析的原理和操作技术。
二、【实验原理】叶绿体色素是植物吸收太阳光能进行光合作用的重要物质，主要有叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素和叶黄素组成。
从植物叶片中提取和分离叶绿体色素是对其认识和了解的前提。
利用叶绿体色素能溶于有机溶剂的特性，可用95%乙醇或无水乙醇提取。
分离色素的方法有多种，如纸层析、柱层析等。
柱层析法是色谱法中的一种，它是根据混合物中各组分对固定相的吸附能力，以及对洗脱剂（即移动相）的溶解度不同将各组分分离。
常用的柱色谱有吸附色柱谱和分配柱色谱两类。
吸附柱色谱通常是在玻璃管中填入表面积很大，经过活化的多孔性物质或粉状固体作为吸附剂（如氧化铝或硅胶），当混合物的溶液流经吸附柱时，就被吸附在柱的上端，然后从柱顶加入溶剂（洗脱剂）洗脱。
由于不同化合物在吸附柱上的吸附能力不同，在同一溶剂中的溶解度也不同，因此各组分随溶剂以不同速度下移，形成色带。
继续用溶剂洗脱，吸附能力最弱的组分就随溶剂首先流出，整个层析过程进行反复的吸附-解析-再吸附-再解吸。
用柱层析法可以分别收集各组分，并逐个鉴定。
本实验是把三氧化二铝填入玻璃管中（压成柱状）作为吸附剂，将叶绿体色素的石油醚提取液倾于吸附柱上，色素即被吸附。
由于色素的种类不同，被吸附的强弱不同，就在吸附柱上排列成为不同的色层，再利用吸附剂在不同溶剂中有不同的吸附力，用不同的溶剂进行洗脱，从而达到叶绿体主要的4种色素（叶绿素a、叶绿素b、叶黄素、胡萝卜素）的分离。
三、【实验材料】原料：新鲜的菠菜叶试剂：1．无水乙醇或95%乙醇 5.三氧化二铝2．石英砂6．饱和氯化钠溶液3．丙酮7.水硫酸钠4．石油醚（60-90℃）8洗脱液：丙酮：石油醚＝1：9 器材：层析柱（1×30cm），研钵，蒸馏装置，脱脂棉，天平，烧杯，过滤漏斗，玻璃棒，锥形瓶，分液漏斗，试管，铁架台四、【实验操作】1．色素的提取：20克菠菜，加少许石英砂，再加20毫升无水乙醇研磨成浆，脱脂棉过滤，保存滤液，滤渣再用无水乙醇提取一次，合并滤液，滤渣再加入30毫升石油醚提取一次，过滤，合并滤液，转移至分液漏斗中,再加入40毫升饱和氯化钠溶液震荡，弃去下层溶液，再分别加入20毫升水震荡洗涤几次，直至下层无色，保留上层溶液，转移至三角瓶中，加入无水硫酸钠干燥5分钟，备用.2．样品的浓缩：将提取液放入蒸馏烧瓶中，蒸除多余的石油醚，至剩余液体5-8毫升左右，以备加样使用。
柱层析和薄层层析实验报告
柱层析和薄层层析实验报告实验目的：1.了解柱层析和薄层层析的原理和方法；2.掌握柱层析和薄层层析的操作技能；3.熟悉柱层析和薄层层析在不同化合物分离和纯化过程中的应用。
实验原理：柱层析是基于分子在固体填充柱层析柱中的分配系数不同，使得溶液中的化合物能够以不同的速率通过柱层析柱，并在柱中相互分离的一种技术。
薄层层析是将待检样品加载在薄层层析板上，通过毛细作用使得样品在薄层上上升，并在薄层上相互分离的一种技术。
实验仪器和试剂：柱层析仪、薄层层析仪、柱层析柱、薄层层析板、溶液样品、色谱柱填充物、色谱溶剂、染色剂等。
实验步骤：1.柱层析（1）将填充好色谱柱的柱层析仪放置于实验台上并连接好流动相系统；（2）用适当的色谱溶剂预洗柱层析柱；（3）将样品加入柱层析柱并开启流动相系统，实时监测溶液流出；（4）根据溶液流出的情况和实验要求，采集柱层析柱流出的不同组分。
2.薄层层析（1）准备薄层层析板，标记好起点；（2）在薄层层析板上加载待测样品，并使其干燥；（3）将薄层层析板置于薄层层析仪中，并加入适当的色谱溶剂，使其与薄层层析板产生足够的接触；（4）升级薄层层析板，使样品在薄层上上升；（5）取出薄层层析板，根据实验要求，在带有紫外光源下观察色谱斑点，并记录下色谱斑点的相对迁移距离。
实验结果：1.柱层析实验结果展示了分离出的不同组分的溶液，并标记了每个组分的相对迁移时间和相对含量；2.薄层层析实验结果展示了在薄层上分离出的样品斑点，并根据相对迁移距离判断样品的相对含量和分离效果。
实验讨论：1.柱层析和薄层层析在实验过程中的优缺点；2.实验结果是否符合预期，若不符合预期，可能的原因和改进方法；3.模拟实际应用场景，讨论柱层析和薄层层析在不同化合物分离和纯化过程中的应用。
实验结论：通过本次实验，我们掌握了柱层析和薄层层析的原理和实验方法，熟悉了柱层析和薄层层析的操作技能。
柱层析和薄层层析是分离和纯化化合物常用的技术手段，在生物医药、食品安全等领域都有广泛应用。
薄层色谱和柱色谱实验报告
薄层色谱和柱色谱实验报告实验名称：薄层色谱和柱色谱实验目的：了解薄层色谱和柱色谱的基本原理和应用，掌握样品准备、修饰介质的选择、溶剂系统的优化和色谱分离技术的基本操作方法。
实验原理：1.薄层色谱原理：薄层色谱是利用物质在其固、液相之间的分配作用而进行分离的一种色谱方法。
在底片上涂上液相，待液相挥干后，在底片上成薄层状（约为0.2mm之厚）液相，然后在高温、低压的条件下进行分离。
它主要应用于化合物分离和检验、药物分离和分析等领域。
2.柱色谱原理：柱色谱是把某种固体颗粒填充于管柱内部，然后加入适当的流动相使待检样品浸泡在固定颗粒中并与固相上的不同物质发生不同程度的相互作用，从而实现样品的分离和纯化。
柱色谱主要应用于化合物分离、提纯和分析等领域。
实验步骤：1.薄层色谱：(1) 将样品用氯仿、乙酸乙酯等溶剂溶解。
(2) 取薄层色谱板，用细针在距离底端约0.5cm的位置上标记一个起始线，用相同距离的标记在另一侧标上终止线。
(3) 在起始线处使用毛刷将样品溶液均匀地涂在一个小片内，使样品呈现均匀的带状。
(4) 将板放在暗处让涂层彻底干燥，然后将板放入色谱槽，加入开发剂。
(5) 在开发剂移行至终止线前，拿出板晾干并进行显色。
在显色后，用各种方法对相应的化合物进行鉴定和鉴别。
2.柱色谱：(1) 将柱子放入固定支架中，并用滴管加入几滴洗涤液进行洗涤，直至所有洗涤液从柱子底部滴出。
(2) 用吸管将样品溶液加入柱子中，并用滴管加入移动相。
(3) 将收集瓶放在柱子下方，并向柱子中加入移动相，使溶液垂直流过柱子，直至柱子底部没有液体时停止收集。
(4) 将收集物送入旋转蒸发器中，将其浓缩至一定程度后进行结晶或涂层。
实验结果：1.薄层色谱：通过实验我们了解到了薄层色谱对于化合物分离和检验等方面的应用。
在实验中，我们成功的运用了薄层色谱法来完成了对某些化合物的分离和鉴别。
2.柱色谱：通过实验我们了解到了柱色谱对于化合物分离、提纯和分析等方面的应用。
柱色谱和薄层色谱实验
3、展开与显谱：
先将以环己烷：乙酸乙酯=6：1为展开 剂倒入方形染色缸中，加盖饱和5min，使 缸内充满展开剂蒸气。
然后迅速将薄板点样一端浸入展开剂 中，但样品点不可浸入，封盖。
约跑30min后，展开剂的前沿跑到薄板 的3/4时，将薄板取出，并用铅笔划出前沿， 晾干。确定斑点中心，测量，计算三个Rf 值。
由于吸附剂对不同组分有不同的 吸附能力，流动相也有不同的解吸能 力，因此，在流动相向前移动的过程 中，不同的组分移动不同的距离而形 成了互相分离的斑点。
三、实验步骤及注意事项：
（观看录像）
1、铺பைடு நூலகம்：
2、点样：
在离薄板底边约1cm处，用铅笔轻轻 地划一条线，并划上A，B两点，用毛细 管蘸取样品点于点上（A为苏丹Ⅲ溶液，B 为苏丹Ⅲ-偶氮苯混合液），风干，样点扩 散直径不得超过2~3mm。
实验十八 薄层色谱
一、目的与要求： 1、了解薄层色谱的基本原理及其一 般的操作技术。 2、学习用吸附薄层色谱法分离染料 混合物。
二、基本原理
薄层色谱可分为分配色谱和吸附色谱 本实验采用（固－液）吸附色谱。
固体吸附剂是在玻璃板上铺成均匀的 薄层，用毛细管将样品点在板的一端，把 板放在合适的流动相（展开剂）里，流动 相带着混合物组分以不同的速率沿板移动， 即组分被吸附剂不断地吸附，又被流动相 不断地解吸而向前移动。
薄层色谱 计算三个Rf值
注意事项：
1、因比色管中溶液为易挥发的苯，在点 完样后需把盖子盖上。点完样后，毛细 管应放回原试管中，不可放错。 2、点样时不可留下较深的洞穴。 3、一个方形染色缸中只可放入一块薄板。
实验 柱色谱
一、目的与要求：
1、了解柱色谱的基本原理及其一般 的操作技术。
实验十 薄层色谱和柱色谱
实验十薄层色谱和柱色谱1.实验目的①了解薄层色谱和柱色谱的基本原理；②学习用薄层色谱和柱色谱分离、纯化有机化合物的技术2.实验原理①色谱法是分离、提纯和鉴定有机化合物的重要方法之一。
其基本原理是利用混合物中各组分在某一物质中的吸附或溶解性能的不同，或其它亲和作用性能的差异，使混合物的溶液流经该物质时进行反复的吸附或分配等作用，从而将各组分分开。
流动的混合物溶液称为流动相；固定的物质称为固定相(可以是固体或液体)。
根据组分在固定相中的作用原理不同，可分为吸附色谱、分配色谱等。
吸附色谱常用氧化铝和硅胶作固定相；分配色谱中以硅胶、硅藻土和纤维素作为支持剂，以吸收较大量的液体作固定相，而支持剂本身不起分离作用。
根据操作条件不同，可分为柱色谱、纸色谱、薄层色谱、气相色谱及高效液相色谱等类型。
②薄层色谱：薄层色谱属于固-液吸附色谱，是一种微量的分离分析方法，具有设备简单、速度快、分离效果好、灵敏度高以及能使用腐蚀性显色剂等优点。
适用于小量样品(几到几十微克，甚至0.01µg的分离。
此法特别适用于挥发性较小或者在较高温度易发生变化而不能用气相色谱分析的物质。
其可分为吸附色谱和分配色谱。
由于不同组分被固定相吸附程度不同，在流动相中溶解程度不同，因此，不同组分移动的距离不同，因而形成了互相分离的斑点R f=溶质的最高浓度中心至原点中心的距离溶剂前沿至原点中心的距离薄层色谱用的吸附剂和支持剂：薄层色谱常用的吸附剂或支持剂是硅胶或氧化铝。
薄层色谱用的硅胶分为硅胶H不含粘合剂；硅胶G含煅石膏做粘合剂；硅胶HF-254含荧光物质，可在波长254nm紫外光下观察荧光；硅胶GF-254含有煅石膏和荧光剂。
薄层色谱用的氧化铝也分为氧化铝G、氧化铝GF254及氧化铝HF254。
薄层板的制备：简易平铺法，如称取约3g硅胶G，加入到67mL 0.5%的羧甲基纤维素钠水溶液中，调成均匀的糊状物(可铺78张载玻片)。
这一步一定要将吸附剂逐渐加入到溶剂中，边加边搅拌；如果把溶剂加到吸附剂中，容易产生结块。
有机化学实验-薄层色谱实验报告(总结报告范文模板)
有机化学实验薄层色谱实验报告【实验目的】学习薄层层析的基本原理和分离鉴别有机化合物的操作方法。
【实验重点和难点】学习薄层色谱法的原理及方法。
【实验类型】基础性【实验学时】4学时【实验装置和药品】主要实验仪器：4块显微载玻片 50mL烧杯分液漏斗布氏漏斗研钵烘箱吸管玻璃板点样毛细管、大头针、直尺、玻棒无水硫酸钠主要化学试剂：95%乙醇石油醚（60-900C）丙酮乙酸乙酯菠菜叶0.5%羧甲基纡维素钠(CMC)水溶液硅胶G【实验装置图】【实验原理】薄层色谱（thin layer chromatography，缩写TLC）薄层色谱又叫薄板层析，是快速分离和定性分析少量物质的一种很重要的实验技术，属固-液吸附色谱，它兼备了柱色谱和纸色谱的优点，一方面适用于少量样品（几到几微克，甚至0.01微克）的分离；另一方面在制作薄层板时，把吸附层加厚加大，又可用来精制样品，此法特别适用于挥发性较小或较高温度易发生变化而不能用气相色谱分析的物质。
此外，薄层色谱法还可用来跟踪有机反应及进行柱色谱之前的一种“预试”。
薄层层析法是一种微量快速的分析分离方法。
它具有灵敏、快速准确等优点。
薄层层析的原理和柱层析一样，属于固一液吸附层析的类型。
通常是把吸附剂放在玻璃板上成为一个薄层，是为固定相，以有机溶剂作为流动相。
实验时，把要分离的混合物滴在薄层析的一端，用适当的溶剂展开，当溶剂流经吸附剂时，由于各物质被吸附的强弱不同，就以不同的速率随着溶剂移动。
展开一定时间后，让溶剂停止流动，混合物中各组分就停留在薄层析上显示出一个个色斑的色谱图。
若各组分无色，可喷洒一定的显色剂使之显色。
它是利用混合物中各组分在某一物质中的吸附或溶解性能（即分配）的不同，或其它亲和作用性能的差异，使混合物的溶液流经该种物质，进行反复的吸附或分配等作用，从而将各组分分开。
它是近年来发展起来的一种微量快速而简单的色谱法，它兼备了柱色谱和纸色谱的优点。
最典型的薄层色谱法是在一块洗净干燥的玻璃片上均匀铺上一薄层吸附剂，制成薄层板。
薄层色谱法实验报告
薄层色谱法实验报告薄层色谱法实验报告引言：薄层色谱法（Thin Layer Chromatography，TLC）是一种常用的分离和鉴定化合物的方法。
其原理是利用物质在固定相（薄层）和流动相（溶剂）之间的分配和移动差异，实现对混合物中化合物的分离。
本实验旨在通过薄层色谱法对某种未知化合物进行分离和鉴定。
实验材料和仪器：- 薄层色谱板- 未知化合物溶液- 标准溶液- 液相色谱仪- 显色剂- 注射器- 色谱柱- 移液枪实验步骤：1. 准备薄层色谱板：将薄层色谱板剪成适当大小，并在底部标记出起点线。
2. 准备样品：将未知化合物溶液和标准溶液分别用注射器吸取，滴在薄层色谱板的起点线上。
3. 开展色谱：将薄层色谱板放入液相色谱仪中，选择适当的流动相，启动仪器，使流动相在薄层色谱板上上升。
4. 观察色谱带：当流动相上升到适当高度时，取出薄层色谱板，用显色剂喷洒在上面，观察出现的色谱带。
5. 计算Rf值：测量色谱带的迁移距离和起点线至色谱带的距离，计算出Rf值。
6. 鉴定未知化合物：将未知化合物的Rf值与标准溶液的Rf值进行对比，确定未知化合物的成分。
结果与讨论：在实验中，我们成功地进行了薄层色谱法的分离和鉴定。
观察色谱带后发现，未知化合物在薄层色谱板上呈现为多个色谱带，而标准溶液只出现一个色谱带。
通过计算Rf值，我们发现未知化合物的Rf值与标准溶液中某一化合物的Rf值相近，推测未知化合物可能含有该化合物。
然而，由于薄层色谱法的分离效果受多种因素影响，如流动相的选择、色谱板的质量等，因此我们的推测仍需进一步确认。
在今后的实验中，我们可以尝试使用不同的流动相和色谱板，以提高分离效果和鉴定准确性。
结论：薄层色谱法是一种简单、快速、经济的分离和鉴定化合物的方法。
通过本实验，我们成功地利用薄层色谱法对某种未知化合物进行了分离和鉴定，并初步推测其成分。
然而，为了提高实验的准确性和可靠性，我们需要进一步优化实验条件，并进行更多的验证实验。
柱色谱,薄层色谱
柱色谱,薄层色谱实验项目名称: 柱色谱和薄层色谱一、实验目的:1.了解色谱法分离提纯有机化合物的基本原理和应用.2.掌握柱层析, 薄层层析的操作技术.二、实验基本原理(或主、副反应式)色谱法的基本原理是利用混合物各组分在某一物质中的吸附或溶解性能分配的不同,或其亲和性的差异,使混合物的溶液流经该种物质进行反复的吸附或分配作用,从而使各组分分离.色谱法在有机化学中的应用主要包括分离混合物，精致提纯化合物，鉴定化合物，观察一些反应是否完成等等;吸附色谱主要以氧化铝、硅胶等为吸附剂，将一些物质自溶液中吸附到它的表面，而后用溶剂洗脱或展开，利用不同化合物受到吸附剂的不同吸附作用，和它们在溶剂中不同的溶解度，也就是利用不同化合物在吸附剂和溶液之间的分布情况不同而得到分离。
吸附色谱分离课可采用柱色谱和薄层色谱两种方式。
三、主要试剂及主、副产物的物理常数(列举实验所涉及的主要物质与试剂需要的物理常数就可以)溶解度:克/100ml溶剂沸点分子熔点名称性状量 (?) (?) 水醇醚偶氮橙色片状不溶溶溶 182.2 68 293 苯晶体苏丹棕色粉末不溶溶溶 232 ?荧光黄红色至红不溶溶不溶 332.3 320 黄色粉末四、主要试剂规格及用量薄层色谱:样品1:1%偶氮苯的苯溶液，样品2: 1%苏丹?的苯溶液，样品3:以上两者的混合物;展开剂;9:1的无水苯—乙酸乙酯，硅胶G薄层板。
柱色谱:荧光黄(1mg)和次甲基蓝(1mg)溶于1ml 95%乙醇溶液、中性氧化铝(100—200目)、石英砂;洗脱剂;95%的乙醇，冰醋酸。
五、实验装置图见纸质预习报告上面的图示六、实验简单操作步骤A薄层色谱:1. 硅胶G薄层板的制备;2.点样，先用铅笔在薄层板一端1cm处轻轻划一横线作为起始线，然后用毛细管吸取样品，在起始线上小心点样，斑点直径一般不超过2mm，点样要轻，不可刺破薄层;3.显色，在层析缸中加入配好的展开剂，其高度不超过1cm。
仪器分析实验. 预习报告答案(1)
一取代基电效应对芳烃吸收带的影响1、紫外吸收光谱是由何种跃迁产生的？有哪几种跃迁类型？分为哪几个吸收带？电子能级跃迁,振动,转动能级跃迁紫外吸收光谱是带状光谱，分子中存在一些吸收带已被确认，其中有K带、R带、B带、E1和 h E2带等，电子跃迁类型有：（1）σ→σ* 跃迁指处于成键轨道上的σ电子吸收光子后被激发跃迁到σ*反键轨道（2）n→σ* 跃迁指分子中处于非键轨道上的n电子吸收能量后向σ*反键轨道的跃迁（3）π→π* 跃迁指不饱和键中的π电子吸收光波能量后跃迁到π*反键轨道。
（4）n→π* 跃迁指分子中处于非键轨道上的n电子吸收能量后向π*反键轨道的跃迁。
2、什么叫紫外吸收曲线，特点？什么叫助色团、发色团，并列举，什么叫助色效应？吸收光谱又称吸收曲线，以波长为横坐标，以吸收光度A为纵坐标，所绘制的物质吸光度光强随波长变化的曲线特点：有吸收峰，吸收谷，肩峰末端吸收发色基:凡是能在一段光波内产生吸收的基团,就称为这一波段的生色基/发色团/发色基团.紫外光谱的生色基一般是碳碳共轭结构,含杂原子的共轭结构,能进行n-π*跃迁的基团,能进行n-σ*跃迁并在近紫外区能吸收的原子或基团.常见的生色团有C=C-C=C,C=O,-COOH,C=C,Ph-,-NO2,-CONH2,-COCl,-COOR等助色基团：紫外吸收光谱中，助色团是指含有非成键N电子的杂原子饱和基团，它们本身在紫外可见光范围内不产生吸收，但当它们与生色团或饱和烃相连时，能使该生色团的吸收峰向长波方向移动，并使吸收强度增加的基团。
如-OH-、-NR2、-OR、-SH、-SR、-CL、-BR、-I等。
3、苯的紫外吸收光谱是怎样的？有哪几个吸收带？有何特点？苯在紫外光区有两个π→π*跃迁的吸收带，λ=203nm的E2吸收带和λ=256nm的B吸收带。
其中B吸收带具有精细结构，它是由波长为230~267nm的7组吸收峰所组成。
B吸收带是芳香族化合物的特征吸收带。
柱色谱和薄层色谱----预习报告
预习报告一、实验名称：薄层色谱和柱色谱二、实验目的：1、学习薄层色谱和柱色谱技术的原理和应用2、掌握薄层色谱和柱色谱分离技术和操作要点。
3、掌握如何正确的配置展开剂三、实验原理：色谱法的基本原理，是利用混合物各组分在固定相和流动相中分配平衡常数的差异。
简单地说就是，当流动相流经固定相时，由于固定相对各组分的吸附或溶解性能的不同，使吸附力较弱或溶解度较小的组分在固定相中移动的速度较快，在多次反复平衡过程中导致各组分在固定相中形成了分离的“色带”，从而得到分离。
四、主要试剂规格及用量1%禺氮苯的甲苯溶液，1以苏丹山的甲苯溶液，1%勺愈甲基纤维素钠（CMC水溶液，硅胶G,立即比为9:1的甲苯-乙酸乙酯。
五、实验装置图（见实验记录本）六、实验步骤（一）薄层色谱实验步骤：1、薄层板的制备（此实验中不考虑，有直接的可用）2、取两块薄层板，分别在距一端1cm处用铅笔轻轻地画一条线，作为起始线。
用分别两根毛细管，分别取偶氮苯、苏丹甲苯溶液和其混合液放在起始线上，取两个样点，且两样点相距1到1.5厘米，且样点的直径不超过2毫米。
如果样点颜色太浅，可以等其变干后在重复几次。
3、用上述的甲苯-乙酸乙酯作为展开剂，待样点干燥后，小心放入已加入展开剂的广口瓶中，点样一端应进入展开剂0.5cm ,盖好瓶盖，观察实验现象，观察展开剂前沿上升至离板的上端1cm处取出，尽快用铅笔在展开剂上升的前沿处划一记号，比较两者的Rf值的大小。
(二)柱色谱实验步骤1、在色谱柱上端放一个干燥的漏斗，将吸附剂倒入其中，并轻轻的敲打色柱柱身使其填充均匀，然后加入洗脱剂湿润。
2、当溶剂下降到吸附剂表面时立即开始使用色谱柱，用滴管把样品溶液转移到上色谱柱中，并用少量溶剂分几次洗涤柱壁上所沾试液，直至无色。
样品加完后，打开下旋塞，使样品进入石英砂层后，再加入洗脱剂进行洗脱。
3、在分有色物质是，直接观察到分离后的“色带”，然后用洗脱剂将分离后的“色带”依次白柱中洗脱出来，再用适宜的溶剂将溶质萃取出来。
薄层色谱与柱色谱实验报告
薄层色谱与柱色谱实验报告薄层色谱与柱色谱实验报告引言：薄层色谱和柱色谱是常见的分离和分析技术，广泛应用于化学、生物、医药等领域。
本实验旨在通过对两种色谱技术的实验比较，探讨它们的原理、优缺点以及适用范围。
一、薄层色谱实验1. 实验原理：薄层色谱是一种基于分子在固定相和流动相之间的分配行为进行分离的技术。
在薄层色谱实验中，我们将待分离的混合物在薄层平面上涂抹，并将其浸入流动相中，通过分子在固定相和流动相之间的分配行为，实现混合物的分离。
2. 实验步骤：首先，我们准备好薄层色谱板和待分离的混合物溶液。
然后，将薄层色谱板放入色谱槽中，使其与流动相接触。
接下来，将混合物溶液涂抹在薄层色谱板上，然后将其放入色谱槽中，使其与流动相接触。
最后，观察薄层色谱板上的色斑，并进行分析和比较。
3. 实验结果与讨论：通过观察薄层色谱板上的色斑，我们可以得到不同成分的迁移距离，并计算出它们的Rf值。
Rf值是指某一组分的迁移距离与流动相前进距离之比，是判断组分相对亲疏水性的重要指标。
通过比较不同组分的Rf值，我们可以得出它们的相对亲疏水性，从而实现混合物的分离和鉴定。
二、柱色谱实验1. 实验原理：柱色谱是一种基于分子在固定相和流动相之间的分配行为进行分离的技术。
在柱色谱实验中，我们将待分离的混合物通过柱装填有固定相的柱子，通过分子在固定相和流动相之间的分配行为，实现混合物的分离。
2. 实验步骤：首先，我们准备好柱子和待分离的混合物溶液。
然后，将混合物溶液注入柱子中，使其与固定相接触。
接下来，通过流动相的加入，使混合物在柱子中进行分离。
最后，观察柱子中的色斑，并进行分析和比较。
3. 实验结果与讨论：通过观察柱子中的色斑，我们可以得到不同成分的保留时间，并计算出它们的保留因子。
保留因子是指某一组分在固定相和流动相之间分配的程度，是判断组分在柱子中停留时间的重要指标。
通过比较不同组分的保留因子，我们可以得出它们的相对亲疏水性，从而实现混合物的分离和鉴定。
薄层色谱及柱色谱
4.两相中，相对固定不动的一相称为固定相，移动的一相称为流动相。
三、色谱法的分类
LOGO
按其操作不同，可分为薄层色谱、柱色谱、纸色谱、气相色谱和高效 液相色谱。
（1）薄层色谱：将固定相均匀涂布在表面光滑的平板上，形成薄层来进 行物质分离及分析的方法。
按其作用原理不同，可分为吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱和凝 胶渗透色谱。
（1）吸附色谱：利用吸附剂对不同组分吸附能力的不同加以分离的方法。
（2）分配色谱：利用不同组分在流动相和固定相中的分配系数不同而进 行分离的方法。
（3）离子交换色谱：利用离子交换剂与各组分之间的离子亲和 力不同而 进行层析分离的方法。
待糊状物全部装完后，用接收到的洗脱剂转移残留的固 定相，并将柱壁上的固定相淋洗下去。
装柱过程中，应不断轻敲色谱柱，以使固定相填充均匀、 无气泡！
整个装柱过程中，柱内洗脱剂的高度始终不能低于固定 相最上端，否则柱内会出现裂痕和气泡！
五、柱色谱
LOGO
（3）干法装柱： 在色谱柱顶端放一干净干燥的漏斗，将干燥的吸附剂（固定相）倒入漏
（4）凝胶渗透色谱：利用不同组分之间分子大小不同，在通过凝胶介质 时所受到的阻滞作用的差异而进行分离的方法。
四、薄层色谱
LOGO
薄层板的制备
点样
展开
显色，计算、分析
1.薄层板的制备：
（1）固定相的选择：
吸附色谱：
氧化铝、硅胶
分配色谱的支持剂：硅藻土、纤维素
？HF254
GF254
（H——不含黏合剂） （F——含荧光物质） （G——含煅石膏2CaSO4·H2O黏合剂)
柱层析和薄层层析实验报告
柱层析和薄层层析实验报告Pleasure Group Office【T985AB-B866SYT-B182C-BS682T-STT18】柱层析和薄层层析实验报告篇一：柱层析实验报告柱层析分离色素一、【实验目的】1．了解柱层析的分类，掌握各种柱层析的原理。
2．熟练掌握吸附层析的原理和操作技术。
二、【实验原理】叶绿体色素是植物吸收太阳光能进行光合作用的重要物质，主要有叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素和叶黄素组成。
从植物叶片中提取和分离叶绿体色素是对其认识和了解的前提。
利用叶绿体色素能溶于有机溶剂的特性，可用95%乙醇或无水乙醇提取。
分离色素的方法有多种，如纸层析、柱层析等。
柱层析法是色谱法中的一种，它是根据混合物中各组分对固定相的吸附能力，以及对洗脱剂（即移动相）的溶解度不同将各组分分离。
常用的柱色谱有吸附色柱谱和分配柱色谱两类。
吸附柱色谱通常是在玻璃管中填入表面积很大，经过活化的多孔性物质或粉状固体作为吸附剂（如氧化铝或硅胶），当混合物的溶液流经吸附柱时，就被吸附在柱的上端，然后从柱顶加入溶剂（洗脱剂）洗脱。
由于不同化合物在吸附柱上的吸附能力不同，在同一溶剂中的溶解度也不同，因此各组分随溶剂以不同速度下移，形成色带。
继续用溶剂洗脱，吸附能力最弱的组分就随溶剂首先流出，整个层析过程进行反复的吸附-解析-再吸附-再解吸。
用柱层析法可以分别收集各组分，并逐个鉴定。
本实验是把三氧化二铝填入玻璃管中（压成柱状）作为吸附剂，将叶绿体色素的石油醚提取液倾于吸附柱上，色素即被吸附。
由于色素的种类不同，被吸附的强弱不同，就在吸附柱上排列成为不同的色层，再利用吸附剂在不同溶剂中有不同的吸附力，用不同的溶剂进行洗脱，从而达到叶绿体主要的4种色素（叶绿素a、叶绿素b、叶黄素、胡萝卜素）的分离。
三、【实验材料】原料：新鲜的菠菜叶试剂：1．无水乙醇或95%乙醇 5.三氧化二铝2．石英砂 6．饱和氯化钠溶液3．丙酮7.水硫酸钠4．石油醚（60-90℃） 8洗脱液：丙酮：石油醚＝1：9 器材：层析柱（1×30cm），研钵，蒸馏装置，脱脂棉，天平，烧杯，过滤漏斗，玻璃棒，锥形瓶，分液漏斗，试管，铁架台四、【实验操作】1．色素的提取：20克菠菜，加少许石英砂，再加20毫升无水乙醇研磨成浆，脱脂棉过滤，保存滤液，滤渣再用无水乙醇提取一次，合并滤液，滤渣再加入30毫升石油醚提取一次，过滤，合并滤液，转移至分液漏斗中,再加入40毫升饱和氯化钠溶液震荡，弃去下层溶液，再分别加入20毫升水震荡洗涤几次，直至下层无色，保留上层溶液，转移至三角瓶中，加入无水硫酸钠干燥5分钟，备用.2．样品的浓缩：将提取液放入蒸馏烧瓶中，蒸除多余的石油醚，至剩余液体5-8毫升左右，以备加样使用。
色谱法薄层色谱和柱色谱
柱色谱法的操作步骤
样品处理
将待分离样品进行适当处理， 如溶解、稀释等，以便更好地 与固定相相互作用。
洗脱
选择合适的流动相，控制流速， 使各组分依次从固定相中洗脱 出来。
装柱
选择合适的色谱柱，填充固定 相，确保柱子填充均匀、无气 泡。
上样
将处理后的样品加入色谱柱顶 部，控制上样量，避免过载。
检测
对洗脱出来的组分进行检测， 如紫外可见光谱、质谱等，以 确定组分的性质。
通过质谱技术对色谱分离后的组分进行鉴定和结构分析， 提高定性能力。
要点二
色谱-光谱联用（GC-FTIR、LCUV/Vis）
结合光谱技术对色谱分离后的组分进行定性和定量分析， 拓展应用范围。
色谱法在生命科学领域的应用
药物代谢和药物动力学研究
利用色谱法研究药物在体内的吸收、分布、代谢和排泄过程，为新药研发提供有 力支持。
03 柱色谱法
柱色谱法的原理
01
02
03
分离原理
柱色谱法基于不同物质在 固定相和流动相之间的分 配平衡原理，实现混合物 中各组分的分离。
分离过程
当流动相通过固定相时， 各组分在两相之间的分配 达到动态平衡，从而实现 分离。
分离依据
各组分在固定相和流动相 之间的分配系数不同，因 此以不同的速度移动，从 而实现分离。
通过不同组分在固定相上的吸附和解吸过程，实现了各组分的分离。
薄层色谱法的操作步骤
展开
点样
用微量注射器将样品溶液点在薄 层板的起点处，注意控制点样量。
将薄层板放入展开槽中，使流动 相在固定相中展开，不同组分随 流动相移动。
显色
根据各组分的性质选择合适的显 色剂，使各组分显色以便观察。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
预习报告
一、实验名称:薄层色谱和柱色谱
二、实验目的：1、学习薄层色谱和柱色谱技术的原理和应用
2、掌握薄层色谱和柱色谱分离技术和操作要点。
3、掌握如何正确的配置展开剂
三、实验原理：色谱法的基本原理，是利用混合物各组分在固定相
和流动相中分配平衡常数的差异。
简单地说就是，当
流动相流经固定相时，由于固定相对各组分的吸附或
溶解性能的不同，使吸附力较弱或溶解度较小的组分
在固定相中移动的速度较快，在多次反复平衡过程中
导致各组分在固定相中形成了分离的“色带”，从而
得到分离。
四、主要试剂规格及用量
1%偶氮苯的甲苯溶液，1%苏丹Ⅲ的甲苯溶液，1%的羧甲基纤维素钠（CMC）水溶液，硅胶G，立即比为9:1的甲苯-乙酸乙酯。
五、实验装置图（见实验记录本）
六、实验步骤
（一）薄层色谱实验步骤：
1、薄层板的制备（此实验中不考虑，有直接的可用）
2、取两块薄层板，分别在距一端1cm处用铅笔轻轻地画一条
线，作为起始线。
用分别两根毛细管，分别取偶氮苯、苏丹
甲苯溶液和其混合液放在起始线上，取两个样点，且两样点
相距1到1.5厘米，且样点的直径不超过2毫米。
如果样点
颜色太浅，可以等其变干后在重复几次。
3、用上述的甲苯-乙酸乙酯作为展开剂，待样点干燥后，小心
放入已加入展开剂的广口瓶中，点样一端应进入展开剂
0.5cm，盖好瓶盖，观察实验现象，观察展开剂前沿上升至离
板的上端1cm处取出，尽快用铅笔在展开剂上升的前沿处划
一记号，比较两者的Rf值的大小。
（二）柱色谱实验步骤
1、在色谱柱上端放一个干燥的漏斗，将吸附剂倒入其中，
并轻轻的敲打色柱柱身使其填充均匀，然后加入洗脱剂湿
润。
2、当溶剂下降到吸附剂表面时立即开始使用色谱柱，用滴管
把样品溶液转移到上色谱柱中，并用少量溶剂分几次洗涤
柱壁上所沾试液，直至无色。
样品加完后，打开下旋塞，
使样品进入石英砂层后，再加入洗脱剂进行洗脱。
3、在分有色物质是，直接观察到分离后的“色带”，然后用
洗脱剂将分离后的“色带”依次自柱中洗脱出来，再用适
宜的溶剂将溶质萃取出来。
七、注意事项
（1）薄层色谱
1、吸附剂必须均匀地填在柱内，没有气泡、没有裂缝，否则
将影响洗脱和分离。
2、加入沙子的目的是使加料时不致把吸附剂冲起，影响分高
效果。
若无沙子，也可用滤纸覆盖在吸附剂表面。
3、为了保持柱子的均一性，使整个吸附剂浸泡在溶剂或溶液
中是必要的。
否则当柱中溶剂或溶液流干时，就会使柱身干
裂，影响渗滤和显色的效果。
（2）柱色谱
1、制板时，硅胶用水调成刚好能流动的糊状物为佳，勿太浓
或太稀，并即刻铺在层析板上。
做好的层析板应均匀一致，
否则会影响分离效果。
2、待溶剂前沿离层析板顶端仅1~2mm时方能取出，否则色点
分离不完全。
但溶剂不能冲顶，否则色点会扩散而影响分离
效果。