第四章 植物器官培养(2)
植物器官与组织培养-PPT课件
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二、植物茎尖(stem tip culture)培养：
茎尖培养（shoot tip culture）指对植物顶端 的原分生组织和衍生的分生组织的培养。小到10 －100um的茎尖分生组织，大到几十毫米的茎尖 或更大的芽。茎尖培养的成活率与茎尖大小呈正 相关。 茎尖培养广泛应用于种苗快速繁殖，脱毒苗 的生产，品种改良和基础理论研究。快繁可取数 毫米大小，脱病毒培养要求取小于1mm的茎尖。
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A
B
C
E
花烛叶片离体培养及植株再生
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（一）愈伤组织诱导：
诱导接种的叶片外植体脱分化形成愈伤组
织的过程。愈伤组织的形成通常经历诱导期、 分裂期和分化期等阶段。 高浓度生长素及适当浓度的细胞分裂素可 以促进愈伤组织的形成。
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（二）不定芽的分化：
由脱分化形成的愈伤组织细胞分化出不 定芽及不定根的过程。 分化过程受细胞分裂素/生长素比值的 影响。通常添加高浓度的细胞分裂素，降低 生长素浓度以诱导不定芽的形成。
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植物器官和组织培养的基本程序
植物营养器官培养 植物繁殖器官培养 植物组织培养及脱毒苗的生产
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第一节 植物器官和组织培养的基本程 序
基本程序： 一、无菌外植体的获得 二、初代培养物的建立 三、形态发生和植株再生 四、培养产物的观察记载
第四章 器官培养
第四章器官培养植物器官培养主要是指包括离体的根、茎、叶、花器和果实、种子的无菌培养。
以器官作为外植体进行离体培养的植物种类最多，应用的范围也最广，它是植物组织培养中最主要的一个方面。
植物器官培养不仅是研究器官生长、营养代谢、生理生化、组织分化和形态建成的最好材料和方法，而且在生产实践上具有重要的应用价值。
如利用茎、叶和花器培养建立的试管培养物，可在短期内提高繁殖速率，从而实现名、优、特、新品种的快速繁殖；利用茎尖培养可以获得脱毒试管苗，解决品种的退化问题；将植物器官作诱变处理和培养可获得突变株，进行细胞的突变育种。
另外，器官培养也是种质保存的有效手段。
第一节根的培养离体根的培养是进行根系生理和代谢研究最优良的实验体系。
因为根系生长快，代谢强，变异小，加上无菌和不受微生物的干扰，可以通过改变培养基的成分来研究其营养吸收、生长和代谢的变化；在工厂化生物反应器系统中通过工艺调控实现根的大规模培养不受环境和季节的限制，可以随时随地生产离体根的培养物，进行药物、微量活性物质及一系列次生代谢产物的工厂化生产。
另一方面通过根细胞的培养可再生植株，用于生产实践。
一、根无性繁殖系的建立1.外植体根的培养材料一般来自无菌种子发芽产生的幼根或植株根系经消毒处理后的切段。
2.根无性繁殖系的建立将种子消毒后在无菌条件下萌发，待根伸长后从根尖一端切取长1.2cm的根尖（或植株的根系经表面灭菌后）接种于培养基中。
这些根的培养物生长甚快，几天后发育出侧根。
待侧根生长约1周后，即切取侧根的根尖进行扩大培养，它们又迅速生长并长出侧根，又可切下进行培养，如此反复切接就可得到从单个根尖衍生的无性繁殖系。
二、培养方法1.植株的再生培养根离体培养再生出植株的方法是：先诱导离体根形成愈伤组织，再在再分化培养基上诱导芽的分化，进而形成小植株。
如果愈伤组织先分化形成根，则往往抑制芽的形成。
2.固氮培养将具有固氮作用的根瘤菌接种到禾谷类等作物的试管苗根系中，并在诱瘤剂的诱导下使根瘤菌侵入试管苗根部结瘤固氮，从而实现谷物直接利用生物固氮的捷径。
植物器官培养实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 理解植物组织培养的基本原理和操作步骤。
2. 掌握无菌操作技术，包括消毒、接种等。
3. 学习植物器官培养的过程，包括愈伤组织的诱导、分化以及再生植株的形成。
4. 观察并分析植物器官培养过程中的各种现象，加深对植物生长发育机制的理解。
二、实验原理植物组织培养是利用植物细胞的全能性，通过无菌操作将植物器官、组织或细胞在人工控制的培养条件下进行培养，使其生长发育成完整的植株。
实验过程中，植物激素的添加和培养条件的调控对愈伤组织的形成和器官分化起着关键作用。
三、实验材料与试剂1. 实验材料：小麦种子、香蕉叶片、胡萝卜块根。
2. 试剂：70%乙醇、氯化汞、MS培养基、2,4-D、6-BA、蔗糖、琼脂等。
四、实验方法与步骤1. 无菌操作：将实验材料用70%乙醇和氯化汞消毒后，用无菌水冲洗干净，放置在超净工作台上进行接种。
2. 愈伤组织诱导：a. 将小麦种子接种于MS培养基中，添加2,4-D和6-BA，置于培养箱中培养。
b. 将香蕉叶片切成小块，接种于MS培养基中，添加2,4-D和6-BA，置于培养箱中培养。
c. 将胡萝卜块根切成小块，接种于MS培养基中，添加2,4-D和6-BA，置于培养箱中培养。
3. 愈伤组织分化：a. 当愈伤组织形成后，调整培养基中激素比例，诱导愈伤组织分化成根和芽。
b. 将分化出的芽和根接种于新的培养基中，继续培养。
4. 再生植株形成：a. 当芽和根生长到一定程度后，将其移植到土壤中，培养成完整的植株。
五、实验结果与分析1. 愈伤组织诱导：实验结果表明，在不同植物材料中，愈伤组织的诱导效果不同。
小麦种子和香蕉叶片的愈伤组织诱导效果较好，而胡萝卜块根的愈伤组织诱导效果较差。
2. 愈伤组织分化：在调整培养基中激素比例后，愈伤组织分化成根和芽。
小麦种子愈伤组织分化出较多的根和芽，香蕉叶片愈伤组织分化出较多的芽，而胡萝卜块根愈伤组织分化出的根和芽较少。
3. 再生植株形成：将分化出的芽和根移植到土壤中，大部分植株成功生长。
植物组织培养技术第三章第四章植物器官的培养
营养器官的培养——茎尖的培养 营养器官的培养——茎尖的培养
1、 取材 、
取1-2㎝顶梢 ①直接取材：在生长旺盛、枝 直接取材：在生长旺盛、 条健壮、 条健壮、无病的母株上选生 长不久、杂菌污染少的顶梢 长不久、 （1－2cm）（取前可喷杀菌 cm）（取前可喷杀菌 ）（ 药，可顶芽或侧芽）。 可顶芽或侧芽）。 ②从试管苗获取。 从试管苗获取。
第一节 一、离体根的培养 意义： （一） 意义： ①生理代谢研究的优良实验体系 ②研究器官分化形态建成的良好体系 ③建立快速生长的根无性系 ④进行诱变育种 营养器官的培养
营养器官的培养——根的培养 营养器官的培养——根的培养
（二） 培养方法 1. 培养基选择 White培养基；2/3或1/2 MS 和 B5培养基 培养基； 或 培养基 培养基 注：离体根生长要求 提供全部必需元素，蔗糖、硝态氮效果好， 提供全部必需元素，蔗糖、硝态氮效果好，加入 B1、B6最重要 生长素对离体根影响不一致。 最重要， B1、B6最重要，生长素对离体根影响不一致。培养 温度25 27℃，暗光培养。 25－ 温度25－27℃，暗光培养。
离 体 根
脱分化培养基
愈 伤 组 织
再分化培养基
分 化 芽
再 生 植 株
植物器官的培养
二、茎尖的培养
•1.茎尖培养概念及类型 1.茎尖培养概念及类型 1. •2.茎尖培养方法及步骤 2.茎尖培养方法及步骤 2.
营养器官的培养——茎尖的培养 营养器官的培养——茎尖的培养
（一）茎尖培养概念及类型
茎尖培养： 茎尖培养：切取茎的先端部分或茎尖分生组织部分，进行 无菌培养。 茎尖培养根据培养目的和取材大小可分为： 茎尖培养根据培养目的和取材大小可分为： 微茎尖培养: 微茎尖培养 带有1-2个叶原基的生长锥, 其长度不超过0.5mm 普通茎尖培养： 普通茎尖培养：较大的茎尖(如几mm到几十mm)、芽尖及侧芽 这里主要讲普通茎尖培养。这种培养技术简单，操作方便， 茎尖容易成活，成苗所需时间短
植物器官培养
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4、培养的方法和程序
（1）培养基
① 基本培养基 MS、White、 B5、 Heller培养基。 ② 蔗糖作碳源效果好，浓度2－3%。
③ 激素（ 2，4-D，IAA， NAA ）和有机添加物有明显影 响。但激素浓度以0.1mg/L为宜，不要太高。
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茎尖生长状态
生长太慢：茎尖不增大→→变绿→→细胞逐渐老化→→休眠 原因: 生长素浓度太低；温度过低或过高； 生长太快：茎尖迅速增大→→愈伤组织→→丧失成苗能力 原因: 生长素浓度过高；光照太弱或温度太高； 生长正常：茎尖基部稍增大并形成少量愈伤组织，茎尖颜色 逐渐变绿，并伸长，叶原基发育成可见的小叶，
进而形成小苗。
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（2）初代培养条件
每天 光照16h， 光强度1500-30001x， 温度25±2℃
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（3） 继代培养
茎尖长成的新梢→→切成小段→→增殖培养基中→→ 1
个月左右→→新梢又可切成小段→→再转入新培养基
→→建立和维持了茎尖无性系。 （即微型扦插）
继代培养可用MS培养基。
官培养 植 物 器 官 培 养 繁殖器 官培养
根培养 茎培养（ 包括茎尖、茎段） 叶培养（包括叶原基、叶柄、 叶鞘、叶片、子叶）
花培养 （包括花托、花瓣、花丝、 花柄、子房、花药） 种子培养（包括成熟与未成熟） 胚胎培养（包括幼胚、成熟胚、 胚珠、 子房、胚乳培养 ）
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外植体形态发生形成完整植株的途径
通过离体花芽培养可了解整体植物和内源激素在花芽性别
第四章植物器官的培养
第四章植物器官的培养1、器官培养包括离体的根、茎、叶、花器和果实的培养。
以器官作为外植体进行离体培养。
器官培养的意义:研究器官生长、营养代谢、生理生化、组织分化和形态建成在生产实践上具有重要的应用价值,可在短期内提高繁殖速率,进行名贵品种的快速繁殖;利用茎尖培养可得到脱毒试管苗,解决品种的退化问题,提高产量和质量;将植物器官作诱变处理,用器官培养可得到突变株,进行细胞突变育种等。
第一节营养器官的培养一、茎尖的培养茎尖培养是切取茎的先端部分或茎尖分生组织部分,进行无菌培养。
这是组织培养中用得最多的一个取材部位。
茎尖培养根据培养目的和取材大小可分为微茎尖培养和普通茎尖培养。
微茎尖指带有1-2个叶原基的生长锥,其长度不超过0.5mm。
普通茎尖指较大的茎尖(如几mm到几十mm)、芽尖及侧芽。
普通茎尖培养(1)取材: 挑选杂菌污染少,生长不久的茎尖。
(2)消毒接种: 将茎尖切成0.5-1.Ocm长将茎尖置于流水冲洗2-4h在75%的酒精中处理30s在稀释20倍的次氯酸钠中浸5-8min无菌水冲洗数次接种(3)接种: 为了减少污染,可在接种前再剥掉一些叶片,使茎尖为0.5cm左右大小。
(4)培养的方法和程序①培养基多数茎尖培养采用MS作为基本培养基,常用的其他培养基有White,Heller.培养基中生长素:2,4-D,IAA,NAA,浓度一般用0.1mg/L左右,高于此浓度,往往产生畸变芽或形成愈伤组织。
茎尖在培养过程中会出现生长太慢、生长太快和生长正常等三种类型。
生长太慢:接种后茎尖不增大,只是茎尖逐渐变绿,出现绿色小点,细胞逐渐老化而进人休眠状态,或者逐渐变褐死亡。
引起的原因:生长素浓度太低,或是温度过低或过高;生长太快型是接种后茎尖迅速增大,在茎尖基部产生愈伤组织,并迅速增殖,而茎尖不伸长,久之茎尖也形成愈伤组织,从而丧失发育成苗的能力。
引起的原因:一是生长素浓度过高,引起细胞疯狂分裂而导致愈伤组织的形成。
器官培养PPT课件
离体根的培养，由于具有生长迅速、代谢 活跃及在已知条件下可根据需要增减培养基中 的成分等优点，多用于探索植物根系养过程 （图6-1）。番茄种子经表面消毒，在无 菌条件下萌发，待根伸长后，从根尖一 端切取10mm长的根尖接种于培养基中 。
(四)原球茎的增殖
适当的培养基可以提高原球茎的增殖率。
(五)苗的分化与壮苗培养
在原球茎增殖的同时,有可能分化成幼芽， 即可置入生根培养基上培养。
这是大花蕙兰假鳞茎诱导而成的原球茎
徐美玲老师在指导同学们接种
谢谢观看！
一、培养过程
叶片从枝上摘取后，用水冲洗数小时，通 过表面消毒后接种于固体培养基上。叶片在培 养基的生长状况大多依赖于叶子离体时的成熟 程度，一般说来，幼叶比近成熟的叶生长潜力 大。很多植物的叶组织在离体培养条件下先形 成愈伤组织，然后通过愈伤组织再分化出胚状 体、茎、叶和根（图7-2）。
图7-2 由叶组织培养经愈伤组织及胚状体再生植株
的诱导、增殖、成球与生根，培养成了完整植株。
二、培养基
诱导、扩繁和生根培养基大量的用MS培养 基，再加入不同浓度的不同种类的生长素和细 胞分裂素。
这 是 百 合 鳞 茎 诱 导 的 植 株
第三节 叶的培养
很多植物如香叶、天竺葵、秋海棠 等的叶片具有很强的再生能力，由于取 材方便，数量多且均一性较强，为适宜 的外植体。
对离体根培养研究得最多的是胡萝卜， 用White培养基添加的2,4－D和的KT使胡萝卜 肉质根形成愈伤组织。将未分化的愈伤组织 球形细胞转入到含低水平生长素的培养基中， 细胞先形成根，再产生不定芽，长成小植株。 用胡杨的根段进行离体培养，在根段的上面 先形成愈伤组织，后再分化产生出小植株。
生长调节物质对离体根生长的影响，因 植物种或品种的不同而存在差别。如离体根 对生长素的反应有三种情况： 1.生长素促进根的生长（如玉米、小麦等）； 2.有些植物离体根的生长要依赖于生长素的作 用（如黑麦、小麦的一些变种）； 3.生长素抑制植物离体根的生长（如樱桃、番
植物器官培养资料
2020/6/14
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离体根生长的营养要求
1、无机成分 要求培养基中有全部必要元素， 因为它是离体生长所需要的，一般的为MS、B5培 养基。
2、氮源 氮源有铵态氮、硝态氮和可溶性有机 氮如氨基酸或酰胺等，其中以硝态氮的效果最好。 加入含各种氨基酸的水解酪蛋白，能促进离体根 的生长。
3、碳源 以蔗糖的效果最佳，几乎为葡萄糖的10 倍。蔗糖的浓度为2—3%。
3. 培养条件
暗光和温度25-27℃。
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一、离体根的培养
4、根的间接增殖 第一步在脱分化培养基上诱导形成愈伤组织，如胡杨
的根段培养，可诱导形成白色愈伤组织。 第二步在再分化培养基上诱导形成芽的分化，如胡杨
从绿色愈伤组织分化出小植株。
胡 萝 卜 根 培 养
5、培养方式
离体根的培养方式有三种类型。 第一种固体培养法，即将根尖接种在固体培养基
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植物 器官 培养
营养器 官培养
根培养 茎培养（ 包括茎尖、茎段） 叶培养（包括叶原基、叶柄、
叶鞘、叶片、子叶）
繁殖器 官培养
花培养 （包括花托、花瓣、花丝、 花柄、子房、花药）
种子培养（包括成熟与未成熟） 胚胎培养（包括幼胚、成熟胚、 胚珠、
子房、胚乳培养 ）
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外植体形态发生形成完整植株的途径
4、维生素 维生素以B1和B6最为重要，缺少它根 的生长受到阻碍，而加入它可使根的生长成倍的加 快。B1的使用浓度为0.1-1.0mg/L为宜。
5、生长物质 对离体根的生长而言，生长素的效 应最为明显，在一般情况，加入适量的生长素能促 进根的生长，其反应和需要量因植物种而异：
6、温度和光照 黑暗有利于根的形成，温度一般 在16-25℃
植物组织培养 复习资料
第一章绪论植物组织培养类型根据培养材料不同分为：（1）完整植株培养：对幼苗和较大植株等的培养。
（2）胚胎培养：包括成熟胚、幼胚、子房、胚珠等的培养。
（3）器官培养：包括离体根、茎、叶、果实、种子、花器官的培养。
（4）组织培养：如分生组织、薄壁组织、输导组织培养。
（5）细胞培养：指对单细胞或较小的细胞团进行培养。
（6）原生质体培养：指对去掉细胞壁后所获得的原生质体进行培养。
根据再生途径分为：（1）器官发生途径（2）体细胞胚胎发生人工种子：是指植物离体培养产生的胚状体或不定芽被包裹在含有营养和保护功能的人工胚乳和人工种皮中，从而形成能发芽出苗的颗粒体。
作为繁殖材料。
植物组织培养技术的应用：1、优质种苗的快速无性繁殖1）无性繁殖作物及不易繁殖作物的快速繁殖2）通过茎尖培养生产脱毒健康种苗2、用于植物遗传育种包括种质资源离体保存；花粉花药培养产生单倍体；胚乳培养产生三倍体；胚培养拯救杂种胚克服远缘杂交障碍；原生质体培养进行体细胞杂交；植物体细胞无性系变异诱导和筛选；用于植物基因转移操作等。
3、大规模植物细胞、组织和器官培养生产次生代谢物质4、用于植物生长发育理论研究，包括生理学、病理学、胚胎学和细胞与分子生物学等第二章植物组织培养的基本技术组培实验室：包括化学实验室或准备室、接种室以及培养室三部分，并且按顺序排列。
在化学实验室与接种室之间应留有缓冲空间。
（1）准备室：用于培养器皿的清洗、培养基的配制、分装和灭菌、试管苗的出瓶及整理等工作。
冰箱、天平、高压灭菌锅、pH计、干燥箱、实验台、水槽、凉干架、药品柜、离心机、水浴锅、微波炉、电炉、磁力搅拌器、蠕动泵、移液器、各种玻璃器皿（烧杯、量筒、容量瓶、试剂瓶、三角瓶等）及培养基分装用品等。
（2）接种室：植物材料的灭菌、接种以及培养物的继代转接等。
超净工作台、紫外灯、小推车、搁架、磁盘、接种工具（各种镊子、解剖刀、手术剪、普通剪刀接种针、酒精灯、手持喷雾器、细菌过滤器等）等。
植物器官培养
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植物 器官 培养
营养器 官培养
根培养 茎培养（ 包括茎尖、茎段） 叶培养（包括叶原基、叶柄、
叶鞘、叶片、子叶）
繁殖器 官培养
花培养 （包括花托、花瓣、花丝、 花柄、子房、花药）
种子培养（包括成熟与未成熟） 胚胎培养（包括幼胚、成熟胚、 胚珠、
子房、胚乳培养 ）
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——茎尖脱毒的基本原理
（三）茎尖培养方法及步骤
及材
取
消料
材
毒处
理
接
培
驯
化
种
养
移 栽
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1、 取材
①直接取材：在生长旺盛、枝 条健壮、无病的母株上选生 长不久、杂菌污染少的顶梢 （1－2cm）（取前可喷杀菌 药，可顶芽或侧芽）。
②从试管苗获取。
取1-2㎝顶梢
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二、茎尖的培养*
（一）茎尖培养概念及类型 （二）病毒在植物体内的分布 （三）茎尖培养方法及步骤
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(一)茎尖培养概念及类型
茎尖培养：切取茎的先端部分或茎尖分生组织部分，进行 无菌培养。
茎尖培养根据培养目的和取材大小可分为： ①微茎尖培养: 带有1-2个叶原基的生长点, 其长度不超 过 0.5mm。
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（4） 诱导生根
采用1／2MS培养基 加入一定的生长素类调节物质，如NAA、IBA等。 新梢基部浸入50或100mg/l的IBA溶液处理4-8h， 然后转移到无激素的生根培养基中。
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(5) 驯化移栽入土
在生根培养1个月左右→→生长健壮而发达的根系→→ 炼苗→→移栽 →→管理（温、光、湿、气）
高中生物精品资源第四章 植物细胞培养与次生代谢产物的生产课件高中生物竞赛
的速度蓬勃发展。
药用植物及其制成保健食品、化妆品等每年进,药用植物细胞大量培养技术正成为 国际上名贵珍稀天然药物开发的新目标,目前已经从400多种植物建立了组 织和细胞培养体系,从中分离出600多种代谢产物,其中40多种化合物在数量 上超过或等于原植物
玫瑰鲜花在清晨摘下后24小时内即取出黄褐色的玫瑰精油，大约五吨 重的花朵只能提炼出两磅的玫瑰油，所以是全世界最贵的精油之一
茉莉精油被称为“精油之王”。茉莉精油产量 极少因而十分昂贵，其具有高雅气味，可舒缓 郁闷情绪、振奋精神、提升自信心，同时可护 理和善肌肤干燥、缺水、过油及敏感的状况， 淡化妊娠纹与疤痕，增加皮肤弹性，让肌肤倍 感柔嫩。
悬浮培养基本分为：分批式、流加式、连续式、半连续式培养
1)分批培养(batch culture) 是指在培养过程中，既不向系统中补加培养基， 也不从系统中排出培养物（包括培养基和细胞），也就是说一次性加入培养 基，在一定条件下培养一段时间后，一次性收获。
国内外细胞培养的研究进展
1）重点放在细胞培养上（过去） 细胞培养的优点是生物量生长快，但也有次生代谢产物的含量不稳定
和不易与大田栽培接轨等明显的缺点。
2）植物组织和器官培养具有更重要的意义。
初级代谢物、次生代谢物对细胞、植物的意义 植物合成次生代谢产物的目的是其自身生理代谢的需要，在细胞阶段，往往不 需要合成，但到了组织和器官阶段，合成的需要就会加强。因此，培养药用植 物的组织和器官，更容易获得次生代谢产物。
第四章 植物组织培养生产次生代谢产物
一、植物组织培养生产次生代谢物质的目的意义 二、植物细胞培养生产次生代谢产物
(第四章)第五章 植物的器官培养和离体
第2节 植物离体快繁
（2）“五阶段”过程（由Debergh和 Read 1991年提出） 第一阶段：“O”阶段（准备阶段） 第二阶段：初代培养阶段 第三阶段：增殖阶段 第四阶段：促长和生根阶段 第五阶段：移栽阶段
第2节 植物离体快繁
2、特点： 它的特点是“快速繁殖”，每年以千百万 倍的速度繁殖后代，比常规繁殖方法快万倍 到数十万倍。
第2节 植物离体快繁
3、应用： （1）植物（作物）良种快繁； （2）少量脱毒良种苗的快繁和无病毒苗的大量快 繁； （3）特殊育种材料的快繁； （4）制种材料的快速繁殖； （5）基因工程植株的快繁； （6）自然和人工诱变有用突变体的快繁； （7）离体保存种质的快繁； （8）濒危植物的离体快繁。
叶柄
诱导 分化
园球茎
分化
芽、根
形成
完整小植株
例子：观叶海棠等。
第2节 植物离体快繁
第六种途径：块茎型（Tuber type） 方式：叶片或叶柄上形成粒状芋块，进一步分化出芽和 根。 特点：块茎芽可为繁殖系母体，不断切割繁殖，移栽成 活率高。 图示：
叶片、叶柄
生根 诱导 培养
类愈伤组织 小硬粒突出
第2节 植物离体快繁
材料
第八种途径；微小短枝扦插型（Minicultting type） 方式：带芽的小插条在试管内进行无菌扦插。 特点：为木本植物进行快速繁殖的主要方式。 图示：
剪切
带一叶的单芽茎段
生长 培养
成苗
植物器官的培养-花器官的培养(花蕾)1(精)
一、植物器官的培养-花器官的培养（花蕾）1. 定义：花器官培养指整个花器及其组成部分如花托、花瓣、花丝、花柄、子房、花药等的无菌培养。
2、意义：通过离体花芽培养可了解整体植物和内源激素在花芽性别决定中所起的作用；可以了解花器各部分对果实和种子发育的作用；内、外源激素在果实种子发育过程中的调控作用；生产上也可用于珍贵品种的扩大繁殖。
3. 培养方法(1) 取材、消毒：从健壮植株上取未开放的花蕾→75％酒精浸润约30s →饱和漂白粉浸泡10-15min（或0.1％升汞中浸3-5min ）→无菌水冲洗数次→接种。
(2)接种：花蕾培养：花梗插入培养基中。
部分花器培养：切片接入培养基中。
(3)培养培养基：MS、B5。
附加生长素（NAA0.1 mg/L ）和细胞分裂素（6-BA 2mg/L ），诱导形成愈伤组织或胚状体，再分化培养成植株。
培养条件：温度：25±2℃；光照时间：10-12h/d，光照强度：1500-3000 Lx。
培养约1周，形成少量愈伤组织。
再经1个月就分化出绿色芽点，再切割转接，可形成大量无根苗，经长根成植株，用于繁殖。
二、种子的培养1定义：种子培养是指受精后发育完全的成熟种子和发育不完全的未成熟种子的无菌培养。
2.意义：可以打破种子休眠，促进萌发；解决远缘杂种败育性，产生后代；快速繁殖苗木。
优点：植株分化容易，无菌操作方便。
3.培养技术(1) 种子灭菌：种皮厚或不饱满的种子，宜用0.1％升汞消毒10-20min。
幼嫩的或发育不全的种子，宜用饱和漂白粉消毒15-30min。
若种子上有绒毛或蜡质，应先用95％酒精或吐温80处理，提高消毒效果。
对壳厚难萌发的种子，可去壳培养。
(2)培养基：A.促种子萌发用MS培养基，加或不加激素，诱导愈伤组织则可加入6-BA或2,4-D。
B.无胚乳种子（棉花、大豆、花生、向日葵、番薯、马铃薯、苹果、烟草、薄荷）应适当加生长素。
C.一般糖浓度为1-3%。
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200704023
指示植物
CMV病毒感染的植株叶片 病毒感染的植株叶片
3、抗血清鉴定法：利用抗原和抗体的特异性反应原理 、抗血清鉴定法： 进行病毒鉴定。用已知病毒的抗血清（ 进行病毒鉴定。用已知病毒的抗血清（antiserum）鉴 ） 定未知病毒。 定未知病毒。
近年来又在此基础上发展出酶联免疫法（ 近年来又在此基础上发展出酶联免疫法（Enzyme Linked Immunosorbent Assay，ELISA），方法是将抗 Assay，ELISA）， ），方法是将抗 原固定在支持物上，加入待检血清，然后加入酶（ 原固定在支持物上，加入待检血清，然后加入酶（过氧 化物酶或碱性磷酸酶）标记的抗体， 化物酶或碱性磷酸酶）标记的抗体，使待检血清与对应 抗原的特异性抗体结合，最后用分光光度计进行诊断。 抗原的特异性抗体结合，最后用分光光度计进行诊断。
第二节 脱毒种苗生产及病毒检测技术
脱毒苗的培养： 一、脱毒苗的培养： 通过茎尖培养获得无病毒种苗， 通过茎尖培养获得无病毒种苗，对退化品 种进行提纯复壮。 种进行提纯复壮。 茎尖培养脱毒主要是由于病毒在植物体内 的分布不均匀， 的分布不均匀，在茎尖部位带病毒少或不带 病毒，因此可以通过茎尖培养脱毒。 病毒，因此可以通过茎尖培养脱毒。 主要应用于各种无性繁殖植物，如草莓、 主要应用于各种无性繁、甘蔗等。
virusfree tissue virus particles found here
微嫁接
病毒检测方法： 二、病毒检测方法：
1、性状鉴定： 根据植株的生长状态鉴定是否 、性状鉴定： 脱毒，但不准确。 脱毒，但不准确。
2、指示植物鉴定法：利用特定的易于感染某些 、指示植物鉴定法： 病毒的指示植物的特征进行病毒鉴定。 病毒的指示植物的特征进行病毒鉴定。
酶联免疫法进行病毒鉴定
4、电子显微镜检测（Electronmicroscope）：采用电 、电子显微镜检测（ ）：采用电 ）： 子显微镜对病毒的薄样品（ －－100um）或纯化的 子显微镜对病毒的薄样品（约1－－ －－ ） 病毒悬液中进行病毒的直接观察。 病毒悬液中进行病毒的直接观察。
5、RT－PCR检测（Reverse Transcription－ 、 － 检测（ 检测 － Polymerase Chain Reaction）：RT-PCR是将RNA模板的 ）：RT 是将RNA ）：RT-PCR是将RNA模板的 反转录（RT） cDNA的聚合酶链式扩增 PCR） 的聚合酶链式扩增（ 反转录（RT）,和cDNA的聚合酶链式扩增（PCR）相结 合的技术。RT-PCR技术灵敏而且用途广 技术灵敏而且用途广， 合的技术。RT-PCR技术灵敏而且用途广，可用于检测 病毒DNA的转录产物，分析表达的水平。 DNA的转录产物 病毒DNA的转录产物，分析表达的水平。该方法已用于 大蒜脱毒苗检测。 大蒜脱毒苗检测。