双氯芬酸钠注射液的肌肉刺激性试验

动 物 医 学 进 展 ，２０１９，４０（２）：７９８３ ＰｒｏｇｒｅｓｓｉｎＶｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ双氯芬酸钠注射液的肌肉刺激性试验秦 哲２，李 世 宏２，杨 亚 军２，孔 晓 军２，刘 希 望２，焦 增 华２，李 剑 勇２，郭 玉 凡１（１．郑州百瑞动物药业有限公司，河南郑州 ４５００００；２．中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所／ 农业部兽用药物创制重点实验室／甘肃省新兽药工程重点实验室，甘肃兰州 ７３００５０） 摘　要：考察双氯芬酸钠注射液的肌肉刺激性，为临 床 安全用 药提供 参 考。

采 用 同 体 左、右 侧 自 身 比 对 法，对日本大耳白兔进行股四头肌注射给药，经折算，供试品双氯芬酸钠注射液给药剂量为１４．３９ ｍｇ／ｋｇ，等 体 积９ｍｇ／ｍＬ 氯化钠注射液用作阴性对照，每天１次，连续３ｄ。

自给药起到给药后第１９天，观察试验兔的 一 般 状 况 ，进 行 注 射 部 位 解 剖 及 组 织 病 理 学 检 查 ，综 合 评 价 其 肌 肉 刺 激 性 。

双 氯 芬 酸 钠 注 射 液 注 射 后 １ 周 内 对股四头肌有较强的刺激性，在给药１９ｄ后肌肉 损 伤 可 以 完 全 恢 复。

双 氯 芬 酸 钠 注 射 液 符 合 我 国 《化 学 药 物 刺 激 性 、过 敏 性 和 溶 血 性 研 究 技 术 指 导 原 则 》中 注 射 剂 对 于 肌 肉 刺 激 性 的 要 求 ，可 用 于 肌 内 注 射 。

关 键 词 ：双 氯 芬 酸 钠 注 射 液 ；肌 肉 刺 激 性 ；大 耳 白 兔中 图 分 类 号 ：Ｓ８５９．７；Ｓ８５２．３１文 献 标 识 码 ：Ａ文 章 编 号 ：１００７５０３８（２０１９）０２００７９０５ 双氯芬酸 钠 别 名 双 氯 灭 痛，是 一 种 衍 生 于 苯 乙 酸 类 的 第 三 代 强 效 非 甾 体 抗 炎 药 （ｎｏｎｓｔｅｒｏｉｄａｌａｎｔｉ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｄｒｕｇ，ＮＳＡＩＤ），具 有 较 强 的 抗 炎 、镇 痛 及解热作用，疗效强于阿司匹林、扑热 息 痛和吲 哚美 辛等同类药物［１］，且具有副作 用 小、长 期 应 用 无 蓄 积 性等优点 。

［２］ 该药在兽医临床 上 被 试 用 于 治 疗 动 物 的关节炎、神经 痛 以 及 各 种 炎 症 所 致 的 发 热 等 疾 病 的防治，疗效确 切，效 果 显 著，被 誉 为 兽 医 临 床 上 的 “阿司匹 林”［３］。

目 前，在 西 班 牙、意 大 利、葡 萄 牙 及 部分东南亚国家已有兽用双氯芬酸钠注射液产品上 市，主要用于治疗牛、马及猪的外伤及 风 湿引起 的炎 症及病变，急性或慢性跛行等症 。

［４］ 然而，我国尚未 见奶 牛 用 双 氯 芬 酸 钠 制 剂 注 册 上 市。

本 品 为 ５０ ｍｇ／ｍＬ 双氯芬酸钠注射液，可用于泌 乳 期奶牛 的临 床型乳房炎的辅助治疗。

本研究对其进行肌肉刺激 性 试 验 ，旨 在 为 临 床 安 全 用 药 提 供 理 论 依 据 。

１ 材 料 与 方 法１．１ 材 料 １．１．１　药 物 与 试 剂 双 氯 芬 酸 钠 注 射 液 （中 试 产 品），规格０．５ｇ／１０ ｍＬ，郑 州 百 瑞 动 物 药 业 有 限 公 司产品，批号：２０１５０８２６。

９ ｍｇ／ｍＬ 氯 化 钠 注 射 液， 规格５００ｍＬ，西安 京 西 双 鹤 药 业 有 限 公 司 产 品，批 号 ：１５０６１６７Ｇ。

１．１．２ 仪 器 设 备 ＭＥ２３５Ｓ 微 量 分 析 天 平，德 国赛多利斯公司产品；ＬｅｉｃａＤＭ５５００Ｂ 显 微成像系 统， 德国莱卡公司产品；ＹＨ 型 电 子 秤，瑞 安 市 英 横 电 器 有限公司产品。

１．２ 方 法 １．２．１　实验 动 物 普 通 级 日 本 大 耳 白 兔 １６ 只，雌 雄各半，体重范围２．０ｋｇ～２．８ｋｇ，购自 中国农业 科 学院兰州兽医 研 究 所 实 验 动 物 中 心，动 物 生 产 许 可证号：ＳＣＸＫ （甘 ）２０１０ － ０００１。

饲 养 条 件 符 合 ＧＢ１４９２４．４和 ＧＢ１４９２５ 的 要 求。

实 验 动 物 房 室 温 为２０ ℃±３ ℃，相对湿度为３０％～７０％，光照、黑暗 １２ｈ 交 替 。

实 验 动 物 自 由 采 食 ，饮 水 充 足 。

１．２．２　肌肉刺 激 性 试 验 方 案 取 健 康 家 兔 １６ 只， 雌雄各半，在上述饲养条件 下 适 应 环 境 ５ｄ后，开 始 试验。

每笼４只，雌雄各半。

采用自身 对照，注射前 剃掉注射部位的兔毛，酒精棉球消 毒，右 侧股四头 肌 处以 无 菌 操 作 方 法 注 入 双 氯 芬 酸 钠 注 射 液 ０．２８７８ ｍＬ／ｋｇ（奶牛临床推荐用药剂量为 ２．２ ｍｇ／ｋｇ，奶牛 体重以 ５５０ｋｇ 计，兔 子 的 临 床 等 效 用 量 为 １４．３９ ｍｇ／ｋｇ）［５］，左侧相应部位同 法 注 入 等 体 积 的 灭 菌 生 理 盐 水 作 为 阴 性 对 照 。

每 天 １ 次 ，连 续 ３ｄ。

每 天 给 药前对动物整体情况和注射部位进行肉眼观察。

分 别于末次给药后第 ３、７、１４、１９ 天，每 次 随 机 取 ４ 只 家兔，耳缘静脉 注 射 空 气 处 死，剖 检 股 四 头 肌，纵 向 切开，观察注射 部 位 肌 肉 有 无 刺 激 性 变 化 （充 血、水 收 稿 日 期 ：２０１８０２２８ 基金项目：郑州市２０１６年度 科 技 重 大 专 项 项 目 （１６２ＰＺＤＺＸ１９０），中 国 农 业 科 学 院 科 技 创 新 工 程 项 目 （ＣＡＡＳＡＳＴＩＰ２０１４ＬＩＨＰＳ０２） 作 者 简 介 ：秦 哲 （１９８３－ ），女 ，内 蒙 古 巴 彦 淖 尔 人 ，助 理 研 究 员 ，博 士 ，主 要 从 事 兽 药 药 理 毒 理 学 研 究 。

通 讯 作 者８０动 物 医 学 进 展 ２０１９ 年 第 ４０ 卷 第 ２ 期 （总 第 ３０８ 期 ）肿、硬结、变性 或 坏 死）。

取 出 股 四 头 肌 进 针 部 位 病 犘＜０．０５为差异显著，犘＜０．０１为差异极显著。

变明显处小块组织做病理切片检查 。

［６１０］表 １ 平 均 分 值 和 等 级１．２．３　结果评 价 与 数 据 分 析 参 照 文 献 ［９］，依 据Ｔａｂｌｅ１　Ａｖｅｒａｇｅｓｃｏｒｅａｎｄｇｒａｄｅｏｆｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ表１、表２计算相应分值。

按照注射剂肌肉刺激性反 平均分值 Ａｖｅｒａｇｅｖａｌｕｅ等级 Ｇｒａｄｅ应评分标 准 评 分，并 对 肌 肉 刺 激 性 程 度 进 行 评 价。

每次检查的４只家兔的平均反应分值在２以下者， 可认为符合规定；如 平 均 反 应 分 值 在 ２～３ 之 间 者， 应另取２只 家 兔 复 试 （４ 只 家 兔 可 综 合 计 算），结 果０．０～０．４ ０．５～１．４ １．５～２．４无 Ｎｏｎｅ 轻微 Ｓｌｉｇｈｔ 轻度 Ｍｉｌｄ判断标准同前，如超过２则认为不 符合 规 定，不 可供２．５～３．４中度 Ｍｏｄｅｒａｔｅ肌内注射用。

数据 采 用 ＳＰＳＳ１９．０ 软 件 进 行 单 因 素 方 差 （ＯｎｅＷａｙ ＡＮＯＶＡ）统 计 分 析，试 验 结 果 以 平 均 值 ± 标 准 差 （狓珚±ＳＤ）表 示 ，各 试 验 组 进 行 两 两 比 较 ，３．５～４．４ ≥４．５重度 Ｓｅｖｅｒｅ 严重 Ｅｘｔｒｅｍｅｌｙｓｅｖｅｒｅ表 ２ 注 射 剂 肌 肉 刺 激 反 应 评 分 标 准Ｔａｂｌｅ２　Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎｃｒｉｔｅｒｉｏｎｏｆｍｕｓｃｌｅｓｔｉｍｕｌｕｓｒｅｓｐｏｎｓｅｓｏｆｉｎｊｅｃｔｉｏｎ反应级数 Ｇｒａｄｅ ０ １ ２ ３ ４ ５刺激反应 Ｍｕｓｃｌｅｓｔｉｍｕｌｕｓｒｅｓｐｏｎｓｅｓ无明显反应 Ｎｏｏｂｖｉｏｕｓｒｅｓｐｏｎｓｅ给药部位肌肉组织轻度充血，范围在０．５ｃｍ 以下 Ｍｉｌｄｈｙｐｅｒｅｍｉａｉｎ ｍｕｓｃｕｌａｒｔｉｓｓｕｅａｔｔｈｅｉｎｊｅｃｔｉｏｎｓｉｔｅ，ｗｉｔｈａｄｉａｍｅｔｅｒｎｏ ｍｏｒｅｔｈａｎ０．５ｃｍ给 药 部 位 肌 肉 组 织 中 度 充 血 ，范 围 在 ０．５～１．０ｃｍ Ｍｏｄｅｒａｔｅｈｙｐｅｒｅｍｉａｉｎ ｍｕｓｃｕｌａｒｔｉｓｓｕｅａｔｔｈｅｉｎｊｅｃｔｉｏｎｓｉｔｅ，ｗｉｔｈａｄｉａｍｅｔｅｒａｍｏｎｇ０．５ｔｏ１．０ｃｍ给 药 部 位 肌 肉 组 织 重 度 充 血 ，红 肿 ，伴 有 肌 肉 变 性 Ｓｅｖｅｒｈｙｐｅｒｅｍｉａｉｎ ｍｕｓｃｕｌａｒｔｉｓｓｕｅａｔｔｈｅｉｎｊｅｃｔｉｏｎｓｉｔｅ，ｗｉｔｈｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎａｎｄｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ出现肌肉坏死或褐色变性，直径在０．５ｃｍ 以下 Ｍｕｓｃｌｅｎｅｃｒｏｓｉｓｏｒｂｒｏｗｎｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎａｔｔｈｅｉｎｊｅｃｔｉｏｎｓｉｔｅ，ｗｉｔｈａｄｉａｍｅｔｅｒｎｏｍｏｒｅｔｈａｎ０．５ｃｍ肌肉严重变性，出现广泛性坏死 Ｓｅｖｅｒｍｕｓｃｌｅｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ，ｗｉｔｈｅｘｔｅｎｓｉｖｅｎｅｃｒｏｓｉｓ２ 结 果２．１ 注 射 部 位 大 体 检 查 分别于 给 药 后 第 ３、７、１４、１９ 天 处 死 家 兔，剖 检注射部位肌肉组 织，通 过 左、右 侧 对 比，观 察 双 氯 芬 酸钠注射液的肌肉刺激情况及肌肉组织的损伤修复 情 况 。

肌 肉 剖 检 情 况 见 图 １。

通过 对 肌 内 注 射 部 位 的 剖 检 可 知，对 试 验 用 家 兔股四头肌连续 ３ｄ 肌 内 注 射 双 氯 芬 酸 钠 注 射 液， 在给药结束后第３天受试侧药物注射部位肌肉组织 有明显褐色病变，直径 在 １ｃｍ 以 上，与 阴 性 对 照 侧 生理盐水注射部位 的 组 织 对 比 明 显，按 照 注 射 剂 刺 激反应评分标准判断药物性损伤为重度损伤。

给药 结束后第７天剖检 家 兔，发 现 受 试 侧 注 射 部 位 肌 肉 组织的黄褐色 病 变 面 积 减 小，直 径 小 于 １ｃｍ，判 断 药物性损伤为中 度。

给 药 结 束 后 第 １４ 天 剖 检 发 现 家兔的受 试 侧 注 射 部 位 肌 肉 组 织 病 变 程 度 明 显 好 转，达到轻度损伤程度。

给药结 束 后 第 １９ 天 剖 检 ４ 只 家 兔 ，发 现 ４ 只 家 兔 均 无 充 血 或 无 明 显 变 化 ，按 照 注 射 剂 刺 激 反 应 评 分 标 准 评 价 为 无 损 伤 （表 ３）。