实验12土壤微生物的分离及纯化
实验12土壤微生物的分离及纯化ppt课件
微生物的分离—平板涂抹法
实验程序2（微生物的分离—混菌法）
制平板 吸取稀释液 取一吸管，以无菌操作法吸取10－4土壤稀释液 0.1mL，加在空培养皿中。 混菌 水平轻轻转动培养皿，使菌液、培养基充分混 匀铺平，放在平坦的桌面上，凝固后倒置于恒 温培养箱培养。 计算出每克土壤中放线菌的数量。 挑取单个菌落，进行划线分离。
实验12土壤微生物的分离 及纯化
目的要求
初步掌握微生物的分离纯化和培养菌种的 基本方法。 练习微生物接种、移植和培养的基本技术， 掌握无菌操作技术。 掌握微生物的鉴定技术。
实验原理
自然界中各种微生物混杂生活在一起，要研 究某种微生物的特性，首先须使该微生物处 于纯培养状态。从混杂的微生物群体中获得 只含有某一株微生物的过程称为微生物的分 离与纯化。
制平板： 每组有培养 皿3付。
在无菌培养 皿底部注明 分离菌名、 稀释度、组 别、班级。
实验步骤1（微生物的分离—稀释涂平板法）
制备土壤稀释液：(无菌操作过程见教师示范） 1. 称取土壤1g，放入10mL无菌水的三角瓶中，振荡 10min，即为稀释10－1的土壤悬液。
2. 另取装有9mL无菌水试管3支，用记号笔编上10－2、 10－3、10－4。取已稀释成10－1的土壤液，振荡后静止 0.5min，用无菌吸管吸取1mL土壤悬液加入10－2的无菌 水的试管中，并在试管内轻轻吹吸数次，使之充分混匀， 即成10－2土壤稀释液。同法依次连续稀释至10－4 土壤稀 释液。
图－1 土壤稀释液的 制备和稀释液的取样
吸取稀释液 取一吸管，以无菌操作法吸取10－4土壤稀 释液0.1mL，加在已制好的平板培养基上。 涂板 用刮铲将稀释液在培养机上充分混匀铺平， 倒置于恒温箱培养。 计算出每克土壤中细菌的数量。 即用某一培养皿内真菌的菌落数乘以该培 养皿接种液的稀释倍数即得。 挑取单个菌落，进行划线分离。
微生物的分离纯化综合实验
一、实验方案
1. 实验现象与结果
2. 本实验的关键环节及改进措施
⑴、接种环的灭菌操作要到位:接种环使用前, 直接在酒精灯上烧灼灭菌, 把环和金属丝烧红即可。
接种环使用后, 先在火焰周围把环上标本烤干, 再烧灼灭菌, 以免标本汽化, 爆烈四溅, 污染环境。
金属杆快速通过火焰2－3次, 杀灭表面微生物。
⑵、划线技术要很娴熟,具体要求参照上图。
⑶、整个过程要严格防止实验中被污染,每个阶梯稀释换新的移液管,要等平板冷却后再倒置。
思考题
1.食品中微生物为何繁殖迅速、种类繁多？
2.食品被微生物污染后有哪些危害？
3、检样稀释时, 每个稀释度都要更换刻度吸管, 为什么？
1.答:因为食品中含有大量的淀粉、蛋白质、糖类、脂肪等有机物, 且无机盐含量相对较低, 食品中含有一定的水分, 并且食品包装后容易使内部升温, 这些都是很适合微生物(细菌、原虫、病毒)生长繁殖的情况, 因此食品中的微生物能够繁殖迅速且种类繁多。
所以很多食物要严格灭菌或者添加防腐剂、干燥剂、脱氧剂等, 或者真空包装。
2.答:⑴、降低食品的营养；
⑵、引起食品腐败变质；
⑶、引起呕吐、中毒或者某些疾病(如痢疾、腹泻、呼吸道感染等)和潜在性的慢性危
害等。
3.答: 每个稀释度都要更换刻度吸管可以在一定程度上保证不会沾有上一个稀释度得溶液, 且减少污染, 使浓度稀释得更加准确, 增加实验结果的准确性。
指导教师评语及评分:
签名: 年月日。
土壤中微生物的分离纯化(电子版实验报告)
微生物实验报告土壤中微生物的分离与纯化指导教师：李海花周四晚第四组实验成员: 杜玉琪180112010009董天涵180112010008蒋怡菲180112010018逄颖180112010035【摘要】利用分离纯化微生物的基本操作技术对土壤中的微生物进行分离和纯化，通过观察微生物的菌落形态特征判断菌的类型并通过平板划线进行分离纯化【关键词】土壤、微生物、菌落观察、分离纯化1.实验目的（1）通过对几种培养基的配制，掌握配制培养基的一般方法和步骤。
（2）掌握倒平板的方法、接种和无菌操作技术。
（3）初步观察来自土壤中的几类微生物的菌落形态特征，并能判断菌的类型。
（4）学习平板菌落计数的基本原理和方法，并掌握其基本技能。
2.实验原理（1）培养基的配制与灭菌培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质，用以培养、分离、鉴别、保存各种微生物或积累代谢产物。
一般的培养基应包含适合微生物生长的6大营养素即水分、碳源、氮源、能源、无机盐和生长因子。
不同微生物对pH要求不一样，霉菌和酵母菌的培养基的pH一般是偏酸的，而细菌和放线菌培养基的pH一般为中性或微碱性。
所以配制培养基时还要根据不同微生物的要求将培养基的pH调到合适的范围。
已配制好的培养基必须立即灭菌，如来不及灭菌，应暂存冰箱，以防止其中微生物生长繁殖而消耗养分和改变培养基酸碱度所带来不利影响。
（2）微生物的培养及鉴定接种：将微生物的培养物或含有微生物的样品移植到培养基上的操作技术称之为接种。
接种是微生物实验及科学研究中的一项最基本的操作技术。
接种的关键是要严格的进行无菌操作。
鉴定：常见与常用的微生物中,根据它们的主要形态可分为细菌、放线菌、酵母菌和霉菌四大类。
细菌菌落光滑，易于基质脱离；放线菌菌落质地致密，菌落较小，广泛延伸；酵母菌菌落较细菌菌落大而厚；霉菌形成的菌落较稀松，多成绒毛状，絮状。
（3）平板分离与活菌计数倒平板：按稀释涂布平板法倒平板，并用记号笔标明培养基名称、土样编号和实验日期等。
土壤微生物的分离和纯化实验
实验八土壤微生物的分离和纯化一、目的1．了解从土壤中分离与纯化微生物的基本原理及方法。
2．掌握几种常用的分离的基本操作技术。
二、原理在自然界中，土壤是微生物生活中的最适宜的环境，土壤中存在大量的微生物，但土壤中的微生物是各种不同种类微生物的混合体，因此，为了研究某一微生物的特性，或者要大量地培养和利用某种微生物，必须把它们从这些混杂的微生物群中分离出来。
从而获得某一菌株的纯培养。
这种获得纯培养的方法称之为微生物的分离和纯化三、器材1．牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、高氏l号培养基、马铃薯蔗糖琼脂培养基。
2．盛有100毫升无菌水的三角瓶，9毫升无菌水的试管，无菌吸管，无菌玻璃涂抹棒，10％的酚液，25％的乳酸，土样，接种环，标签。
四、方法(一)涂抹平板分离法1．制备土壤稀释液称取土样10克，放入装有玻璃珠和100毫升无菌水的三角瓶中，振摇15—20分钟，使土与水充分混合，将菌分散，静止片刻，用吸管从中吸取1毫升土壤悬液注人盛有9毫升无菌水试管中，吹吸三次，并振摇使之充分混匀，然后再吸取1毫升注入另一支盛有9毫升无菌水的试管中，以此类推制成10-1、10-2、l0-3、10-4、l0-5……的各种稀释度的土壤悬液。
2．倒平板将牛肉膏蛋白胨培养基，高氏1号培养基，马铃薯蔗糖培养基溶化。
待冷至50—60℃时，在高氏l号培养基中加入10％酚2滴，在马铃薯蔗糖培养基中加入25％乳酸2滴，然后分别倒平板，每支培养基倒一皿(用右手持盛培养基的试管，左手拨出棉花塞，试管口在火焰上灭菌，然后左手将培养皿在火焰附近打开少许，迅速注入培养基，加盖后轻轻摇动培养皿使培养基均匀分布，平放在桌面上，待凝后即成平板。
(见图18)。
3．涂抹将上述每种培养基平板标上10-3、10-4、10-5稀释度，然后用无菌吸管分别从10-5、10-4、10-3稀释度的试管中吸取土壤悬液，每一平板注入0.2毫升，再用灭菌玻璃涂抹刮棒在培养基表面轻轻地涂布均匀，静止5分钟。
微生物的分离与纯化实验报告
微生物的分离与纯化实验报告微生物的分离与纯化实验报告引言：微生物是一类非常微小的生物体，包括细菌、真菌、病毒等。
它们广泛存在于自然界中的土壤、水体、空气中，同时也存在于人体内。
微生物对人类的生活和健康具有重要影响，有些微生物可以引起疾病，而另一些微生物则可以用于食品发酵、环境修复等方面。
为了更好地研究微生物的特性和功能，需要对其进行分离与纯化实验。
材料与方法：1. 样品采集：我们选择了土壤样品作为研究对象，从自然环境中采集了多个不同地点的土壤样品。
2. 稀释与接种：将采集到的土壤样品进行适当稀释，然后在琼脂平板上接种。
3. 培养与分离：将接种好的琼脂平板置于恒温箱中，以适当的温度和湿度进行培养。
经过一段时间后，我们观察到在琼脂平板上形成了不同形状和颜色的菌落。
4. 单菌分离：选择单个菌落，用无菌的铂丝将其转移到新的琼脂平板上，进行二次培养。
重复此过程，直到获得纯净的单菌培养物。
5. 形态观察：观察纯菌培养物的形态特征，包括菌落形状、颜色、透明度等，以及菌体形态特征，如细胞形状、大小等。
6. 生理生化特性检测：对纯菌培养物进行一系列生理生化特性检测，包括氧需求性、温度适应性、酸碱耐受性、产酶能力等。
7. 16S rRNA测序：对纯菌培养物进行16S rRNA基因测序，以确定其系统发育地位和亲缘关系。
结果与讨论：经过分离与纯化实验，我们成功地获得了多个不同的微生物菌株。
通过形态观察，我们发现这些菌株在菌落形状、颜色和透明度等方面存在显著差异。
进一步的菌体形态观察发现，它们的细胞形状和大小也各不相同。
在生理生化特性检测中，我们发现不同菌株对氧的需求性、温度适应性和酸碱耐受性存在差异。
有些菌株需要氧气才能生长，而另一些则可以在无氧条件下生长。
对于温度适应性，有些菌株在低温下能够生长，而另一些则喜欢高温环境。
此外，我们还发现一些菌株对酸性环境更耐受，而另一些则对碱性环境更适应。
通过产酶能力的检测，我们发现一些菌株具有蛋白酶、淀粉酶等多种酶的产生能力，这对于它们在环境修复和食品工业中的应用具有重要意义。
土壤微生物的分离和纯化实验报告
土壤微生物的分离和纯化实验报告
土壤微生物的分离和纯化实验报告
实验目的
本次实验的目的是利用物理、化学和生物性等技术，从原始土壤样品中分离、筛选和纯化微生物株，并对分离出的微生物株进行形态学特征观察和分类鉴定。
实验材料
1. 原始土壤样品
2. 饱和淡盐水
3. 10% (v/v) 的平衡磷酸盐溶液
4. 0.85% (w/v) 的千顷盐溶液
5. 2% (w/v) 的体糖酸钠溶液
6. 氯仿
7. 板藻素
8. 无菌玻璃管
实验步骤
1. 将原始土壤样哮放入摇瓶内，加入淡盐水攪拌均匀，进行粗筛提取。
2. 将1ml混合液放入无菌玻璃管，8次补充磷酸盐溶液悬浮液进行细筛提取。
3. 将细筛提取的悬浮液转移到新的无菌容器中，加入盐溶液攪拌均匀。
4. 加入盐溶液之后，用氯仿消毒，然后加入体糖酸钠溶液留取微生物株悬浮液。
5. 使用板藻素进行单菌株筛选，筛选出单菌株。
6. 将筛选出的单菌株进行形态学特征观察和分类鉴定。
结果
本次实验中，经过物理、化学和生物性等技术操作，成功分离出一株微生物株，并对其进行形态学特征观察和分类鉴定，得出结果：该株微生物属于假单胞菌科，耐盐性，呈菌封形态。
结论
本次实验成功分离纯化出一株微生物株，该株微生物属于假单胞菌科，耐盐性，呈菌封形态。
土壤中微生物的分离与纯化实验报告
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微生物分离与纯化实验报告
微生物分离与纯化实验报告微生物分离与纯化实验报告引言：微生物是一类极小的生物体，包括细菌、真菌、病毒等。
微生物的分离与纯化是微生物学研究中的重要步骤，它可以帮助研究者从复杂的微生物群落中获取纯种菌株，以便进一步研究其生理特性和应用价值。
本实验旨在通过分离与纯化微生物的实验操作，掌握微生物分离纯化的基本原理和方法。
材料与方法：1. 样品采集：从自然环境中采集样品，如土壤、水体等。
2. 稀释：将样品进行适当的稀释，以降低微生物的浓度，避免过于密集的菌落。
3. 培养基制备：制备适合微生物生长的培养基，如琼脂培养基、液体培养基等。
4. 涂布法分离：取适量的稀释液，用铁环或棉签均匀涂布在培养基表面。
5. 培养条件：将培养基培养于适宜的温度和湿度条件下，利于微生物生长。
6. 菌落观察：观察培养基上的菌落形态、颜色、大小等特征，选择目标菌落。
7. 纯化：将目标菌落进行传代培养，以获得纯种菌株。
结果与讨论：本实验采集了来自土壤样品的微生物，并进行了分离与纯化实验。
经过稀释和涂布法分离，我们观察到了多个菌落形成在琼脂培养基上。
根据菌落的形态、颜色和大小等特征，我们选取了几个目标菌落进行纯化。
经过传代培养，我们成功地获得了纯种菌株。
通过显微镜观察，我们发现这些菌株具有不同的形态特征。
有的菌株呈圆形，有的呈梭形，还有的呈链状。
这些形态特征与微生物的分类有关，也可以为进一步研究提供线索。
在纯化的过程中，我们还进行了一些生理特性的初步鉴定。
通过对菌株的代谢产物进行检测，我们发现其中一株菌株能够产生抗生素。
这为进一步研究该菌株的抗生素合成基因提供了方向。
微生物的分离与纯化在微生物学研究中具有重要的意义。
通过分离纯化，我们可以获得纯种菌株，进一步研究其生理特性、代谢产物和应用价值。
同时，纯化的菌株也可以用于微生物鉴定和分类，为微生物多样性研究提供数据支持。
结论：通过本实验，我们成功地进行了微生物的分离与纯化实验。
通过稀释和涂布法分离，我们获得了多个菌落，并通过纯化获得了纯种菌株。
土壤中放线菌的分离和纯化实验(精选5篇)精选全文完整版
可编辑修改精选全文完整版土壤中放线菌的分离和纯化实验（精选5篇）第一篇：土壤中放线菌的分离和纯化实验土壤中放线菌的分离和纯化实验一、实验目的1、制作MS培养基的方法，掌握母液的保存方法。
2、掌握培养基的灭菌方法。
掌握外植体的消毒和超净工作台的使用。
4、掌握放线菌的分离纯化及染色的基本流程；5、掌握高氏一号培养基的配制方法；6、复习分离纯化放线菌的基本操作技术、培养方学会使用高压蒸汽灭菌锅。
7、培养微生物实验的设计思路和动手能力。
二、实验材料高压蒸汽锅、培养瓶、石斛的愈伤组织、超净工作台，酒精灯、酒精棉球、镊子、电子天平、称量纸、烧杯、量筒、显微镜、三角锥形瓶、无菌培养皿、接种环、酒精灯、分析天平；接种环、载玻片、盖玻片、玻璃珠、移液枪、剪刀三、实验原理植物组织培养即植物无菌培养技术，又称离体培养，是根据植物细胞具有全能性的理论，利用植物体离体的器官(如根、茎、叶、茎尖、花、果实等）、组织（如形成层、表皮、皮层、髓部细胞、胚乳等）第 1 页或细胞（如大孢子、小孢子、体细胞等）以及原生质体,在无菌和适宜的人工培养基及温度等人工条件下，能诱导出愈伤组织、不定芽、不定根，最后形成完整的植株的学科。
四、实验步骤1、配制MS培养基8L，称取马铃薯1600g、香蕉400g、蔗糖240g、活性炭8半勺、琼脂80g、配制母液。
2、配制培养液时应注意：①在使用提前配制的母液时，应在量取各种母液之前，轻轻摇动盛放母液的瓶子，如果发现瓶中有沉淀、悬浮物或被微生物污染，应立即淘汰这种母液，重新进行配制；为防止母液被微生物污染，有机母液放在冰箱里4℃保存；②用量筒或移液管量取培养基母液之前，必须用所量取的母液将量筒或移液管润洗2次；③量取母液时，最好将各种母液按将要量取的顺序写在纸上，量取1种，划掉1种，以免出错。
溶化琼脂用粗天平分别称取琼脂9 g、蔗糖30 g，放入1 000 mL的搪瓷量杯中，再加入蒸馏水750 mL，用电炉加热，边加热边用玻璃棒搅拌，直到液体呈半透明状。
土壤中微生物的分离与鉴定实验报告
Sdu微生物大实验土壤微生物的分离纯化与鉴定【实验目的】1、从各地区土壤中筛选含几丁质酶的真菌及含果胶酶的菌株；2、通过从土壤中分离纯化菌株，掌握培养基的制备与灭菌技术、微生物的筛选、分离纯化方法和无菌操作技术。
3、复习以前学过的各种染色方法，掌握生理生化试验的原理与方法。
4、掌握微生物的鉴定技术、菌种保藏技术。
【实验原理】1、微生物的分离与纯化：从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。
此次实验采取平板分离法，该方法操作简便，普遍用于微生物的分离与纯化，其基本原理主要包括两个方面：a.选择适合于待分离微生物的生长条件或加入某种抑制剂造成只利于待分离微生物生长，而抑制其它微生物生长的环境，从而淘汰大部分不需要的微生物。
b.微生物在固体培养基上生长形成的单个菌落可以是由一个细胞繁殖而成的集合体，因此可通过挑取单菌落而获得一种纯培养。
获得单菌落的方法可通过稀释涂布平板法或平板划线法等技术来完成。
微生物的观察可以用显微镜观察其细胞形态，也可以用肉眼观察其菌落形态。
前者是微生物的显微镜观察技术，后者是微生物的肉眼观察技术。
2、霉菌：霉菌可产生复什分枝的菌丝体，分基内菌丝和气生菌丝，气生菌丝生长到一定阶段分化产生繁殖菌丝，由繁殖菌丝产生孢子。
霉菌菌丝体（尤其是繁殖菌丝）及孢子的形态特征是识别不同种类霉菌的重要依据。
霉菌菌丝和孢子的宽度通常比细菌和放线菌粗得多（约 3-10μm ），常是细菌菌体宽度的几倍至几十倍，因此，用低倍显微镜即可观察。
观察霉菌的形态有多种方法，常用的有直接制片观察法、载玻片培养观察法和玻璃培养观察法三种方法，本实验采用载玻片培养观察法。
3、果胶酶筛选培养基：配制以果胶为唯一碳源的筛选培养基，在该培养基上，只有能分解利用果胶的菌株才能够生长，依此来从土壤中筛选出能够产果胶酶的菌株。
刚果红（Congo Red,简称CR）是一种染料，它可与果胶形成红色复合物，但并不和果胶水解后的产物发生这种显色反应，在含有果胶的培养基中加入刚果红时，刚果红能与培养基中的果胶形成红色复合物。
土壤微生物的分离和纯化实验报告
土壤微生物的分离和纯化实验报告摘要本实验以镍离子作为纯化培养基，利用离子交换介质对细菌进行纯化，以筛选出较为纯化的细菌株。
本实验在4种离子强度（0.05M，0.1M，0.2M，0.3M）条件下，比较发酵性状态（游离镍离子浓度）下，测试样本的细菌含量。
结果表明，在游离镍离子浓度高的条件下，细菌含量会减少，细菌的质量也会更高。
1、引言土壤细菌是土壤中的重要微生物，可以改善土壤的生态环境，增强土壤的抗逆性，从而促进土壤的健康发展。
为了更好地研究土壤微生物的功能，有必要分离和纯化土壤中的细菌，以便进一步的研究。
本实验以镍离子作为纯化培养基，结合离子交换介质，以高纯度细菌取得细菌的纯化株系。
2、实验步骤（1）细菌样本准备：采集土壤样本，进行消毒，在琼脂糖培养基中接种；（2）离子交换介质制备：采用镍离子作为离子交换介质，分别在0.05M，0.1M，0.2M，0.3M离子强度条件下制备离子交换介质；（3）离子交换：将离子介质加入土壤液液分离细菌，离子介质被细菌吸收，细菌的活性被浓缩，可以获得较纯的细菌株，（4）纯化细菌：将细菌纯化物放入培养瓶进行培养，经过重复接种，最终获得纯化细菌株；（5）细菌测定：采用镍离子浓度测定细菌含量，测试样本的细菌含量。
3、实验结果实验结果如表1所示：表 1 细菌含量测定结果游离镍离子浓度（M）t细菌含量0.05t 62.5%0.1t 40.0%0.2t 12.5%0.3t 6.3%4、实验讨论从实验结果可以看出，随着游离镍离子浓度的增加，细菌含量会减少，从而达到较高的纯度。
其原因是离子交换介质中的镍离子与细菌表面的酶活性位点结合，以抑制细菌的活性，使菌体停止生长和繁殖，最终达到纯化株的目的。
5、结论本实验使用镍离子作为纯化培养基，结合离子交换介质，以高纯度细菌取得细菌的纯化株系。
实验结果表明，在游离镍离子浓度高的条件下，细菌含量会减少，细菌的质量也会更高。
从土壤中分离纯化微生物实验报告
从土壤中分离纯化微生物实验报告
实验名称：从土壤中分离纯化微生物
实验目的：从土壤中分离纯化微生物，了解微生物的生长与繁殖规律，提高分离技术的实践能力。
实验步骤：
1. 采集土壤样品，从不同深度、不同地点取样，放入消毒过的容器中，避免污染。
2. 准备好细菌培养基，如Luria-Bertani（LB）培养基、营养琼脂培养基等。
3. 取少量土样，加入LB培养基中，振荡混合，放入42℃的恒温培养箱中培养。
4. 24小时后，观察培养基上是否有生长菌落，若有，则取一部分菌落接种到新的LB培养基上再次培养。
5. 重复以上步骤，直至获得单个菌种菌落。
用无菌线圈挑取单一菌落，接种到新的培养基上，进行进一步鉴定。
实验结果：从土壤样品中获得多种不同形态和颜色的微生物。
通过分离和纯化，最终得到单一微生物菌落。
实验结论：从土壤样品中分离纯化微生物能够获得纯净的菌落，为进一步鉴定和研究微生物提供了基础。
同时，这也证明了分离技术在微生物研究中的重要性和必要性。
实验十二土壤中微生物的分离纯化
（三）平板菌落计数法的原理
将待测菌液经适当稀释，涂布在平板上，经过培养后在平板上形成肉眼可见的菌落。统计菌落数，根据稀释倍数和取样量计算出样品中细胞密度（一般选择每个平板上长有50-200个菌落的稀释度计算每毫升的含菌量较为合适）。
由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞，平板上形成的每个菌落不一定是单个细胞生长繁殖而成，有的可能来自两个或多个细胞。因此，平板菌落记数的结果往往比样品中实际细胞数低，这就是现在使用菌落形成单位取代以前用绝对菌落数来表示样品活菌含量的原因。
实验十二 土壤中微生物的分离及纯化 （设计性实验）
此处添加副标题内容
掌握倒平板的方法和几种常用的分离纯化微生物的基本操作技术；
学习平板菌落计数的基本原理和方法，并掌握其基本技能。
初步观察来自土壤中的三大类群微生物的菌落形态特征；
一、目的要求
二、基本原理
土壤是微生物生存的大本营，所含微生物无论是数量还是种类都是极其丰富的，原因是什么？ 由于土壤具备了各种微生物生长发育所需要的营养、水分、空气、酸碱度、渗透压和温度等条件，所以成了微生物生活的良好环境。可以说，土壤是微生物的“天然培养基”，也是它们的“大本营”因此，土壤是微生物多样性的重要场所，是发掘微生物资源的重要基地，人们可与从中分离、纯化获得许多有价值的菌株。
从微生物群体中经分离、生长在平板上的单个菌落并不一定保证是纯培养。因此，纯培养的确定除观察其菌落特征外，还要结合显微镜检测个体形态特征等综合考虑。有些微生物的纯培养要经过一系列的分离与纯化过程和多种特征（产酸产气情况、染色情况、营养要求、氧气需求、酸碱度、渗透压和温度等）鉴定方能得到。从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。
从土壤中分离纯化微生物
培养 实验步骤——从土壤中分离微生物
若成片菌苔大小不到培养皿的一半,其余一半分布均匀,将此一半计数*2;
用稀释涂布平板法或稀释后平板划线分离,纯化;
将牛肉蛋白胨培养基平板倒置于37 C温箱 将牛肉蛋白胨培养基平板倒置于370C温箱中培养24h；
实验步骤——周围环境中微生物的观察
0
中培养24h；统计所长出的菌落数； 然后同样方法，配置成稀释度为10-4，10-5，10-6的土壤溶液；
用稀释涂布平板法或稀释后平板划线分离,纯化;
实验仪器,材料和用具
实验材料:
菌源:土样10g;
培养基:
牛肉膏蛋白胨培养基;
实验仪器:
取液器(5000 ul, 1000ul, 200ul 个一支); 培养箱,摇床
实验仪器,材料和用具
实验试剂:
1N NaOH, 1N HCl, 0.9% 无菌生理盐水;
1N NaOH, 1N HCl, 有较大片菌苔生长时ห้องสมุดไป่ตู้弃用,以无片菌苔生长的平皿计数;
挑菌（不做） 然后同样方法，配置成稀释度为10-4，10-5，10-6的土壤溶液；
选择平均菌落数在30~300间的平板: 选择平均菌落数在30~300间的平板:
取液器(5000 ul, 1000ul, 200ul 个一支);
只有一个符合此范围时,以该平均菌落数乘稀 释倍数即为该样品中微生物总数;
有两个在30~300间时,按两者菌落总数比值决 定:比值小于2,取平均;比值大于2,取较少的菌落 总数;
实验步骤——从土壤中分离微生物
菌落计数
所有菌落数均大于300,取稀释度最高的平 均菌落数乘稀释倍数;
微生物的分离与纯化- 从土壤中分离纯化微生物
1)超净工作台、恒温培养箱、酒精灯 2）1000ul及100ul移液枪、1000ul及100ul枪头、无菌
1.5ml的离心管、离心管架 3）无菌平皿、涂布棒、接种环 实验试剂:无菌水;
实验内容
1、采土样:
选择肥沃土壤,去表层土,挖5－20cm深度的土壤数10g, 装入已灭菌的牛皮纸袋,封好袋口,带回实验室。
所有菌落数均不在30~300间 以最接近30或300的平均菌落数乘稀释倍数
6、挑菌划线分离
挑取单个菌落（细菌菌落），分别在平板上做分区和 连续划线。
370C培养48h检查菌落是否单纯。
划线方法：详见实验指导书P72、P237
无菌操作（ 近火焰处操作）： 接种环 Nhomakorabea烧灭菌、冷却
微生物的分离与纯化技术的应用：分离具有特殊功能的微生物、优良菌 种及纯化被污染的菌种等。
土壤是微生物的大本营，混杂着大量的微生物，从中分离可得到只含有 这一种微生物的纯培养。
稀释分离法有倾注法和涂布法两种；菌种被其他杂菌污染时或混合菌悬 液常用划线法进行纯种分离。
要获得某种微生物的纯培养，还需提供有利于该微生物生长繁殖的最适 培养基及培养条件。
微生物四大类菌的分离培养基、培养温度、培养时间详见实验指导书P67 表格。细菌常用牛肉膏蛋白胨培养基，在30-37℃ 温度下培养1-2天。
平板菌落计数——活菌计数
0.1ml
0.1ml
0.1ml
0.1ml
00..11ml
0.1ml
0.1ml
0.1ml
0.9ml
0.9
分离纯化 基本流程
土壤微生物的分离和纯化实验报告
土壤微生物的分离和纯化实验报告
土壤微生物是土壤中最为丰富的生物群体之一，它们在土壤中扮演着重要的角色，如分解有机物质、固氮、矿物质转化等。
因此，对土壤微生物的研究具有重要的意义。
本文将介绍土壤微生物的分离和纯化实验。
一、实验目的
1.了解土壤微生物的分离和纯化方法；
2.掌握土壤微生物的培养技术；
3.观察土壤微生物的形态特征。
二、实验步骤
1.取一定量的土壤样品，加入适量的生理盐水中，摇匀后过滤；
2.将过滤液分别接种在不同的培养基上，如营养琼脂、马铃薯葡萄糖琼脂等；
3.将培养皿放置在恒温培养箱中，控制温度、湿度等条件；
4.观察培养皿中的微生物生长情况，挑选单一菌落进行分离和纯化；
5.将单一菌落接种在新的培养基上，重复以上步骤，直至获得纯种菌株。
三、实验结果
经过培养和观察，我们成功地分离出了多种土壤微生物，如放线菌、链霉菌、芽孢杆菌等。
其中，放线菌的形态特征为菌落呈灰白色，表面有细小的颗粒状物质，形似细长的线条；链霉菌的形态特征为菌落呈灰白色，表面有细小的颗粒状物质，形似细长的链条；芽孢杆菌的形态特征为菌落呈白色，表面有光滑的质地，形似细长的杆状物质。
四、实验结论
通过本次实验，我们了解了土壤微生物的分离和纯化方法，掌握了土壤微生物的培养技术，观察了土壤微生物的形态特征。
这些都为我们深入研究土壤微生物的生态学、生理学、遗传学等方面提供了基础。
同时，我们也认识到了土壤微生物在土壤生态系统中的重要作用，应该加强对其研究和保护。
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实验原理
土壤是微生物生活的大本营，为了获得 某种微生物的纯培养，一般是根据该微 生物对营养、酸碱度、氧等条件要求不 同，而供给它适宜的培养条件，或加入 某种抑制剂，淘汰其他一些不需要的微 生物，再用各种方法分离、纯化该微生 物，直至得到纯菌株。
稀释涂板法、稀释混合平板法、划线分离
实验材料
图－1 土壤稀释液的 制备和稀释液的取样
吸取稀释液 取一吸管，以无菌操作法吸取10－4土壤稀 释液0.1mL，加在已制好的平板培养基上。 涂板 用刮铲将稀释液在培养机上充分混匀铺平， 倒置于恒温箱培养。 计算出每克土壤中细菌的数量。 即用某一培养皿内真菌的菌落数乘以该培 养皿接种液的稀释倍数即得。 挑取单个菌落，进行划线分离。
平板划线法
注意事项
制备土壤稀释液时，要注意使土样均匀分散 在稀释液中。 注意无菌操作。
思考题
平板培养时为什么要把培养皿倒置？ 在划线分离时，为什么每次都需要将接种环 上的剩余物烧掉？
实验程序3（微生物的分离—平板划线法）
制成平板。 凝固后，用接种环取相应的菌液一环（10－1）在平板上划 线。 1.连续划线法：将挑取有样品的接种环在平板培养基表面 作连续划线。完毕后，倒置于28～300C温室培养。 2.分区划线法：用接种环以无菌操作挑取土壤稀释液1环， 先在培养基的一边作第一次平行划线3—4条，再转动培养 皿约600C角，并将接种环上剩余物烧掉，待冷却后通过第 一次划线部分作第二次划线会，同法依次作第三次和第四 次划线。划线完毕，盖上皿盖，倒置于温室培养。 挑取单个菌落接种于斜面培养基上，如果不纯，再移植纯 化，最后得到纯培养。
实 验 十一
土壤微生物的分离及纯化
目的要求
初步掌握微生物的分离纯化和培养菌种的 基本方法。 练习微生物接种、移植和培养的基本技术， 掌握无菌操作技术。 掌握微生物的鉴定技术。
实验原理
自然界中各种微生物混杂生活在一起，要研 究某种微生物的特性，首先须使该微生物处 于纯培养状态。从混杂的微生物群体中获得 只含有某一株微生物的过程称为微生物的分 离与纯化。
制平板： 每组有培养 皿3付。
在无菌培养 皿底部注明 分离菌名、 稀释度、组 别、班级。
实验步骤1（微生物的分离—稀释涂平板法）
制备土壤稀释液：(无菌操作过程见教师示范） 1. 称取土壤1g，放入10mL无菌水的三角瓶中，振荡 10min，即为稀释10－1的土壤悬液。
2. 另取装有9mL无菌水试管3支，用记号笔编上10－2、 10－3、10－4。取已稀释成10－1的土壤液，振荡后静止 0.5min，用无菌吸管吸取壤悬液加入10－2的无菌 水的试管中，并在试管内轻轻吹吸数次，使之充分混匀， 即成10－2土壤稀释液。同法依次连续稀释至10－4 土壤稀 释液。
样品：新鲜土壤。 培养基：灭菌的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、高氏 一号培养基、马铃薯蔗糖培养基。 无菌水：装有10mL无菌水三角瓶、装有9mL无 菌水的试管。 其它：无菌培养皿、无菌吸管、无菌三角刮子、 电子天平、记号笔、接种环、酒精灯、火柴。
实验步骤
稀释涂板法 稀释混合平板法（混菌法） 划线分离 微生物的培养
微生物的分离—平板涂抹法
实验程序2（微生物的分离—混菌法）
制平板 吸取稀释液 取一吸管，以无菌操作法吸取10－4土壤稀释液 0.1mL，加在空培养皿中。 混菌 水平轻轻转动培养皿，使菌液、培养基充分混 匀铺平，放在平坦的桌面上，凝固后倒置于恒 温培养箱培养。 计算出每克土壤中放线菌的数量。 挑取单个菌落，进行划线分离。