实验12土壤微生物的分离及纯化

制平板： 每组有培养 皿3付。

在无菌培养 皿底部注明 分离菌名、 稀释度、组 别、班级。
实验步骤1（微生物的分离—稀释涂平板法）

制备土壤稀释液：(无菌操作过程见教师示范） 1. 称取土壤1g，放入10mL无菌水的三角瓶中，振荡 10min，即为稀释10－1的土壤悬液。
2. 另取装有9mL无菌水试管3支，用记号笔编上10－2、 10－3、10－4。取已稀释成10－1的土壤液，振荡后静止 0.5min，用无菌吸管吸取1mL土壤悬液加入10－2的无菌 水的试管中，并在试管内轻轻吹吸数次，使之充分混匀， 即成10－2土壤稀释液。同法依次连续稀释至10－4 土壤稀 释液。
实验原理

土壤是微生物生活的大本营，为了获得 某种微生物的纯培养，一般是根据该微 生物对营养、酸碱度、氧等条件要求不 同，而供给它适宜的培养条件，或加入 某种抑制剂，淘汰其他一些不需要的微 生物，再用各种方法分离、纯化该微生 物，直至得到纯菌株。
稀释涂板法、稀释混合平板法、划线分离
实验材料

实验程序3（微生物的分离—平板划线法）


制成平板。 凝固后，用接种环取相应的菌液一环（10－1）在平板上划 线。 1.连续划线法：将挑取有样品的接种环在平板培养基表面 作连续划线。完毕后，倒置于28～300C温室培养。 2.分区划线法：用接种环以无菌操作挑取土壤稀释液1环， 先在培养基的一边作第一次平行划线3—4条，再转动培养 皿约600C角，并将接种环上剩余物烧掉，待冷却后通过第 一次划线部分作第二次划线会，同法依次作第三次和第四 次划线。划线完毕，盖上皿盖，倒置于温室培养。 挑取单个菌落接种于斜面培养基上，如果不纯，再移植纯 化，最后得到纯培养。
实 验 十一
土壤微生物的分离及纯化
目的要求
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初步掌握微生物的分离纯化和培养菌种的 基本方法。 练习微生物接种、移植和培养的基本技术， 掌握无菌操作技术。 掌握微生物的鉴定技术。


实验原理

自然界中各种微生物混杂生活在一起，要研 究某种微生物的特性，首先须使该微生物处 于纯培养状态。从混杂的微生物群体中获得 只含有某一株微生物的过程称为微生物的分 离与纯化。
平板划线法
注意事项


制备土壤稀释液时，要注意使土样均匀分散 在稀释液中。 注意无菌操作。
思考题

平板培养时为什么要把培养皿倒置？ 在划线分离时，为什么每次都需要将接种环 上的剩余物烧掉？


样品：新鲜土壤。 培养基：灭菌的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、高氏 一号培养基、马铃薯蔗糖培养基。 无菌水：装有10mL无菌水三角瓶、装有9mL无 菌水的试管。 其它：无菌培养皿、无菌吸管、无菌三角刮子、 电子天平、记号笔、接种环、酒精灯、火柴。
实验步骤
稀释涂板法 稀释混合平板法（混菌法） 划线分离 微生物的培养
微生物的分离—平板涂抹法
实验程序2（微生物的分离—混菌法）





制平板 吸取稀释液 取一吸管，以无菌操作法吸取10－4土壤稀释液 0.1mL，加在空培养皿中。 混菌 水平轻轻转动培养皿，使菌液、培养基充分混 匀铺平，放在平坦的桌面上，凝固后倒置于恒 温培养箱培养。 计算出每克土壤中放线菌的数量。 挑取单个菌落，进行划线分离。
图－1 土壤稀释液的 制备和稀释液的取样




吸取稀释液 取一吸管，以无菌操作法吸取10－4土壤稀 释液0.1mL，加在已制好的平板培养基上。 涂板 用刮铲将稀释液在培养机上充分混匀铺平， 倒置于恒温箱培养。 计算出每克土壤中细菌的数量。 即用某一培养皿内真菌的菌落数乘以该培 养皿接种液的稀释倍数即得。 挑取单个菌落，进行划线分离。