ELISA检测乙肝抗体
乙肝表面抗原检测流程
乙肝表面抗原检测流程
1. 采集样本，通常使用静脉血作为检测的样本。
医务人员会使用消毒的针头抽取一定量的血液。
2. 样本处理，采集到的血液样本会被送往实验室进行处理。
在实验室中，血清会被分离出来，以便进行后续的检测。
3. 酶免疫法检测，乙肝表面抗原通常使用酶免疫法（ELISA）进行检测。
ELISA是一种常用的免疫学检测方法，通过检测血清中特定抗原或抗体的存在来进行诊断。
4. 结果分析，实验室技术人员会分析样本中乙肝表面抗原的检测结果。
阳性结果表明患者体内存在乙肝病毒，阴性结果则表明患者体内暂时没有乙肝病毒的感染。
5. 结果报告，最终的检测结果会被记录在报告中，并由医生进行解读和诊断。
如果检测结果呈阳性，医生可能会建议进行进一步的检测以确认诊断，并制定相应的治疗方案。
需要注意的是，以上流程仅为一般的乙肝表面抗原检测流程，
具体的操作步骤可能会因医疗机构和实验室的不同而略有差异。
在进行乙肝表面抗原检测前，建议咨询专业医生以获取详细的检测流程和注意事项。
临床免疫学：ELISA检测“乙肝二对半”
(Enzyme linked immunosorbent Assay ELISA)
ELISA的概念
酶联免疫吸附试验 （enzyme-linked immunosorbent assay，
ELISA）
酶联：抗原或抗体的酶标记。 免疫：以抗原抗体特异性反应为基础。 吸附：抗原或抗体包被于固相载体表面。
7、中止显பைடு நூலகம்：每孔加入中止液50ul
8、判断结果：
①目测法：
•HBsAg， HBsAb， HBeAg
颜色 透明无色
结果 阴性
黄色
阳性
•HBeAb ， HBcAb
颜色
结果
黄色 透明无色
阴性 阳性
②比色法：波长450nm读取各孔OD值
• HBsAg， HBsAb， HBeAg 样品OD值/阴性对照OD值≥2.阳1 性
在固相载体表面实现抗原抗体的反应，通过酶标记的手段，酶催化底 物形成水解、氧化或还原反应，形成有色物质，其颜色的深浅与标本中的 抗原或抗体的量直接相关。
ELISA技术特点
• 具有良好的灵敏度和特异性，能满足临床 需要，应用广泛。
• 操作简单、无需昂贵的仪器投入，价格便 宜。
• 对环境几乎没有污染。
•阴性H对B照eAObD，值H/样B品cAObD值≥2.阳1 性
（建议双波长比色（450/630nm））
ELISA的注意事项
• 标本：内源性和外源性因素 • 试剂：试剂质量、批号、是否失效、平衡、摇匀 • 加样：不可太快，避免加在上部和产生气泡。
加试剂时不可重复加和漏加，或加在两孔之间。 • 温育：温度、时间、湿度、封片 • 洗板：手工或仪器 • 比色：建议双波长比色。 • 结果判定：反应终止后10分钟内 • 质量控制：内对照、室内质控、室间质评等 • 表面抗原阳性结果建议复查；灰区标本和矛盾结果建议复查 • 试剂盒应视为有传染性物质。
实验五：ELISA法检查乙肝表面抗原(HBsAg)
• 特点：
高度特异性：保持抗原抗体反应的特异性 高灵敏度：酶催化底物显色的高效性，pg水平微量检测 定性定量检测：反应液颜色深浅或光密度值
• 分类：
酶联免疫吸附试验：可溶性抗原或抗体 酶免疫组化法： 组织中或细胞表面的抗原。
酶联免疫吸附试验
• 洗涤必须彻底，防止产生假阳性； • 温育常采用的温度有43℃、37℃、室温和4℃等。37℃是实
验室中常用的保温温度，也是大多数抗原抗体结合的合适温 度。 • ELISA板放在湿盒内，可在盒底垫湿的纱布，将ELISA板放在 湿纱布上。反应板均不宜叠放，以保证各板的温度都能迅速 平衡。温浴的时间要严格控制。
•定量测定：酶标仪测定450nm波长下的OD值，根据标准曲 线计算样品抗原的浓度。
预期结果
• 阳性：显色为黄色 • 阴性：无色
1 23 4
阴性 阴性 阳性 阳性
ELISA注意事项
• 加样应加在板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可溅 出，避免产生气泡并迅速完成；一个人操作时，一次不宜多 于两块板同时测定。
免疫标记技术
1.定义：
将抗原-抗体反应与标记技术相结合，用放射性 同位素、酶或荧光素标记的已知抗体或抗原，通过 检测标记物，间接测定未知的抗原或抗体。
2.分类：
放射免疫测定法：131I，32P 免疫荧光技术：FITC，PE 免疫酶测定法：HRP，AP
免疫标记技术
用标记物标记抗体或抗原进行抗原抗体反应借以提高免
• 1、掌握ELISA（双抗体夹心法）的原理 • 2、熟悉ELISA实验操作方法，并了解其应
用
实验材料
HBsAg酶联免疫分析试剂盒 HBsAg阳性品，阴性对照品 移液枪，枪头 湿盒 酶标板，酶标仪 一次性手套 记号笔 计时器
血清乙型肝炎病毒e抗体检测(ELISA)作业指导书
血清乙型肝炎病毒e抗体检测（ELISA）作业指导书1. 原理在微孔条上预包被被纯化乙肝e抗体（HBeAb），配以酶标记抗原（HBeAb-HRP）、中和抗原（HBeAg）及TMB等其它试剂，采用竞争法原理检测人血清（或血浆）中乙肝e抗体（HBeAb）。
2. 标本采集2.1 采集前病人准备：受检者应空腹。
2.2 标本种类：血清或血浆。
2.3 标本要求：采集病人静脉血3ml（可用EDTA抗凝），室温放置不超过4小时，分离血清备用。
3. 标本储存：2-8℃保存不应超过24小时，-20℃不应超过3个月，-70℃长期保存，应避免反复冻融。
4. 标本运输：密封，室温运输。
5. 标本拒收标准：污染、标本量不足、严重溶血或脂血标本不宜作此项检测。
6. 试剂6.1 试剂名称：乙型肝炎病毒e抗体诊断试剂盒6.2 试剂生产厂家：英科新创（厦门）科技有限公司。
6.3 包装规格：96Test/Kit6.4 试剂盒组成：HBeAb微孔板，HBeAb酶标记抗原，中和抗原，HBeAb阳性对照血清，HBeAb 阴性对照血清，浓缩洗涤液，底物A，底物B，终止液，封口膜，自封袋。
6.5 试剂储存条件及有效期：2-8℃避光保存，有效期9个月。
7. 仪器设备7.1 仪器名称：自动酶标仪7.2 仪器厂家：Rayto7.3 仪器型号：RT-2100C8. 操作步骤8.1 平衡：将试剂盒各组分取出，平衡至室温（18-25℃），微孔板开封后，余者及时以自封袋封存。
8.2 配液：浓缩洗涤液配制前充分摇匀（如有晶体应充分溶解），浓缩洗涤液和蒸馏水或去离子水按1：19稀释后使用。
8.3 编号：将微孔条固定于支架，按序编号。
8.4 加样：分别用加样器在对照孔中加入阴、阳性对照血清各50μl于相应孔中。
8.5 加酶：分别在每孔中加入酶标记抗体50μl，轻拍混匀。
8.6 中和：分别在每孔中加入中和抗原（HBeAg）50μl，轻拍混匀。
8.7 温育：置37℃温育60分钟，室温平衡5分钟。
酶联免疫吸附试验(ELISA)检测乙肝病毒表面抗原
xx医科大学附属第五医院 xx
乙肝五项报告单
教学目标
• 掌握ELISA检测乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）的原理
酶联免疫吸附试验
技术简介
• 酶联免疫吸附试验：ELISA • 是一种固相酶免疫分析技术 • 即可检测抗原，又可检测抗体 • 广泛地应用于临床和科研检测 • 反应类型：双抗体夹心法、双抗原夹心法、竞争法…
固相载体（聚苯乙烯塑料） E E 酶标记乙肝表面抗体
乙肝表面抗体 血清中待测乙肝表面抗原
底物（底物缓冲液+ 底物液）
水浴箱37℃温育
血清中其他非待测抗原
双抗体夹心法
检测HBsAg反应原理示意图 1、特异性抗体与固相载体结合，形成固相抗体
包被 固相乙肝表面抗体
双抗体夹心法
检测HBsAg反应原理示意图 2、加入待测标本，温育，形成固相抗体-待测抗原复合物
抗原抗体反应具有高度的特异性
酶联免疫吸附试验
如何应用双抗体夹心法检测HBsAg?
双抗体夹心法
方法简介
• 是ELISA检测抗原最常用的方法 • 适用于检测含有至少两个抗原决定簇的多价抗原
双抗体夹心法
检测HBsAg三个必要试剂
• 固相化的抗体 • 酶标记的抗原 • 酶反应的底物
双抗体夹心法
反应基本原理
课后思考题
• 试着分析乙型肝炎病毒表面抗体（HBsAb）的检测原理？
提示：双抗原夹心法
EE
EE
EE
EE
固相乙肝表面抗体-待测乙肝表面抗原-酶标乙肝表面抗体复合物
双抗体夹心法
检测HBsAg反应原理示意图
6、加底物，固相载体结合的酶催化底物显色
乙肝实验报告
一、实验背景乙型肝炎（Hepatitis B）是一种由乙型肝炎病毒（HBV）引起的肝脏感染疾病，具有高度传染性。
乙型肝炎病毒主要通过血液、性接触和母婴垂直传播。
乙型肝炎病毒感染可分为急性乙型肝炎和慢性乙型肝炎。
急性乙型肝炎多数病例可自愈，而慢性乙型肝炎则可能导致肝硬化、肝细胞癌等严重后果。
为了了解乙型肝炎病毒的感染情况和病毒复制水平，本实验采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测了乙型肝炎病毒五项指标，包括乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）、乙型肝炎病毒表面抗体（HBsAb）、乙型肝炎病毒e抗原（HBeAg）、乙型肝炎病毒e抗体（HBeAb）和乙型肝炎病毒核心抗体（HBcAb）。
二、实验目的1. 检测乙型肝炎病毒感染情况，判断患者是否为乙型肝炎病毒感染者。
2. 评估病毒复制水平，为临床诊断和治疗提供依据。
三、实验方法1. 标本采集：采集患者血清，置于-20℃冰箱保存。
2. 试剂与仪器：乙型肝炎病毒五项检测试剂盒（ELISA法）、酶标仪、移液器、离心机等。
3. 实验步骤：1. 将试剂取出室温平衡30分钟。
2. 按照试剂盒说明书进行操作，包括加样、孵育、洗涤、显色等步骤。
3. 使用酶标仪检测各孔的吸光度值（OD值）。
4. 根据标准曲线计算各指标的含量。
四、实验结果1. HBsAg阳性，表明患者为乙型肝炎病毒感染者。
2. HBsAb阴性，表明患者未产生保护性抗体。
3. HBeAg阳性，表明病毒复制活跃。
4. HBeAb阴性，表明病毒复制尚未停止。
5. HBcAb阳性，表明患者曾感染或正在感染乙型肝炎病毒。
五、分析与讨论1. 本实验结果显示，患者为乙型肝炎病毒感染者，病毒复制活跃，可能存在慢性乙型肝炎的风险。
2. 患者未产生保护性抗体，建议接种乙型肝炎疫苗，以提高免疫力。
3. 患者HBcAb阳性，表明曾感染或正在感染乙型肝炎病毒，需进一步检查肝功能，以评估肝脏损伤程度。
六、结论本实验采用ELISA法检测了乙型肝炎病毒五项指标，结果表明患者为乙型肝炎病毒感染者，病毒复制活跃。
乙肝检测实验报告
一、实验名称乙肝检测实验二、实验目的1. 了解乙肝病毒的基本知识。
2. 掌握乙肝病毒检测的方法和原理。
3. 学会使用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测乙肝病毒标志物。
三、实验原理乙肝病毒（HBV）是一种嗜肝病毒，主要通过血液、性传播和母婴传播途径传播。
为了预防乙肝病毒的感染，我国已将乙肝疫苗纳入国家免疫规划。
乙肝病毒检测是预防和控制乙肝病毒感染的重要手段。
本实验采用ELISA方法检测乙肝病毒标志物，包括HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb和HBcAb。
ELISA是一种基于抗原-抗体特异性结合的免疫学检测方法，其原理是利用酶标记的抗体（或抗原）与标本中的相应抗原（或抗体）特异性结合，通过酶催化底物反应的生物放大作用显示免疫复合物的存在，从而提高检测的敏感性。
四、实验材料1. 标本：待测血清样本。
2. 试剂：HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb和HBcAb的ELISA试剂盒。
3. 仪器：酶标仪、微量加样器、移液器、离心机、恒温水浴箱等。
五、实验步骤1. 标本处理：将待测血清样本进行室温下平衡，按试剂盒说明书进行稀释。
2. 标本加样：将稀释后的样本加入ELISA试剂盒的反应孔中，每孔100μL。
3. 加入试剂：按照试剂盒说明书加入相应的试剂，包括抗原包被板、酶标记抗体、底物等。
4. 避光孵育：将反应板放入恒温水浴箱中，避光孵育一段时间。
5. 洗板：按照试剂盒说明书进行洗板操作。
6. 显色：加入底物溶液，混匀，室温避光反应一段时间。
7. 终止反应：加入终止液，终止反应。
8. 比色：使用酶标仪在特定波长下测定吸光度（OD值）。
六、实验结果与分析1. 结果判定：根据试剂盒提供的标准曲线或参考值，判断标本是否阳性。
2. 结果分析：分析标本中乙肝病毒标志物的检测结果，了解乙肝病毒感染情况。
七、实验讨论1. 乙肝病毒感染情况：根据实验结果，分析待测血清样本中乙肝病毒标志物的检测结果，判断是否存在乙肝病毒感染。
1.2乙肝表面抗体检测操作规程1
乙型肝炎病毒表面抗体检测（ELISA）1原理在微孔板上预包被被纯化的乙肝表面抗原（HbsAg），配以酶标记抗体（HbsAg-HRP）及TMB等其它试剂，采用夹心法原理检测人血清（或血浆）中乙肝表面抗体（HBsAb）。
2试剂：2.1试剂名称：乙型肝炎病毒表面抗体诊断试剂盒（酶联免疫法）2.2试剂生产厂家：英科新创（厦门）科技有限公司2.3包装规格：96Test/Kit2.4试剂盒组成：HbsAg预包被微孔板（包被HbsAg），HbsAb酶标抗体（含HRP标记HbsAg）, HbsAb阳性对照（含HbsAbde 阳性血清），HbsAb阴性对照血清（正常人血清），浓缩洗涤液（PBS-T缓冲液），底物A（含H2O2），底物B（含TMB），终止液（含2M H2SO4），封板膜，自封袋，说明书。
2.5试剂储存条件及有效期：2~8℃避光保存，有效12个月。
3样本采集：取静脉血3-4ml于干净容器中分离出血清或血浆标本，如不及时测定可置于4℃冰箱保存，如长期保存需置于-15至-20℃冻存，并避免样本反复冻融。
高脂血、高胆红素及溶血样本可能会影响试验结果的准确性，建议不使用。
4所需仪器4.1全自动酶免分析仪4.2新鲜蒸馏水或去离子水4.3酶标仪（单波长450nm或双波长450nm/630nm）4.4微量移液器4.5 37℃恒温箱或水浴箱4.6洗板机或洗瓶5检验方法5.1平衡：将试剂盒各组分从盒中取出，平衡至室温（18~25℃），微孔板板开封后，余者即时以自封袋封存。
5.2配液：浓缩洗涤液配置前充分摇匀（如有晶体应充分溶解），浓缩洗涤液和蒸馏水去离子水按1：19稀释后使用。
5.3编号：取所需数量微孔条固定于支架，按序编号。
5.4加样：分别在相应孔中加入50ul阴、阳性对照血清或待测样本。
5.5加酶：分别在每孔中加入酶标记抗体50ul；轻拍混匀。
5.6温育：置37℃温育25min。
5.7洗涤：用洗涤液充分洗涤5次、洗涤后扣干（每次应保持30~60s的浸泡时间）。
ELISA法检测乙肝五项的影响因素与临床意义
ELISA法检测乙肝五项的影响因素及临床应用【摘要】众所周知，乙肝的致病原是乙肝病毒，乙肝病毒在肝细胞内生存、复制后，再排出到血液中。
所以不仅血流中病毒高负荷，而且肝脏的大多数肝细胞都被感染。
当今社会谈乙肝色变，主要有下列几个方面：长期病毒携带或患病怕传染给亲属和周边的人群，同时亦担心受到社会的歧视；治疗乙肝和各种护肝药名目繁多，且各有利弊而不知所从；长期病毒携带或久治不愈而演化成肝硬化甚至肝癌。
作为检测乙肝五项的工作人员应该慎重操作，对每一个结果负责，不能因假阳性引起患者的心理压力和精神痛苦，造成不必要的纠纷。
【关键词】ELISA法；乙肝两对半；乙肝两对半又称乙肝五项，为国内常用的乙肝病毒(HBV)感染的检测血清标志物。
乙肝病毒免疫学标记有表面抗原(HBsAg)、表面抗体(抗-HBs或HBsAb)、e抗原(HBeA g)和e 抗体(抗-HBe或HBeAb)、核心抗原(HBcAg)和核心抗体(抗-HBc或HBcAb)”。
可检测患者是否感染乙肝及感染的具体情况。
随着现代临床免疫学的发展，酶联免疫吸附试验(ELISA) 因其操作简单、灵敏度高、特异性高等特点而广泛应用于乙肝五项的检测。
但由于乙肝标志物检测生产试剂厂家较多，各种试剂诊断灵敏度及特异性相差很大，因此，如何选择灵敏度高、特异性好的乙肝标志物检测试剂成为乙肝检测中至关重要的问题之一。
本研究分别选择3家国产ELISA试剂盒对来甘肃省武威肿瘤医院参加健康体检患者血液样品进行乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)检测，乙肝表面抗原(HBsAg)检测试剂盒，通过ELISA法检测300例健康体检患者血清中HBsAg水平，检测出的阳性标本再用免疫胶体金试纸条检测，比较三个不同公司生产试剂盒检测阳性率及与金标试纸条法检测的一致性，现报道如下：1资料与方法1 ．1一般资料选择我院2013年7月——2 013年11月健康体检患者300例，其中，男170例，女130例；年龄20～54岁，平均30岁。
ELISA2乙肝两对半
6. 显色：先加显色液A50ul，再加入显色液 B50ul，贴上封膜，37℃反应15min(避 光)；
注：显色从加入第一滴显色液B开始计时 7. 终止：加终止液50ul； 8. 判读：终止反应后10min内完成。
(450nm处测定吸光度)
结果判断及解释： COV=2.1×N
阴性对照A≤0.10，阳性对照A≥1.0，否 则实验无效。 S≥COV 阳性 S＜COV 阴性
e抗体检测(竞争抑制法)
1. 准备：试剂盒各组份在37℃平衡30min； 2. 配洗涤液：按1：20将20×洗液稀释； 3. 加样品及酶标：各50ul，同时设阳性、阴
性 4. 孵育：贴上封膜，孔中滞留
【目的要求】
1.进一步熟悉酶标仪及洗板机； 2.掌握乙肝两对半的检测。
【原理】
项目 表面抗原 表面抗体
e抗原 抗e抗体 核心抗体
HBsAg 抗-HBs HBeAg 抗-HBe 抗-HBc
检测原理 双抗体夹心法 双抗原夹心法 双抗体夹心法 竞争抑制法 竞争抑制法
【器材】
BIORAD680型自动化酶免分析仪、 BIORAD全自动酶标洗板机、微 量加样器、吸头等
结果判断及解释： COV=2.1×N
阴性对照A≤0.10，阳性对照A≥1.0，否 则实验无效。 S≥COV 阳性 S＜COV 阴性
表面抗体检测(夹心法)
1. 准备：试剂盒各组份在37℃平衡30min； 2. 配洗涤液：按1：20将20×洗液稀释； 3. 加样品及酶标：各50ul，同时设阳性、阴
性 4. 孵育：贴上封膜，37 ℃反应30min; 5. 洗板：洗板机5次，每次洗液在孔中滞留
时间10-15s，并注满反应微孔；
乙肝抗体的检测实验报告
一、实验背景乙型肝炎病毒（HBV）感染是全球范围内重要的公共卫生问题。
乙肝抗体检测是临床诊断和预防乙型肝炎的重要手段。
本次实验旨在通过酶联免疫吸附试验（ELISA）检测乙型肝炎表面抗体（HBsAb），了解实验对象的免疫状态，为乙型肝炎的防控提供依据。
二、实验目的1. 掌握乙型肝炎表面抗体ELISA检测方法；2. 评估实验对象的免疫状态；3. 为乙型肝炎的防控提供依据。
三、实验原理乙型肝炎表面抗体ELISA检测原理基于抗原抗体特异性结合反应。
将乙型肝炎表面抗原（HBsAg）包被于微孔板，加入待测血清，若血清中存在HBsAb，则与包被的HBsAg结合。
再加入酶标记的二抗，若HBsAb与HBsAg结合，则酶标记的二抗与HBsAb结合。
最后加入底物显色，根据颜色深浅判断HBsAb的存在。
四、实验材料1. 乙型肝炎表面抗原（HBsAg）包被微孔板；2. 待测血清；3. 酶标记的二抗；4. 底物；5. 洗涤液；6. 酶标仪；7. 移液器；8. 试剂盒说明书。
五、实验方法1. 标准曲线绘制：将不同浓度的HBsAb标准品按试剂盒说明书操作，检测吸光度（A值），以A值为纵坐标，HBsAb浓度为横坐标，绘制标准曲线。
2. 实验操作：a. 将微孔板置于酶标仪上，调整波长为450nm；b. 向微孔板每孔加入50μl待测血清，置于酶标仪上，37℃孵育30分钟；c. 向微孔板每孔加入50μl酶标记的二抗，置于酶标仪上，37℃孵育30分钟；d. 向微孔板每孔加入底物，置于酶标仪上，37℃孵育15分钟；e. 向微孔板每孔加入终止液，终止反应；f. 测量各孔的A值。
3. 结果判断：a. 根据标准曲线，计算待测血清的HBsAb浓度；b. 以HBsAb浓度≥10mIU/ml为阳性，低于10mIU/ml为阴性。
六、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：根据标准曲线绘制结果，A值与HBsAb浓度呈正相关。
2. 实验结果：本次实验共检测30份血清样本，其中18份样本HBsAb浓度为10mIU/ml以上，12份样本HBsAb浓度低于10mIU/ml。
第五节乙肝五项指标检测(ELISA双抗体夹心法)
（2）弃去孔内液体，用洗涤液注满每孔，弃 去拍干，反复5次。
（3）每孔in后加终止液一滴（2mol/L 50μl），终止反应。
H2SO4，
结果判断：
（1）目测法：阳性对照呈蓝色、阴性及空白 对照为无色，以此为依据来判断标本孔。
（2）比色法：以空白孔调零，用酶标仪测 492 nm吸光度，读取各孔A值，以标本吸 光度A值/阴性对照吸光度A值 ≥ 2.1者判为 阳性。
（2）抗-HBe检测 取出相应的包被板（或条）， 每孔加待测血清50μl，同时设立对照，每孔加 中和试剂50μl（试剂盒中配备），再加入酶结 合物50μl（空白孔不加），然后进行同抗-HBc 检测的操作过程，结果观察亦同抗-HBc，需反 看。
三、作业 撰写实验小论文1篇。 四、思考题 简述乙肝五项指标各自的医学意义？
（黄升海）
（二）材料
1.疑似乙型肝炎患者待检血清。 2.检测HBV“两对半”血清标志（HBsAg）
的ELISA试剂盒：包被有相应抗体或抗原的 反应条，酶结合物，阳性与阴性对照，洗 涤液，显色剂A、B，终止液。
（三）操作方法
参照所购试剂盒的操作说明书进行
1.乙肝表面抗原（HBsAg）检测
（1）每孔加待测血清50μl，每板设HBsAg阳 性、阴性及空白对照各一孔；再向每孔加 入酶结合物50μl（空白孔不加），用不干胶 封孔后，37℃水浴30min。
第五节 乙肝五项指标检测 （ELISA双抗体夹心法）
一、目的和要求 掌握乙肝五项指标检测的ELISA方法。
二、内容
（一）原理
乙型肝炎的微生物学检查中以抗原抗体检测 最常用，其中尤以酶联免疫吸附试验（ELISA） 为主，采用双抗体夹心法（一步法）。如乙肝表 面抗原（HBsAg）检测：包被马抗-HBs的单克隆 抗体于微孔板上，血清标本中HBsAg与其结合后， 再加入辣根过氧化酶（HRP）标记的抗-HBs，结 果形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，加入酶的底 物后使底物显色。
ELISA法检测血清中乙肝病毒表面抗体虚拟实验笔记
ELISA法检测血清中乙肝病毒表面抗体虚拟实验笔记
（实验主编：杨健，川北医学院）
实验一：肘静脉采血与分离血清
实验原理：带受试者完成三针乙肝疫苗免疫接种两个月后，对其进行肘静脉采血，将血液样本静置后离心分离血清用于检测乙肝病毒表面抗体，以判断乙肝疫苗的免疫效果
实验相关设备介绍：器材和试剂
采血针，压脉带，真空采血管，离心机，1000ul移液器，天平，-20℃冰箱，2ml离心管，恒温培养箱，无菌棉签，75%酒精，碘酒，采血垫
实验操作：
点击采血垫→压脉带→握拳→碘酒→酒精→采血针→真空采血管→压脉带→无菌棉签→培养箱→离心机→签字笔→移液枪→冰箱
实验二ELISA法检测血清乙肝病毒表面抗体
实验操作
血清样本→HBsAb阳性对照血清→HBsAb阴性对照血清→HBsAb酶标记抗原
酶标抗原添加1-5孔（左到右）→封口膜→培养箱→酶标板（每孔加入300ul洗涤液，轻晃酶标板1min，弃去，在吸水纸上拍杆，如此重复共洗涤5次）
点击洗涤液→加入1-6孔→酶标板晃动→吸水纸→底物A(1-6孔）
底物B→晃动标板→封口膜→终止液→晃动酶标板→酶标仪。
实验五ELISA法检查乙肝表面抗原
实验五ELISA法检查乙肝表面抗原
一、实验原理
ELISA（酶联免疫吸附测定）是一种酶联免疫法，它利用可见的酶促
反应（如酶标）来测定或检测特殊的抗原或抗体，也称为酶标免疫分析（ELISA）。
它的作用是，通过特定抗原与特殊抗体之间的特异性结合，
使反应剂（受体物质）发生可见的改变，以此来测定定量或定性的被测物
质（抗原或抗体）是否存在。
ELISA法是用来检测乙肝表面抗原（HBsAg）的一种快速简易的方法。
首先，将患者血清在微孔板上预先唾液，然后在微孔板上涂上特异性抗原
抗体，抗体和抗原结合形成复合体，最后将这种复合体添加进反应液中，
在其中一种特殊条件下，复合体中的受体物质会发生反应，此时可见的酶
标反应就出现了，检测结果就可以出现了。
二、实验步骤
1、准备实验样本和实验设备：患者血清样本，抗体，反应液，微孔板，洗涤盒，细胞培养室，实验酶标板和其他实验用品等。
2、抗原抗体涂覆：将患者血清在微孔板上唾液，然后用特异性抗体
对抗原抗体进行涂覆，并将抗体抗原复合体形成复合体。
3、反应液加入：将复合体加入反应液中，并在恒温水浴箱中反应，
使受体物质发生反应，产生可见酶标反应。
4、检测并判断结果：检测。
ELISA检测乙肝抗体
•
方法一 用于检测未知抗原的双抗体夹心法: 1. 包被：用0.05M PH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg／ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml， 4℃过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。(简称洗涤，下同)。 2. 加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔，阴性对照孔及 阳性对照孔)。 3. 加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃孵育0.5～1小时，洗涤。 4. 加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分钟。 5. 终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。 6. 结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈 颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测O·D值：在ELISA检测仪上，于450nm(若以ABTS显色，则410nm)处，以空白对照孔调零后 测各孔O·D值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。
链接后，仞
测物质的量直接相关，故跟据颜色反应的深浅进行定性或定量分析。
(三) 试剂器材 1. 试剂 (1) 包被缓冲液(PH9.6 0.05M碳酸盐缓冲液): NaCO３ 1.59克 NaHCO３ 2.93克 加蒸馏水至1000ml (2) 洗涤缓冲液(PH7.4 PBS)：0.15M KH2PO4 0.2克 Na2HPO４· 12H2O 2.9克 NaCl 8.0克 KCl 0.2克 Tween-20 0.05％ 0.5ml 加蒸馏水至1000ml (3) 稀释液： 牛血清白蛋白(BSA) 0.1克 加洗涤缓冲液至100ml 或以羊血清、兔血清等血清与洗涤液配成5～10％使用。 (4) 终止液(2M H２SO４）： 蒸馏水178.3ml，逐滴加入浓硫酸(98％)21.7ml。 (5) 底物缓冲液(PH5.0磷酸棗柠檬酸): 0.2M Na２HPO４(28.4克／L) 25.7ml 0.1Ma 柠檬酸(19.2克／L) 24.3ml 加蒸馏水50ml。
免疫检验法用于乙肝病毒血清标志物检测
免疫检验法用于乙肝病毒血清标志物检测本文旨在探讨免疫检验法在乙肝病毒血清标志物检测中的应用。
乙肝病毒是一种常见的病毒性肝炎病原体，其传染性强且可引发严重的肝脏疾病。
针对乙肝病毒感染的早期诊断和监测，准确、敏感的血清标志物检测至关重要。
免疫检验法已成为当前最常用的检测方法之一，其基于免疫学原理，通过检测人体产生的抗体或抗原来确定感染状态。
乙肝病毒感染已成为全球公共卫生问题之一。
由于乙肝病毒在早期感染阶段往往没有明显的临床症状，因此及早进行感染的检测至关重要。
血清标志物检测可以提供准确的诊断结果，从而帮助医生采取合适的治疗措施，并预防病毒传播。
免疫检验法以其高度特异性和灵敏性成为乙肝病毒血清标志物检测的首选方法。
1 免疫检验法概述免疫检验法是一种常用于乙肝病毒血清标志物检测的方法。
该方法通过检测人体血清中的特定抗原或抗体来确定是否感染了乙肝病毒。
免疫检验法基于免疫反应原理，利用抗原与抗体之间的特异性相互作用来实现检测。
其中，乙肝病毒的相关抗原有乙肝表面抗原（HBsAg）、乙肝e抗原（HBeAg）等，而人体产生的抗体则包括乙肝表面抗体（HBsAb）和乙肝核心抗体（HBcAb）乙肝e抗体（HBeAb）等。
根据不同的免疫检验方法，可以检测不同的乙肝病毒血清标志物，如酶联免疫吸附试验（ELISA）、放射免疫法（RIA）和荧光免疫分析法（FIA）等。
这些方法具有简便、灵敏、特异性高等特点，广泛应用于临床乙肝病毒感染的诊断和监测中。
2肝病毒血清标志物的检测方法2.1乙肝病毒表面抗原（HBsAg）的检测方法乙肝病毒表面抗原（HBsAg）的检测是乙肝病毒感染诊断的首要指标之一。
常见的检测方法包括酶联免疫吸附试验（ELISA）、放射免疫分析（RIA），以及荧光免疫分析（FIA）等。
ELISA是最常用的乙肝病毒表面抗原（HBsAg）检测方法之一。
该方法利用固相酶标板上已经固定好的抗HBsAg抗体，通过与患者血清中的HBsAg结合，形成特异性的抗原-抗体反应。
elisa检测hbsab实验报告
elisa检测hbsab实验报告ELISA 检测 HBsAb 实验报告一、实验目的本实验旨在通过酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测血清中乙型肝炎表面抗体（HBsAb）的水平，以评估个体对乙型肝炎病毒（HBV）的免疫状态。
二、实验原理ELISA 是一种基于抗原抗体特异性结合反应的检测方法。
在本实验中，将乙型肝炎表面抗原（HBsAg）包被在微孔板上，形成固相抗原。
加入待检血清后，其中的 HBsAb 会与固相抗原结合。
随后加入酶标记的抗人免疫球蛋白（二抗），形成抗原抗体酶标二抗复合物。
最后加入底物，通过酶催化底物显色，根据显色的强度来定量测定血清中HBsAb 的含量。
三、实验材料与设备1、试剂乙型肝炎表面抗原（HBsAg）ELISA 试剂盒，包括包被有 HBsAg的微孔板、酶标记的二抗、阳性对照、阴性对照、样品稀释液、洗涤液、显色液和终止液等。
待检血清样本。
酶标仪。
移液器。
恒温箱。
四、实验步骤1、准备工作将试剂盒从冰箱中取出，平衡至室温（约 20-25℃）。
配制洗涤液：将浓缩洗涤液用蒸馏水按规定比例稀释。
2、加样设空白孔、阴性对照孔、阳性对照孔和样品孔。
空白孔不加任何物质，阴性对照孔和阳性对照孔分别加入阴性对照和阳性对照血清，样品孔加入待检血清，每孔100μL。
血清样本需先用样品稀释液按一定比例稀释。
3、温育将微孔板放入恒温箱中，37℃温育 30 分钟。
4、洗涤小心吸出孔内液体，用洗涤液洗涤微孔板 5 次，每次浸泡 30 秒，然后拍干。
除空白孔外，每孔加入酶标记的二抗100μL。
6、温育再次将微孔板放入恒温箱中，37℃温育 30 分钟。
7、洗涤重复洗涤步骤 4。
8、显色每孔加入显色液 A 和显色液 B 各50μL，轻轻振荡混匀，室温避光显色 15 分钟。
9、终止每孔加入终止液50μL，终止反应。
10、测定使用酶标仪在 450nm 波长处测定各孔的吸光度（OD 值）。
五、实验结果1、结果判断以空白孔调零，读取各孔的 OD 值。
乙肝核心抗体 判断标准
乙肝核心抗体判断标准
乙肝核心抗体（HBcAb）是乙型肝炎病毒感染的一种标志物，其
阳性可能表示曾经感染过乙型肝炎病毒。
乙肝核心抗体的判断标准
通常包括以下几个方面：
1. 阳性和阴性判断，乙肝核心抗体检测结果通常为阳性或阴性。
阳性表示体内存在乙肝病毒感染的免疫反应，而阴性则表示未曾感
染或感染后已清除病毒。
阳性结果通常需要结合其他乙肝病毒标志
物进行综合分析。
2. 检测方法，乙肝核心抗体的检测方法包括酶联免疫吸附试验（ELISA）等，通过血清样本进行检测。
在实验室条件下进行检测，
根据试剂盒的说明书进行操作，得出检测结果。
3. 临床意义，乙肝核心抗体的阳性结果可能表示曾经感染过乙
型肝炎病毒，但并不代表当前是否处于活动性感染状态。
需要结合
其他乙肝病毒标志物及临床症状进行综合分析，以确定感染状态和
疾病进展情况。
4. 结果解读，乙肝核心抗体的检测结果需要由具备相关资质和
经验的医疗人员进行解读，结合患者的临床资料进行综合判断，以确定感染状态和制定相应的治疗方案。
总之，乙肝核心抗体的判断标准需要综合考虑检测方法、结果解读、临床意义等多个方面，以确定患者的感染状态和疾病进展情况。
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酶联免疫吸附实验—ELISA
• 实验原理
抗原或抗体吸附到固体相载体表面后，以及抗原抗体与酶连接 后，仍保持免疫活性和酶活性，当酶遇到相应第底物时，在酶的催 化下引起底物水解显色。产物的量与标体中受检物质的量直接相关， 故可根据颜色反应的深浅进行定性或定量分析。
ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗 体。在这种测定方法有三个必要的试剂：
操作步骤
1.从冰箱取出试剂盒，室温平衡30分钟。 2.按如下方式加待测血清，每孔1滴。
待1 待2 待2 阳性 阴性 空白
3.每孔加酶结合物1滴（孔上方悬空滴加，无气泡），混匀，空白 孔不加，置37度温箱30分钟。 4.取出反应板，弃液，拍干。 5.每孔注满洗条液，（不要溢出）静置5秒后弃液，拍干，重复洗 条5次，拍干。 6.每孔加显色剂A和B各1滴，置37度温箱15分钟。 7.每孔加终止液1滴混匀，观察结果。
标记物DH２+来自２O２细胞1D+2H2O
酶具有高效催化性：可加快化学反应的速率；在反应前 后没有质和量的改变；微量的酶便可发挥巨大的催化作用
• 酶联免疫吸附试验
用于检测可溶性 抗原或抗体
酶免疫技术
• 酶免疫组化法
用于检测组织或细胞 表面的抗原
酶联免疫吸附试验-ELISA
ELISA是一种免疫测定（immunoassay， IA）。抗原或者抗体的固相化及抗原或抗体 的酶标记：加入酶反应的底物后，底物被 酶催化成为有色产物；产物的量与标本中 受检物质的量直接相关，由此进行定性或 定量分析。
• 免疫标记技术 免疫标记技术是用荧光、酶、或者放射性核素等标记抗体或抗原，利用 标记技术的高度敏感性进行的抗原抗体的反应。
标记物
细胞1
细胞2
分类
荧光素
放射性核素
酶
放射免疫技术
免疫荧光技术
免疫酶技术
免疫酶技术
用酶标记的抗原或抗体进行的抗原抗体反应。可用酶标测定仪测 定光密度(OD）来反应抗原或抗体含量，灵敏度可达到ng—pg/ml。
（1）免疫吸附剂 （2）结合物 （3）酶反应的底物
ELISA的类型
间接法（测抗体） 双抗体夹心发（测大分子抗原） 竞争发（测小分子抗原）
竞争法
用于抗原和半抗原的定量测定，也可用于测定抗体。以测定抗 原为例，将特异性抗体吸附于固相载体表面，经洗涤后分成两组： 一组加酶标记抗原和待测抗原的混合液，而另一组加酶标记抗原， 再经孵育洗涤后加底物显色，这两组底物降解量之差即为所要测定 的未知抗原的量。 这种方法所测定的抗原只有一个结合部位就可，因此，对小分 子抗原如激素和药物之类的测定常用此法。该法的优点就是快，因 此只有一个保温洗涤过程，但常需用较多的酶标记抗原。
ELISA检测乙肝抗体
组员：李家成（1520150102） 林其聪（1520150103） 付 强（1520150104） 郑海军（1520150105） 管 汝（1420151143） 分工 汇报：林其聪 PPT制作：李家成，付强
ELISA检测乙肝抗体
肝表面抗体ELISA检测
实验目的 1.掌握ELISA的原理和操作方法。 2.熟悉酶标仪的使用方法。