淋球菌培养及鉴定

+
+ 灰白→棕色、易 乳化
分泌物
小
直接涂片染色
结
革兰阴性细 胞内双球菌
百度文库未见革兰阴性 细胞内双球菌
男性确诊 女性（其 他标本）
分泌物培养 （巧克力色平板）
可疑菌落（菌落形态、阴性双球菌、 氧化酶阳性）
涂片染色 生化反应 DNA检测
免疫荧光
淋球菌培养关键
取材部位准确 女性病人标本：取宫颈内膜分泌物 男性病人标本：取尿道口脓性分泌物
培养基预温 立即接种 最好床边接种 合适的培养基 CO2培养
淋球菌鉴定
分泌物 直接涂片染色
初步报告
分离培养 可疑菌落
生长特性
涂片染色
生化反应
平板生长特性
经24h~48h的培养后，可形成圆形、凸起 、湿润、光滑、半透明或灰白色菌落，似 露水珠，易乳化，直径为0.5mm ~1.0mm 。
淋球菌形态
致病性
传染方式：成人 性接触 初生婴儿 患病母亲产道感染 致病物质：菌毛 外膜蛋白PI：中性粒细胞受损 外膜蛋白PII：黏附 外膜蛋白PIII：阻抑抗体活性 IgA1酶:破坏粘膜局部抗体
所致疾病
男性——急性淋菌性前尿道炎 女性——淋菌性宫颈炎、尿道炎 初生婴儿——脓漏眼 发展： 男性——后尿道炎、前列腺炎、精囊炎 、附睾炎等 女性——子宫内膜炎、输卵管炎等
鉴定试验
氧化酶试验 糖分解试验（葡萄糖、麦芽糖、蔗糖） 30％过氧化氢试验
鉴定依据
形态染色典型：革兰阴性球菌 培养特性：光滑、湿润、易乳化菌落 生化反应：氧化酶阳性、仅分解葡萄糖 （麦芽糖、乳糖、蔗糖、果糖均不分解 ）
奈瑟菌属鉴定
生长
产酸
菌名
巧克力 或血琼 营养
脂 琼脂 (22℃) (35℃)
T-M培养基是在GC基础培养基中，加入血 红蛋白(1%)、抗生素(万古霉素3g/ml、粘 菌素7.5g/ml和制霉菌素12.5g/ml)和淋球菌 增菌剂，使绝大多数杂菌被抑制而淋球菌 菌落长得较大，在乎皿中几乎呈纯培养， 从而大大提高了由子宫颈、尿道，尤其是 咽和直肠部位分离出淋菌的阳性率。
淋球菌培养条件
葡 萄 糖
麦 芽 糖
乳 糖
蔗 糖
硝酸盐还 DNA 巧克力平皿上特
果
原
酶
点
糖
- 淋病奈瑟菌 - + - - - -
-
- 光滑,灰白色,透明
- 脑膜炎奈瑟 菌
- ++ - - -
-
- 光滑,灰,无色,透 明,个别淡黄
+ 粘膜奈瑟菌 + + + - + +
+
-
黄绿,光滑
d 卡他布兰汉 + - - - - -
淋球菌对外环境变化颇为敏感，对寒冷和干 燥抵抗力很弱。因此，为了保证培养有足够 的成功率，取材后应立即接种，标本离体时 间越短越好。 培养的最适温度为35℃~37℃，超过38.5℃ 或低于30℃便生长不良。因此，孵育的温度 要恒定。 淋球菌为需氧菌，但最初从人体分离时，为 促进生长，需用5%二氧化碳环境培养。
淋球菌培养条件
淋球菌的营养要求较复杂，所用的培养 基中应含有动物蛋白及细菌生长所需的 各种因子。目前国内常用的是血液琼脂 或巧克力琼脂。 国外常用的培养基有Thayer-Martin(TM)培养基、NewYork City(NYC)培养基 和Martin-Lewis(ML)培养基等。
T-M培养基
细菌培养：标本在选择性培养基上培养 ，可出现典型菌落，氧化酶试验阳性， 镜检可见到革兰阴性双球菌，
还可用检测淋球菌DNA，直接免疫荧光 试验协助确诊。
淋球菌培养
淋球菌是淋病的病原菌，为实验室确诊 淋病提供依据。（培养法为确诊淋病的 金标准） 淋球菌药敏试验，测定药物抑菌或杀菌 能力，以便准确有效利用药敏进行治疗。
淋球菌培养及鉴定
黄景维 2014-10-31
什么是淋球菌？
淋球菌即淋病奈瑟菌，属于奈瑟菌属。
共同点：革兰阴性球菌、单个或成双排 列、无芽孢、无鞭毛、有菌毛 触酶试验（+） 氧化酶试验（+） 不同点：对糖分解能力、硝酸盐还原能 力和DNA合成酶
淋球菌形态
淋球菌，是一种革兰阴性双球菌，呈卵 圆形或肾形，成对排列，直径约0．6—0 ．8~m，常位于多形核白细胞的胞浆内 ，慢性期则在细胞外。 生长适宜温度为37℃—38℃，淋菌不耐 热，干燥环境存活1—2小时，55℃5分钟 立即死亡，附着在衣裤和卧具上的淋菌 最多只能生存24小时，一般消毒剂易将 其杀死。
平板生长形态
镜检形态
从菌落上取材作涂片，革兰染色后可见 到菌的大小及染色的深度有差异，排列 也不一致，呈典型革兰阴性双球菌。
镜检形态
镜检形态
来自泌尿生殖道符合初步鉴定标准的分 离株，一般可诊断为淋球菌，准确率达 98%。 对于菌落形态不典型的分离株，来自咽 部、眼睛或其他泌尿生殖道外部位的分 离株，应作确诊试验。
后遗症：不育、不孕、异位妊娠
淋球菌感染
淋病是由奈瑟淋球菌所致的泌尿生殖系 统感染。 不仅可引起男性尿道炎、女性宫颈或尿 道炎，还可经血行播散引起菌血症。 临床表现因感染的人群不同，部位不同 而有差别
实验室鉴别淋球菌
直接涂片：取尿道或宫颈脓性分泌物涂 片，作革兰染色，镜下可见大量多形核 白细胞，细胞内可见数量不等的革兰阴 性双球菌。涂片对女性检出率低，有假 阴性，必要时应作培养。