蔬菜中硝酸盐和亚硝酸盐含量的测定
白菜、生菜和黄瓜中硝酸盐与亚硝酸盐的测定-离子色谱法
５ ４ ． ４ ５ ． ９
５ ５ ． ６ ５ ． ９
生 菜 ７ ． Ｏ ９ ４ ． Ｏ Ｏ ｌ １ ． ２ ２ １ ０ ３
２ ． ５ ０ ． ０
黄 瓜 ７ ． １ ６ ８ ． ０ ０ １ ４ ． ８ ４ ９ ６ ． ０
表 １ 标 准工 作 液 系 列 元素 硝酸盐 亚硝酸盐
名 称
ｍｇ ／ Ｌ ８ ｔ ｄ ５ １ ０ ． ０ ５ ． ０ ０ Ｉ Ｓ ｔ ｄ ６ ｌ １ ４ ． ０ Ｉ ７ ． ｏ ０
ＲＳ Ｄ（ ％）
Ｊ Ｓ ｔ ｄ ｌ １ ０ ｌ ０
３－ ５ ． ３ 样 品 处 理
Ｉ ． ！ ！苎
Ｉ 工业
称取风干 后的蔬菜５ ０ 克于搅拌机 中， 加水５ ０ ｍｌ ， 搅 拌２ 分钟 ， 再加入５ ０ ｍｌ 氢氧化钠 ， 搅拌 １ 分钟 。 密 闭超声 ３ ０ 分钟 ， 于７ ０ ￣ Ｃ 水 浴３ ０ 分钟 ， 冷 却至室温后用布 氏漏斗 过 滤至５ ０ ０ ｍｌ 容量瓶 中 ， 加水至刻度 ， 混匀， 静置取部分 上 清夜于离心管 中， ５ ０ ０ ０ ｒ ／ ｍｉ ｎ 离 心１ ０ 分 钟后过０ ． ４ ５“ 硝酸 盐对 人 体健康 的损害 不亚 于农 药 。 因为 硝酸 １ Ｔ Ｉ 滤膜后 备用 ； 同时作试剂 空 白。 盐不仅 容易诱 发糖尿病 ， 对 肾脏造成 的损 害也 十分 严 ３ ． ６样 品分 析 重。 肾脏 是 过滤 血液 和废 物 、 排 泄 水分 及 盐分 的重 要 ３ ． ６ ． １仪 器 工 作 条 件 器官 ， 如果 人们 摄取 了高 浓度 的硝 酸盐 ， 肾脏 的负 担 （ １ ） 流动相 ： Ｎａ ＨＣ ０ ３ １ ． ７ ｍＭ— Ｎａ ２ Ｃ Ｏ ３ １ ． ８ ａＭ。 ｒ 加重 ， 容易 引起溶血 性贫血 。 除此 之外 ， 留存 在蔬菜 内 （ ２ ） 柱温： ３ ５ ℃。 （ ３ ） 流速 ： ０ ． ８ ｍｌ ／ ｍｉ ｎ 。 （ ４ ） 泵压 ： Ｐ ｓ ｉ ８ ６ ４ 。 的硝 酸盐 在酶 和 细菌 的作 用 下 ， 被还 原成 亚硝 酸 盐 ， （ ５ ） 进样 量 ： ２ ５ ｕ ｌ 。 进而 与人体 内的蛋 白质类物质 结合 ， 生成 致癌性极 强 ３ ． ６ ． ２标 准 曲 线绘 制 的亚硝 酸 胺类 物质 。 配置 硝酸 盐标 准使用 液 ： 将硝 酸 盐贮备 液配 置成 亚硝 酸盐为强氧化 剂 ， 进人 人体后 ， 可使 血 中低铁 ２ ０ ０ ｍｇ ／ Ｌ的工作液 ， 配置标 准 曲线 ； 血红蛋 白氧化成 高铁血 红蛋 白 ， 十血红蛋 白失去 携氧 配置 亚硝 酸盐 标准使 用 液 ： 将 亚硝 酸盐 贮备 液配 能力 ， 致使 组织缺 氧 ， 并对 周 围血 管有扩 张作用 。 亚硝 置 成 １ ０ ０ ｍｇ ／ Ｌ的工作液 ， 配置标 准 曲线 ； 各 点浓 度见 酸盐 的危 害还 不 只是 使人 中毒 ， 它还 有致 癌作 用 。 亚 表 １ 。 硝酸 盐 可 以与食 物 或 胃 中的仲 胺 类物 质 作用 转化 为 硝酸 盐及亚硝酸 盐标准贮 备液 已用 国家环 境保 护 亚硝 胺 。 亚硝 胺具 有 强烈 的致 癌作 用 ， 主要 引起食 道 总 局 标准 样 品研 究 所 的硝 酸盐 及 亚硝 酸 盐标 样 进行 癌、 胃癌 、 肝癌、 和 大肠癌 等 。 此外 ， 亚硝酸 盐还 可通过 分 析过 ， 浓度 均在 不确 定度 范 围之 内。 乳 汁进入 婴儿 体 内 ， 造 成婴 儿机体 组 织缺 氧 ， 皮肤黏 打开 电脑 ， 接通气 源 ， 将 离子 色谱仪 打开 ， 预 热至 膜 出现青 紫斑 。 柱 温箱 温度到达３ ５ ℃， 打开泵 ， 流速为０ ． ８ ｍｌ ／ ｍｉ ｎ 至仪 器稳定。 按 照标 准 曲线各 工作 点依 次进样 ， 并 记录 仪 ２ 我国现有食品中亚硝酸盐与硝酸盐的监测分析方法 器 响应值 ， 求得一 元 线性 回归方程 。 Ｇ Ｂ ／ Ｔ ５ ０ ０ ９ ． ３ ３ － ２ ０ ０ ３ 食 品中亚硝 酸盐与硝酸盐 的 ３ ． ６ ． ３试 样 测 定
食品中亚硝酸盐的测定
（一）亚硝酸盐的测定
原理：试样经沉淀蛋白质、除去脂肪后，在弱酸条件下亚硝酸盐 与对氨基苯磺酸重氮化后，再与盐酸萘乙二胺偶合形成紫红色 染料，与标准比较定量。 试剂 1 亚铁氰化钾溶液：称取106.0g亚铁氰化钾，用水溶解，并稀 释至1000mL。 2 乙酸锌溶液：称取220.0g乙酸锌，加30mL冰乙酸溶于水， 并稀释至1000mL。 3 饱和硼砂溶液：称取5.0g硼酸钠，溶于100mL热水中，冷 却后备用。
（二）硝酸盐测定—镉柱法
原理
• 试样经沉淀蛋白质、除去脂肪后，溶液通过镉柱，使其
中的硝酸根离子还原成亚硝酸根离子，在弱酸性条件下 ，亚硝酸根与对氨苯基磺酸重氮化后，再与盐酸萘乙二 胺偶合形成红色染料，测得亚硝酸盐总量，由总量减去 亚硝酸盐含量即得硝酸盐含量。
（二）硝酸盐测定—镉柱法
1 氨缓冲溶液(pH9.6～9.7)：量取20 mL盐酸.加50 mL水，混 匀后加50 mL氨水，再加水稀释至1 000 mL，混匀。
• 井水中含有亚硝酸盐，据报道广东一村庄受井水中亚硝酸盐危
害几十年，男人寿命不足40岁，经化验结果表明亚硝酸盐含 量大大超过国家标准。
• 亚硝酸盐在食品生产中作为食品添加剂使用，用作发色剂和防
腐剂，允许用于肉及肉制品的生产加工中，其作用是使得肉与 肉制品呈现良好的色泽。
1.农产品中硝酸盐来源
• 化肥：硝酸铵、硝酸钙、硝酸钾、硝酸钠和尿素等； • 生活污水、生活垃圾与人畜粪便：1公斤垃圾粪便堆肥在自然
够容纳 2 倍试样体积的带盖容器中，通过反复摇晃和颠倒容器使样品充 分混匀直到使试样均一化。
• 发酵乳、乳、炼乳及其他液体乳制品：通过搅拌或反复摇晃和颠倒容器使
试样充分混匀。
• 干酪：取适量的样品研磨成均匀的泥浆状。为避免水分损失，研磨过程中
蔬菜中硝酸盐和亚硝酸盐的测定及含量分析
蔬菜中硝酸盐和亚硝酸盐的测定及含量分析
硝酸盐和亚硝酸盐在一些地区的日常食物中存在，如蔬菜和肉类。
它们也被添
加到食品中，如香肠和酱油，以改善口感和保鲜时间，可以减少有害微生物的生长。
硝酸盐和亚硝酸盐在高浓度下有毒，所以监管机构和食品安全官员必须密切监测它们在食品中的含量，以确保食物安全。
为了确定蔬菜中硝酸盐和亚硝酸盐的含量，原理是用水解和酸解的方法，然后
用标准的分光光度法进行测定分析。
首先解冻样品，采用乙醇或其他适当的溶剂消化；消化液可以用酸浓度调节器进行调节，如HCl或NaOH；然后将消化液向容易
对比度测量物体中添加适量氧化铌，水解时加热蒸发；最后添加分光光度滴定液，如凯氏滴定液，测量出总硝酸盐摩尔浓度，并建立比例。
以上是硝酸盐和亚硝酸盐在蔬菜样品中的分析测定方法。
硝酸盐和亚硝酸盐的含量可以通过上述方法利用标准的分光光度法确定。
这一
测定方法简单容易，重点是精确度较高，可以准确检测出不同样品中硝酸盐和亚硝酸盐的含量，从而提高食物的安全性。
蔬菜中亚硝酸盐含量测定实验方案
蔬菜中亚硝酸盐含量测定实验方案烹饪蔬菜在不同保存条件下的亚硝酸盐含量变化一、实验原理蔬菜样品经磨碎后，样品中的亚硝酸盐可被饱和硼砂溶液提取至溶液中；弱酸性条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸反应生成重氮盐，再与盐酸萘乙二胺偶合成红色染料，于538nm处测定吸光度，亚硝酸盐含量与溶液吸光度成正比。
二、仪器和试剂仪器1、分光光度计2、分析天平3、搅拌机4、振荡机5、电热恒温水浴锅6、烧杯、移液管、容量瓶等试剂1、饱和硼砂溶液（50g/L）称取10.0g硼酸钠（Na2B4O7·10H2O），溶于200mL热水，冷却后备用；2、亚铁氰化钾溶液（0.25mol/L）称取26.5g亚铁氰化钾（K4Fe(CN)6·3H2O），溶于水，定容至250mL; 3、乙酸锌溶液（1mol/L）称取55.0g乙酸锌（Zn(CH3COO)2·2H2O）加7.5mL冰醋酸（CH3COOH）4、对氨基苯磺酸（0.4%）称取0.4ｇ对氨基苯磺酸（C6H7NO3S），溶于100 mL 20 %（体积比）盐酸中，置棕色瓶中混匀，避光保存。
5、盐酸萘乙胺溶液（0.2%）称取0.2 g 盐酸萘乙二胺（C12H14N2·2HCl），溶于100 mL 水中, 混匀后，置棕色瓶中，避光保存。
6、亚硝酸钠标准储备液（200 μg /mL）称取0.1000ｇ于110℃～120℃干燥恒重的亚硝酸钠（预先在干燥器中放置24h以上），加水溶解移入500 mL 容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀，储于棕色瓶，冰箱中保存。
7、亚硝酸钠标准使用液（10μg /mL）吸取储备液5.00mL于100mL容量瓶中，定容，临用时配制。
8、粉末状活性炭。
三、测定步骤1、样品前处理烹煮后的白菜暴露在空气中冷却30分钟，模拟一般家庭进食情况，随后把样品分成3分。
对照组暴露在空气中常温保存；实验组A 置于冰箱中4℃下保存；实验组B用保鲜膜密封于常温下保存。
离子色谱测定对蔬菜中亚硝酸盐及硝酸盐的研究
图1 样品中氯离子、亚硝酸根离子色谱图2.2 检测范围为了验证色谱测定法的极限测定范围，使用不同浓度的硝酸根离子（0～100 mg/L）和亚硝酸根离子（0～200 mg/L）—），女，广东信宜人，本科，助理工程师。
研究方向：食品的理化检验工。
图2 样品硝酸根离子与亚硝酸根离子色谱图2.4 对照实验分别采用离子色谱法（IC）与比色法测定大白菜鲜样中硝酸根离子和亚硝酸根离子的含量，进行对照实验，测定结果详见表3，从数据上看，两次方法的检测结果数据基本接近，无明显差异，表明检测方法结果数据可靠，稳定性好，对实际蔬菜监控中具有指导意义，在实际应用中，根据卫生部门的指导标准进行监控，能够快速将不合格的蔬菜查出，部分蔬菜实际测试图谱如图3所示。
表3 对照实验结果阴离子亚硝酸根离子/（mg/kg）硝酸根离子/（mg/kg）测定方法比色法IC比色法IC测定值12.612.5138.8125.813.913.5524.4834.514.815.8350.2325.5 30.527.3159.7178.6 7.97.4341.8357.5 16.915.8161.9180.8t值－ 1.354－ 2.098图3 部分样品色谱图2.5 样品测定通过前述的方法，证明离子色谱分析测定法的结果数据可靠性高，为了应用于实践总，按上述条件对上海地区7种蔬菜进行测定，结果详见表4，从数据上看，每种蔬菜的亚硝酸根离子与硝酸根离子浓度都能定量分析，如韭菜、空心菜等显示亚硝酸根离子浓度很低，使监控人员对蔬菜的质量能有直观的判断。
表4 上海地区蔬菜测试结果蔬菜亚硝酸根离子平均值/（mg/kg）RSD/%硝酸根离子平均值/（mg/kg）RSD/%韭菜＜0.03—257.37 3.2香椿475.26 2.2455.48 2.6空心菜＜0.04—586.33 4.2蒜苗 1.08185.25 2.7葱＜0.04—225.04 1.7茴香0.89 1.5469.26 2.8油菜 4.77 2.72886.36 4.53 结论对于新鲜蔬菜中的硝酸根离子和亚硝酸根离子，离子色谱分析测定其含量，样品需要经过前期的处理，如柱处理等。
高效液相色谱法同时测定蔬菜中的硝酸盐和亚硝酸盐
用 ｌＯ ￣ｍ 的硝酸钠和亚硝酸钠标准使用液配制标准 系 Ｏｕ ｌ
列 浓度 。在 ０５～ ０ ｇｍ 范 围内成 线 性关 系 ， ． ５ ｕ／ ｌ 相关 系数 大 于 ０ ．
２ ４ 氯化 钠 对检 测结 果的 影 响 ．
９９ ． 据 ＩＰ Ｃ的规 定 倍 噪 音 为 样 品 检 出 限 ， 酸钠 的 检 出 ９２ 根 ＵＡ 硝
健康 天地
２１ ００年
第 ４卷
第 ２期
综 述
高效液 相色谱法 同时测定 蔬菜 中的硝酸盐 和亚硝酸盐
尹 华
蔬菜中富含硝酸盐 ， 亚硝酸盐在新 鲜蔬菜 中含量很低 ， 但
是在 运 输 、 存 、 工 过 程 中 由 于 硝 酸 盐 还 原 酶 和 微 生 物 的 作 储 加 用， 硝酸 盐 可被 还 原 为 亚 硝 酸 盐 。众 所 周 知 ， 期 食 入 过 量 含 长
速 ：．ｍ／ ｉ １０ ｌｍ ｎ
两者不仅可以完全分离 ， 而且色谱峰型漂亮 ｊ 。见图 １
柱 温 ： ℃ 检 测波 长 ：１ ｎ ３ ０ ２０ ｍ进 样 量 ２ｕ 保 留时 间定性 ， ０ｌ 峰
面积 定 量
１ ２ 样 品 预 处 理 ．
称取 １ｇ 右 绞碎 均 匀 的样 品 ， ８ ｍ 水洗 人 １０ ｌ 量 ０左 用 ０ｌ ０ｍ容
瓶中， 超声 提取 ３ ｍｎ 每 隔 ５ ｉ ０ ｉ， ｍ ｎ振摇一次 ， 保持 固相 完全分
散 。于 ７ ℃水 浴 中放 置 ５ ｉ。 后 用水 定 容 至刻 度 。溶 液经 滤 ５ ｍｎ然
纸过 滤后 再 取上猜 液 过 ０ ４ ｕ 的膜 ， ．５ ｍ 待测 。
１ ３ 标 准 曲线 制备 ．
限为 ０ ２ ｇ亚硝 酸钠 的检 出限 为 ２ ｇ ．ｎ ， ｎ。
蔬菜的硝酸盐亚硝酸盐分光光度法测定
蔬菜硝酸盐亚硝酸盐分光光度计测定法仪器：分光光度计、组织粉碎机（或研钵小）、水浴锅、电子天平、冷藏冰箱、烘箱器材：烧杯500mL、容量瓶1000mL（至少2个）、250mL(多个)、100mL(至少8个)、50mL （至少2）。
5mL移液枪（或小于50mL量筒）、漏斗、铁架台、滤纸药品：硝酸钾、硼砂、亚铁氰化钾、乙酸锌、冰醋酸、活性碳粉（分析纯）去离子水。
试剂：饱和硼砂溶液（50g溶于1000mL热去离子水、下同）0.25mol/L亚铁氰化钾溶液（106g定容于1000ml容量瓶）1mol/L乙酸锌溶液（220g溶于30mL乙酸水混合物，定容至1000mL）100mg/L硝酸钾标准液（110摄氏度下烘至恒重的样品取0.1631g定容至1000mL）标准曲线的绘制吸取硝酸根标准贮备液0、2、4、6、8、10、12、14mL分别于8个100mL容量瓶中去离子水定容至刻度混匀配置成：0、2、4、6、8、10、12、14mg/L在风光光度计上220nm???处比色绘标准曲线。
实验步骤：1.取待测样品洗净吸干水分称取3g磨成匀浆（5分钟以内）2.将匀浆入用约80mL热水（70~80℃，不超过100mL）洗入250mL烧杯，加5mL饱和硼砂溶液，沸水浴15min并不时搅拌。
3.冷却洗入250mL容量瓶，加入10mL亚铁氰化钾溶液和10mL乙酸锌溶液沉淀蛋白，1g 活性炭吸附有机物（每加一种均需摇匀）定容至刻度，摇匀过滤的透明待测液。
（取100mL去离子岁做空白对照3个）4.分吸取2mL待测液与对照分别220nm（石英比色杯）处比色于标准曲线上读取浓度亚硝酸盐测定取叶片约5克磨成匀浆（五分钟内）称取匀浆3克于100mL烧杯中，用量筒量取4%的乙酸锌30mL倒入搅拌均匀，用2mol/L的NaOH调节pH至7.2-7.5，加入粉状活性炭0.5克，于70度恒温水浴锅加热30min并不时搅拌，后冷却到室温，用布氏漏斗初次抽滤，（用清洗玻璃棒的烧杯的液体洗涤滤渣3-5次），将滤液倒入100mL容量瓶后用约30mL的蒸馏水分多次清洗抽滤瓶洗液倒入容量瓶定容到刻度，用注射器和0.45um滤膜再次抽滤，吸取滤液10mL入25mL比色管加入2.5mL对氨基苯磺酸，摇匀震荡，5min后加入2.5mL的N-1-萘乙基乙二胺震荡摇匀，用4%的盐酸调节pH至1.1-1.3定容到刻度，取此溶液在540nm处比色。
蔬菜中的硝酸盐、亚硝酸盐的气相色谱法测定
蔬菜中的硝酸盐、亚硝酸盐的气相色谱法测定我们都知道，蔬菜中含有一定量的有毒物质，其中硝酸盐和亚硝酸盐就是其中重要的有毒物质。
它们的存在会对人体健康产生不利的影响，因此必须采取测量的方法，以便在食用前及时准确地测量出其中的硝酸盐和亚硝酸盐的含量，以确保食物的安全。
硝酸盐和亚硝酸盐的测量方法多种多样，但以其测定准确、灵敏等特点而被广泛采用的是气相色谱法。
它通过将硝酸盐和亚硝酸盐放入气相色谱仪中，以及利用其特定的色谱特征，分离出硝酸盐和亚硝酸盐，最后用浓度检测器对分离出的两种物质的浓度进行准确的测定。
气相色谱法测定的实验步骤较多，但每一步都是重要的，否则将会影响实验结果的准确性。
首先，实验者需要准备一定量的样品，并用容器容器把它们放在一起，然后用电离室把样品离心，这样才能保证实验结果的准确性。
接着，实验者需要准备相关的仪器、玻璃器皿，并用于吸收塔将离心的样品加入，之后将其载入气相色谱仪中，利用其特定的色谱特征，将硝酸盐和亚硝酸盐分离出来，并用浓度检测器对分离出的两种物质的浓度进行准确的测定，完成整个实验。
在气相色谱法测定硝酸盐、亚硝酸盐时，实验者必须特别注意准备工作，例如正确选择、精确调整样品、搭配适当的色谱仪器等，以保证实验结果的准确性。
此外，实验者也要留意实验中出现的异常情况，确保将异常情况及时处理，以减少影响实验结果的不利因素。
经过正确的气相色谱法测定，我们可以准确测量出蔬菜中的硝酸盐和亚硝酸盐的含量，从而确保食物的安全。
此外，实验者也可以利用上述方法，测量植物中其他含有毒物质的含量，来保证人们在食用时不受其影响。
因此，气相色谱法测定硝酸盐、亚硝酸盐在食品安全检测方面有着非常重要的意义。
综上所述，本文以《蔬菜中的硝酸盐、亚硝酸盐的气相色谱法测定》为标题，就气相色谱法测定硝酸盐和亚硝酸盐的实验步骤及重要性进行了详细的阐述，以便更好地保障食物的安全。
蔬菜中硝酸盐和亚硝酸盐含量的测定
蔬菜中硝酸盐和亚硝酸盐含量的测定摘要：蔬菜中的硝酸盐和亚硝酸盐是一种对人体有害的化学物质,其含量比其它植物都高,人体摄入它会引起多种疾病.本实验采用分光光度发分别对拜城县恰玛古，柯坪县恰玛古，伊宁市恰玛古，大白菜，黄萝卜，黄瓜中亚硝酸盐及硝酸盐含量进行测定。
结果表明：（1）亚硝酸盐：六种蔬菜中亚硝酸盐含量有明显的差异，测定结果是：大白菜0.7919mg/g，黄萝卜0.6930mg/g，黄瓜0.5763mg/g，拜城恰玛古0.5528mg/g，伊宁恰玛古1.1294 mg/g，柯坪恰玛古0.5174mg/g。
（2）硝酸盐：大白菜1.6098mg/g，黄萝卜0.0598mg/g，黄瓜0.7421mg/g，拜城恰玛古0.2608mg/g，伊宁恰玛古2.5308mg/g，柯坪恰玛古0.0317mg/g，蔬菜中亚硝酸盐含量的回收率88.80%。
关键词：硝酸盐；亚硝酸盐；蔬菜；测定方法；前言：蔬菜尤其是叶菜类蔬菜,是一种易于富集硝酸盐的植物。
人体摄入的硝酸盐81.2％来自蔬菜[1]。
硝酸盐本身毒性不大,对人畜无直接的危害,但含量过高对人体可能造成危害,因为在微生物的作用下极易还原为亚硝酸盐。
亚硝酸盐是一种有毒物质,可直接使动物中毒!造成亚铁血红蛋白症,严重可致死亡[2]。
亚硝酸盐，一类无机化合物的总称。
主要指亚硝酸钠.亚硝酸钠为白色至淡黄色粉末或颗粒状，味微咸，易溶于水。
外观及滋味都与食盐相似，并在工业、建筑业中广为使用，肉类制品中也允许作为发色剂限量使用。
由亚硝酸盐引起食物中毒的机率较高。
食入0.3～0.5克的亚硝酸盐即可引起中毒甚至死亡[3]。
硝酸盐,亚硝酸盐广泛存在于人类环境中,其对人类健康和生态环境的危害,日益受到人们的普遍关注。
硝酸盐在细菌的作用下可还原成亚硝酸盐,使血液的载氧能力下降,从而导致高铁血红蛋白症。
联合国世界卫生组织和粮农组织[4]早在1973 年就制定了食品中硝酸盐的限量标准,以ADI值为基础,提出蔬菜可食部分中硝酸盐含量的卫生标准为432mg/kg (鲜样),亚硝酸盐成人每人每日容许量为7.8mg。
蔬菜中亚硝酸盐含量测定
常州工程职业技术学院毕业设计报告（论文）（ 2009届）系别：制药与生物工程技术系课题名称：蔬菜中的亚硝酸盐含量测定指导教师：班级：学生姓名：摘要近几年来我国人口中患消化系统癌症的人数明显增多，根据学者的研究发现，造成这种现象的原因与我国人口摄入过多的硝酸盐和亚硝酸盐是分不开的。
工业、农业的发展和生活燃烧导致了地区和全球氮循环的混乱,亚硝酸盐的渗透还引起地下水污染,威胁着人类的健康。
尤其是化学氮肥的广泛使用，蔬菜中的硝酸盐残留量过高。
人体持续摄入少量的硝酸盐会引起消化不良、精神抑郁和头痛,当摄入0.3-0.5g亚硝酸盐即可引起中毒, 3克可致死。
另外亚硝酸盐能够透过胎盘进入胎儿体内,人体血液中亚硝酸钠浓度为 0.4mg/kg～200mg/kg时会产生毒性,孕妇食用过量的亚硝酸钠可导致胎儿畸形,特别是六个月以内的婴儿。
联合国粮农组织和世界卫生组织规定硝酸盐和亚硝酸盐的每日允许摄入量： KNO3 或 NaNO3 0.5mg/kg，KNO2或 NaNO2 0.2mg/kg。
为了更加健康的饮食习惯，本文开始研究蔬菜中的亚硝酸盐含量。
针对亚硝酸盐的测定，本文借鉴前人的经验设计出一套合理可行的分光光度法测定蔬菜中亚硝酸盐的方案，该方案的线性范围为0 mg/L～0.3 mg/L，线性相关系数r=0.999 x，检出限为0.14 mg/kg，回收率为94.61%～104%的亚硝酸钠含量。
分别测出芹菜、西红柿、大蒜在常规条件下的亚硝酸盐含量，分别对这三种蔬菜在不同浸泡时间、不同煮沸时间及不同放置时间下的亚硝酸盐含量进行检测。
不难发现减少亚硝酸盐的摄入，科学的蔬菜处理法是要浸泡至少20min，煮蔬菜时尽量减少煮沸的时间，煮熟的蔬菜隔夜的不宜食用。
另外还可以从该实验中看出叶菜类蔬菜中含有的亚硝酸盐含量要高于茄果类蔬菜和鳞茎类蔬菜。
关键词：分光光度法蔬菜亚硝酸盐探究AbstractIn recent years China's population with the digestive system in the number of cancer significantly increased, according to the research of the find, cause the reasons of this phenomenon and our country population excessive intake of nitrate and nitrite is not divided. Industry, the development of agriculture and life burning led to regional and global nitrogen cycle of chaos, the penetration of nitrite also caused a groundwater pollution, threatening human health. Especially the widespread use of chemical fertilizer, the vegetables nitrate residues were too high.The human body for a small amount of nitrate intake causes indigestion, depression and headaches, when intake 0.3 0.5 g nitrite cancause poisoning, 3 g can be deadly. Another nitrite can pass through the placenta to the fetus, the human body blood sodium nitrate concentrations in central Asia for 0.4 mg/kg to 200 mg/kg can produce the toxicity, the pregnant woman eat too much and sodium nitrate can cause of fetal abnormalities, especially within six months of the baby. The United Nations food and agriculture organization (fao) and the world health organization provisions of nitrate and nitrite allowed per day intake: easier or NaNO3 0.5 mg/kg, KNO2 or NaNO2 0.2 mg/kg.In order to more healthy eating habits, this paper studies the vegetables started nitrite content. According to the determination of nitrite, taking in the previous experience design a feasible spectrophotometry vegetables of nitrate central Asia plan which linear range of 0 mg/L ~ 0.3 mg/L, linear correlation coefficient r = 0.999 x, detection limit for 0.14 mg/kg, the recovery is 94.61% ~ 104% and sodium nitrate content. Measured respectively, tomatoes, garlic celery under routine conditions of the content of nitrite, respectively, on the three vegetables in different soaking time, different boil time and place under different time of nitrite content for testing. It is not difficult to find that reduce the intake of nitrite, scientific vegetables processing method is to soak at least 20 min, boiled vegetables reduce as far as possible when boiling time, cooked vegetables of overnight unfit to eat. It was also from this experiment that leaf vegetables contain nitrite bio-control technology levels than vegetables and bulb vegetables.Keywords: spectrophotometry vegetables nitrite explored目录第一章前言 11.1 概述 11.2 课题研究的意义 1第二章方案设计 32.1 方案原理 32.2 实验条件探究 32.3 实验部分 4第三章实验结果与讨论 63.1 最大吸收波长的测定 63.2 标准曲线的绘制 63.3 如何消除抗坏血酸对实验的影响 73.4 实验的选择 83.5 芹菜、西红柿及大蒜各阶段中的亚硝酸盐含量 9 3.6 用盐水浸泡蔬菜对亚硝酸盐含量的影响 133.7 回收率的测定 143.8 精密度的测定 15第四章实验结论 16辞谢 17参考文献 18附录 19第一章前言1.1 概述亚硝酸盐是广泛存在于自然环境中的化学物质, 特别是在食物中。
蔬菜中硝酸盐和亚硝酸盐检测方法的研究进展
4、电化学法
电化学法是一种利用电化学反应原理来检测硝酸盐和亚硝酸盐的方法。该方 法具有操作简单、灵敏度高、响应时间短等优点。近年来，一些研究采用电化学 法来检测蔬菜中的硝酸盐和亚硝酸盐，并研发了便携式电化学传感器，可实现现 场快速检测。但该方法可能会受到其他物质的干扰，影响检测结果的准确性。
5、生中硝酸盐和亚硝酸盐的检测方法也在不断改 进和完善。目前，高效液相色谱法、气相色谱-质谱联用法、电化学法和生物传 感器法等新型检测方法已广泛应用于蔬菜中硝酸盐和亚硝酸盐的检测。这些方法 具有高灵敏度、高分辨率和高特异性等优点，且操作简便、快速、准确。
然而，这些方法仍存在一些不足之处，如可能受到其他物质的干扰、需要衍 生化处理等。因此，未来的研究将致力于开发更加准确、快速、简便的蔬菜中硝 酸盐和亚硝酸盐的检测方法，以满足现代实验室的需求。加强公众对蔬菜中硝酸 盐和亚硝酸盐的认知教育，提高公众的健康意识也是至关重要的。
二、硝酸盐和亚硝酸盐的基本特 性
硝酸盐和亚硝酸盐是两种无机化合物，它们在自然界中广泛存在。硝酸盐在 植物中含量较高，而亚硝酸盐则主要来源于食物中的硝酸盐还原菌的作用。虽然 硝酸盐和亚硝酸盐在一定浓度下对人体是有益的，但过量摄入可能对人体造成负 面影响，如引发癌症、胎儿畸形等。因此，准确检测蔬菜中的硝酸盐和亚硝酸盐 含量，对保障公众健康至关重要。
研究方法
本次演示将重点介绍一种基于液相色谱的蔬菜中硝酸盐和亚硝酸盐检测方法。 该方法采用乙酸乙酯萃取蔬菜样品中的硝酸盐和亚硝酸盐，然后通过液相色谱仪 分离和测定。具体实验流程如下：
1、样品处理：称取一定量蔬菜样品，加入乙酸乙酯溶液，震荡混匀后静置 萃取。萃取液经滤纸过滤后，用氮吹仪吹干，用甲醇定容至一定体积。
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食品安全亚硝酸盐与硝酸盐的测定
（1）镉柱还原效率的测定
取 10.0mL 还原后的溶液 （相当 10μg 亚 硝酸钠）于 50mL 比色管中，加入 2mL 对氨基苯磺酸溶液，混匀，静置 3min ～ 5min 后各加入 1mL 盐酸萘乙二胺溶液， 加水至刻度，混匀，静置 15min ，用 2cm 比色杯，以空白管调节零点，于波 长 538nm 处测吸光度，代入标准曲线计 算含量。
整块的禽肉类样品（腊肉、烤鸭等）在不同部位切取小片或截取 小段四分法缩分。
（一）样品的制备
将缩分后的样品四分法分成二份，一份作留样 备用（>100g），另一份切细后用捣碎机捣碎 混匀供分析(>50g)。
当送样量不能满足留样要求时，全部粉碎混匀， 在保证分析样用量后，全部用作留样。
（二）样品的保存
（1）镉柱还原效率的测定
还原效率计算： X=A×100/10
X—— 还原效率， % A—— 由标准曲线计算测得的亚硝酸钠的含量，单
位为微克（ μg ） 10—— 测定用溶液中亚硝酸钠的含量，单位为微克
（ μg ）
（1）镉柱还原效率的测定
还原效率大于 98% 为符合要求。 若不符合要求，则继续用 25mL 盐酸
（四）镉柱的装填
先用水装满镉柱玻璃管，然后装入 2cm 高的玻璃棉做垫，将玻璃棉压向 柱底时， 应将其中所包含的空气全部 排出。
在轻轻敲击下加入海绵状镉至 8cm ～ 10cm 高，上面再用 1cm 高的玻璃棉 覆盖，上置一贮液漏斗。
当镉柱填装好后，先用 25mL 盐酸 (0.1mol/L) 洗涤，再以水洗两次，每次 25mL 。
(0.1mol/L) 洗涤，再以水洗两次，每次 25mL 。 实验过程中，随时保持镉柱在水平面以下， 加液时沿贮液漏斗管壁匀速加入，避免镉 柱内产生气泡。 多次洗涤后，还原效率还不符合要求，应 该重新制备装填镉柱。
MM_FS_CNG_0038 水果 蔬菜及其制品 亚硝酸盐和硝酸盐含量的测定
离子色谱测定蔬菜中亚硝酸盐与硝酸盐(最全)word资料
离子色谱法同时测定蔬菜中亚硝酸盐与硝酸盐徐霞,应兴华(中国水稻研究所农业部稻米及制品质量监督检验测试中心,杭州,310006摘要:研究建立了带抑制电导检测器的离子色谱同时测定蔬菜中亚硝酸盐和硝酸盐的分析方法。
样品经去离子水超声提取后上机分析,采用离子交换分离和抑制电导检测,外标法定量。
NO2¯和NO3¯的线性范围分别为0.01~20mg/L和0.02~200mg/L;回收率均>80%;相对标准偏差均≤5%。
称样量为10.0g时,NO2¯和NO3¯的检出限分别为0.2mg/kg和0.4mg/kg。
与比色法相比,离子色谱法预处理简单,灵敏度高,能快速、准确地测定蔬菜中的亚硝酸盐和硝酸盐。
关键词:离子色谱;蔬菜;亚硝酸盐;硝酸盐硝酸盐、亚硝酸盐广泛存在于人类环境中,其对人类健康和生态环境的危害,日益受到人们的普遍关注。
硝酸盐在细菌的作用下可还原成亚硝酸盐,使血液的载氧能力下降,从而导致高铁血红蛋白症;另一方面,亚硝酸盐可与次级胺(仲胺、叔胺、酰胺及氨基酸结合,形成亚硝胺,从而诱发消化系统癌变[1,2]。
而人体摄入的硝酸盐81.2%来自蔬菜[3]。
因此蔬菜中硝酸盐和亚硝酸盐含量的高低已成为衡量蔬菜安全与否的一项重要指标,我国已对无公害蔬菜中的亚硝酸盐和硝酸盐含量提出明确的限量标准[4]。
国内外用于分析蔬菜样品中亚硝酸盐和硝酸盐的方法很多,主要有光谱法、电化学法和色谱法等[5],其中以分光光度法为基础的比色法应用最为广泛,该方法操作繁琐、耗时耗试剂,且需通过镉柱还原测定硝酸盐的含量。
离子色谱法作为一种新型的色谱分析法,能同时测定多种阴离子组分,已广泛应用于食品分析。
因此,本文研究建立了离子色谱同时测定蔬菜中亚硝酸盐和硝酸盐的分析方法。
与比色法相比,离子色谱法具有简便、快速、准确等优点,能同时测定蔬菜中的亚硝酸盐和硝酸盐。
1 实验部分1.1 仪器和试剂ICS-2000型离子色谱仪(Dionex,配EG40电导检测器和Chromeleon®色谱工作站。
浓度直读法快速测定蔬菜中的硝酸盐和亚硝酸盐含量_宋莲军
[基金项目] 河南省教育厅科研项目(2003550308)[作者简介] 宋莲军(1969-),女,硕士,副教授,主要从事食品科学方面的教学与研究。
*通讯联系人【化学测定方法】浓度直读法快速测定蔬菜中的硝酸盐和亚硝酸盐含量宋莲军,侯永新,任洪涛,高向阳*,张娟梅(河南农业大学食品科学技术学院,郑州 450002)[摘要] 目的:建立快速测定蔬菜中硝酸盐和亚硝酸盐含量的方法。
方法:利用硝酸根离子选择性电极和离子分析仪,采用浓度直读的方式,同时测定蔬菜中硝酸盐(NO -3)和亚硝酸盐(NO -2)。
对干扰离子的影响及消除方法、T ISAB 溶液的选取、测定条件的控制、方法的准确度和精密度等进行了系统探讨。
结果:NO -3的相对标准偏差为0.46%,NO -2的相对标准偏差为1.18%,对NO -3的回收率为97.4%～104.7%,对NO -2的回收率为98.6%～99.8%。
结论:该法简便、快速、准确,可用于蔬菜中硝酸盐和亚硝酸盐含量的测定。
[关键词] 浓度直读;离子选择性电极;蔬菜;硝酸盐;亚硝酸盐[中图分类号] TS255.7 [文献标识码] A [文章编号] 1004-8685(2005)12-1444-03 硝酸盐在酶和微生物作用下会被还原成亚硝酸盐,在一定条件下,亚硝酸盐和蛋白质可以形成强烈的致癌物质亚硝胺,严重危害人体健康。
我国对肉制品中硝酸盐和亚硝酸盐的监测较为重视,而蔬菜中的硝酸盐常常被忽视。
实际上,蔬菜种植过程中过量施用化肥、干旱条件下生长和贮藏方法不当等都会造成蔬菜中硝酸盐和亚硝酸盐含量过高。
据统计,人体通过蔬菜摄入的硝酸盐占硝酸盐摄入总量的81.2%[1],因此蔬菜中硝酸盐和亚硝酸盐的危害应引起广泛关注。
目前,测定蔬菜中硝酸盐含量的方法有镉柱法、离子色谱法、紫外分光光度法等,测定蔬菜中亚硝酸盐含量的方法有盐酸奈乙二胺法、镉粉还原分光光度法等[2～5]。
这些方法大多对实验条件和仪器设备的要求较高,操作步骤繁琐,对色泽较深或混浊的样品溶液不适用,耗时长,很难满足蔬菜快速流通的需要,故急需一种快速准确的检测方法。
植物中硝、亚硝酸盐含量的测定
9．水果、蔬菜及其制品亚硝酸盐和硝酸盐含量的测定(GB/T 15401一94)原理 :在弱碱性条件下，用热水从样品中提取亚硝酸离子(NO2-)和硝酸离子(NO3-) ，然后用亚铁氰化钾和乙酸锌沉淀蛋白，过滤。
分取两整份溶液。
一份直接加磺胺和蔡乙二胺盐酸盐，在波长538 nm处测量生成的红色复合物的吸光度，计算样品中原有的亚硝酸离子含量;另一份用金属镉还原硝酸离子为亚硝酸离子，然后同上显色，测量样品中原有的亚硝酸离子和硝酸离子还原生成的亚硝酸离子的总量，由二者之差计算硝酸离子含量。
试剂1．所用试剂除注明者外，均为分析纯，水为去离子水，不含亚硝酸盐及硝酸盐。
2．饱和硼砂溶液:称取50 g硼酸钠(GB 632),溶于1 000 mL温水中，冷却至室温。
3．亚铁氰化钾溶液:0.25 m ol/L。
称取106g 亚铁氰化钾(GB1 273),溶于水，定容至10 00m L。
4．乙酸锌溶液:1m ol/L,称取220g 乙酸锌。
溶于30m L冰乙酸(GB6 76)和水的混合液中，再用水定容至1 000 mL。
5．显色溶液5.1 溶液I 称取0.4 g 磺胺，放入盛有160m L水的200m L容量瓶中，在沸水浴上加热溶解。
冷却后(必要时过滤)加入20m L盐酸(ρυ=1.19 g /mL,GB6 22)，用水定容，避光保存。
5.2 溶液Ⅱ称取0. 1 g萘乙二胺盐酸盐(C10H7NHCH2CH2NH2·2HC1，含量98.5%以上)，放入100 mL容量瓶中，加水溶解后定容，避光保存。
5.3 溶液Ⅲ量取445m L盐酸(ρυ=1.19 g /mL)，放人1000m L容量瓶中，加水定容。
6 锌棒:长约150 mm，直径5-7 mm,7 硫酸镉溶液:200 g/1。
称取40 g硫酸镉(GS 1286)，于200 mL容量瓶中，加水溶解后定容。
8．镉粒置锌棒（6）于盛有200m L硫酸镉溶液(7)的高型烧杯中，及时用刮勺(4.4)将还原生成的镉刮下来，并用捣碎机(4.5)打碎，再用0.1 m ol/L盐酸处理镉粒，然后用蒸馏水冲洗数次，保存于蒸馏水中备用。
蔬菜中硝酸盐、亚硝酸盐测定方法
Ｎ ＯＮ Ｇ ＹＥ ＫＥ ｘＵ Ｅ
蔬菜 中硝酸盐 、亚硝酸盐测定方法
河南科技大学林业职业学院
摘
缺点。
刘 荣森
张泽根
要 ：综述 了蔬菜 中 酸盐及亚硝酸盐测定方法，常见的测定方法有分光光度法、离子 色 硝 谱法 电位分析法等。并且分析了各方法的优
关键词 ：蔬菜 ；硝酸盐 ；亚硝酸盐 ；测定
九 、杨扇 舟 蛾及 杨小 舟 蛾幼 虫期
调 查
释放 周 氏 啮小 蜂 防治 杨 扇 舟 蛾 、 杨小 舟蛾 第二代 幼 虫 ，待 第 三代 幼虫 发生 期对 虫 口密 度 调查 ，比较 释 放前 与释放后 虫 口密度是否下降 。 （ 见表 ２
和表 ３ 。 ） 十、试验结果分析
０９ ９ —０９ ９ ， Ｒ Ｄ 在 ０２ ％ ～ ． ０ ９ ． ９ Ｓ ９ ． ２
液直接 用盐 酸萘 乙二胺 比色法 测定 其
中的亚硝酸盐 ，另一份经 ｚ — ｎ ｃ柱将 硝
测 定要 求 。宋 莲军等 利用 硝酸 根离子 选 择 电极 和离 子分析 仪 ，采用 浓度直 读 的方 法 ， 同时 测 定 蔬 菜 中 Ｎ ｆ和 Ｏ
２ｍ ５ Ｌ范围内符 合 比耳定律 ， 尔吸收 摩
系 数 分 别 为 ０８×１ ／（ ｏ ・ｍ）、 ． ０ ｍ ｌｃ ４ ； Ｌ ｍ０・ｍ ． ×１３ ／（ １ｃ ），对上 述 试样 分 ０ ｏ 别 进 行 ７次测 定 ，得 到 Ｒ Ｄ分 别 为 Ｓ ３５ ． ％、４３ ％、３１％；其 回收率分别 ２ ．８ ．１
［子拥军， ３ 】 朱芝英， 张忠镇 ． 舟蛾在 济宁危 杨扇 害现状及综合 防控配套技 术［． 国森林 Ｊ中 】
病 虫， ｌ， ） ２ １ Ｏ１ ．
蔬菜中硝酸盐和亚硝酸盐的分析
蔬菜中硝酸盐和亚硝酸盐的分析贾 丽(北京市理化分析测试中心，北京100089)摘要:介绍了近几年来比色法、电极法、紫外法、离子色谱法等对蔬菜中硝酸盐和亚硝酸盐的分析进展，并对今后的发展作了展望。
关键词:比色法；电极法；紫外法；离子色谱法；硝酸盐；亚硝酸盐蔬菜是一种与人民生活密切相关而又易富集硝酸盐的作物，研究表明，蔬菜是人体硝酸盐的主要来源，人体摄入的硝酸盐有70%—80%来自蔬菜[1]。
在正常情况下，蔬菜从土壤中吸收的硝酸盐在体内可经硝酸还原酶的作用，转化为氨和氨基酸等营养物质。
而当条件不适宜时特别是在大量施氮肥的条件下，蔬菜摄取的硝酸盐量过多，在其内不能被充分同化，致使硝酸盐在蔬菜内大量累积。
近年来，蔬菜的安全性问题日益受到各方面关注，特别是蔬菜栽培方式的改变，使得蔬菜硝酸盐含量激增，而人体主要是通过从蔬菜等食品中摄取过量硝酸盐的，严重危害到人体的健康。
因此，蔬菜中硝酸盐含量的控制应得到加强，我国已对无公害蔬菜中的亚硝酸盐和硝酸盐含量提出明确的限量标准，亚硝酸盐≤4.0mg/kg；硝酸盐≤600mg/kg（瓜果类），≤1200mg/kg（根茎类），≤3000mg/kg（叶菜类）[2]，从而相应的检测方法也应进一步得到完善，分析蔬菜中硝酸盐和亚硝酸盐的方法报道的有很多，包括比色法、电极法、紫外法、离子色谱法等。
1 比色法比色法是一种普遍使用的方法，应用时间较长。
王钫等[3]采用了国标方法GB/T 15401 –1994（水果、蔬菜及其制品亚硝酸盐和硝酸盐含量的测定）测定蔬菜样品中硝酸盐和亚硝酸盐的含量，将新鲜蔬菜样品用蒸馏水洗净，晾去表面水分。
用四分法取可食部分，用干净不锈钢剪刀剪成碎块，用捣碎机制成匀浆，准确称取20.0g样品置于200 mL烧杯中。
于538nm 处，测定其吸光度值，外标法定量。
他们用此法分析了大量的蔬菜样品，对杭州市场的蔬菜硝酸盐含量进行了分析和质量评价，得到了较好的应用。
蔬菜中硝酸盐与亚硝酸盐的检测方法
粮农组织（FAO）在 1973 年制订了食品中硝酸盐的限量标准，提出蔬菜中硝 酸盐积累程度分为四级[1]。一级≤432 mg/kg，允许生食；二级≤785 mg/kg，不 宜生食，允许盐渍和熟食；三级≤1440 mg/kg，只能熟食；四级≥3100 mg/kg， 不能食用。作为无公害蔬菜，其硝酸盐含量应达到一级标准甚至更高。
离子色谱法是 20 世纪 70 年代中期发展起来的一项新的液相色谱技术，作为
一种新型的色谱分析方法，离子色谱法不仅可以同时测定蔬菜中的硝酸盐和亚硝 酸盐，还可以根据不同的研究目的，同时定量测定多种阴离子组分的含量，如氟、 氯、甲酸、乙酸、草酸、抗坏血酸、柠檬酸、硫酸、磷酸根等离子，以满足同一 样品多阴离子组分的同时定量测定。
2 色谱法
色谱法用于硝酸盐和亚硝酸盐的检测已有较长的历史，可以实现蔬菜中阴离 子的多残留检测，同时测定蔬菜中痕量的硝酸盐和亚硝酸盐。目前用于蔬菜中硝 酸盐和亚硝酸盐检测使用的色谱法主要有高效液相法和离子色谱法。早在 1984 年，Jackson 等建立了一种 HPLC 法来测定肉制品中的硝酸盐和亚硝酸盐含量[11]。 他们采用一种阴离子交换柱为固定相，用氯甲磺酸盐缓冲液来洗脱，在波长 210～214 nm 范围内检测。该法快速灵敏，精确性好，在多种样品中获得满意的 回收率。采用该法可以弥补普通分光光度法的不足，得到准确的结果。
硝酸盐和亚硝酸盐的测定方法还在不断的发展和完善之中，荧光法是其中比 较成功的尝试。Li 等（2004）建立了一种采用荧光探针 1,3,5,7-四甲基-8-(4’氨基苯)-4,4-二氟-4-硼-3a,4a-二氮-s-indacene(TMABODIPY)来检测肉制品和 蔬菜中痕量亚硝酸盐的方法[9]。亚硝酸盐与 TMABODIPY 先后在酸性和碱性环境下 反应，可以生成重氮酸盐，这种物质是一种稳定的强荧光试剂，因此，该测定方 法具有特异性高、敏感性高和简单的优势。检测范围为 8～300 nmol/L，检测限 0.65 nmol/L。其用于水和蔬菜中亚硝酸盐的测定不必提取。Huang 等(2006)建 立了一 种采用荧光探针 1,3,5,7-四甲基-2,6-二乙酸基-8-(3’,4’-二氨基 苯)-二氟化硼二氮-s-indacene (TMDCDABODIPY)检测肉制品和蔬菜中亚硝酸盐 的方法[10]。TMDCDABODIPY 本身的荧光性很弱，但是与亚硝酸盐在水相介质中常 温下反应后，生成了一种强荧光三唑物质，具有很好的特异性和敏感性。在亚硝 酸盐浓度 9～300 nmol/L 的浓度范围内，荧光强度与亚硝酸盐的浓度呈线性关系， 检测限为 0.21 nmol/L。该方法用于检测食品中痕量亚硝酸盐时，样品回收率为 94.62%～105.48%。
实验七 蔬菜中硝酸盐含量的测定(紫外分光光度法)
实验七蔬菜中硝酸盐含量的测定（紫外分光光度法）1、实验目的掌握蔬菜中硝酸盐的测定原理，熟悉取样方法、样品的处理、测定和仪器的使用方法，了解各种试剂的配制方法。
2、实验原理用pH9.6～9.7的氨缓冲液提取样品中硝酸根离子，同时加活性炭去除色素类，加沉淀剂去除蛋白质及其他干扰物质，利用硝酸根离子和亚硝酸根离子在紫外区219nm处具有等吸收波长的特性，测定提取液的吸光度，其测得结果为硝酸盐和亚硝酸盐吸光度的总体，鉴于新鲜蔬菜、水果中亚硝酸盐含量甚微，可忽略不计。
测定结果为硝酸盐的吸光度，可从标准曲线上查得相应的质量浓度，计算样品中硝酸盐的含量。
3、仪器与试剂3.1 仪器（1）紫外分光光度计（2）分析天平：感量0.01g，0.0001g。
（3）研钵（4）可调式往返震荡机（5）pH计3.2 试剂（1）盐酸。
（2）氢氧化铵。
（3）氨缓冲溶液（pH9.6～9.7）：量取20ml盐酸，加到500nl水中，混合后加入50ml氢氧化铵，用水定容至1000ml。
用精密pH计调pH到9.6～9.7。
（4）活性炭（粉末）。
（5）正辛醇。
（6）亚铁氰化钾溶液{ω[K4Fe(CN)6.3H2O]=15%}：称取150g亚铁氰化钾溶于水，定容至1000ml。
（7）硫酸锌溶液[ω(ZnSO4)=30%]：称取300g硫酸锌溶于水，定容至1000ml。
（8）硝酸盐标准溶液：称取0.2039g经110±5℃烘干至恒重的硝酸钾（优级纯），用水溶解，定容至250ml。
此溶液硝酸根质量浓度为500mg/L，于冰箱内保存。
4、实验步骤4.1 取样选取一定数量的生菜，先用自来水冲洗，再用蒸馏水清洗干净，用吸水纸吸干表面水分，剪碎后充分混匀，称取5.0g于研钵中充分捣碎。
4.2 提取将匀成浆后的样品少量多次共20ml水洗净研钵，将样品全部转移到50ml容量瓶中，加1滴正辛醇消除泡沫，再加入3ml氨缓冲溶液，0.5g粉末状活性炭。
放置于可调式往返振荡机上（200次/min）振荡30min，加入亚铁氰化钾溶液和硫酸锌溶液各1ml，充分混合，加水定容至100ml，充分摇匀，放置5min，用定量滤纸过滤。
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蔬菜中硝酸盐和亚硝酸盐含量的测定摘要：蔬菜中的硝酸盐和亚硝酸盐是一种对人体有害的化学物质,其含量比其它植物都高,人体摄入它会引起多种疾病.本实验采用分光光度发分别对拜城县恰玛古，柯坪县恰玛古，伊宁市恰玛古，大白菜，黄萝卜，黄瓜中亚硝酸盐及硝酸盐含量进行测定。
结果表明：（1）亚硝酸盐：六种蔬菜中亚硝酸盐含量有明显的差异，测定结果是：大白菜0.7919mg/g，黄萝卜0.6930mg/g，黄瓜0.5763mg/g，拜城恰玛古0.5528mg/g，伊宁恰玛古1.1294 mg/g，柯坪恰玛古0.5174mg/g。
（2）硝酸盐：大白菜1.6098mg/g，黄萝卜0.0598mg/g，黄瓜0.7421mg/g，拜城恰玛古0.2608mg/g，伊宁恰玛古2.5308mg/g，柯坪恰玛古0.0317mg/g，蔬菜中亚硝酸盐含量的回收率88.80%。
关键词：硝酸盐；亚硝酸盐；蔬菜；测定方法；前言：蔬菜尤其是叶菜类蔬菜,是一种易于富集硝酸盐的植物。
人体摄入的硝酸盐81.2％来自蔬菜[1]。
硝酸盐本身毒性不大,对人畜无直接的危害,但含量过高对人体可能造成危害,因为在微生物的作用下极易还原为亚硝酸盐。
亚硝酸盐是一种有毒物质,可直接使动物中毒!造成亚铁血红蛋白症,严重可致死亡[2]。
亚硝酸盐，一类无机化合物的总称。
主要指亚硝酸钠.亚硝酸钠为白色至淡黄色粉末或颗粒状，味微咸，易溶于水。
外观及滋味都与食盐相似，并在工业、建筑业中广为使用，肉类制品中也允许作为发色剂限量使用。
由亚硝酸盐引起食物中毒的机率较高。
食入0.3～0.5克的亚硝酸盐即可引起中毒甚至死亡[3]。
硝酸盐,亚硝酸盐广泛存在于人类环境中,其对人类健康和生态环境的危害,日益受到人们的普遍关注。
硝酸盐在细菌的作用下可还原成亚硝酸盐,使血液的载氧能力下降,从而导致高铁血红蛋白症。
联合国世界卫生组织和粮农组织[4]早在1973 年就制定了食品中硝酸盐的限量标准,以ADI值为基础,提出蔬菜可食部分中硝酸盐含量的卫生标准为432mg/kg (鲜样),亚硝酸盐成人每人每日容许量为7.8mg。
蔬菜中硝酸盐和亚硝酸盐含量的高低已成为衡量蔬菜安全与否的一项重要指标,因此快速准确地测定蔬菜中硝酸盐和亚硝酸盐的含量极为重要[5]。
-)是氮循环的中间产物，不稳定,广泛存在于水体、土壤和各类食品中。
根亚硝酸盐(NO2据水环境条件，可被氧化成硝酸盐，也可被还原为氨。
亚硝酸盐可使人体正常的血红蛋白（低铁血红蛋白）氧化成为高铁血红蛋白，发生高铁血红蛋白症，失去血红蛋白在人体内输送氧的能力，导致出现组织缺氧症状。
另外，在人的肠胃中，亚硝酸盐还可与仲胺类物质反应，生成具有致癌性的亚硝胺类物质。
因此，亚硝酸盐成为水质、食品等的重要监测项目之一[6]。
用分光光度法测定蔬菜中亚硝酸盐含量时，为了消除蛋白质对测定结果的干扰，往往通过沉淀的方法来去除蛋白质[7]。
在GB《中华人民共和国国家标准—食品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定（GB/T5009.33—1996）中的格里斯试剂比色法》中，“样品处理”的主要目的就是通过沉淀来去除蛋白质，获测定所需的澄清滤液[8]。
样品处理时所加的氢氧化钠溶液，亚铁氰化钾，乙酸锌溶液和水浴加热的作用是使蛋白质变性而易沉淀[9]。
本文根据测定亚硝酸盐的标准方法于540 nm处测定生成的偶氮化合物的吸光度,从而建立了一种简单、快速、灵敏度较高的测定痕量亚硝酸盐的方法。
1.1实验部分1.1.1实验原理弱碱性条件下,用饱和四硼酸钠、亚铁氰化钾、乙酸锌沉淀除去蛋白质,氢氧化铝悬浮液脱色,减压抽滤;在酸性条件下,亚硝酸盐与对氨基苯磺酸酰胺起重氮化作用,再与萘乙二胺盐酸盐和对氨基苯磺酸反应,生成紫红色偶氮染料,于波长540nm 处测量蔬菜中亚硝酸盐的含量。
1.1.2仪器与试剂1.1.2.1 实验仪器：搅汁机;恒温水浴锅;722型分光光度计;电子天平;冰箱供试蔬菜为：大白菜，黄萝卜，黄瓜，拜城恰玛古，伊宁恰玛古，柯坪恰玛古。
1.1.2.2实验试剂主要试剂有10.6%亚铁氰化钾溶液；22%乙酸锌溶液；饱和四硼酸钠溶液；磺胺；萘乙二胺盐酸盐；盐酸；镉粒；氨缓冲溶液；活性碳；硝酸钾；亚硝酸钠标准使用液；1.1. 3试剂的配制：①10.6 %亚铁氰化钾溶液:称取106g(10.6g) 亚铁氰化钾[K4Fe(CN)6·3H2O] ,溶于水后,稀释至1000ml(100ml)。
②22%乙酸锌溶液:称取220g(22g)乙酸锌[Zn (CH2COO)2·2H2O] ,加30ml冰乙酸和适量水溶解,并用水稀释至1000ml(100ml)。
③饱和四硼酸钠溶液:称取25g(5g)四硼酸钠(Na2B4O7·10H2O),溶于500ml(100ml)热水中,冷却后备用。
④对氨基苯磺酸溶液:称取0.8g对氨基苯磺酸,溶于12 %乙酸溶液150ml中(低温加热并搅拌加速溶解),冷却后避光保存。
⑤α—萘胺溶液:称取0.2gα—萘胺溶于数滴冰乙酸中,再加12%乙酸溶液150ml,混匀,避光保存。
⑥对氨基苯磺酸和α—萘胺混合液:测定前,将对氨基苯磺酸溶液与α—萘胺溶液两种溶液等体积混合摇匀,备用。
⑦亚硝酸钠标准储备溶液:精密称取0.2999g于硅胶干燥器中干燥24h的亚硝酸钠,加水溶解移入1000ml容量瓶中,加2ml氯仿作为保护剂,并稀释至刻度。
此溶液每毫升相当于0.2 mg亚硝酸根。
⑧亚硝酸钠标准使用液:临用前,吸取亚硝酸钠标准储备溶液5.00 ml ,置于100ml容量瓶中,加水稀释至刻度,此溶液每毫升相当于10μg亚硝酸钠。
⑨氢氧化铝悬浮液:称取125g(12.5g)硫酸铝溶于1000ml(100ml)蒸馏水中,慢慢加入浓氨水,使铝离子沉淀完全,放置澄清后倾去上层清液,加蒸馏水反复洗涤,直至清液加氯化钡溶液(检查硫酸根)和硝酸银溶液(检查氯离子)无浑浊现象为止,最后向氢氧化铝胶体沉淀中加300ml蒸馏水,使用时振摇均匀。
1.1.3 标准曲线的绘制准确吸取10μg/ml亚硝酸钠标准使用液0,1.0,2.0,3.0,4.0,5.0ml依次加入到50mL容量瓶,再分别加人3～4滴HCl(1∶1)混匀,2ml对氨基苯磺酸—α—萘胺混合液混匀,静置15 min,用3cm比色杯,于波长540nm处测吸光度,绘制标准曲线，结果见表2-2，图2-2。
1.1.4样品处理与测定（表1-1）测定亚硝酸盐含量的取样量（g）大白菜黄萝卜黄瓜拜城恰玛古伊宁恰玛古柯坪恰玛古第一次20.004 20.068 20.078 20.012 20.03 20.015第二次20.077 20.059 20.089 20.009 20.033 20.027第三次20.015 20.003 20.017 20.038 20.070 20.030把样品洗净，匀浆，称取20g匀浆液于烧杯中，加60ml热水（65℃—75℃），用NaOH 溶液调节至偏碱性，再用水将样品全部转移至50ml 溶液瓶中，置于60℃水浴加热10min，取出冷却，加水至刻度，混匀，静置30min，上清液经乙酸锌和活性炭混合过滤，收集滤液备用。
亚硝酸盐测定：用移液管吸取20ml提取液于50ml容量瓶中,用水稀释至约30ml,加入磺胺溶液5ml,再加入盐酸溶液3ml,混匀,置于室温遮光处,加入萘乙二胺盐酸盐1ml,混匀,用水定容。
在波长540nm处测定吸光度。
依公式求得样品中亚硝酸盐含量，结果见表4。
硝酸盐测定：用移液管吸取提取液20ml于50ml具塞锥形瓶中,加入5ml蒸馏水,5ml氨缓冲液和2g镉粒,振荡,过滤得还原液。
吸取10ml还原液至50ml容量瓶中。
显色步骤同亚硝酸盐测定步骤,依公式求得硝酸盐含量，结果见表2-3。
1.2.5计算样品中亚硝酸盐含量公式：C×50X=——————————m×V2/ V1×1000式中： X——样品中亚硝酸盐的含量，mg/g；m——样品质量，g；C——查得样品在曲线上浓度, μg/mLV1——样品处理液总体积，mL；V2——测定用样液体积，mL。
2.结果与分析分光光度法测定各蔬菜中亚硝酸盐及硝酸盐含量实验中对样品三次平衡分析，测定结果见下表。
亚硝酸盐最大吸收波长的选择：（表2-1）波长500 510 520 530 540 550 560 570 580 590吸光度0.065 0.085 0.102 0.115 0.121 0.117 0.11 0.096 0.072 0.047从表2-1，图2-1可以看出亚硝酸盐标准液的最大吸收波长为540nm.最大吸收波长对应的吸光度为0.121 。
亚硝酸盐标准曲线的绘制：（表2-2）亚硝酸盐标准溶液的浓度及吸光度浓度(μg/mL ) 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1吸光度(A)0 0.089 0.201 0.329 0.451 0.584亚硝酸盐及硝酸盐含量的测定（表2-3）不同蔬菜中亚硝酸盐的含量(mg/g)吸光度 浓度 含量 平均值 相对平准偏差大白菜0.7919 3.76% 0.0570.12970.80780.058 0.1314 0.8208 黄萝卜0.043 0.1060 0.6605 0.6930 3.18% 0.046 0.1111 0.6924 0.049 0.1162 0.7261 黄瓜0.5763 4.79%0.0390.09930.61760.034 0.0908 0.5670 拜城恰玛古 0.5528 4.74%0.029 0.0823 0.51360.0920.1890 1.17950.087 0.1805 1.1265 0.0280.08060.50360.031 0.0857 0.5350 2.26%（表2-4）不同蔬菜中硝酸盐的含量(mg/g)总吸光度 总浓度 总含量 硝酸盐含量 平均值 相对平准偏差 大 白 菜 0.217 0.4007 2.5036 1.7564 0.193 0.3600 2.2415 1.4338 萝 卜 0.0490.1162 0.7237 0.06330.0598 7.85% 0.051 0.1196 0.7452 0.0528 0.055 0.1264 0.7896 0.0635 黄 瓜 0.7421 6.09% 0.1030.2076 1.2919 0.67430.105 0.2110 1.3177 0.7508 拜城恰玛古 0.057 0.1297 0.8104 0.2433 0.2608 4.47% 0.061 0.1365 0.8528 0.2750 0.054 0.1247 0.7776 0.2641 伊宁恰玛古 0.331 0.5937 3.7051 2.5255 2.5308 0.14% 0.3230.5802 3.6133 2.5311柯坪恰玛古0.031 0.0857 0.5353 0.0317 0.0317 0.11%亚硝酸盐回收试验：在蔬菜样品中添加标准物质后与样品的制备，样品含量测定步骤相同条件下做回收试验。