临床感染性疾病实验室诊断技术现状与未来
(完整版)感染性疾病实验室诊断
对环境敏感的细菌应保温立即送检,其他所有采集后最好在2小时内送 检,不能及时送检,应注意保存
2. 必须注意安全防护,切勿污染环境 3.厌氧性标本应放在专门的运送瓶或试管内运送,有时可直接
用抽取标本的注射器运送
二、 检验方法
查病原体:形态与结构检查 分离培养和鉴定
检测病原体成分(抗原和核酸) 检测患者血清中特异性抗体 代谢产物 (生化试验) 毒素:外毒素、内毒素
SARS冠状病毒 新甲型H1N1流感病毒 高致病性禽流感病毒
(二)按疾病特征分类 1. 病原体被清除 2. 隐性感染(covert infection),亦称亚临床感染
一般占人群的90%或以上 3. 显性感染(overt infection)又称为临床感染
发病快慢和病程长短:急性感染和慢性感染 感染部位及性质:局部感染和全身感染 全身感染: ①菌血症 ②败血症 ③毒血症 ④脓毒血症
革兰阳性
革兰阴性
抗酸染色
培养在McCoy细胞的沙眼衣原体 吉姆萨染 色的McCoy细胞,含大衣原体包涵体,使 部分细胞核不清楚。(吉姆萨染色,放大
1000倍)
狂犬病毒可于细胞浆中 可形成嗜酸性包涵体
新生隐球菌 墨汁负染
假丝酵母菌(白色念珠菌)
革兰染色
2.不染色标本
1) 检查生活状态下细菌的动力及运动状况 2) 螺旋体由于不易着色并有形态特征
对某些病原菌作出初步鉴定,如霍乱弧菌
常用方法 压片法(压滴法)或悬滴法 暗视野显微镜或相差显微镜检查
体癣皮屑可见关节孢子
3. 直接电镜检测EM 免疫电镜技术IEM
HAV形态电镜图 粪便标本负染 X200000
HAV particles found in fecal extracts by immunoelectron microscopy
感染性疾病及免疫学检测
病毒性感染
总结词
病毒性感染是由病毒引起的感染性疾病,具有高度传染性,常见的有流感、肝 炎、麻疹等。
详细描述
病毒性感染的症状通常包括发热、咳嗽、流涕、喉咙痛等,严重时可引起肺炎、 心脏疾病等并发症。检测方法包括病毒分离、抗原检测、核酸检测等。
细菌性感染
总结词
细菌性感染是由细菌感染引起的疾病 ,常见的有肺炎、肠道感染、皮肤感 染等。
血液传播
如乙肝、丙肝、艾滋病等,可 通过血液、精液、阴道分泌物 等传播。
昆虫传播
如疟疾、登革热等,可通过蚊 虫叮咬传播。
感染性疾病的危害
对个体健康的影响
感染性疾病可导致身体不适、发 热、疼痛等症状,严重时可引起 并发症甚至危及生命。
对社会的影响
感染性疾病的爆发和流行可对社 会造成严重影响,如医疗资源挤 兑、经济损失等。
分类
根据病原体类型,可分为细菌感染性疾病、病毒感染性疾病、真 菌感染性疾病等;根据传播方式,可分为呼吸道传播疾病、消化 道传播疾病、血液传播疾病等。
传播方式与途径
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空气传播
如流感、麻疹等病毒性疾病, 可通过飞沫、气溶胶等形式传 播。
接触传播
如肠道传染病,可通过直接接 触患者或接触被污染的物品、 食物、水源等传播。
免疫学检测的应用
感染性疾病诊断
通过检测抗体或抗原,有助于确诊感染性疾 病,如乙肝、艾滋病等。
疾病预后判断
通过检测免疫细胞活性或抗体水平,有助于 判断疾病预后。
疫苗接种效果评估
通过检测接种后机体的抗体水平,评估疫苗 接种效果。
药物疗效监测
通过检测特定指标的抗体或抗原,监测药物 治疗效果。
徐元宏感染性疾病早期实验室诊断
感染性疾病早期的实验室诊断安徽医科大学第一附属医院检验科徐元宏感染免疫防御感染与炎症的结局培 养 鉴定及药敏 报 告微生物感染诊断流程WBC 、PCT 、G 和GM 实验、 Endotoxin (内毒素)、IL-6(白介素-6)、IL-10(白介素-10)、TNF (肿瘤坏死因子)、超敏CRP 等一、早期非特异性诊断(一)血常规根据白细胞计数及其分类可以判断感染的类型:革兰阳性球菌感染,白细胞总数及其中性粒细胞计数升高;革兰阴性杆菌、寄生虫、病毒感染,白细胞计数及其中性粒细胞分类可以正常甚至下降。
粒细胞减少症、粒细胞缺乏症:中性粒细胞计数≤1.5×109/L为粒细胞减少症,中性粒细胞计数≤0.5×109/L为粒细胞缺乏症。
常见于肿瘤放化疗患者、甲亢患者、长期放射线的损害等,白细胞总数及其中性粒细胞比例影响治疗方案。
医学决定水平和生命危急值:一般认为白细胞计数<1×109/L; >50×109/L为生命危急值;在上述结果和正常参考值之间为医学决定水平; 低于0.5×109/L,病人有高度易感染性,应采取相应的预防性治疗及预防感染措施。
低于3×109/L为白细胞减少,应再作其他试验,如白细胞分类计数、观察外周血涂片等,并应询问用药史。
高于11×109/L此值为白细胞增多,此时作白细胞分类计数有助于分析病因和分型,如果需要应查找感染源。
高于30×109/L,提示可能为白血病和类白血病反应,应进行白细胞分类,观察外周血涂片和进行骨髓检查。
正常生理性波动:刚出生的婴儿白细胞和中性粒细胞值较高,4~5岁后恢复至正常人水平,在4~5天至4~5岁之间,淋巴细胞比例高于中性粒细胞比例。
(二)超敏CRP多次检测hs-CRP>3 mg/l ,是炎症持续存在信号;提示存在动脉粥样硬化的危险,是心血管疾病危险性评估指标;但hs-CRP是非特异性的,在其他感染,组织损伤,恶性肿瘤中也会增高。
伍德灯在感染疾病诊断中的实用性分析
改进措施建议
加强操作培训
01
提高医生对伍德灯的操作误差。
结合其他诊断方法
02
在使用伍德灯的同时,结合其他诊断方法,如细菌培养、血清
学检测等,以提高诊断的准确性和可靠性。
拓展应用范围
伍德灯在感染疾病诊断中应用
伍德灯原理
伍德灯是一种发出特定波长的紫外线的灯,可使某些细菌 、真菌、病毒等病原体产生荧光,从而进行快速检测。
伍德灯在皮肤感染诊断中应用
如检测糠秕孢子菌、痤疮丙酸杆菌等皮肤常见病原体,辅 助诊断皮肤感染性疾病。
伍德灯在其他感染诊断中探索
如检测口腔、鼻腔等部位的病原体,为相关感染疾病的诊 断提供新的思路和方法。同时,伍德灯还可与其他诊断技 术相结合,提高诊断的准确性和效率。
智能化发展
未来伍德灯可能会与人工智能、大数据等技术相结合,实 现自动化诊断、远程医疗等功能,提高医疗服务的效率和 质量。
应用拓展
除了感染疾病诊断外,伍德灯还有可能拓展到其他医学领 域,如皮肤病、口腔科等,为更多患者提供便捷、安全的 诊断方法。
规范化管理
为确保伍德灯在感染疾病诊断中的准确性和可靠性,未来 可能会出台更加严格的行业标准和操作规范,对伍德灯的 生产、销售和使用进行规范化管理。
03
伍德灯在各类感染疾病中 实用性评估
细菌性感染疾病诊断效果
准确识别细菌种类
伍德灯能够通过特定的荧光反应 ,准确识别出不同类型的细菌, 如金黄色葡萄球菌、链球菌等, 为医生提供准确的诊断依据。
早期发现感染病灶
在细菌性感染疾病的早期阶段, 伍德灯能够帮助医生快速发现感 染病灶,避免病情进一步恶化。
(2024年)《传染病诊断标准》
通过多个实际案例,让学员更加深入 地了解传染病的诊断和治疗方法。
诊断标准及流程
深入阐述了传染病诊断的标准、方法 和流程,包括临床表现、实验室检查 、影像学检查和病原学检查等方面。
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学员心得体会分享
1 2
知识体系更加完善
通过学习本课程,我对传染病的知识体系有了更 加全面和深入的了解,特别是在诊断标准和流程 方面。
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特异性原则
针对不同传染病的特点,选择具有特异 性的诊断方法和标准。
准确性原则
确保诊断结果的准确性,避免误诊和漏 诊。
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注意事项提醒
严格遵守消毒隔离制度
在采集标本、进行检查和治疗过程中 ,严格遵守消毒隔离制度,防止交叉 感染。
注意个人防护
医务人员在进行诊疗操作时,应注意 个人防护,佩戴口罩、手套等防护用 品。
通过细菌培养、病毒分离等方 法直接检测病原体,是确诊传
染病的金标准。
02
血清学检查
检测特异性抗体或抗原,用于 辅助诊断和流行病学调查。
03
分子生物学检查
利用PCR等技术检测病原体基 因片段,具有快速、灵敏的特
点。
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生化检查
部分传染病可引起肝、肾等器 官损害,生化检查可评估器官
功能状态。
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诊断流程、原则及注意事 项
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诊断流程梳理
体格检查
对患者进行全面细致的体格检 查,特别注意与传染病相关的 体征。
影像学检查
对于部分传染病,如肺结核、 病毒性肝炎等,需进行影像学 检查以辅助诊断。
病史采集
详细询问患者病史,包括症状 出现时间、持续时间、伴随症 状等。
核酸检测技术在疾病诊断中的应用
核酸检测技术在疾病诊断中的应用概述:随着科学技术的不断发展,核酸检测技术逐渐成为现代医学诊断领域的重要工具。
核酸检测技术通过检测和分析细胞或病原体中的核酸序列,能够快速准确地判断出疾病的存在并确定具体类型。
本文将介绍核酸检测技术在疾病诊断中的应用,并探讨其优势和局限。
一、感染性疾病的早期诊断感染性疾病对社会健康造成了严重威胁,而准确快速地进行感染源追踪和早期诊断是控制传播的关键。
核酸检测技术能够直接从患者样品中提取并放大目标DNA或RNA序列,可以比传统方法更早地发现细菌、寄生虫、真菌等微生物感染。
例如,在结核病的检测中,通常使用聚合酶链式反应(PCR)扩增结核分枝杆菌特定序列,使其能够被快速检测出来,从而提高了诊断的准确性和及时性。
二、遗传性疾病的检测与筛查遗传性疾病是由基因突变引起的一类疾病,在婴幼儿中较为常见。
核酸检测技术通过筛查患者或携带者基因中的致病突变,可以帮助医生进行风险评估和早期干预,以减少或避免患者遗传性疾病的发生。
例如,囊胞性纤维化是一种常见的遗传性疾病,通过分析CFTR(囊胞性纤维化转膜调节子)基因的突变情况,可以为潜在携带者提供早期筛查和咨询服务,以便适时进行治疗和管理。
三、肿瘤相关基因检测肿瘤由多个基因异常累积而成,肿瘤相关基因检测可以帮助医生确定已经存在的肿瘤类型,并进一步指导治疗方案的选择。
目前,核酸检测技术广泛应用于肿瘤分子诊断和靶向治疗。
通过分析肿瘤细胞的DNA或RNA序列,可以发现其中存在的致癌基因突变、融合基因等遗传异常情况,并为医生提供个体化治疗的建议。
例如,在非小细胞肺癌中,核酸检测技术可用于检测EGFR(表皮生长因子受体)基因突变,从而指导是否选择靶向药物治疗。
四、传染性疾病的流行病学调查核酸检测技术在流行性传染病的防控中起到了至关重要的作用。
通过分析感染者样本中的核酸序列,可以快速确定感染源、确认不同群体间的传播途径,并帮助制定针对性的防控策略。
例如,在COVID-19疫情中,全球范围内采用了PCR等核酸检测技术来追踪新冠病毒感染者,并进行密切接触者筛查和隔离措施,以控制病毒的传播。
儿科常见病毒感染性疾病的临床和实验室诊断研究进展-2019年华医网继续教育答案
2019年华医网继续教育答案-352-儿科常见病毒感染性疾病的临床和实验室诊断研究进展
备注:红色选项或后方标记“[正确答案]”为正确选项
(一)儿童呼吸道合胞病毒感染实验室诊断
1、下列选项对hRSV的描述中,错误的是()
A、hRSV属副粘病毒科,肺炎病毒属
B、因其在组织培养中能形成特殊的融合性细胞病变而命名为人呼吸道合胞病毒(hRSV)
C、人呼吸道合胞病毒导致的死亡病例主要发生在发达国家[正确答案]
D、1956年Morris等人首次从感冒的黑猩猩身上分离出
E、1957年Chanock等人通过细胞培养的方法从患肺炎的患儿中发现了hRSV
2、直接买内衣荧光检测的缺点不包括()
A、需要大量人工操作
B、临床相关性差[正确答案]
C、结果判定存在主观性,对技术人员要求高
D、要求有足够的呼吸道柱状上皮细胞
E、不能用于床旁检测
3、诊断hRSV的金标准是()
A、病毒分离[正确答案]
B、直接免疫荧光法
C、血清抗体中和试验
D、抗体检测
E、抗原检测
4、()是已获批准且临床较常用的儿童急性呼吸道感染病原检测方法
A、免疫荧光法抗原检测[正确答案]
B、快速抗原检测
C、快速免疫诊断技术
D、核酸检测。
结核感染T细胞(TB-IGRA)检测及意义
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与免疫学指标关联
分析TB-IGRA检测与免疫学指标(如CD4+T细胞计数、干扰素-γ释放等)的关系,发现这些 指标在结核病患者中异常表达,且与TB-IGRA检测结果相互印证。
与临床表现及预后关联
探讨TB-IGRA检测结果与结核病患者临床表现及预后的关系,发现阳性结果与患者病情严 重程度、治疗反应及预后密切相关。
完善相关法规和政策支持
01
制定行业标准
建立TB-IGRA检测技术的行业标 准和质量管理体系,确保检测结 果的准确性和可靠性。
02
加强政策扶持
03
完善医保报销政策
政府应加大对TB-IGRA检测技术 的投入和支持力度,推动相关产 业的发展和创新。
将TB-IGRA检测技术纳入医保报 销范围,减轻患者的经济负担, 提高检测的可及性。
05
临床案例分析与解
读
不同类型结核病患者案例分析
活动性结核病案例
通过对比活动性结核病患者的TB-IGRA检测结果,发现其 阳性率较高,表明该检测对于活动性结核病的诊断具有较 高敏感性。
潜伏性结核病案例
分析潜伏性结核病患者的TB-IGRA检测结果,可见部分患 者呈现阳性反应,提示存在结核分枝杆菌感染,但无明显 临床症状。
加强国际间合作与交流
分享经验与技术
加强与其他国家和地区的交流与合作,分享TB-IGRA检测技术的研 发和应用经验,共同推动技术的进步和发展。
参与国际标准制定
积极参与国际标准的制定和修订工作,推动TB-IGRA检测技术的国 际化和标准化进程。
加强科研合作
鼓励科研机构和企业加强合作,共同开展TB-IGRA检测技术的基础 研究和应用研究,推动技术的不断创新和发展。
高通量测序技术在临床感染性疾病实验室诊断中的应用
高通量测序技术在临床感染性疾病实验室诊断中的应用【摘要】随着测序技术的不断进步,高通量测序技术在临床实验室中受到越来越多的关注,其在感染性疾病的诊断和治疗中有着重要价值。
与传统的微生物实验室诊断手段相比,高通量测序技术在对复杂和混合感染的诊断、敏感性、准确性、检测时间等方面均显现出优势。
然而,该技术在检测规范、成本、报告解读等方面还有一些问题亟待解决,在感染诊断的临床应用中仍存在许多挑战。
近年来,在国家政策的支持与规范下,测序行业持续健康发展,其应用市场也逐渐走向成熟;同时,国内外微生物专家努力推动相关共识及标准的形成,医院也在提高实验室测序相关仪器以及人员和知识储备,以促进高通量测序技术的临床应用,充分利用其优势,使其更好地服务于临床诊疗。
本文主要从高通量测序技术在临床微生物感染性疾病实验室诊断中的应用现状以及政策体系支持及发展方向等方面进行阐述。
微生物感染性疾病具有较高的发病率,不能及时诊断、治疗会带来严重的后果,是导致人类死亡的重要原因。
感染性疾病实验室检测能够及时准确地为临床提供客观的医学数据,对临床病情的诊断以及针对性治疗方案的确定有着积极意义,是各级医疗机构控制感染不可或缺的检测项目。
传统的感染性疾病实验室检测方法,如炎性标志物和细菌分离培养在解决临床问题方面尚存在局限性。
高通量测序技术可直接获取样本中的物种基因信息,实现微生物的鉴定,已经逐渐从科研走向临床应用,成为临床微生物实验室诊断的重要手段。
01、临床微生物感染性疾病实验室诊断1. 临床微生物感染性疾病实验室诊断的重要性实验室诊断是临床感染性疾病诊断最直接、最客观的证据之一。
常规感染性疾病实验室诊断可分为感染相关标志物检测和病原体检测两大类。
人体感染病原微生物后,由于免疫系统应答会出现一系列生理和病理反应,继而产生与感染相关的特异性生物标志物改变。
通过检测感染特异性生物标志物可帮助临床医师进行感染性疾病的诊断或鉴别诊断、指导药物使用、评估病程进展和判断预后。
感染性疾病实验诊断ppt课件
组织病理学诊断
组织病理学诊断是通过采集病变组织样 本,进行病理学检查,观察组织结构和 细胞形态的变化,从而确定感染性疾病
的一种实验诊断方法。
组织病理学诊断可以用于确诊各种感染 性疾病,如肝炎、肺炎、肿瘤等。
组织病理学诊断的优点是能够直接观察 病变组织和细胞形态的变化,有助于明 确诊断。缺点是需要采集病变组织样本
感染性疾病的传播途径多样,包括空 气传播、接触传播、血液传播等。
感染性疾病是全球范围内的主要疾病 负担,对人类健康构成严重威胁。
实验诊断的重要性
实验诊断是感染性疾病诊断的 重要手段,通过实验室检测可 以快速、准确地确定病原体的 种类和感染程度。
实验诊断有助于指导临床治疗 ,为制定合理的治疗方案提供 科学依据。
微生物培养的优点是能够直接观察病原体的生长和繁殖情况,有助于明确诊断。缺 点是培养时间较长,需要一定的实验室设备和经验。
免疫学检测
免疫学检测是通过检测人体内的抗原或抗体,间接推断是否存在感染的一种实验诊断方法。
常见的免疫学检测方法包括酶联免疫吸附试验(ELISA)、胶体金免疫层析试验、间接免疫 荧光试验等。
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优化检测流程
对检测流程进行优化,减 少操作环节和时间,降低 误差率,提高检测效率。
标准化试剂和仪器
推动试剂和仪器的标准化 ,确保不同实验室之间的 检测结果具有可比性。
加强实验室质量控制
建立质控体系
制定严格的质量控制标准 和质量管理体系,确保实 验室操作的规范性和数据 的可靠性。
定期质控检查
对实验室的仪器、试剂、 操作过程等进行定期检查 和校准,及时发现并纠正 问题。
多重检测与高通量检测
多重检测
分子诊断技术在县级检验科的发展与未来
分子诊断技术在县级检验科的发展与未来分子诊断技术是将分子生物学方法应用于疾病诊断的一门检验医学技术,通常以疾病相关基因、产物、病原微生物为检测对象,从分子水平来探讨疾病发生和发展的机制,从而为疾病的预防、诊断、疗效评估、预后判断等提供关键信息和决策依据。
纵观国际、国内的大型医疗机构以及三方独立实验室,分子诊断在其检验科的检验项目中拥有大壁江山,由于其具有检测快速、特异、灵敏的优点,在遗传病、病原微生物、肿瘤诊断及治疗上拥有不能取代的地位。
同时由于该技术相对较复杂、实验室建设要求较高、检测成本高,限制了其在县级及县级以下的实验室的开展应用。
从2019年末至今,人类正饱受着一种先前尚未在人类中发现的新型冠状病毒的折磨,目前全球的疫情还未得到有效控制,而我国目前疫情防控成果显著,这主要取决于我国政府的正确抉择部署,全国人民万众一心抗击疫情。
在战疫过程中,“核酸检测”深入人心,充当了“侦察兵”的角色,在疾病的“早发现、早报告、早隔离、早治疗”中起到了举足轻重的作用。
这也是分子诊断在疾病的诊断和预防中的应用非常成功的一次实战。
为了提高我国新冠核酸检测能力的及可及性,国务院联防联控机制印发《进一步推进新冠病毒核酸检测能力建设工作方案》,提出到2020年9月底前,各地要实现辖区内三级综合医院、传染病专科医院、各级疾控机构以及县域内至少1家县级医院具备核酸采样和检测能力。
到2020年底前,所有二级综合医院具备核酸采样和检测能力。
也就是说:“目前我国绝大部分县级医疗机构、二级以上实验室均建立了核酸检测实验室并从事新冠核酸检测”。
新冠疫情终将过去,那么我们县级医疗机构检验科能不能抓住机遇,完成华丽转身,利用已经拥有的规范实验室建设、检验技术人员、分子检测设备拓展分子诊断技术,发挥好其在疾病诊断、治疗、预防中的作用,将在很大程度上决定着其发展方向及未来。
县级医疗机构主要为县域内居民的常见病、多发病以及危急重症抢救提供医疗服务,其服务能力对分级诊疗政策的落实和医疗服务的公平性至关重要,而专科薄弱和人才短缺却是其不能忽略的问题。
呼吸道感染的现状及检测进展 PPT
病毒自限,检测意义不大?
治疗针对性强,预后取决于种类 病毒治疗有时效性 避免抗生素的滥用及病毒传染
常见呼吸道病原体
常见呼吸道病原体
不同发病地点病原体谱存在差异
美国感染病学会/美国胸科协会 成人社区获得性肺炎诊断治疗指南(2007)
不同年龄儿童社区获得性肺炎的病原体谱(1)
根据年龄能很好地预示儿童CAP的可能病原
病毒和细菌的共同感染
研究显示混合感染能诱导更严重的炎症反应, 临床表现比单独的细菌和单 1
独的病毒感染严重[6]
儿童C A P 病例中病毒-细菌混合感染高达45 %, 最常见的是肺炎链球菌和 2
呼吸道病毒的共同感染,如肺炎链球菌和流感病毒的共同感染[6]
通过重新评价1 9 18 年、19 5 7 年、1 9 68 年流感大流行资料, 发现流行 3
美国CDC对2010~2012年的2358名 年龄中位数为2岁患儿的一项研究显 示:感染CAP的儿童中,感染病毒 的可能性远远高于感染细菌 (73%vs15%)
[7] Seema Jain, et al. Children.[J]N Engl J Med 2015;372:835-45.
社区肺炎流行病学(EPIC)研究
期间大多数死亡病例可能是由于继发的细菌感染[9]
[6] 曹彬,谷丽,王辰. 病毒性肺炎:理解和困惑[A]. 呼吸与危重症医学(2010-2011)[C].2011;8. [9] Mo rens D M. J Inf e c t D is , 2 0 0 8 ,1 9 8 : 9 6 2一9 7 0.
已经变化
检测手段改进 ……
病毒检测技术普及度低 缺少安全、有效抗病毒药物
病 毒
临床上,病毒性肺炎长期被忽视
感染性疾病的早期诊断及预后评估相关指标的研究进展
染 的诊 断 、 评估 价值 , 但 就应 用 成 本 、 广 泛 程 度 而 言 P C T尚不能取 代 C R P, 联 合 应 用 可 能 为 临床 提 高 各 标志 物诊 断准确 性 的手段 之 一 。 应 当注意 的是 , P C T在 某些 非感 染条 件下 如 : 急
肝 细胞 、 外 周 血 单 核 细 胞 及 其 它 免 疫 相 关 细 胞 产
生 。
、
C . 反应 蛋 白( C R P )
C . 反 应蛋 白 ( C . r e a c t i v e p r o t e i n , C R P ) 是 重 要 的
急 性期 时相 蛋 白, 每 当发 生 感染 或 组 织 炎 症 时 , I L 一 6
临床肺 科 杂 志
2 0 1 4年 1 1月 第 1 9卷第 1 1 期
2 0 7 1
感 染 性 疾 病 的 早 期 诊 断 及 预 后 评 估 相 关 指 标 的 研 究 进 展
谷 梅 金
感染 性疾 病是 临床 常 见病 、 多发 病 , 若 不 能早期 诊 断并 及时 治疗 , 病 情 进展 可 导 致 MO D S甚 至 危 及 生命 。但 感染 早 期 的 临床 征 象 常 不 典 型 , 因此 寻 找 合适 的实验 室诊 断 标 志物 , 协 助 临床 医师 早 期 判 断 及评 估 病情 预后 , 有着 重 大 的临床 意义 。 下 面对 近年 来一 些受 到 高度关 注 的感染 相 关生
然 而有 部分 研 究 认 为 C R P虽 能提 示 重 症 感 染 的存在 , 但 并不 能很 好 的预测 感染 性休 克 、 脓 毒 症患
儿科常见病毒感染性疾病的临床和实验室诊断研究进展-2019年华医网继续教育答案
2019年华医网继续教育答案-352-儿科常见病毒感染性疾病的临床和实验室诊断研究进展备注:红色选项或后方标记“[正确答案]”为正确选项(一)儿童呼吸道合胞病毒感染实验室诊断1、下列选项对hRSV的描述中,错误的是()A、hRSV属副粘病毒科,肺炎病毒属B、因其在组织培养中能形成特殊的融合性细胞病变而命名为人呼吸道合胞病毒(hRSV)C、人呼吸道合胞病毒导致的死亡病例主要发生在发达国家[正确答案]D、1956年Morris等人首次从感冒的黑猩猩身上分离出E、1957年Chanock等人通过细胞培养的方法从患肺炎的患儿中发现了hRSV2、直接买内衣荧光检测的缺点不包括()A、需要大量人工操作B、临床相关性差[正确答案]C、结果判定存在主观性,对技术人员要求高D、要求有足够的呼吸道柱状上皮细胞E、不能用于床旁检测3、诊断hRSV的金标准是()A、病毒分离[正确答案]B、直接免疫荧光法C、血清抗体中和试验D、抗体检测E、抗原检测4、()是已获批准且临床较常用的儿童急性呼吸道感染病原检测方法A、免疫荧光法抗原检测[正确答案]B、快速抗原检测C、快速免疫诊断技术D、核酸检测E、抗体检测5、快速抗原检测的优点不包括()A、hRSV快速抗原检测方法所需平均时间约为10min(8~15min)B、方法简单,易于操作C、不需特殊仪器D、灵敏度、特异性高[正确答案]E、对于操作地点与操作者的技术均无太高要求(二)儿童流感病毒实验室诊断1、流感病毒诊断的金标准是()A、血清学检测B、核酸检测和病毒分离[正确答案]C、抗原检测D、抗体检测E、抗原和抗体检测2、我国北方地区流感流行季节为是()A、夏季B、冬季C、秋季D、冬春季节[正确答案]E、夏秋季节3、可用于流感病毒实验室诊断的临床标本不包括()A、鼻拭子B、血液[正确答案]C、鼻咽洗液D、咽拭子E、痰液4、可引起世界大流行的流感病毒变异方式是()A、点突变B、抗原性转变[正确答案]C、温度敏感性变异D、宿主范围变异E、抗原漂移5、被称为流感病毒的混合器的动物是()A、水禽B、猪[正确答案]C、马D、鲸鱼E、鸭子6、感染人类的流感病毒主要是()A、甲型和乙型流感病毒[正确答案]B、甲型和丙型流感病毒C、乙型和丙型流感病毒D、丙型型流感病毒E、丁型流感病毒7、流感病毒的抗原变异主要集中在()A、M2蛋白B、核蛋白C、基质蛋白D、血凝素和神经氨酸酶[正确答案]E、多聚酶蛋白8、通常用于流感病毒实验室诊断的方法不包括()A、核酸杂交法[正确答案]B、病毒分离C、直接免疫荧光法D、核酸检测E、免疫层析法(三)儿童轮状病毒感染1、A组轮状病毒G2基因型主要和P()基因型组合出现A、4[正确答案]B、11C、8D、6E、72、()是预防轮状病毒感染引起的儿童中重度腹泻的主要措施A、思密达B、补液盐C、益生菌D、疫苗接种[正确答案]E、布洛芬3、轮状病毒肠外系统感染引起的中枢神经系统症状主要是()A、惊厥[正确答案]B、脑炎C、脑病D、瑞氏综合征E、癫痫4、下面可以称为轮状病毒诊断金标准的是()A、聚丙烯酰胺凝胶电泳[正确答案]B、RT-PCRC、免疫层析D、ELISAE、以上都不是5、国内轮状病毒的流行时间主要是()A、春季B、秋冬季[正确答案]C、夏季D、6-8月E、无明显季节性6、国内轮状病毒G基因型的流行呈现动态变化,2000年之前以()流行为主A、G1[正确答案]B、G2C、G3D、G5E、G97、国内轮状病毒G基因型的流行呈现动态变化,2000年之后以()流行为主A、G1B、G2C、G3[正确答案]D、G5E、G98、编码轮状病毒中壳蛋白的病毒基因是()A、VP7基因B、VP4基因C、VP6基因[正确答案]D、VP9基因E、VP2基因9、轮状病毒()蛋白是被鉴定的第一个病毒内毒素A、非结构蛋白NSP1B、结构蛋白VP4C、非结构蛋白NSP4[正确答案]D、结构蛋白VP7E、结构蛋白VP210、主要引起婴幼儿腹泻的轮状病毒是()A、A组轮状病毒[正确答案]B、B组轮状病毒C、C组轮状病毒D、G组轮状病毒E、D组轮状病毒(四)手足口病临床表现新特点1、非典型手足口病临床特点不包括()A、多伴有中-高热B、皮疹分布多广泛C、恢复期可出现脱甲症D、常伴有神经系统并发症且预后差[正确答案]E、皮疹疼痛、结痂2、非典型手足口病的口腔病变不包括()A、口腔黏膜溃疡B、齿龈充血、红肿、糜烂[正确答案]C、舌黏膜溃疡D、口周皮疹E、口唇发绀3、手足口病与疱疹性咽峡炎关系的错误描述是()A、疱疹性咽峡炎是手足口病的早期表现[正确答案]B、两者的致病病原体有重合C、两者流行季节近似D、两者均可引起聚集性疫情E、两者发病人群近似4、CV-A6手足口病和脓疱疮的鉴别要点是()A、发病季节B、皮疹形态C、感染人群D、是否有自体接种传播[正确答案]E、是否高热5、对非典型手足口病描述正确的是()A、皮疹多为斑丘疹和质硬的疱疹,泡壁厚B、皮疹多离心分布C、常见病原为CV-A6和CV-A10[正确答案]D、皮疹不痛、不痒、不结痂、不留疤E、以上都正确。
梅毒实验室诊断技术的发展现状及评价
家兔 感 染实 验及 TP培 养 : 实验 条 件要 求 高 , 目前 仅
查方 法 , TP感 染人 体后 4 1 ~ 0周 , 体可 产 生 两 种 机 抗体 , 种是 机 体 感染 后 组 织 受 到 破 坏 释 放 出类脂 一
成分 , 后刺 激机 体产 生抗类 脂 质抗 体 , 而 即非 特 异性
效观 察和 判断 复 发 具 有重 要 的意 义 , 了方 便 各实 为
通过 普通 光学 显 微 镜 即 可 观察 到 TP的 形 态 , 验 实
能转 阴 , 因此 该类 试 验 对 早 期 、 晚期 、 伏 期 梅 毒 和 潜
神经 梅 毒 的诊 断不 敏感 , 出现 假 阴性 。溶 血 、 会 脂血 和不 新 鲜 的标 本 、 器具 污 染 等 因素 以及 受 一 些 疾 病 的影 响 还可 出现 “ 物 学 假 阳性 ” 生 。试 验 还 存 在 “ 血 清 固定 ” 前 带 现象 ” 故 非 TP抗 原 血 清 学试 验 存 和“ , 在一 定 的局 限 , 可作 为 梅毒 筛 查 、 效 观察 、 发 和 疗 复 再感 染 判断 的指标 [ , 能作 为 TP确诊 的依据 。 4不 ]
理 大致相 同 , 是 在 方 法 学 上 有所 改 良。VD 只 RL是
暗视 野显 微镜 检查 : 用 于有 新 鲜黏 膜损 伤 的 活动 可
期早期 梅 毒患 者 的 诊 断 , 硬下 疳 和扁 平 湿 疣 组 织 取 渗 出液 以及 肿 大淋 巴结或 羊水 抽 出液 行 盐水 涂 片镜
病毒感染性疾病的实验室诊断
2. 鸡胚接种 鸡胚是用于分离粘病毒科、疱疹病毒、 痘类病毒的较为理想的材料。 (1) 常用接种部位和用途
38-39℃
卵黄囊接种 羊水腔接种
新鲜受精卵
5-13天
尿囊腔接种
绒毛尿囊膜接种
卵壳 气室 羊膜 尿囊
绒毛尿 囊膜
羊水囊
卵黄囊
卵白
① 卵黄囊接种:用于流行性脑炎病毒分 离 ② 羊水腔接种:用于流感病毒、副流感 病毒的初次分离 ③ 尿囊腔接种:用于流感病毒、腺病毒、 腮腺炎病毒分离 ④ 绒毛尿囊膜接种:用于痘病毒、疱疹 病毒分离
(1) 中和试验:是将病毒与特异性抗 体进行免疫反应,使病毒失去感染性, 在细胞培养和活的机体内不出现病变 的试验。常用细胞培养进行中和试验。
方 法:
①固定病毒(100TCID50),稀释血清,测Ab 效价。两次效价相差4倍以上有诊断意义。 TCID50:50%组织细胞感染的病毒剂量 (50%Tissue cell infective dose TCID50)
(4) 理化性质的测定 ① 病毒的大小和形态:可用电镜观察病毒 的大小和形态。 ② 核酸类型鉴别及序列测定:利用5-溴2-脱氧尿苷(BUDR)抑制DNA复制的 特性,在细胞培养液中加入该物质,可 抑制DNA病毒的复制和增殖,抑制细胞 病变的出现,但对RNA病毒无抑制作用, 以次判断病毒核酸类型。也可对病毒特 异序列或全序列的碱基排列测定或DNA 杂交、DNA-RNA杂交来鉴定病毒。
④ 干扰现象: 一种病毒感染细胞后,可以干扰以后 进入的病毒的增殖。利用此现象鉴定不 引起形态学变化的病毒。如某些型别的 鼻病毒能干扰以后进入的副流感Ⅰ型病 毒的增殖,从而阻抑后者的红细胞吸附 作用。
⑤ 红细胞吸附及吸附抑制试验: 红细胞吸附现象的产生是由于病毒在 细胞膜成熟时,将其血凝素插入细胞膜, 使受染细胞吸附红细胞,是病毒增殖的 指标。该现象可被相应的病毒特异性抗 体所抑制,称为红细胞吸附抑制试验, 可用来鉴定病毒。
诺如病毒实验室诊断现状与展望
诺如病毒实验室诊断现状与展望【摘要】诺如病毒能够引起腹泻,也是病毒性急性肠胃炎的主要病因,严重影响着当下公共卫生与食品安全。
诺如病毒基因组具有多样性,且病毒也在不断变异,这也就导致临床尚未研发出疫苗进行病毒控制。
诺如病毒实验室诊断方法类型较多,不同检测技术间的检测原理具有差异,此类实验室检测技术对促进诺如病毒实验室诊断工作的发展具有重要价值,能够满足现代化临床病毒诊断的需求,为临床治疗提供依据。
基于此文章就诺如病毒实验室诊断现状以及未来发展展开阐述。
【关键词】诺如病毒实验室诊断诊断技术诺如病毒属于一组圆形、无包膜的单股正链RNA病毒,属于环状病毒科诺如病毒属。
若如病毒的感染性腹泻是诺如病毒的主要临床症状,此类疾病具有发病急、传播速度快、传播范围广等特点,也是爆发性非细菌性腹泻的主要病因。
从诺如病毒感染性来讲,诺如病毒以肠道传播为主,受到污染的水、食物,甚至空气均有较高的传播性,因此诺如病毒在学校、社区容易出现集体感染。
诺如病毒自身遗传具有高度变异的特征,同一社区在同一时间所存在诺如病毒毒株具有差异,为减少诺如病毒的感染与传播,预防与控制感染对阻断病毒爆发具有重要价值。
实验室检测作为检测诺如病毒最快、最直观的方式,近年来诺如病毒实验室诊断技术也在不断简化、诊断精准性也在不断提升。
一、诺如病毒表型以及免疫学检测方法电子显微镜对诺如病毒的检测十分简单,其仅需要少量样本进行简单处理,便可直观从外形的角度对诺如病毒进行分辨。
电子显微镜对区分小圆病毒的敏感性较差,由于诺如病毒与札幌病毒、星状病毒外形具有相似性,以此单纯电子显微镜难以对诺如病毒进行诊断。
根据当下研究资料统计,有学者研究证明,在对2000余份粪便样本进行检测的过程中,有超100分的阳性样本尚未在电子显微镜下被检出。
由此电子显微镜对诺如病毒的灵敏性较低,且设备自身维护成本较高,不适用于临床诊断。
2003年以来,诺如病毒抗原检测方法在不断更新,受其检测方法快速、操作简单等优势,被广泛应用于诺如病毒抗原的检测中。
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检验后阶段:是指检验结果的确认、报告单的形成到临床对检验结果的 认可及反馈的全过程。 确保检验结果的真实性
实验诊断流程管理
Á 优化检验项目组合,为临床提供检验信息 最大化。
Á 为临床提供实验数据鉴别、确认技术平台。 Á 建立疾病筛查、确认、疗效评估三级技术
平台,给临床提供快捷、相对准确的实验 数据,为临床诊疗服务。
病原体的多重快速筛查 技术的建立是关键!
多重筛查技术
感染性疾病病原微生物抗体检测
Á 欧蒙BIOCHIP系统:
Á 呼吸道系列 Á 中枢神经系列 Á 淋巴结炎系列 Á 心肌炎系列 Á 胃肠道系列 Á 皮疹系列 Á 妊娠感染系列 Á 眼科感染系列 Á 其它肝炎系列
病原微生物特异性抗体谱检测
HIV特异性抗体谱检测
确认平台
免疫荧光吸附或TPPA 或免疫印迹实验确认
疗效评估平台
快速血浆反应素试验
(TRUST、RPR 滴度测定,疗效判定)
免疫印迹技术
Á 抗原检测:依赖于好的抗体 (单抗、多抗)
Á 抗体检测:依赖于好的抗原 (天然、基因工程)
E. coli expression systems
N.I. I M
(forward Primer is labeled)
WUPyv
鼻病毒
副流感病毒3型
腺病毒
流感病毒A型 RSV
HMPV HCoV
GeXP Analysis
2a
Multiplex PCR step 1
2b
Forward chimeric gene specific
Multiplex PCR step 2
primers (involved in cycle 1 to 3)
Universal Primers take over
after about the 3rd cycle
初筛试验 ●定性试验:(Y;N)
确认试验
(敏感性 与 特异性) ( 方法适用范围 )
●定量试验:( 是多少) ;真值?
(受方法学限制 酶 染料 药物等影响)
疾病筛查、确认、疗效评估三级技术平台
疾病筛查平台 (筛查实验)
疾病确认平台 (确认实验)
疾病疗效评估平台 (实验数据的变化)
艾滋病筛查、确认、疗效评估 三级技术平台
检验概念的更新
医学检验
提供实验数据
检验医学
检验结果确认 检验结果解释 出具检验报告 提出相关建议 相关咨询服务
临床检验医学专业发展
检验医学
血液体液 生物化学 免疫学 微生物学 分子生物学 输血
全自动仪器
+ 形态学
全自动仪器
全自动仪器 RT-PCR 小型仪器
+
各种芯片
+
形态学 质谱…
手工
检验医学的发展和管理中 什么最重要?
检验流程管理至关重要
Á 检验质量流程管理 Á 实验诊断流程管理
检验质量流程管理
Á 检验流程“三部曲”Fra bibliotek检验前
(原材料)
检验中
(产品生产)
检验后
(售后服务)
检验前阶段:是指从临床医生开出检验单、患者准备、原始标本的采 集、储存、运输直至检验室验收的全过程。 检验结果正确的重要保障
检验中阶段:是指从接受标本开始到实验数据形成的过程。 确保检验结果的准确性?(正确)
病原体检测:病原体培养、抗原检测(酶联免疫、荧光免疫、 胶体金、蛋白芯片、质谱等)、核酸检测(各种 PCR、基因芯片、核酸测序、质谱等)。
抗体检测: IgM, IgG检测( 酶联免疫、荧光免疫、胶体金、 免疫印迹、生物芯片等)。
目前临床感染性疾病实验室诊断手段
Á 病原微生物培养
慢!!!
Á 抗体检测
1 Reverse Transcriptase (Reverse chimeric gene specific primers only, Multiplexed Reverse transcription)
cDNA synthesis from mRNA
Remove aliquot of cDNA and move to PCR amplification
GeXP技术
GenomeLabTM GeXP Technology
CEQTM Genetic Analysis System
Process of GeXP
Cells Grown OR Samples
Extract RNA and DNA
Multiple gene transcripts (mRNA) in RNA sample
临床感染性疾病实验室 诊断技术现状与未来
广东医学院附属福田医院 (深圳市第四人民医院)
陆学东
临床检验医学发展的五化
Á 自动化(流水线、全封闭系统) Á 床边化(POCT技术、快检技术) Á 信息化(依赖各种数据库、LIS) Á 分子化(各种PCR技术、质谱技术等) Á 个体化(临床用药、疾病预测等)
HIV病毒 筛查实验 (酶标、金标)
病原微生物特异性抗体谱检测
单纯疱疹病毒-1型、-2型特异性抗体谱检测
单纯疱疹病毒 筛查实验
(酶标、金标)
病原微生物特异性抗体谱检测
幽门螺杆菌 筛查实验
(酶标、金标、 呼气实验等)
2002-2012年 广东省各期梅毒发病情况
病例数
60000 50000 40000 30000 20000
酶标、金(硒)标法筛查平台
免疫印迹、PCR、病毒载量 确认平台
疗效评估平台 (病毒载量)
病原微生物感染性疾病诊断方法:
Á 根据疾病诊断的需求和目的
筛选法:凝集试验、酶联免疫 、胶体金、发光等
方法。
确诊法:病原体分离、免疫印迹、PCR技术、生物
芯片、质谱技术、核酸测序等方法。
病原微生物感染性疾病诊断方法:
梅毒 Ⅰ期梅毒 Ⅱ期梅毒 Ⅲ期梅毒 胎传梅毒 隐性梅毒
10000
年份
0
2002 2003 2004 2005 2006 2007 2008 2009 2010 2011 2012
2002年-2012年广东省各期梅毒发病趋势
2015-7-31
23
广东省皮肤病医院 黄澍杰
检测对象
筛查平台
ELISA或胶体金 或免疫发光
滞后、通量不够!!!
Á 抗原检测、分子生物学检测 通量不够!!!
第一时间病原学诊断困难!!!
临床急需解决的问题
z 如何快速检测病原体?(筛查) z 如何准确检测病原体?(确认)
感染性疾病疑似病人
血常规 +
降钙素原 检测
G试 验
标本采集
细菌、真菌 培养
病原抗原、 抗体检测
分子生物学 检测
病毒培养
降钙素原;G试验定量;病毒载量