无菌室消毒

无菌室消毒

目的：建立无菌室清洁消毒标准操作规程，为质检中心的无菌室清洁消毒操作提供标准，防止污染，保证药品质量控制及检验的准确性和真实性。

范围：适用于实验室的无菌室的清洁消毒工作。质检中心无菌室的工作人员对本规程实施负责，质保部负责监督。

消毒灭菌操作要领

1、先进行无菌室空间的消毒，开启紫外灯30—60分钟。

2、检验用的有关器材，搬入无菌室前必须分别进会灭菌消毒。

3、操作人员必须将手清洗消毒，穿戴好无菌工作衣、帽和鞋，才能进入无菌室。

4、进入无菌室后再一次消毒手部，然后才进行检验操作。

操作过程注意事项

1、动作要轻，不能太快，以免搅动空气增加污染；玻璃器皿也应轻取轻放，以免破损污染环境。

2、操作应在近火焰区进行。

3、接种环、接种针等金属器材使用前后均需灼烧，灼烧时先通过内焰，使残物烘干后再灼烧灭菌。

4、使用吸管时，切勿用嘴直接吸、吹吸管，而必须用洗耳球操作。

5、观察平板时不好开盖，如欲沾取菌落检查时，必需靠近火焰区操作，平皿盖也不能大开，而是上下盖适当开缝。

6、进行可疑致病菌涂片染色时，应使用夹子夹持玻片，切勿用手直接拿玻片，以免造成污染，用过的玻片也应置于消毒液中浸泡消毒，然后再洗涤。

7、工作结束，收拾好工作台上的样品及器材，最后用消毒液擦拭工作台。

常用消毒剂

现将常用的消毒药品及其配制、使用方法，介绍如下：

1．35％甲醛水溶液（HCHO）：又名福尔马林，使蛋白质变性。用于培养室、无菌室的灭菌。

2．0.1％的升汞水（HgCL3）：能使蛋白质变性，抑制酶类。0.1％升汞配制方法是称取升汞0.1克，用少许酒精溶解，再加水至100毫升即成。用于无菌箱、培养箱、培养皿四周表面以及手指的灭菌。

3．石炭酸（C6H5OH），5％浓度喷雾后，能使蛋白变性沉淀。石炭酸（苯酚）50毫升，加水950毫升配成。用于工作服、实验桌的灭菌。杀菌效果同升汞。4．高锰酸钾（KMnO4）：氧化剂。0.1％浓度能使蛋白质与氨基酸氧化，失去酶的活性，用于消毒，能抑制或杀死杂菌。

5．乙醇（CH3CH3OH）：又称酒精。消毒以75％浓度的效果最好。它能使蛋白质脱水变性。高浓度酒精会使蛋白质很快脱水凝固，消毒作用反而减弱。

6．新洁尔灭：0.25％新洁尔灭用于无菌箱、无菌室的灭菌。一般新洁尔灭5％原液50毫升；加水950毫升配成。

7．漂白粉水：取漂白粉10克，加水140毫升配成。通常在使用前临时配制，静置1～2小时，取上清液喷射，进行室内消毒，每平方米用1升。

8．药皂：煤酚皂(来苏儿5-10%)、硼酸皂等各种药皂的水溶液，均可用于器具、橡皮塞及手指的消毒。

9．2％硫酸铜溶液：用硫酸铜（胆矾）2克，加水至100毫升加热溶解配成。用于床架、木架等各种菌种架的消毒。还可用5％硫酸铜溶液。

10．0.5％波尔多液：先用硫酸铜1斤，溶于100斤水，再用石灰1斤，加水100斤。然后等量混合起来即成。用于菌种架、段木的消毒。

11.多菌灵：用于杀灭真菌、半知茵。1：800倍拌料或1：500倍喷洒均可。

无菌箱及无菌室的消毒灭菌

无菌箱的消毒灭菌，可采取以下几种方法：

l．用甲醛和高锰酸钾混合熏蒸：一般每平方米需40％甲醛10毫升、高锰酸钾8毫升，进行熏蒸。使用时，先密闭门窗，量甲醛溶液盛入容器中、然后倒入量好的高锰酸钾，人员随之离开接种室，关紧房门，熏蒸20—30分钟即可。2．0.1％升汞水消毒：用0.1％升汞水浸过的纱布或海绵进行指擦，或用喷雾器喷雾灭菌，使箱内的上下左右都沾上升汞水，手也可用升汞水消毒，并把袖子卷起来。喷雾后20～30 分钟，箱内的杂菌和雾滴一起落到箱底被杀死，内部的空气就变得很清洁。

3．紫外线照射灭菌：在无菌箱中装一支200伏、3O瓦的紫外线灯管；每次开20～30分钟，就能达到空间杀菌的目的。照射结束后，罩黑布半小时，以增强杀菌效果。

4．石炭酸喷雾：在每次接种之前，用5％石炭酸溶液喷雾，可促使空气中的微

粒和杂菌沉降，防止桌面微尘飞扬，并有杀菌作用。5．石灰揩擦：经常用药物熏蒸，易造成酸性环境，特别用甲醛和高锰酸钾熏蒸长久，污染往往越来越严重，预防办法可把各种药品交替使用，过一段时间（约五周）用石灰擦洗一遍。实践证明，这样做效果很好。

空气污染的程度

如霉菌较多时；可先用5％石炭酸全面喷射后，再用甲醛熏蒸。如细菌较多时，可采取用乳酸和甲醛交替熏蒸的办法加以杀灭。

无菌室无固定程序，但按一般操作应遵循如下规程

1．接种室内和缓冲室内使用前，用5％石炭酸溶液喷雾。把所需要的器材搬入缓冲室清洗，等晒干后搬入接种室，打开紫外线灯，照射杀菌。

2．穿上工作服及无菌工作帽、鞋，然后用煤皂液洗手2 分钟。进人接种室后，查验器械是否放在一定位置。然后用5％石炭酸溶液重点在工作台的上方和附近的地面上喷雾。然后退回缓冲室。还可给接种室门口地面洒一层石灰，进门时踩石灰可使鞋底保持无杂菌状态。3．接种操作前，用70％的酒精棉球擦手。进行无菌操作时，要严格认真，动作轻捷，尽量减少空气流动。

4．工作结束后，立即将台面收拾干净，不留残物。然后用5％石炭酸全面喷洒。5．操作时，注意安全。如棉塞着火，用手紧握即可熄灭。如打破菌瓶，可用抹布沾5％石炭酸，收拾到废物桶内。每次的污染物应小心放在盘内，盖严拿出室外深埋或烧掉。