呋喃唑酮及其代谢物 牙鲆肌肉组织
呋喃唑酮快速检测试剂盒说明书
-01版呋喃唑酮代谢物（AOZ）快速检测试剂盒说明书一、原理本试剂盒采取间接竞争ELISA方法检测水产和鸡肉等组织样本中AOZ, 在微孔条上预包被上偶联抗原, 利用抗原与抗体特异性免疫化学反应原理来进行, 样本中AOZ和微孔条上预包被偶联抗原竞争抗呋喃唑酮代谢物衍生物抗体, 加入酶标识物后, 用TMB底物显色, 样品中AOZ含量与样品吸光度值呈反比, 与标准曲线比较即可得出呋喃唑酮代谢物含量。
二、试剂盒技术指标:试剂盒灵敏度: 0.05ppb样本检测下限:组织（鸡/鸭/猪/牛/羊/鱼/虾肉）—---——0.1ppb肝脏（鸡/鸭/猪/牛/羊肝脏）--------———0.1ppb蜂蜜、牛奶、肠衣--------------------------—0.1ppb 鱼/虾等水产品组织因存在一定干扰,检测下限为0.2ppb交叉反应率: 呋喃唑酮代谢物————————————100%呋喃它酮代谢物———————————﹤0.1% 呋喃妥因代谢物———————————﹤0.1% 呋喃西林代谢物———————————﹤0.1% 回收率:组织、肝脏……………………………90%±10% 蜂蜜、牛奶、肠衣……………………75%±15%三、试剂盒组成1、微量测试孔: 每条8孔, 一板12条2、标准液X6瓶: （1ml/瓶）0ppb、0.05ppb、0.15ppb、0.45ppb、1.35ppb、4.05ppb3、酶标识物12m l………………………红色帽4、抗体工作液7m l………………………蓝色帽5、底物A液7 m l………………………白色帽6、底物B液7 m l………………………黑色帽7、终止液7 m l………………………黄色帽8、20X浓缩洗涤液40 m l…………………白色帽9、2X浓缩复溶液50 m l…………………透明帽10、衍生化试剂10m l…………………白色帽四、所用仪器、试剂含有仪器: 微孔酶标仪、打印机、均质器、氮气吹干装置、振荡器、离心机、刻度移液管、天平（感量0.01g）微量移液器: 单道20µl-200µl, 100µl-1000µl、多道250µl试剂:氢氧化钠、乙酸乙酯、正己烷、浓HCl、磷酸氢二钾（全部样本使用）亚硝基铁氰化钾（K2Fe（CN）5·NO·3H2O）、ZnSO4·7H2O（奶样专用）五、样本前处理步骤样本处理前须知处理任何样本时, 都必需注意:（a）本试剂盒所检测组织样本包含: 动物组织、禽类和水产组织。
禽蛋中呋喃唑酮代谢物（AOZ）残留量的酶联免疫检测
禽蛋中呋喃唑酮代谢物（AOZ ）残留量的酶联免疫检测贺燕，王益军，张苏珍，葛敏，谭海荣（连云港市畜产品质量监督检验测试中心江苏连云港222001）用酶联免疫方法对禽蛋中呋喃唑酮代谢物（AOZ ）残留量进行检测，随机抽取20个禽蛋样品进行处理，样品经2-硝基苯甲醛衍生化并用乙酸乙酯提取AOZ 。
通过样品中残留的AOZ 和酶标板上预包被的抗原竞争抗体，加入酶标二抗后与底物显色，测得禽蛋中AOZ 的残留量。
检测结果为18个阴性样，2个阳性样，经液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS ）比对试验，样品阴、阳性判断结果一致，且与阳性样测定结果相符。
综上，酶联免疫法能够实现禽蛋中AOZ 残留量的准确检测。
代谢物；残留量；酶联免疫；禽蛋；检测呋喃唑酮又称痢特灵，是人工合成的广谱抗菌药物，属硝基呋喃类药物，它有非常好的抗菌效果和药代动力学的特性[1]，曾经被广泛应用于畜牧业，它还可以作为猪、禽类和水产促生长的添加剂。
但在长时间的实验室研究过程中发现，硝基呋喃类的药物和代谢物均可使实验动物发生癌变和基因突变，因此，此类药物禁止在治疗和饲料中使用[2]。
自1993年起，欧盟范围内便禁止在动物饲养中使用硝基呋喃类药物盐酸呋喃它酮、呋喃妥因和呋喃西林，而呋喃唑酮也从1995年起被禁用。
我国农业部第235号公告中也规定动物性食品中呋喃唑酮检出限为不得检出[3]。
硝基呋喃类药物在体内迅速代谢，在组织中与细胞膜蛋白结合长期持续存留，因此在分析此类药物的残留时以分析代谢物为主[4]。
目前，动物组织中呋喃唑酮代谢物（AOZ ）残留分析主要采用高效液相色谱法（HPLC-MS ）、液相色谱串联质谱法（LC-MS/MS ）和酶联免疫法（ELISA)。
前者由于需要复杂的仪器设备、繁琐的前处理过程及对检验人员的高技能要求，不适合现场监控和大量样本的筛查，而以抗原抗体特异性反应为基础的酶联免疫法具有灵敏度高、特异性强、操作简便等优点，已在农兽药残留检测中得到广泛应用[1]。
呋喃唑酮及其代谢物在牙鲆肌肉组织中的代谢动力学研究
关 于 呋 喃 唑酮 和 呋 喃 西 林 代 谢 物 在 大 菱 鲆 、 罗 非 鱼ｌ ｌ ｏ ］ 、 日本 鳗 鲡 】 １ 以 及 鲤 １ 组 织 中 的 药 物 代
有限公 司 ） ； Ａ ｎ ｋ ｅ Ｔ Ｄ Ｌ一４ ０ Ｂ离 心 机 （日本 日立 公 司） ； Ｌ ａ ｂ ｏ ｒ ｏ ｔ ａ ４ ０ ０ 型旋 转蒸 发 仪 （ 德国 Ｈ ｅ ｉ ｄ ｏ ｌ ｐ ｈ公 司） ； Ｈ Ｚ Ｓ—Ｈ 水 浴恒 温振荡 器 （ 哈尔 滨市 东联 电子 技 术 开发有 限公 司 ） ； Ｉ Ｋ Ａ—Ｔ １ ８ ｂ ａ ｓ ｉ ｃ匀 质 机 （ 德国 Ｉ Ｋ Ａ
摘要 ： 采用高效液相 色谱法 和液相色谱 一串联质谱联用法分别 测定 牙鲆肌 肉组织 中的呋 喃唑酮及 其代谢 物 ３一氨基
一
２一嗯 唑 烷 酮 （ Ａ Ｏ Ｚ ） 的 残 留 浓 度 。在 （ ２ ２± ２ ）℃ 条 件 下 ， 研 究 了单 剂 量 口灌 条 件 下 （ 以８ ０ ｍｇ ／ ｋ ｇ 计） ， 呋 喃唑 酮 及 其 … 出 现在 ２ ｈ ， 第 一 次 达 峰 浓度 Ｃ ……为 ３ ０ ６ ０ ． ５ ｇ ／ ｋ ｇ ； 第
价值 较 高 。呋喃 唑酮 已经 禁 用 ， 但 是 禁 而 不止 ， 在 牙
鲆养 殖 中违法 使 用 现 象仍 然 存 在 。 本研 究 探 讨 了呋
喃 唑酮及 其。
１ 材 料 和 方 法
１ － １ 仪器 、 试剂及材料
２ ０ １ ３年 ３月 第 ３卷 第 １期
中 国 渔 业 质 量 与 标 准
Ｃ ｈ ｉ ｎ ｅ ｓ ｅ Ｆ ｉ ｓ ｈ ｅ ｒ ｙ Ｑ ｕ ａ ｌ ｉ ｔ ｙ ａ ｎ ｄ Ｓ ｔ ａ ｎ ｄ ａ ｒ ｄ ｓ
呋喃唑酮在凡纳滨对虾组织中代谢动力学研究
呋喃唑酮在凡纳滨对虾组织中代谢动力学研究张海琪;丁雪燕;薛辉利;姚高华【期刊名称】《宁波大学学报（理工版）》【年(卷),期】2009(022)004【摘要】运用液相色谱-串联质谱法研究了呋喃唑酮药饵多次给药后在凡纳滨对虾体内的药物代谢动力学.研究结果表明:呋喃唑酮代谢物在血淋巴、肝胰脏、肌肉组织中的代谢过程均符合二室模型,其动力学方程分别为C血液=414.107×e-0.092t+124.451×e-0.005t,C肝胰腺=1625.563×e-0.019t+125.700.C肌肉=120.434×e-0.019t+71.579×e-0.001t.凡纳滨对虾血淋巴和肝胰腺中呋喃唑酮代谢物浓度在4h达到高峰,肌肉中药物浓度在2 h达到最大值;最高峰时血淋巴、肝胰腺和肌肉中药物浓度平均为570.6μg·L-1、1 948.6μg·kg-1和210.0μg·kg-1.在血淋巴、肝胰腺和肌肉组织中呋喃唑酮代谢物浓度的吸收半衰期(t1/2α)分别为7.497 h、36.206 h和36.484 h,消除半衰期(t1/2β)分别为132.525 h、1 000 479.21 7 h和505.637 h,总表观分布容积(V1/F)分别为55.775 L·kg-1、17.16 L·kg-1和161.574 L·kg-1.说明给药后呋喃唑酮代谢物在凡纳滨对虾体内消除缓慢,残留严重,尤其以肝胰脏残留最为明显.【总页数】5页(P472-476)【作者】张海琪;丁雪燕;薛辉利;姚高华【作者单位】浙江省水产质量检测中心,浙江,杭州,310012;浙江省水产质量检测中心,浙江,杭州,310012;浙江省水产质量检测中心,浙江,杭州,310012;浙江省水产质量检测中心,浙江,杭州,310012【正文语种】中文【中图分类】S948【相关文献】1.自主创新开拓地壳动力学研究新领域——访中国地震局地壳应力研究所谢富仁教授 [J], 龚海莹;吴应清2.凡纳滨对虾摄食诺氟沙星强化卤虫的药代动力学研究 [J], 曹立民;李健;刘淇;王群3.菠萝叶片绿色组织与贮水组织中代谢物水平的昼夜变化 [J], 陈产松;齐一萍;等4.呋喃西林和呋喃唑酮在海参组织中的代谢消除规律 [J], 付树林;邢丽红;孙伟红;李兆新;郑关超;翟毓秀;郭江涛5.呋喃唑酮及其代谢物在牙鲆肌肉组织中的代谢动力学研究 [J], 刘莹;李兆新;郑炯;邢丽红;王英姿因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
毕业设计(论文)动物组织中硝基呋喃代谢物残留量的测定方法
山东理工大学毕业论文题目：动物组织中硝基呋喃代谢物残留量的测定方法学院：专业：食品科学与工程学生姓名：指导教师：毕业论文时间：二ОО八年二月二十五日～六月二十日共十七周摘要用高效液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）法同时测定动物组织及水产品中呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃西林和呋喃妥因的代谢物。
盐酸水解动物组织及水产品中蛋白结合的代谢物，同时加入2-硝基苯甲醛（2-NBA），37℃过夜衍生化。
加入氢氧化钠，调节PH值至7.0后，再加入正己烷去除蛋白。
后用乙酸乙酯提取，正己烷净化，分析物采用电喷雾电离正离子（ESI+）、多反应检测（MRM）模式检测，內标法定量。
在添加浓度0.5~2μg/kg范围内，內标法回收率为89.5%~110.3%；相对标准偏差（RSD）小于11.3%。
5-马啉代甲基-3-氨基-2-恶唑酮（5-methylmorpholino-3-amino-2-oxazolidinone，AMOZ）、3-氨基-2-恶唑酮（3-amino-2-oxazolidinone，AOZ）、氨基脲（semicarbazide，SEM）和1-氨基-乙内酰胺（1-amino-hydantoin，AHD）方法检出限为0.5μg/kg。
关键词：液相色谱-串联质谱，硝基呋喃类代谢物，内标法AbstractA high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometric method was established for simultaneous determination of the nitrofuran metabolites, furazolidone, nitrofurazone and nitrofurantoin in animals，tissue and aquatic produces. Potein-bound metabolites were released in HCl solution and deriatised with 2-nitrobenzaldehyde(2-NBA)overnight at 37℃. Proteins were sedmentated by n-hexane , after adjusting pH to 7.0 by sodium hydroxide. Then the analytes were extracted by ethyl acetate and cleaned up by n-hexane. Identification was achieved by electrospray ionization in positive mode(ESI+%~110.3%with spiked levels of 0.5~2μg/kg. The RSDs were less than 11.3%. The limits of detection were 0.5μg/kg for AMOZ, AOZ, SEM and AHD.Keywords:Liquid chromatography-tandem mass spectrometric, metabolites of nitrofurans, internal standard.第一章目录摘要 (I)ABSTRACT（英文摘要） (Ⅱ)目录 (Ⅲ)第一章引言 (1)硝基呋喃类药物的性质和使用 (1)硝基呋喃类药物的危害及其管理对策 (2)1.2.1硝基呋喃类药物的主要危害 (2)1.2.2硝基呋喃类药物的管理对策 (3)1.3硝基呋喃类物质及其代谢物的样品处理方法 (4)1.3.1样品的均质 (4)1.3.2提取和衍生化 (5)1.3溶剂提取 (5)1.3.2.2水解和衍生化 (5)1.3.3样品的净化 (6)1.3.3.1液液萃取（LLP） (6)1.3.3.2基体固相分散技术（MSPD） (6)1.3.3.3固相萃取技术（SPE） (7)1.3.3.4在线透析和微量富集技术 (7)1.4硝基呋喃类物质及其代谢物的检测方法 (8)1.4.1色谱分析方法 (8)1.4.1.1高效液相色谱法(HPLC) (8)1.4.1.2联用技术分析法 (10)1.4.2分光光度法 (12)1.4.3免疫分析法（IA） (13)1.4.4总结 (14)第二章实验方法 (17)2.1原理 (17)2.2仪器和设备 (17)2.3试剂与溶液 (18)2.3.1 主要试剂 (18)2.3.2 主要溶液的配制 (18)2.3.3 标准物质和标准溶液 (19)2.4实验方法 (20)2.4.1 试样制备与保存 (20)2.4.2 分析步骤 (20)2.4.2.1 洗样 (20)水解 (20)2.4.2.3 提取和净化 (20)2.4.2.4 仪器参数与设定 (21)2.4.2.5液相色谱-串联质谱测定 (22)2.4.2.6定性方法 (22)2.4.2.7定量方法 (23)第三章结果计算及讨论 (24)3.1结果计算 (24)3.2总离子流图和保留时间 (24)3.3样品衍生条件的优化 (25)3.4净化条件的选择 (26)质谱条件的优化 (26)检测限、测定低限、回收率和精密度 (29)3.6.1 回收率统计 (29)3.6.2 重复性统计 (33)3.7內标法定量 (38)3.8标准曲线图谱及线性范围 (39)3.8.1 标准曲线图谱 (39)3.8.2 线性范围 (41)3.9质量控制及注意事项 (41)3.9.1 质量控制 (41)3.9.2 注意事项 (42)结论 (44)参考文献 (45)致谢及声明 (48)第一章引言1.1 硝基呋喃类药物的性质和使用硝基呋喃类药物(Nitrofurans)是人工合成的具有5-硝基呋喃基本结构的广谱抗菌药物，对大多数革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌、某些真菌和原虫均有作用，在低浓度下对上述病原体有抑制作用，高浓度则有杀灭作用，其抗菌作用机理是干扰细菌体内的氧化还原酶系统，使细菌代谢紊乱[1]。
呋喃唑酮
抗菌药。
遮光，密封保存。
呋喃唑酮片。
药物说明
01
药理作用
02
药代动力学
03
适应症
04
不良反应
06
孕妇用药
05
注意事项
1
儿童用药
2
药物相互作用
3
药物过量
4
用量用法
5
毒副作用
本品为硝基呋喃类抗菌药。对革兰阳性及阴性菌均有一定抗菌作用，包括沙门菌属、志贺菌属、大肠杆菌、 肺炎克雷伯菌、肠杆菌属、金葡菌、粪肠球菌、化脓性链球菌、霍乱弧菌、弯曲菌属、拟杆菌属等，在一定浓度 下对毛滴虫、贾第鞭毛虫也有活性。其作用机制为干扰细菌氧化还原酶从而阻断细菌的正常代谢。
公告显示，此次禁用的含呋喃唑酮复方制剂共涉及四种，分别为复方雪胆呋喃唑酮胶囊、呋喃苦参黄连素片、 二维呋喃唑酮片、谷海生片。
注意呋喃唑酮单方制剂没有受到影响。
化合物简介
1
基本信息
2
理化性质
3
分子结构数据
4
计算化学数据
5
用途
化学式：C8H7N3O5 分子量：225.158 CAS号：67-45-8 EINECS号：200-653-3
4、本品的红外光吸收图谱应与对照品的图谱（光谱集182图）一致。
酸度 取本品1.0g，加水100mL，振摇15分钟，滤过，取滤液依法测定（通则0631），pH值应为5.5～7.0。 乙醇中溶解物 取本品5.0g，置250mL锥形瓶中，加乙醇100mL，加热回流5分钟，放冷至25±2℃，用5号垂熔漏斗滤过，滤 渣用乙醇50mL洗涤，洗液与滤液合并，置已称定重量的蒸发皿中，蒸去乙醇，残渣在80℃干燥1小时，遗留残渣 不得过0.5%。 5-硝基糠醛二乙酸酯 照薄层色谱法（通则0502）试验，避光操作。 供试品溶液：取本品约50mg，精密称定，置10mL量瓶中，加N,N-二甲基甲酰胺5mL，置水浴中微温使溶解， 放冷，用丙酮稀释至刻度，摇匀。 对照品溶液：取5-硝基糠醛二乙酸酯对照品适量，加N,N-二甲基甲酰胺-丙酮（1:1）溶液溶解并定诫稀释制 成每1mL中含50µg的溶液。
酶联免疫法测定水产品中呋喃唑酮代谢物AOZ的残留.pdf
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治疗长期腹泻的药_部分不合格项目的小知识
部分不合格项目的小知识一、呋喃唑酮代谢物呋喃唑酮是硝基呋喃类抗菌药，具有抗菌谱广等特点。
动物产品的呋喃唑酮代谢物残留，一般不会对人体产生急性毒性作用。
长期大量摄入呋喃唑酮代谢物残留超标的食品，可能会在人体内积蓄。
《食品动物中禁止使用的药品及其他化合物清单》（农业农村部公告第250号）中规定，呋喃唑酮代谢物氯霉素为禁止使用的药物，在禽类肌肉中不得检出。
二、恩诺沙星恩诺沙星属于氟喹诺酮类药物，是一类人工合成的广谱抗菌药，用于治疗动物的皮肤感染、呼吸道感染等，是动物专属用药。
《食品安全国家标准食品中兽药最大残留限量》（GB 31650-2019）中规定，恩诺沙星在水产品中的最大残留限量为100 μg/kg。
长期食用恩诺沙星残留超标的食品，对人体健康有一定影响。
三、氯霉素氯霉素是一种广谱抑菌剂，《食品动物中禁止使用的药品及其他化合物清单》（农业农村部公告第250号）中规定，氯霉素为禁止使用的药物，在水产品中不得检出。
水产品中检出氯霉素的原因可能为养殖环节为预防相关疾病而非法使用。
水产品中氯霉素残留，一般不会对人体产生急性毒性作用，长期大量摄入氯霉素超标的食品，可能会在人体内积蓄，产生耐药并对同类药物有交叉耐药。
四、磺胺类（总量）磺胺类药物是一种人工合成的抑菌药，具有抗菌广谱、性质稳定、便于储存、吸收迅速等优点。
根据《食品安全国家标准食品中兽药最大残留限量》（GB 31650-2019）规定，磺胺类（总量）在水产品中的残留限量为100 μg/kg。
养殖环节未严格控制休药期或超量使用可能导致残留超标。
水产品中磺胺类药物残留量很低时，一般不会对人体产生急性毒性作用，长期大量摄入磺胺类药物残留不合格的食品，可能会在人体内蓄积，引起过敏反应的耐药性菌株，也可能导致泌尿系统和肝脏损伤。
五、氟苯尼考氟苯尼考是一种广谱抗菌药物，一般为动物专用抗菌药。
一般由于饲料添加或者家禽疾病治疗导致残留积累在家禽体内。
GB 31650-2019《食品安全国家标准食品中兽药最大残留限量》中规定产蛋家禽禁止使用。
4种硝基呋喃类代谢物在青石斑鱼肌肉中的富集与消除规律
4种硝基呋喃类代谢物在青石斑鱼肌肉中的富集与消除规律丁军伟;邓建朝;杨贤庆;岑剑伟;李来好;陈胜军【摘要】实验通过连续7 d投喂各含有100 mg·kg–1呋喃西林、呋喃唑酮、呋喃它酮和呋喃妥因的饲料,研究4种硝基呋喃药物在青石斑鱼(Epinephelus awoara)肌肉中的消除规律.采用超高效液相色谱串联质谱(UPLC-MS/MS)检测青石斑鱼肌肉中的氨基脲(SEM)、3-氨基-2-恶唑基酮(AOZ)、5-甲基吗啉-3-氨基-2-唑烷基酮(AMOZ)和1-氨基-2-内酰脲(AHD)的质量分数,并用内标法定量.结果表明,SEM、AOZ、AMOZ和AHD在石斑鱼背肌的峰浓度最大值依次为1104.10 μg·kg–1、781.09 μg·kg–1、679.75 μg·kg–1和437.18 μg·kg–1.4种硝基呋喃代谢物在石斑鱼肌肉组织中的消除规律大致相似.SEM、AHD、AOZ和AMOZ半衰期时间的长短顺序为23.90 d、23.10 d、22.35 d和21.00 d.SEM在肌肉中消除最慢.消除到第163天时,SEM、AOZ、AMOZ和AHD在肌肉中的质量分数仍然高于液质检出限(0.5 μg·kg–1).建议硝基呋喃药物应禁止用于石斑鱼疾病的预防或治疗中.%To investigate the accumulation and elimination of four nitrofuran metabolites in muscle of grouper, we fed the groupers with 100 mg·kg–1of nitrofurantoin, furazolidone, furaltadone and nitrofurazone for seven days. The concentrations of semicarbazide (SEM), 3-amino-2-oxazolidone (AOZ), 5-morpholinomethyl-3-amino-2-oxazolidone (AMOZ) and 1-aminohydantoin (AHD) in muscle were determined by UPLC-MS/MS and quantified by internal standard method. The maximum concentrations of nitrofuran metabolites in grouper muscle are as follows: SEM: 1 104.10 μg·kg–1, AOZ: 781.09 μg·kg–1, AMOZ: 679.75 μg·kg–1and AHD:437.18μg·kg–1. The rules of elimination for the four nitrofuran metabolites ingrouper muscle are similar. The half-life time of nitro-furan metabolites in grouper muscle is as follows: SEM: 23.90 d, AHD: 23.10 d, AOZ: 22.35 d and AMOZ: 21.00 d. The eliminating rate of SEM is the lowest. By 163rdday of elimination, the concentrations of SEM, AOZ, AMOZ and AHD in grouper muscle had still been over 0.5 μg·kg–1. It is suggested that nitrofurans should be banned in the prevention or treatment of grouper disease.【期刊名称】《南方水产科学》【年(卷),期】2018(014)001【总页数】8页(P60-67)【关键词】青石斑鱼;硝基呋喃药物;消除规律;超高效液相串联质谱【作者】丁军伟;邓建朝;杨贤庆;岑剑伟;李来好;陈胜军【作者单位】中国水产科学研究院南海水产研究所,农业部水产品加工重点实验室,广东省渔业生态环境重点实验室,广东广州 510300;中国水产科学研究院南海水产研究所,农业部水产品加工重点实验室,广东省渔业生态环境重点实验室,广东广州510300;中国水产科学研究院南海水产研究所,农业部水产品加工重点实验室,广东省渔业生态环境重点实验室,广东广州 510300;中国水产科学研究院南海水产研究所,农业部水产品加工重点实验室,广东省渔业生态环境重点实验室,广东广州510300;中国水产科学研究院南海水产研究所,农业部水产品加工重点实验室,广东省渔业生态环境重点实验室,广东广州 510300;中国水产科学研究院南海水产研究所,农业部水产品加工重点实验室,广东省渔业生态环境重点实验室,广东广州510300【正文语种】中文【中图分类】S948硝基呋喃类药物是一类广谱的抗生素，如抗沙门氏菌(Salmonella)，大肠杆菌(Escherichia coli)，支原体(Mycoplasma)等[1-2]。
呋喃唑酮代谢物(AOZ)ELISA检测试剂盒说明书
呋喃唑酮代谢物（AOZ）ELISA检测试剂盒说明书一、概要用来检测呋喃唑酮代谢物的最常用方法是LC-UV，LC-MS和LC-MS/MS。
酶联免疫方法结合了色谱技术，采用AOZ衍生物的特异性抗体，具有很高的准确度和灵敏度，较低的操作技术要求和短暂的检测时间，检测样本量大等特点在检测中很好的表现出来。
（本试剂盒的检测时间为1.5小时。
）二、试验原理本试剂盒采用间接竞争ELISA方法，在酶标板微孔条上预包被偶联抗原，样本中的残留的AOZ经衍生化后和酶标板微孔条上预包被的偶联抗原竞争抗呋喃唑酮代谢物的衍生物抗体，加入酶标二抗后，用TMB底物显色，样本吸光值与其所含残留物AOZ的含量成负相关，与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数，即可得出样品中呋喃唑酮代谢物的残留量。
三、适用范围可定性、定量检测动物组织（鸡、猪、牛等）、牛奶、蜂蜜和鸡蛋样本中的呋喃唑酮代谢物的残留量。
四、交叉反应率呋喃唑酮代谢物…………………………………… 100%呋喃它酮代谢物…………………………………小于 0.1%呋喃妥因代谢物…………………………………小于 0.1%硝基糠腙（呋喃西林）代谢物…………………小于0.1%呋喃唑酮…………………………………………………16.3%呋喃它酮………………………………………………小于1%呋喃妥因………………………………………………小于1%硝基糠腙（呋喃西林）………………………………小于1%五、使用单位需自备的设备及试剂设备：┅┅微孔板酶标仪450nm/630nm┅┅旋转蒸发仪/氮气吹干装置┅┅均质器┅┅振荡器┅┅涡旋仪┅┅离心机┅┅天平：感量0.01g┅┅刻度移液管：10ml┅┅洗耳球┅┅容量瓶： 100ml、1L┅┅玻璃试管：10ml┅┅聚苯乙烯离心管：2ml、10ml、50ml┅┅微量移液器：单道 20ml～200ml、100ml～1000ml多道 250ml试剂：┅┅乙酸乙酯（分析纯）┅┅正己烷（或正庚烷）（分析纯）┅┅三水合磷酸氢二钾（分析纯）┅┅浓盐酸┅┅氢氧化钠（分析纯）┅┅二水合亚硝基铁氰化钠（Na2Fe(CN)5·NO·2H2O）（分析纯）（供奶、鸡蛋样用）┅┅七水合硫酸锌(ZnSO4·7 H2O) (分析纯)（供奶、鸡蛋样用）┅┅去离子水六、提供的材料与试剂1、96孔酶标板×1块（包被有偶联抗原）2、标准液×6瓶：（1ml/瓶）0ppb,0.05ppb,0.15ppb,0.45ppb,1.35ppb,4.05ppb 3、高浓度标准品：（1ml/瓶）100ppb4、酶标二抗浓缩液 1.5ml ……………………红色帽5、抗体浓缩液 0.8ml……………………绿色帽6、底物液 A 液 7ml ……………………白色帽7、底物液 B 液 7ml ……………………红色帽8、终止液 7ml ……………………黄色帽9、20×浓缩洗涤液 40ml………………………透明帽10、2×浓缩复溶液 50ml……………………蓝色帽11、2-硝基苯甲醛 15.1mg……………………黑色帽七、溶液的配制配液1: 衍生化试剂向装有2-硝基苯甲醛的试剂瓶中加甲醇溶解定容至10ml（浓度为10mM）。
水产品中硝基呋喃类药物及其代谢物残留检测技术的研究进展
水产品中硝基呋喃类药物及其代谢物残留检测技术的研究进展作者：杨惠宇张惠峰来源：《河北渔业》2017年第06期摘要：综述了水产品中硝基呋喃类药物代谢规律，分别介绍了硝基呋喃原药及其代谢物的检测方法，比较了各种方法在实际应用中的优缺点，并对检测方法进行了展望，以期为水产品中硝基呋喃类药物及其代谢物检测的研究提供帮助。
关键词：硝基呋喃类；代谢物；水产品；检测方法硝基呋喃类药物作为一种抗菌药物曾被广泛的应用于水产养殖中，现国内外对硝基呋喃类药物的控制都十分严格[1-2]，我国该类药物的检测标准也有明确的规定[3-5]。
硝基呋喃类药物虽然被禁止，但其在治疗水产养殖动物细菌性尤其是胃肠道等细菌性疾病方面快速有效，仍有渔民使用。
硝基呋喃类药物是检出率最高的违禁药物之一[6-8]，正严重威胁着人的健康安全，因此开展水产品中硝基呋喃药物及其代谢物的检测工作十分必要。
1 硝基呋喃类药物及其代谢物的基本性质及危害硝基呋喃类药物是一种合成的重要的抗感染性药物，常用的有呋喃唑酮（Furazolidone）、呋喃妥因（Nitrofurantion）、呋喃它酮（Furaltadone）、呋喃西林（Furacillin）。
其对应的代谢物分别为3-氨基-2-恶唑烷基酮（AOZ）、1-氨基-2-内酰脲（AHD）、5-甲基-吗啉-3-氨基-2-恶唑烷基酮（AMOZ）、氨基脲（SEM）。
硝基呋喃类药物是一种具有潜在致癌和诱导机体产生突变的物质[9-10]，对人类身体健康构成严重威胁[11]。
四种硝基呋喃原药、代谢物分子结构图如下：2 水产品中硝基呋喃类药物代谢规律硝基呋喃类药物在水产品中的代谢和残留规律研究，主要有呋喃唑酮和呋喃西林[12]。
通常情况下，硝基呋喃类在养殖动物体内的代谢速度非常快，3 d内就检测不到原药。
其中，呋喃唑酮的研究以口服和口灌药饵的方式为主，呋喃西林的研究以药浴的方式为主。
国内对呋喃唑酮的代谢和残留规律研究主要涉及草鱼、罗非鱼、牙鲆、鲤、杂交鳢、斑点叉尾鮰、异育银鲫、团头鲂、鳗鲡和大菱鲆等。
诺氟沙星在牙鲆体内的残留及消除规律研究_刘秀红.
海洋水 . 产研究第 2 4 卷乙基 N F L X 在各组织中的残留浓度除肌肉外均大于 0 0 5 的残留消除动态这对于严格药物残留监控是必要的 , , , 。
a n o 昭电 (A n d 。
9 92 1 。
因此应关注药物活性代谢物 1 ℃ , 此外鱼体内药物消除受许多因素影响其中水温影响是最大的 r g e 0 % ( Ig t s 变化 1 n e b i n 、 , 、、研究表明温度变化 , 药物代谢速度 , 9 9 1 1 而且给药剂量给药方式鱼类种属等因素不同都会产生一定影响所以临床。
休药期还要据具体鱼种实际养殖环境分别进行研究确定参邓国东杨桂香陈杖榴 , , . . . 考文献 . 200 氟哇诺酮类药物在动物性食品中的残留检测研究进展中国兽药杂志 . , 34 ( 3 5 3 : 一5 8 刘明亮编译 2 0 0 1 唆诺酮类抗菌药的概况与展望国外医药抗生素分册 . . , 22 ( : l : 1一 4 一5 3 朱秋华钱国英 , . 2 00 1 3 种药物在甲鱼体内的残留研究中国水产科学 8 ( 3 5 0 , . 贡玉清 . . 200 2 , 哇诺酮类药物的残留分析畜牧与兽医 , . . , 3《 8 : 1 3 一 3 . 邱银生朱式鸥郝玉萍等 , 19 9 4 . . 烟酸诺氟沙星在猪鸡体内的组织残留研究中国兽药杂志 , . 、 , 28 ( , 3 15 ( : : 0 一1 1 2 2 : 张雅斌张柞新郑 . , , 伟等 , , 200 诺氟沙星在鱼类细菌性疾病中的应用研究大连水产学院学报 , . 9 7 一 5 8 d t a l , 〕 {i t e s er in bo r l l e 曾振灵冯淇辉 . , 19 9 4 t in . 氟喳诺酮类抗菌剂在畜禽体内的药物动力学研究进展中国兽药杂志 , 28 ( 4 一 2 一5 5 6 n l a 腻h y 一 A n 致 a do n A . . , M a r z e Re s , 一 L a . . Am 洲刃〕 . J . 之、飞 , n( r a . 邵 M A . , . . , . V e le z C t e a l 19 9 2 Ph 53 1 1 : 2 084一 2 089 , ~ . o k in c e tl e s f o r o l r l f o c a x in a n d it s N d e a c x o l e e m (A 垃e k . e n s J H tr . s O w N u J M F in j e e V田 1 de r . . . . j de n e Hi l tu r e u r , M H T : e t a l 二 199 1 D i s l 〕 s t n l o t y o f f l n r u e 明 u in e i n p la s n r a , f Eu r o o pean 刀召 ` 艺 l敌 a 刀召砚艺 la l a f te r a s n i - g le in y B la r 朋 1 1J Se u , t io n . Aqa u 曰 Il c u 99 213一 223 l a H a 1T Da G r n n K e , B 二 199 0 T p r e a e t o r e te d S b O a r pt n o l a t 1 d e x er e t io n o f x o t . e t r a y e ln e l ina r i门 l 抓 to r ut : ( 撇 l; r n 多d o . n e r R A Qu a c u l tu e r , 84 : 36 3 一372 I n g e b五 g a ts 二 1 99 1 . . t Rc . M l俪 i J 15 7 . s O R e e a G D , n o f众哩 d 昭 di 卯 i i o r s t a l 二 1997 f巧 P s u e T i A n t a t . r s s t 讯 fi s h d i s . 人似 . V e 〕 5。
超高效液相-串联质谱法测定动物组织中硝基呋喃类代谢物残留量
超高效液相-串联质谱法测定动物组织中硝基呋喃类代谢物残留量Determination of the nitrofuran metabolite residues in animal tissues by uplc-tandem massspectrometry龙顺荣1李炜正2王力清1LONG Shun-rong1LI Wei-zheng2WANG Li-qing1(1.广东省产品质量监督检测中心，广东佛山528300，2.广东省工商联鳗鱼业商会检测中心,广东佛山528300）(1.Guangdong Center of Product Quality Supervision,Foshang,Guangdong528300,China；2.Guangdong Industrial&Commercial Union Eel Chamber of Commerce Testing Centre, Foshang,Guangdong528300,China)摘要：用盐酸水解动物组织，酸性环境下用对硝基苯甲醛作衍生剂，离心过滤，SPE富集纯化，乙腈—乙酸铵、甲酸溶液为流动相，采用梯度洗脱，5min内完成一次分离测定；采用4个同位素内标法定量，定量限为0.1,0.5μg/kg加标回收试验8次，回收率为90%～110%。
关键词：硝基呋喃代谢物；超高效液相色谱；串联四极杆质谱Abstract:animal tissues is hydrolyze with hydrochloric acid,simultaneous derivatization with 2-nitrobenzaldehyde(2-NBA)in acid medium.Centrifuge samples,then Filter,the filtrate was cleaned up with SPE.The analytes were separated and analysed by gradient elution of acetonitrile-ammonium acetate and fomic acid in5minutes.,quantification of analyte was performed by using isotope as the internal standard.The limits of quantification were no more than0.1μg/kg,The recovery ratio ranged from90%to110%at the levels of0.5μg/kg. Keywords:Nitrofuran metabolite；UPLC；Tandem mass————————————作者简介：龙顺荣（1975-），男，广东省产品质量监督检测中心工程师E-mail:longshunrong@收稿日期：2007-07-11硝基呋喃类药物（Nitrofurans）主要是指呋喃唑酮（Furazolidone）、呋喃它酮（Furaltadone）、呋喃西林（Nitrofurazone）、呋喃妥因（Nitrofurantion）等引入硝基的人工合成抗菌药，用于治疗和预防埃希氏菌和沙门氏菌引起的动物消化道疾病，近年来，发现其具有慢性毒性，可引起消化反应，并且发现呋喃唑酮和其代谢物（AOZ）具有致突变和致癌作用；美国、欧盟等工业发达国家和地区已禁止使用，我国也于2002年颁布了禁止使用硝基呋喃类抗生素的禁令1。
呋喃西林和呋喃唑酮代谢物在大菱鲆组织中的消除规律
呋喃西林和呋喃唑酮代谢物在大菱鲆组织中的消除规律谭志军;翟毓秀;冷凯良;王志杰;郭萌萌;王群;邢丽红;刘艳萍;王瑜【期刊名称】《中山大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2008(047)0Z1【摘要】分别采用呋喃西林或呋哺唑酮单药给药及两种药物共同给药的方式,研究了其代谢物氨基脲(Semi-carbazide,SEM)和3-氨基-2-噁唑烷基酮(3-amino-2-oxazolidinone,AOZ)在大菱鲆肌肉、肝脏和血液中的消除规律.结果表明,无论采用何种给药方式,呋喃西林和呋喃唑酮均能在大菱鲆组织中富集,并迅速代谢成SEM 和AOZ.不同组织中,肝脏中SEM和AOZ的质量分数最高,其次为肌肉和血液;而同种组织则AOZ的质量分数远高于SEM,前者约为后者的10～30倍.而且两种给药方式下,SEM和AOZ在3种组织中都具有相似的消除规律:初始阶段均具有较高的消除速率,随后消除趋势趋于平缓,并在较长时间内维持一定质量分数,至实验结束时,3种组织中的SEM和AOZ质量分数都仍高于检出限.然而给药方式能够影响SEM和AOZ的富集质量分数及消除速率,如单药给药时SEM和AOZ在大菱鲆组织中的质量分数远高于共同给药下的质量分数,但消除半衰期(t1/2)却低于共同给药方式.结果表明硝基呋喃类药物的代谢物在大菱鲆组织中较难消除,具有较长的消除半衰期,应慎重将这类药物应用于大菱鲆疾病的治疗.【总页数】7页(P63-69)【作者】谭志军;翟毓秀;冷凯良;王志杰;郭萌萌;王群;邢丽红;刘艳萍;王瑜【作者单位】农业部海洋渔业资源可持续利用重点实验室//中国水产科学研究院黄海水产研究所,山东,青岛,266071;国家水产品质量监督检验中心,山东,青岛,266071;农业部海洋渔业资源可持续利用重点实验室//中国水产科学研究院黄海水产研究所,山东,青岛,266071;国家水产品质量监督检验中心,山东,青岛,266071;农业部海洋渔业资源可持续利用重点实验室//中国水产科学研究院黄海水产研究所,山东,青岛,266071;国家水产品质量监督检验中心,山东,青岛,266071;农业部海洋渔业资源可持续利用重点实验室//中国水产科学研究院黄海水产研究所,山东,青岛,266071;国家水产品质量监督检验中心,山东,青岛,266071;农业部海洋渔业资源可持续利用重点实验室//中国水产科学研究院黄海水产研究所,山东,青岛,266071;国家水产品质量监督检验中心,山东,青岛,266071;农业部海洋渔业资源可持续利用重点实验室//中国水产科学研究院黄海水产研究所,山东,青岛,266071;农业部海洋渔业资源可持续利用重点实验室//中国水产科学研究院黄海水产研究所,山东,青岛,266071;国家水产品质量监督检验中心,山东,青岛,266071;农业部海洋渔业资源可持续利用重点实验室//中国水产科学研究院黄海水产研究所,山东,青岛,266071;国家水产品质量监督检验中心,山东,青岛,266071;农业部海洋渔业资源可持续利用重点实验室//中国水产科学研究院黄海水产研究所,山东,青岛,266071;国家水产品质量监督检验中心,山东,青岛,266071【正文语种】中文【中图分类】X503.22【相关文献】1.网箱养殖条件下呋喃西林代谢物SEM在斑点叉尾鮰体内组织分布及消除规律研究 [J], 刘永涛;艾晓辉;索纹纹;余少梅;陈建武2.苯扎溴胺和芳草中药对加速大菱鲆组织中硝基呋喃代谢物消除速率的作用初探[J], 谭志军;郭萌萌;邢丽红;孙伟红;李兆新;冷凯良;翟毓秀3.呋喃唑酮代谢物AOZ在斑点叉尾(鲴)体内组织分布与消除规律研究 [J], 刘永涛;艾晓辉;索纹纹;余少梅;杨秋红4.呋喃西林和呋喃唑酮在海参组织中的代谢消除规律 [J], 付树林;邢丽红;孙伟红;李兆新;郑关超;翟毓秀;郭江涛5.孔雀石绿及其代谢物在大菱鲆肌肉中的消除规律 [J], 曲志娜;李存金;赵思俊;路平;王玉东;谭维泉;孙晓亮;郑增忍因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
MS法检测鸡肉中呋喃它酮代谢物
２０13年3月第34卷第6期酶联免疫法与LC-MS/MS 法检测鸡肉中呋喃它酮代谢物陈玲1，汪善良2，李桂华3，罗晓琴2，刘琳2，崔彦虎2，何方洋2，*（1.山东省兽药质量检验所，山东济南250022；2.北京勤邦生物技术有限公司，北京102206；3.山东省饲料质量检验所，山东济南250022）摘要：运用酶联免疫法和LC-MS/MS 法检测鸡肉中呋喃它酮代谢物的残留，对两种方法的灵敏度、准确度、重现性等参数进行了比较。
结果显示，酶联免疫法和LC-MS/MS 法的检测限可以达到0.1μg/kg ，对鸡肉样品分别添加0.2、0.4、0.8μg/kg 三个浓度水平的呋喃它酮代谢物时，酶联免疫法平均回收率为75.0%~94.6%，变异系数为7.9%~14.3%；LC-MS/MS 法的平均回收率为89.5%~92.3%，变异系数为8.0%~10.3%，两种检测方法对阳性样品的检测结果一致。
酶联免疫法可以作为初筛方法进行呋喃它酮代谢物的快速筛选，LC-MS/MS 法适用于对筛选样品的确证和精确定量。
关键词：酶联免疫法；LC-MS/MS 法；鸡肉；呋喃它酮代谢物Comparing the Enzyme Linked Immunosorbent Assay （ELISA ）and LC-MS/MS for Determinationof Furaltadone Metabolite Residues in Chicken MeatCHEN Ling 1，WANG Shan-liang 2，LI Gui-hua 3，LUO Xiao-qin 2，LIU Lin 2，CUI Yan-hu 2，HE Fang-yang 2，*（1.Shandong Provincial Veterinary Medicine Supervision Institute ，Jinan 250022，Shandong ，China ；2.BeijingKwinbon Biotechnology CO.，LTD.，Beijing 102206，China ；3.Shandong Provincial Testing Institute of FeedQuality ，Jinan 250022，Shandong ，China ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：ELISA and LC-MS/MS for the analysis of furaltadone metabolite （AMOZ ）residues in chicken meat were studied.The sensibility ，accuracy and repeatability of ELISA method were compared to those of LC-MS/MS method.The detection limit of ELISA and LC-MS/MS method could reach to 0.1μg/kg respectively.When the samples were spiked with 0.2，0.4and 0.8μg/kg of AMOZ ，the average recovery rates of ELISA were 75.0%-94.6%，the relative standard deviation （RSD ）was 7.9%-14.3%.And the average recovery rates of LC-MS/MS were 89.5%-92.3%，while the relative standard deviation （RSD ）was 8.0%-10.3%.The results were basically the same to the positive sample.The results showed that ELISA was a rapid and exact method with good reproducibility suitable for the screen of AMOZ positive samples ，LC-MS/MS was sensitive and suitable for determination of positive samples.Key words ：ELISA ；LC-MS/MS ；chicken meat ；AMOZ食品研究与开发Ｆood Research And DevelopmentDOI ：10.3969/j.issn.1005-6521.2013.06.025作者简介：陈玲（1969—），女（汉），农业技术推广研究员，本科，研究方向：主要从事兽药及畜产品质量安全检测。
呋喃唑酮代谢物在中华绒螯蟹体内消除规律
文章编号：１００４－２４９０（２０２０）０６－０７３２－０８呋喃唑酮代谢物在中华绒螯蟹体内消除规律 收稿日期：２０２０－０２－２４基金项目：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金（中国水产科学研究院东海水产研究所）项目（Ｎｏ．２０１１Ｔ０２）；国家农产品质量安全风险评估重大专项（ＧＪＦＰ２０１６００９０１）作者简介：黄宣运（１９８４—），男，助理研究员，研究方向：水产品质量安全与风险评估。
Ｅ ｍａｉｌ：ｈｘｙｓｅｖｅｎ＠１６３．ｃｏｍ通信作者：蔡友琼，男，研究员。
Ｅ ｍａｉｌ：ｃａｉｙｏｕｑｉｏｎｇ＠１６３．ｃｏｍ黄宣运，沈晓盛，史永富，蔡友琼（中国水产科学研究院东海水产研究所，农业农村部水产品质量安全与风险评估实验室（上海），上海 ２０００９０）摘 要：采用高效液相色谱串联质谱法（ＨＰＬＣ ＥＳＩ／ＭＳ／ＭＳ）分析呋喃唑酮主要代谢物３ 氨基 ２ 恶唑烷酮（ＡＯＺ）在中华绒螯蟹（Ｅｒｉｏｃｈｅｉｒｓｉｎｅｎｓｉｓ，以下简称河蟹）体内的消除规律。
以３０ｍｇ·ｋｇ－１（Ｐ１组）和９０ｍｇ·ｋｇ－１（Ｐ２组）的呋喃唑酮药饵投喂河蟹（扣蟹），连续投喂５ｄ，每天投喂２次。
在最后１次投喂后的１ｈ、２ｈ、４ｈ、８ｈ、１２ｈ、２４ｈ、４８ｈ、９６ｈ、１９２ｈ、２８８ｈ、３８４ｈ、４８０ｈ、７２０ｈ、９６０ｈ、１２００ｈ、１４４０ｈ、１９２０ｈ、２４００ｈ、２８８０ｈ和３６００ｈ对河蟹肌肉、肝胰腺和鳃进行取样分析。
结果显示：停药后，２个试验组河蟹各组织中ＡＯＺ均呈波动下降趋势。
在停药１ｈ后，２个试验组河蟹的肝胰腺、肌肉和鳃中ＡＯＺ均为最高值，其中Ｐ１组测定值分别为（３４７．０±２５．２）、（１７２．０±７．２）、（１９６．０±１７．７）μｇ·ｋｇ－１，Ｐ２组测定值分别为（２４７５．０±１２８．３）、（９５２．０±７５．２）、（７８６．０±４０．９）μｇ·ｋｇ－１。
呋喃唑酮
呋喃唑酮(furazolidone)又称痢特灵，属硝基呋喃类药物，是人工合成的具有5- 硝基呋喃基本结构的广谱抗菌药物，对革兰氏阳性及阴性菌均有一定的抗菌作用，因此被广泛应用于家禽、家畜、水产品中的疾病预防和治疗。
近年研究表明，呋喃唑酮及其代谢物具有致基因突变性和致癌性[1]，因此引起了世界各国的高度重视。
美国1993 年禁止呋喃唑酮作为兽药[2]，欧盟从1997年开始将所有的硝基呋喃类抗生素列为违禁药物[3]，我国农业部第235 号公告中也规定动物性食品中呋喃唑酮检出限为不得检出[4]。
由于呋喃唑酮在体内代谢很快，对其原药的检测难度较大，而其代谢产物以蛋白结合态的形式可在组织中长期稳定存在，因此管理部门可通过检测组织中的呋喃唑酮代谢物(AOZ)来检测呋喃唑酮的残留[5-6]。
目前文献报道的呋喃唑酮代谢物的酶联免疫法大都是针对水产品的，且检测时间较长，最低检测限较高，如宋琍琍等[7]使用酶联免疫法测定水产品中呋喃唑酮代谢物的残留，所用试剂盒的灵敏度和检测限分别为0.05μg/L 和0.3μg/kg，样品加标回收率为86.8%～96.9%，检测时间75min。
目前，动物组织中呋喃唑酮及其代谢物的残留分析主要采用高效液相色谱法、液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)仪器方法[6,8-11]和酶联免疫法(ELISA)[1,7,12-13]。
前者由于需要复杂的仪器设备、繁琐的前处理过程及对检验人员的高技能要求，不适合现场监控和大量样本的筛查，而以抗原抗体特异性反应为基础的酶联免疫法具有灵敏度高、特异性强、操作简便等优点，已在农兽药残留检测中得到广泛应用。
本实验应用酶联免疫法测定猪肉中呋喃唑酮代谢物的残留量，以对试剂盒的性能进行评价。
1材料与方法1.1材料与试剂猪肉市售。
呋喃唑酮代谢物(AOZ)ELISA检测试剂盒(包括包被有偶联抗原的96 孔酶标板，质量浓度分别为0、0.025、0.075、0.225、0.675、2.025μg/L 的呋喃唑酮代谢物标准液，酶标二抗，抗体浓缩液，单组分底物液，终止液，20 ×浓缩洗涤液，2 ×浓缩复溶液和2- 硝基苯甲醛) 北京勤邦生物技术有限公司；呋喃唑酮代谢物标准品(纯度≥99%) 美国Sigma 公司；其余试剂均为国产分析纯。
动物源性食品中呋喃唑酮及其代谢物的检测[1]
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动物源性食品中呋喃唑酮及其代谢物的检测郭 桢,连 瑾,吴淑君(广州市农产品质量安全监督检测中心/广州市农业标准与监测中心,广东广州 510308) 摘 要:简述了呋喃唑酮主要代谢物3-氨基-2-唑酮(AOZ)的稳定特性和致癌特性,介绍了动物源性食品中呋喃唑酮残留物原药分子和代谢物AOZ的检测技术,指出我国相关检测标准的不足,提出以检测代谢物来反映硝基呋喃类的真实残留量,并对今后我国呋喃唑酮的监管工作提出建议。
关键词:动物源性食品;呋喃唑酮;检测中图分类号:S859.84 文献标识码:A 文章编号:1004-874X(2005)05-0057-03 呋喃唑酮(furazolidone),即3-(5-硝基糠醛缩氨基)-2-唑烷酮,又称痢特灵,属硝基呋喃类(nitro2 furans)药物,为广谱抗生素,对革兰阳性及阴性菌均有一定抗菌作用。
由于呋喃唑酮价格低廉且治疗效果好,因此被广泛应用于家禽、家畜、水产类的痢疾、肠炎、球虫病以及火鸡黑头病的预防和治疗中。
但有关研究证明,硝基呋喃类药物及其代谢物具有相当大的毒性,有致畸胎副作用,且能诱发癌症[1],因而引起了人们的高度重视。
1990年7月欧盟颁布2377/90/EEC条例,将硝基呋喃类药物及其代谢产物列为A类禁用药物,规定其在动物源性食品中的残留检测限为1.0μg/kg。
由收稿日期:2005-04-07作者简介:郭桢(1972-),女,博士,农艺师于对呋喃唑酮蛋白结合态残留物的安全性产生怀疑,自1995年起欧盟全面规定禁止使用呋喃类抗菌物质,在动物源性食品中呋喃类残留物的检出限为不得检出[2,3]。
2004年美国FDA公布了禁止在进口动物源性食品中使用的11种药物名单,其中包括呋喃西林和呋喃唑酮。
我国农业部文件农牧发[2002]1号也规定动物源性食品中呋喃唑酮的检出限为不得检出。
1 呋喃唑酮代谢物及其毒性硝基呋喃类药物常见有4种,即呋喃唑酮、呋喃它酮(furaltadone)、硝基呋喃托英(nitrofurantoin)和硝基糠腙(nitrofurazone),其中呋喃唑酮为硝基呋喃类药物中最具代表性的一种。
呋喃唑酮代谢物AOZ在斑点叉尾(鲴)体内组织分布与消除规律研究
呋喃唑酮代谢物AOZ在斑点叉尾(鲴)体内组织分布与消除规律研究刘永涛;艾晓辉;索纹纹;余少梅;杨秋红【期刊名称】《淡水渔业》【年(卷),期】2012(042)005【摘要】Tissue distribution and elimination rules of furazolidone metabolite 3-amina-2-oxazolidinone (AOZ) was studied in channel catfish cultured in the cages of pond at the average temperature was 30. 6℃ during the whole experiment. Channel catfish were continuously fed feed containing furazolidone twice everyday for 5 days at the dose of 100mg/kg fish body weight. The concentrations of AOZ in blood and tissues (muscle, skin, liver, and kidney) were detected by liquid chromatography tandem mass spectrometric ( HPLC-ESI/MS/MS). The concentrations of AOZ were ( 2 649. 0 ± 463. 1 ) ng/mL, (1 169. 4 ±194. 5) , (2 308. 5 ± 100.5) , (7 816. 2 ±568. 5) and 15 938. 1μg/kg in blo od, muscle, skin, liver, and kidney respectively after drug withdrawal for 4 hours. Average concentrations of AOZ in blood, muscle, skin, liver, and kidney were 6.66 ng/mL, 4.50, 33.7, 17. 1, 21.3 μg/kg respectively on the 60th day and were 6.66, 4. 50, 33. 7 , 17. 1 , 21. 3 times of 1μg/kg which was the determination limit of AOZ. AOZ was not detected on the 90th day in blood and ail kinds of tissues. The concentration levels of AOZ from high to low in tissues were kidney, liver, skin, blood, and muscle. Theelimination half-life T1/2(d) were 11. 1 d (skin) , 7.8 d (muscle) , 7. 2 d (blood) , 6. 9 d (liver) , and 6. 7 d (kidney). The concentration of AOZ in skin was higher than in muscle and residue time was longer. In this cultured conditions, the elimination period of AOZ'in channel catfish tissues was 2754 ℃ · d.%研究了在池塘网箱养殖模式下,平均水温为30.6℃,以100 mg/kg鱼体重的剂量投饲斑点叉尾鲴(Ietalurus punetaus)苗种(95±20.9)g 含呋喃唑酮的药饵,连续5d,每天2次.采用高效液相色谱串联质谱(HPLC-ESI/MS/MS)法分析了呋喃唑酮主要代谢产物3-氨基-2-噁唑烷酮(3-amina-2-oxazolidinone,AOZ)在斑点叉尾鲴体内的组织分布与消除规律.结果表明:血液、肌肉、皮肤、肝脏和肾脏中AOZ于停药后在4h时的浓度分别为(2649.0±463.1)ng/mL,(1 169.4±194.5)、(2 308.5±100.5)、(7 816.2±568.5)和15 938.1 μg/kg,血液、肌肉、皮肤、肝脏和肾脏中AOZ在60 d时平均浓度分别为6.66 ng/mL,4.50、33.7、17.1和21.3 μg/kg,分别是AOZ判定限1μg/kg的6.66、4.5、33.7、17.1和21.3倍.90 d时AOZ在血液和各组织中均检测不到.AOZ在血液和各组织中的浓度水平肾脏＞肝脏＞皮肤＞血液＞肌肉,消除半衰期T1/2皮肤(11.1 d)＞肌肉(7.8 d)＞血液(7.2 d)＞肝脏(6.9 d)＞肾脏(6.7 d).斑点叉尾鲴皮肤中AOZ的浓度高于肌肉组织,而且残留时间长,在此养殖条件下,AOZ在斑点叉尾鲴各组织中消除至少需要2 754℃·d.【总页数】7页(P38-44)【作者】刘永涛;艾晓辉;索纹纹;余少梅;杨秋红【作者单位】中国水产科学研究院淡水研究中心,江苏无锡214081;中国水产科学研究院长江水产研究所农业部淡水鱼类种质监督检验测试中心,武汉430223;中国水产科学研究院淡水研究中心,江苏无锡214081;中国水产科学研究院长江水产研究所农业部淡水鱼类种质监督检验测试中心,武汉430223;中国水产科学研究院淡水研究中心,江苏无锡214081;华中农业大学水产学院,武汉430070;中国水产科学研究院淡水研究中心,江苏无锡214081;华中农业大学水产学院,武汉430070;中国水产科学研究院淡水研究中心,江苏无锡214081;中国水产科学研究院长江水产研究所农业部淡水鱼类种质监督检验测试中心,武汉430223【正文语种】中文【中图分类】S948【相关文献】1.网箱养殖条件下呋喃西林代谢物SEM在斑点叉尾鮰体内组织分布及消除规律研究 [J], 刘永涛;艾晓辉;索纹纹;余少梅;陈建武2.浸泡条件下孔雀石绿及其代谢物隐色孔雀石绿在斑点叉尾组织中分布及消除规律研究 [J], 刘永涛;艾晓辉;索纹纹;杨秋红3.强力霉素在斑点叉尾(鲴)体内药物动力学及残留消除规律研究 [J], 丁俊仁;艾晓辉;汪开毓;刘永涛;袁科平;袁丹宁4.市售氯硝柳胺在斑点叉尾鲴组织中的残留消除规律研究 [J], 索纹纹;刘永涛;艾晓辉;吕思阳;杨秋红;余少梅5.孔雀石绿及其代谢物隐色孔雀石绿在鳜鱼体内组织的分布及消除规律 [J], 万译文;黄向荣;李小玲;索纹纹;黄华伟因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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值较高。 呋喃唑酮已经禁用， 但是禁而不止， 在牙鲆 养殖中违法使用现象仍然存在。 本研究探讨了呋喃 唑酮及其代谢物 AOZ 在牙鲆肌肉组织中的代谢和消 除规律。
1
1． 1
材料和方法
仪器、 试剂及材料
1． 1． 1
仪器 Agilent 1100 高 效 液 相 色 谱 仪， 配 紫 外 检 测 器； Agilent 1100 离子阱质谱仪， 配有 Agilent 1100 液相色 谱仪、 自动进样器和电喷雾离子源（ 美国 Agilent 科技 有限公 司 ） ； Anke TDL － 40B 离 心 机 （ 日 本 日 立 公 司） ； Laborota400 型 旋 转 蒸 发 仪 （ 德 国 Heidolph 公 司） ； HZS － H 水浴恒温振荡器（ 哈尔滨市东联电子技 术开发有限公司 ） ； IKA － T18basic 匀质机 （ 德国 IKA 公司） ； pHS － 3C 精密 pH 计（ 上海雷磁仪器厂 ） ； Milli
2013 年 20 中国渔业质量与标准
为色谱纯， 其他未做特别说明的实验药品均为分析 纯， 实验所用水为 Millipore 纯水器制备的超纯水。 1． 1． 3 牙鲆 选自辽宁省旅顺市太平洋海珍品养殖基地 ， 平均 质量为 100 g， 鱼体表面无白化或黑化斑块， 体质健 壮， 经抽样检测无呋喃唑酮和 AOZ 残留后作为实验 用鱼， 共 200 尾， 实验期间水温为（ 22 ± 2 ） ℃ 之间。
氘代内标使用液： 准确吸取氘代内标储备液， 用 4 ℃ 水于逐级稀释配制成 100 ng / mL 标准工作溶液， 冷藏保存。 标准工作曲线的制备： 移取标准工作溶液， 使之 2、 5、 10 、 20 μg / L 的系列浓度， 成为 1 、 分别加入 100 μL 内标工作溶液。 1． 2． 3 样品处理 呋喃唑酮： 称取经均质的匀浆样品约 10 g （ 精确 至 0． 01 g ） ， 加 25 mL 二氯甲烷搅拌分散后浸泡 15 min， 在振荡器上振荡 5 min， 提取液经无水硫酸钠柱 残渣分别用 25 mL 和 15 mL 二氯甲 滤入蒸发烧瓶中， 烷按上述方法各重复提取一次， 再用 15 mL 二氯甲烷 并采用洗耳球吹出柱中液体， 滤 冲洗无水硫酸钠柱， ， 液均滤入同一蒸发烧瓶中 滤液于旋转蒸发仪上在 45 ℃ 左右水浴下减压蒸发去除溶剂， 蒸发速度控制 在每秒一滴。 用 1． 0 mL 流动相和 1． 0 mL 正己烷溶 将液体移入离心管中， 解残渣并充分洗涤蒸发烧瓶， 在 4 000 r / min 离心 5 min， 用尖嘴吸管移去上层正己 烷层， 再向离心管中加入 1． 0 mL 正己烷， 混匀 2 min， 离心， 用尖 嘴 吸 管 移 去 上 层 正 己 烷 层， 下层清液经 0. 45 μm 膜孔滤器过滤后进 HPLC 分析。 AOZ： 称取 2 g（ 精确到 0． 01 g ） 匀化后的样品于 100 mL 聚丙烯离心管中， 加入 100 μL 内标工作溶 液， 加入 20 mL 含 0． 2 moL / L 盐酸的水溶液， 涡动 1 min， 然后加入 500 μL 的 2 － 硝基苯甲醛溶液 （ 0． 05 mol / L 2 － 硝基苯甲醛二甲亚砜溶液） ， 在 37 ℃ 下， 水 浴振荡 16 h。取出上述样品， 冷却至室温， 反应产物 用 0． 5 mL 磷酸钠溶液 （ 0． 3 mol / L ） 中和， 然后用 2 mol / L 的氢氧化钠溶液将 pH 值调节至 7． 0 ～ 7． 5 ， 加 入 5 mL 的乙酸乙酯， 室温振荡 30 min， 然后离心 10 min。将有机相转移至干净的试管， 上述萃取过程重 45 ℃ 蒸到 复一次。 将两次的乙酸乙酯有机相合并， 近干， 然后在氮气流下吹干， 立即用 1 mL 70% 乙腈甲 V / V ） 溶液将残留 酸（ CH3 CN∶ 0． 1% HCOOH = 70∶ 30 ， 物溶解， 过 0． 45 μm 滤膜， 进行 LC － MS / MS 分析。 1． 2． 4 1． 2． 4． 1 仪器条件 呋喃唑酮检测 色谱 条 件： Zorbax SB － C18 柱 （ 4． 6 mm × 250 mm， 5 μm ） ； 流动相： 乙腈 / 水 （ 40 ∶ 60 ， V / V） ， 500 mL 乙腈水混合溶液中加 0． 5 mL 磷酸 （ 85% ） ， 流速 1． 0
中， 在冰箱中冷藏保存， 保存期 1 个月。该液 1 mL 相 取呋喃唑酮标准储 当于 200 μg 呋喃唑酮。 临用前， 备液， 用流动相稀释成 0． 01 ～ 1． 00 μg / mL 的标准工 作液。 1． 2． 2． 2 AOZ 标准溶液的制备 AOZ 标准储备液（ 0． 5 mg / mL ） ： 精确称取约 5． 0 mgAOZ， 4 ℃ 用甲醇溶解并定容于 10 mL 容量瓶中， 。 冷藏保存 AOZ 标准工作溶液： 准确吸取 AOZ 标准储备液， 4 ℃ 用水逐级稀释配制成 100 ng / mL 标准工作溶液， 冷藏保存。 氘代内标储备液（ 0． 5 g / L） ： 准确称取 5 mg 氘代 内标物 AOZ － d4 ， 用甲醇溶解并定容于 10 mL 容量 4 ℃ 冷藏保存。 瓶中，
、
组织中的药物代谢 动力学研究已有报道。呋喃唑酮及其代谢物 AOZ 在 牙鲆体内的药代动力学还未见相关报道。 牙鲆是我 国重要的海水增养殖鱼类品种， 其营养价值和经济价
、 日本鳗鲡
［11 ］
以及鲤
［12 ］
－ Q 纯水器（ 美国 Millipore 公司） 。 1． 1． 2 试剂 AOZ 标 样， AOZ － d4 标 样 （ 含 量 ＞ 呋喃 唑 酮， 98% ） ， 美国 SIGMA 公司； 乙腈， 甲醇， 二硝基苯甲醛
1， 3 2* 1 2 3 刘莹 ， 李兆新 ， 郑炯 ， 邢丽红 ， 王英姿
（ 1． 青岛市渔业技术推广站， 青岛 266071 ； 2 中国水产科学院黄海水产研究所，青岛 266071 ； 3． 中国海洋大学化学与化工学院， 青岛 266003 ） 摘要： 采用高效液相色谱法和液相色谱 － 串联质谱联用法分别测定牙鲆肌肉组织中的呋喃唑酮及其代谢物 3 － 氨基 － 2 － 噁唑烷酮（ AOZ） 的残留浓度。在（ 22 ± 2 ） ℃ 条件下， 研究了单剂量口灌条件下（ 以 80 mg / kg 计） ， 呋喃唑酮及其 代谢物 AOZ 在牙鲆肌肉中的代谢规律 。结果显示： 1 ） 呋喃唑酮在牙鲆肌肉组织中的药 － 时曲线出现明显的双峰现象， 非房室模型统计矩原理分析药动学数据， 第一次达峰时间 Tmax（ 1） 出现在 2 h， 第一次达峰浓度 Cmax（ 1） 为 3 060． 5 μg / kg； 第 二次达峰时间 T max（ 2） 出现在 8 h， 第二次达峰浓度 C max（ 2） 为 508． 3 μg / kg； 药 － 时曲线下面积 AUC 为 10． 9 ； 平均滞留时 间 MRT 为 6． 9 h， 说明呋喃唑酮在牙鲆体内吸收较迅速， 消除时间较短。2 ） 代谢物 AOZ 在牙鲆肌肉中的药代动力学 一级吸收速率常数 K a 为 0． 2 ， 吸收半衰期 t1 /2Ka 为 3． 2 h， 分布半衰期 t1 /2α 为 4． 2 h， 消除半衰期 模型符合二房室模型， t1 /2β 为 95． 1 。说明代谢物 AOZ 在牙鲆体内吸收、 消除所需时间较长， 直至停药后 528 h 仍然能够检测到残留。［ 中国 2013 ， 3 （ 1 ） ： 19 － 26］ 渔业质量与标准， 关键词： 牙鲆； 呋喃唑酮； 3 － 氨基 － 2 － 噁唑烷酮； 药物代谢动力学； 残留 中图分类号： S94 文献标志码： A 文章编号： 2095 － 1833 （ 2013 ） 01 － 0019 － 26
中国渔业质量与标准 2013 年 3 月 Mar. 2013 Chinese Fishery Quality and Standards Vol. 3 No. 1 第3 卷 第1 期
呋喃唑酮及其代谢物在牙鲆肌肉组织中的代谢动力学研究
1． 2
1． 2． 1
实200 mL 烧杯中， 先用少
量淀粉糊将呋喃唑酮制成乳化液， 再加入约 200 mL 水， 待完全溶解后转移到 250 mL 容量瓶中定容， 配制 的药物浓度为 8． 0 mg / mL。采用灌服的方式喂药， 每 尾鱼灌服 1 mL， 灌服剂量约为 80 mg / kg （ 以体质量 计） 。具体操作如下： 先将鱼随机捞出， 以 1 mL 的一 次性针管抽取 1． 0 mL 药液， 小心的插入牙鲆喉部， 推 拔出针管， 稍待片刻， 将鱼放回池中， 并开 入药液后， 始计时（ 灌喂过程中有回吐的鱼应弃去） 。 1． 5 、 2、 本实验共设置 28 个采样点， 分别为： 0． 5 、 2． 5 、 3、 3． 5 、 4、 4． 5 、 5、 5． 5 、 6、 7、 8、 9、 10 、 12 、 14 、 16 、 18 、 20 、 24 、 36 、 48 、 96 、 144 、 240 、 384 、 528 h； 每个采样点随 机抽取牙鲆 6 尾。 迅速将牙鲆处死后取其背部肌肉 20 ～ 25 g， 置于冰箱中 － 20 ℃ 冷冻待用。测试呋喃唑 酮和代谢物 AOZ 的牙鲆鱼分别取样， 每一个样取一 尾鱼， 每组药物 3 个平行样。 1． 2． 2 1． 2． 2． 1 标准品溶液的制备 呋喃唑酮标准工作液配制 呋喃唑酮标准储备液： 称取 10． 0 mg 呋喃唑酮， 用乙腈水溶液溶解并稀释定容至 50 mL 棕色容量瓶
收稿日期： 2013 － 01 － 03 ； 接收日期： 2013 － 03 － 06 资助项目： 中央级公益性科研院所基本科研业务费（ 2012A10 ） 和（ 20603022011014 ） 作者简介： 刘莹（ 1980 － ） ， 女， 工程师， 研究方向为水产品质量安全 。E － mail： qd8588@ 126． com 通信作者： 李兆新， 博士， 副研究员， 主要从事水产品质量安全检测与控制技术研究 。E － mail： lizx@ ysfri． ac． cn