厌氧菌的培养特性
合集下载
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性,平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益,请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间:9:00-18:30)。
4)未用选择性培养基 5)无合适的厌氧罐或装备出现问题 6)培养时间不足 7)…………………..
鉴定实验பைடு நூலகம்
1 形态和染色 重要的是为下一步的鉴定提供参考,
时间
破伤风梭菌革兰氏染色改变 拉丝实验 加KOH30g/l一滴,能拉丝为 阴性不能为阳性
PH 痤疮丙酸杆菌7.0时阴性及多型性 6.0及以下革兰氏阳性杆菌
能分解多种糖类,如葡萄糖、麦芽糖、 蔗糖和乳糖,产酸产气,不发酵甘露糖 或水杨苷,能液化明胶,产生硫化氢,
致病条件与破伤风梭菌相似。产气荚膜 梭菌既能产生强烈的外毒素,又有多种 侵袭性酶,并有荚膜,构成其强大的侵 袭力,引起感染致病。
1.气性坏疽 2.食物中毒 3.急性坏死性肠炎
破伤风梭菌菌体细长,长4~8um ,宽 0.3~ 0.5um ,周身鞭毛,芽胞呈圆形, 位于菌体顶端,直径比菌体宽大,似鼓 槌状,是本菌形态上的特征。繁殖体为 革兰氏阳性,带上芽胞的菌体易转为革 兰氏阴性。破伤风梭菌为专性厌氧菌, 最适生长温度为37℃pH7.0~7.5,
营养要求不高,在普通琼脂平板上培养 24~48小时后,可形成直径1mm 以上不 规则的菌落,中心紧密,周边疏松,似 羽毛状菌落,易在培养基表面迁徒扩散。 在血液琼脂平板上有明显溶血环,在疱 肉培养基中培养,肉汤浑浊,肉渣部分 被消化,微变黑,产生气体,生成甲基 硫醇(有腐败臭味)及硫化氢。
厌氧性细菌及检验
临床微生物教研室
袁小澎
一定义
有氧条件下不能生长,无氧条件(不是绝 对)下才可以生长的一类细菌 1836年Pasteur提出 临床上日益受到重视,60%临床标本存在 厌氧菌感染---------------------需要 重视
二 分类
1 有芽孢厌氧性细菌 一个梭菌属包括83个种 2 无芽孢厌氧性细菌 40多个菌属,300多个菌 种和亚种
三 感染
分布 原因 临床症状
厌氧菌在正常人体内的分布
厌氧菌 一芽孢菌 G+杆菌 梭状芽孢杆菌属 二无芽孢菌 (一)G+的杆菌 双歧杆菌 (二) G-的杆菌 类杆菌属 (三)G+的球菌 消化球菌属 (四)G-的球菌 韦荣氏菌属 皮肤 上呼吸道 口腔 肠道 尿道 阴 道
0
0
±
++
±
±
0 0 + 0
有芽孢的厌氧菌
简介 梭菌属 G+ 陈旧性培养基G-
四 破伤风梭菌
大量存在于人和动物的肠道 粪便污染
伤口被污染导致----------注意消毒清洁 芽孢为于顶部,呈鼓槌壮,直径比菌体 粗,呈梭状 可以被用来生物技术, 外毒素致毒
一)生物学性状
染色,培养 生化
对我们实验诊断来说最重要
需氧培养 厌氧培养
有生长
无生长
有生长
无生长
兼性厌氧菌 药物敏感实验
形态和染色 菌落
专性厌氧菌 分类鉴定
需氧菌 菌种保存
气液相色谱 其它,PCR等等
生化反应
药敏性实验
检验的方法
1 直接镜检 一些特殊的特点,临床工作中的总结 可对初步判断及临床应用做早一步的 指 导作用
2 分离培养
1 初步培养 1 )培养基的选择 强化血琼脂平板 卡那万古霉素冻溶血琼脂平板 七叶苷胆汁平板等等
三)微生物学检验
标本采集 检验程序 检验方法和鉴定
五 气性坏疽病原菌
以组织坏死,水肿,产气及全身中毒的 严重的急性外伤感染 包括很多-----重点 产气夹膜梭菌
产气夹膜梭菌
生物学性状
形态和染色 培养特性 生化反应
致病性
为革兰氏阳性粗大梭菌,3~4×1~ 1.5um。单独或成双排列,有时也可成短 链排列。芽胞呈卵圆形,芽胞宽度不比 菌体大,位于中央或末次端。培养时芽 胞少见,须在无糖培养基中才能生成芽 胞。在脓汁、坏死组织或感染动物脏器 的涂片上,可见有明显的荚膜,无鞭毛, 不能运动。
标本的送运与处理
针筒送运法 无菌小瓶送运法 棉拭送运法 大量标本送运法 组织块送运法 厌氧袋送运法
分离和鉴定
临床标本
1 肉眼观察及有无气味 2 涂片观察与直接镜检 分离培养 (接种血平板及选择性培养基) 增菌培养 (接种液体培养基)
厌氧培养
2~7天 确定厌氧菌
每个平板挑5个以上的菌落 每个菌落接种2个平板48h培养
破伤风梭菌能产生强烈的外毒素,即破 伤风痉挛毒素(Tetanospasmin)或称神 经毒素(Neurotoxin)。破伤风毒痉挛毒素 是一种神经毒素,为蛋白质,由十余种 氨基酸组成不耐热,可被肠道蛋白酶破 坏,故口服毒素不起作用。在菌体内的 痉挛毒素是单一和一条多肽链,分子量 15万。破伤风毒素的毒性非常强烈,仅 次于肉毒毒素。破伤风梭菌没有侵袭力
3.动物实验 取培养液0.5~1ml给小鼠或 家兔静脉内注射,10分钟后杀死动物, 置37℃5~8小时。如动物躯体膨胀,即 行解剖,可见脏器和肌肉内有大量气泡, 尤以肝脏最为明显,称“泡沫肝”。取 内脏或心血涂片镜检或分离培养,可发 现有革兰氏阳性大杆菌,并有明显荚膜。
无芽孢的厌氧菌
革兰氏阴性的杆菌 革兰氏阳性的杆菌 革兰氏阴性的球菌 革兰氏阳性的球菌
革兰氏阴性的杆菌 -----正常菌群的组成部分 类杆菌属
厌氧程度不如破伤风梭菌要求高。在血 液琼脂平板上菌落较大、灰白色、不透 明,边缘呈锯齿状,多数菌株有双层溶 血环,内环是θ毒素的作用,而外环不完 全溶血是a毒素所致。不能消化已凝固的 蛋白质和血清。
在疱肉培养基中肉渣不被消化,有时呈 肉红色。在牛乳培养基中能分解乳糖产 酸,使酪蛋白凝固,同时生成大量气体, 将凝固的酪蛋白冲成海棉状碎块。管内 气体常将覆盖在液体上的凡士林层向上 推挤,这种现象称为“汹涌发酵”,是 本菌的特点之一。
0 + + +
+ ++ ++ ++
++ ++ ++ +
0 + ± ±
± + ++ +
致病的原因
1 组织缺氧或氧化还原电势降低 穿刺伤等封闭性伤口,血管压迫,肿 瘤压迫等等 2 机体免疫力低下
临床的症状
1 感染部位产生大量气体,组织脓肿和坏 死,皮下有捻发音,是产气夹膜梭菌感 染的特征 2分泌物有恶臭,或为暗红色,分泌物涂 片经革兰氏染色,发现细菌,而培养阴 性的 3 其它等等
一般不发酵糖类,能液化明胶,产生硫 化氢,形成吲哚,不能还原硝酸盐为亚 硝酸盐。对蛋白质有微弱消化作用。本 菌繁殖体抵抗力与其他细菌相似,但芽 胞抵抗力强大。在土壤中可存活数十年, 能耐煮沸40~50分钟。对青霉素敏感, 磺胺类有抑菌作用。
二)致病性与免疫性
破伤风梭菌芽胞广泛分布于自然界中可由伤口 侵入人体,发芽繁殖而致病,但破伤风梭菌是 厌氧菌,在一般伤口中不能生长,伤口的厌氧 环境是破伤风梭菌感染的重要条件。窄而深的 伤口(如剌伤),有泥土或异物污染,或大面 积创伤、烧伤、坏死组织多,局部组织缺血或 同时有需氧菌或兼性厌氧菌混合感染,均易造 成厌氧环境,局部氧化还原电势降低。有利于 破伤风杆菌生长
2 )标本的接种 每份标本应接种3个培养平板,分别 放置于有氧,无氧和含5%~10%的CO2的 容器中,有时需要专用的培养基
3) 厌氧培养法 a 厌氧罐培养法 b 气袋法 c 气体喷射法 d 厌氧手套箱法 e 其它等等
2 次代培养和厌氧菌的确定
3 分离培养中可能失败的原因 1)培养前为做标本的直接涂片和染色 镜检 2)标本在空气中放置太久或接种时时 间过长 3)未用新鲜配制的培养基
2 菌落性状 1)色素 产黑色素类杆菌2~10天可产生 黑色素;溶齿放线菌培养3~4天产生粉红 色色素 2)溶血 产气夹膜梭菌在新鲜的血琼脂 平板上可产生双溶血环 3)荧光
3 抗生素敏感实验 4一些特殊的敏感实验—— 聚茴香脑磺酸 钠敏感实验 5生化特性 6气液相色扑 7 PCR等等
厌氧菌标本的采集和送检
标本的采集和送检-----------1 标本决不能被正常菌群污染; 2 应尽量避免空气
标本的采集
标本来源 封闭性脓肿 妇女生殖道 下呼吸道分泌物 胸腔 窦道,子宫腔,深部创伤 组织 尿道 收集的方法 针管抽取 后穹隆穿刺抽取 肺穿刺术 胸腔穿刺术 静脉注射的塑料导管穿入 无菌外科切开 上阴部膀胱穿刺
1.直接涂片镜检 从伤口深部取材涂片, 革兰氏染色镜检,可见革兰氏阳性大杆 菌,并有荚膜,常伴有其他杂菌,白细 胞甚少,形态不规则,这是气性坏疽标 本涂片的特点。
2.分离培养与鉴定 取坏死组织制成悬液, 接种于血球脂平板上或疱肉培养基中, 厌氧培养,观察生长情况。取细菌培养 物涂片镜检,并进一步用生化反应鉴定。