厌氧菌的培养特性

三）微生物学检验
标本采集 检验程序 检验方法和鉴定

五 气性坏疽病原菌
以组织坏死，水肿，产气及全身中毒的 严重的急性外伤感染 包括很多-----重点 产气夹膜梭菌

产气夹膜梭菌


生物学性状
形态和染色 培养特性 生化反应

致病性

为革兰氏阳性粗大梭菌，3～4×1～ 1.5um。单独或成双排列，有时也可成短 链排列。芽胞呈卵圆形，芽胞宽度不比 菌体大，位于中央或末次端。培养时芽 胞少见，须在无糖培养基中才能生成芽 胞。在脓汁、坏死组织或感染动物脏器 的涂片上，可见有明显的荚膜，无鞭毛， 不能运动。

革兰氏阴性的杆菌 -----正常菌群的组成部分 类杆菌属
厌氧性细菌及检验
临床微生物教研室
袁小澎
一定义
有氧条件下不能生长，无氧条件(不是绝 对）下才可以生长的一类细菌 1836年Pasteur提出 临床上日益受到重视，60%临床标本存在 厌氧菌感染---------------------需要 重视

二 分类
1 有芽孢厌氧性细菌 一个梭菌属包括83个种 2 无芽孢厌氧性细菌 40多个菌属，300多个菌 种和亚种

1．直接涂片镜检 从伤口深部取材涂片， 革兰氏染色镜检，可见革兰氏阳性大杆 菌，并有荚膜，常伴有其他杂菌，白细 胞甚少，形态不规则，这是气性坏疽标 本涂片的特点。

2．分离培养与鉴定 取坏死组织制成悬液， 接种于血球脂平板上或疱肉培养基中， 厌氧培养，观察生长情况。取细菌培养 物涂片镜检，并进一步用生化反应鉴定。
4）未用选择性培养基 5）无合适的厌氧罐或装备出现问题 6）培养时间不足 7）…………………..

鉴定实验
1 形态和染色 重要的是为下一步的鉴定提供参考，



时间
破伤风梭菌革兰氏染色改变 拉丝实验 加KOH30g/l一滴，能拉丝为 阴性不能为阳性
PH 痤疮丙酸杆菌7.0时阴性及多型性 6.0及以下革兰氏阳性杆菌
0 + + +
+ ++ ++ ++
++ ++ ++ +
0 + ± ±
± + ++ +
致病的原因
1 组织缺氧或氧化还原电势降低 穿刺伤等封闭性伤口，血管压迫，肿 瘤压迫等等 2 机体免疫力低下

临床的症状
1 感染部位产生大量气体，组织脓肿和坏 死，皮下有捻发音，是产气夹膜梭菌感 染的特征 2分泌物有恶臭，或为暗红色，分泌物涂 片经革兰氏染色，发现细菌，而培养阴 性的 3 其它等等

破伤风梭菌能产生强烈的外毒素，即破 伤风痉挛毒素（Tetanospasmin）或称神 经毒素(Neurotoxin)。破伤风毒痉挛毒素 是一种神经毒素，为蛋白质，由十余种 氨基酸组成不耐热，可被肠道蛋白酶破 坏，故口服毒素不起作用。在菌体内的 痉挛毒素是单一和一条多肽链，分子量 15万。破伤风毒素的毒性非常强烈，仅 次于肉毒毒素。破伤风梭菌没有侵袭力

2 ）标本的接种 每份标本应接种3个培养平板，分别 放置于有氧，无氧和含5%~10%的CO2的 容器中，有时需要专用的培养基

3） 厌氧培养法 a 厌氧罐培养法 b 气袋法 c 气体喷射法 d 厌氧手套箱法 e 其它等等


2 次代培养和厌氧菌的确定

3 分离培养中可能失败的原因 1）培养前为做标本的直接涂片和染色 镜检 2）标本在空气中放置太久或接种时时 间过长 3）未用新鲜配制的培养基

破伤风梭菌菌体细长，长4～8um ，宽 0.3～ 0.5um ，周身鞭毛，芽胞呈圆形， 位于菌体顶端，直径比菌体宽大，似鼓 槌状，是本菌形态上的特征。繁殖体为 革兰氏阳性，带上芽胞的菌体易转为革 兰氏阴性。破伤风梭菌为专性厌氧菌， 最适生长温度为37℃pH7.0～7.5，

营养要求不高，在普通琼脂平板上培养 24～48小时后，可形成直径1mm 以上不 规则的菌落，中心紧密，周边疏松，似 羽毛状菌落，易在培养基表面迁徒扩散。 在血液琼脂平板上有明显溶血环，在疱 肉培养基中培养，肉汤浑浊，肉渣部分 被消化，微变黑，产生气体，生成甲基 硫醇（有腐败臭味）及硫化氢。

2 菌落性状 1）色素 产黑色素类杆菌2~10天可产生 黑色素；溶齿放线菌培养3~4天产生粉红 色色素 2）溶血 产气夹膜梭菌在新鲜的血琼脂 平板上可产生双溶血环 3）荧光

3 抗生素敏感实验 4一些特殊的敏感实验—— 聚茴香脑磺酸 钠敏感实验 5生化特性 6气液相色扑 7 PCR等等
需氧培养 厌氧培养
有生长
无生长
有生长
无生长
兼性厌氧菌 药物敏感实验
形态和染色 菌落
专性厌氧菌 分类鉴定
需氧菌 菌种保存
气液相色谱 其它，PCR等等
生化反应
药敏性实验
检验的方法

1 直接镜检 一些特殊的特点，临床工作中的总结 可对初步判断及临床应用做早一步的 指 导作用
2 分离培养
1 初步培养 1 ）培养基的选择 强化血琼脂平板 卡那万古霉素冻溶血琼脂平板 七叶苷胆汁平板等等

厌氧程度不如破伤风梭菌要求高。在血 液琼脂平板上菌落较大、灰白色、不透 明，边缘呈锯齿状，多数菌株有双层溶 血环，内环是θ毒素的作用，而外环不完 全溶血是a毒素所致。不能消化已凝固的 蛋白质和血清。

在疱肉培养基中肉渣不被消化，有时呈 肉红色。在牛乳培养基中能分解乳糖产 酸，使酪蛋白凝固，同时生成大量气体， 将凝固的酪蛋白冲成海棉状碎块。管内 气体常将覆盖在液体上的凡士林层向上 推挤，这种现象称为“汹涌发酵”，是 本菌的生硫 化氢，形成吲哚，不能还原硝酸盐为亚 硝酸盐。对蛋白质有微弱消化作用。本 菌繁殖体抵抗力与其他细菌相似，但芽 胞抵抗力强大。在土壤中可存活数十年， 能耐煮沸40～50分钟。对青霉素敏感， 磺胺类有抑菌作用。
二）致病性与免疫性

破伤风梭菌芽胞广泛分布于自然界中可由伤口 侵入人体，发芽繁殖而致病，但破伤风梭菌是 厌氧菌，在一般伤口中不能生长，伤口的厌氧 环境是破伤风梭菌感染的重要条件。窄而深的 伤口（如剌伤），有泥土或异物污染，或大面 积创伤、烧伤、坏死组织多，局部组织缺血或 同时有需氧菌或兼性厌氧菌混合感染，均易造 成厌氧环境，局部氧化还原电势降低。有利于 破伤风杆菌生长
三 感染
分布 原因 临床症状

厌氧菌在正常人体内的分布
厌氧菌 一芽孢菌 G+杆菌 梭状芽孢杆菌属 二无芽孢菌 （一）G+的杆菌 双歧杆菌 （二） G-的杆菌 类杆菌属 （三）G+的球菌 消化球菌属 （四）G-的球菌 韦荣氏菌属 皮肤 上呼吸道 口腔 肠道 尿道 阴 道
0
0
±
++
±
±
0 0 + 0

厌氧菌标本的采集和送检

标本的采集和送检-----------1 标本决不能被正常菌群污染； 2 应尽量避免空气
标本的采集
标本来源 封闭性脓肿 妇女生殖道 下呼吸道分泌物 胸腔 窦道，子宫腔，深部创伤 组织 尿道 收集的方法 针管抽取 后穹隆穿刺抽取 肺穿刺术 胸腔穿刺术 静脉注射的塑料导管穿入 无菌外科切开 上阴部膀胱穿刺

3．动物实验 取培养液0.5～1ml给小鼠或 家兔静脉内注射，10分钟后杀死动物， 置37℃5～8小时。如动物躯体膨胀，即 行解剖，可见脏器和肌肉内有大量气泡， 尤以肝脏最为明显，称“泡沫肝”。取 内脏或心血涂片镜检或分离培养，可发 现有革兰氏阳性大杆菌，并有明显荚膜。
无芽孢的厌氧菌
革兰氏阴性的杆菌 革兰氏阳性的杆菌 革兰氏阴性的球菌 革兰氏阳性的球菌
标本的送运与处理
针筒送运法 无菌小瓶送运法 棉拭送运法 大量标本送运法 组织块送运法 厌氧袋送运法

分离和鉴定
临床标本
1 肉眼观察及有无气味 2 涂片观察与直接镜检 分离培养 （接种血平板及选择性培养基） 增菌培养 （接种液体培养基）
厌氧培养
2~7天 确定厌氧菌
每个平板挑5个以上的菌落 每个菌落接种2个平板48h培养

能分解多种糖类，如葡萄糖、麦芽糖、 蔗糖和乳糖，产酸产气，不发酵甘露糖 或水杨苷，能液化明胶，产生硫化氢，

致病条件与破伤风梭菌相似。产气荚膜 梭菌既能产生强烈的外毒素，又有多种 侵袭性酶，并有荚膜，构成其强大的侵 袭力，引起感染致病。

1．气性坏疽 2．食物中毒 3．急性坏死性肠炎

有芽孢的厌氧菌

简介 梭菌属 G+ 陈旧性培养基G-
四 破伤风梭菌
大量存在于人和动物的肠道 粪便污染

伤口被污染导致----------注意消毒清洁 芽孢为于顶部，呈鼓槌壮，直径比菌体 粗，呈梭状 可以被用来生物技术， 外毒素致毒

一）生物学性状
染色，培养 生化
对我们实验诊断来说最重要