免疫磁珠技术

磁性物质 O金H属)，小
载体微球
高分子层 功能基
如亚乙聚使现疏水颗（3F、e聚胺烯醋其具水、粒F3Oe乙、醇酸表有非-2亲4O）烯聚、乙
免疫配基
免疫配基通过生物高分子的功能基团结合到 磁性载体微球上形成免疫磁珠。由于载体微 球制备材料和方法不同，其表现出的物理性 质也不同， 从而可结合不同的免疫配基， 如 抗原、抗体、凝集素、DNA 和RNA 等。配 基必须具有生物专一性的特点， 而且载体微 球与配基结合要不影响或改变配基原有的生 物学特性， 保证磁珠的特殊识别功能。
大肠杆菌o157的检测
基本原理：磁性微球经过一定处理后,
2 .免疫磁珠技术的应用
2.1 食品有害微生物检测中的应用
免疫磁珠技术与常规检验方法相 比具有显著的优点，它能从样品 中迅速、有选择性地分离出目的 微生物，有效地减少了背景的干 扰，提高了精准性。
还能捕获受损伤的靶细菌，而目 前所用的几种常规方法则不具备 这样的能力。目前，免疫磁珠技 术已经广泛应用于食品样品中致
1.2 免疫磁珠技术
免疫磁珠( immunomagnetic bead, IMB) 技术：是一种以特异的抗原抗体反应为 基础的免疫学检测和分离技术。它是以 抗体包被的磁珠为载体，通过抗体与反 应介质中特异性抗原结合，形成抗原— 抗体复合物，此复合物在外加磁场的作 用下发生定向移动，从而达到分离抗原 的目的。
5.吸取上清液:取1支无菌加长吸管，从
6.洗涤:洗涤免疫磁珠混合物。重复上 述步骤 4~ 6 。
7.重复上述步骤4 ~ 5 。
8.免疫磁珠悬浮:将免疫磁珠重新悬浮 在100 μL PBS-Tween 20洗液中。
9.涂布平板:用漩涡混合器将免疫磁珠 混匀，用加样器各取50 μL免疫磁珠悬 液分别转移至CT-SMAC平板和改良 CHROMagar O157弧菌显色琼脂平板 一侧，然后用无菌涂布棒将免疫磁珠涂 布平板的一半，再用接种环划线接种平
GB/T 4789.36-2008 免疫磁珠捕获 法检测程序
↓ 36± 1oC 18h~24h
涂板CO检2L（挑个酶改5H1阳布和m样~取阴g非5MLR良1(7ESC改mO可性U0疫珠获弧3366CTE±±T个11LMooG良CC疑，-+C磁捕↓↓↓↓↓菌)1S81免-h8a+~h，n~242肉h4菌革h阴Mg2）显血↓↓氧a2汤A落兰，r色5C化m5氏琼平
1.免疫磁珠技术简介
1.1 免疫磁珠的结构与性质
1.1.1 免疫磁珠的结构 免疫磁珠（IMB）， 也称免疫磁性
微球， 是一种均匀、具有超顺磁性及 保护性壳的球形小粒子，基本上由载体 微球和免疫配基结合而成。其核心为顺 磁性粒子，核心外层包裹一层高分子料， 最外层是免疫配基。
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羟基(-
载体微球
免疫磁珠技术（IMB）在食品 有害微生物检测中的应用
目录
1 免疫磁珠技术简介
1.1 免疫磁珠的结构与性质 1.2 免疫磁珠技术
2 免疫磁珠技术的应用
2.1 IMB技术在食品有害微生物检测中的应用 2.2 免疫磁珠与其它检测手段的联用 2.3 免疫磁珠技术在其他领域的应用 2.4 免疫磁珠技术的优缺点及发展方向
菌落识别
在CT-SMAC平板上，典型菌落为不发酵山梨醇的圆形、光滑、 较小的无色菌落，中心呈现较暗的灰褐色;发酵山梨醇的菌落 为红色;在改CHROMagar O157弧菌显色琼脂平板上为圆形、 较小的菌落，中心呈淡紫色一紫红色，边缘无色或浅灰色。 初步生化试验:
在CT-SMAC和改良CHROMagar O157弧菌显色琼脂平板上 挑取5个~10个典型或可疑菌落，分别接种TSI琼脂，同时接种 MUG-LST肉汤，于36℃士1℃培养18 h~24 h。必要时进行氧 化酶试验和革兰氏染色。在TSI琼脂中，典型菌株为斜面与底 层均呈阳性反应呈黄色，产气或不产气，不产生硫化氢(H2S)。 置MUG-LST肉汤管于长波紫外灯下观察，无荧光产生者为阳 性结果，有荧光产生者为阴性结果;对分解乳糖且无荧光的菌 株，在营养琼脂平板上分纯，于36℃士1℃培养18 h~24 h，并 进行鉴定。
2.1.1 大肠杆菌O157的检测
传统分离E.coli O157∶H7所采用的直接分离 法存在着鉴别力差、抑制杂菌能力弱、耗时长、 工作量大等缺点。 采用免疫磁珠技术，能够快速地从各种食品样 品中分离富集E.coli O157∶H7，满足流行病学 的研究要求和提高控制力度。
现在这种免疫磁珠的方法已经被英国公共健 康服务实验室认定为标准的分离方法，我国也 已将免疫磁珠法对大肠杆菌O157的检测纳入国 家标准（GB/T 4789.36-2008）和出入境检验检 疫行业标准(SN/T 1059.5-2006)。
3.结合:在18℃~30℃环境中，将上述 Eppendorff管连同磁板架放在Dynal MXl样品混合器上转动或用手轻微转10 min，使E. coli O157与免疫磁珠充分接 触。
4.捕获:将磁板插人到磁板架中浓缩磁珠。 在3 min内不断地倾斜磁板架，确保悬 液中与盖子上的免疫磁珠全部被收集起 来，此时，在Eppendorff管壁中间明显 可见圆形或椭圆形棕色聚集物。
增菌
具体操作步骤
免疫磁珠捕获与分离
1.将Eppendorff管按样品和质控菌株进 行编号，每个样品使用1支Eppendorff 管，然后插人到磁板架上。在漩涡混合 器上轻轻振荡E. coli O157免疫磁珠溶 液后，用开盖器打开每支Eppendorff管 的盖子，每管加人20 μL E. coli 0157免 疫磁珠悬液。
1.1.2 免疫磁珠的性质
由于免疫磁珠的大小和形状具有均一性， 从而可使靶物质迅速和有效地结合到磁 珠上，也可使生成的新复合物在磁场中 具有相同的磁响应性，且行为一致
磁珠的球形结构可消除与不规则形状粒 子有关的非特异性结合
顺磁性可使磁珠置于磁场时显示其磁性， 并做定向移动， 从磁场移出时磁性消 除， 磁珠分散， 由此可方便地进行分 离和磁性导向