免疫磁珠技术

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免疫磁珠技术及其在食品微生物检测中的应用

免疫磁珠技术及其在食品微生物检测中的应用

免疫磁珠技术及其在食品微生物检测中的应用随着食品安全问题的日益严重,食品微生物检测成为了食品安全监管的重要手段。

而免疫磁珠技术作为一种高效、快速、灵敏、特异性强的检测方法,已经在食品微生物检测中得到了广泛应用。

一、免疫磁珠技术的原理免疫磁珠技术是将特异性抗体固定在磁性微珠表面,并将其与待检测样品中的微生物结合,通过磁力分离技术将目标微生物从复杂的基质中分离出来,从而实现快速、高效、特异性强的检测方法。

二、免疫磁珠技术在食品微生物检测中的应用1. 检测食品中的病原微生物免疫磁珠技术可以用于检测食品中的多种病原微生物,如大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌等。

该技术具有高灵敏度、高特异性、快速、简便等优点,可以在短时间内检测出食品中的病原微生物,为食品安全监管提供了有力的技术支持。

2. 检测食品中的致病菌免疫磁珠技术还可以用于检测食品中的致病菌,如霉菌、酵母菌等。

该技术可以在短时间内检测出致病菌的存在情况,为食品生产企业提供了有效的质量控制手段。

3. 检测食品中的致敏物质免疫磁珠技术还可以用于检测食品中的致敏物质,如花生、虾、蟹等食品中的过敏原。

该技术可以在短时间内检测出食品中的致敏物质,为过敏人群提供了有效的食品安全保障。

三、免疫磁珠技术的优点1. 特异性强免疫磁珠技术采用特异性抗体,可以高效地捕捉目标微生物,避免误检和漏检。

2. 灵敏度高免疫磁珠技术具有高灵敏度,可以检测出微生物的极低浓度。

3. 快速、简便免疫磁珠技术操作简单,检测速度快,可以在短时间内完成检测。

4. 应用范围广免疫磁珠技术可以应用于多种食品中的微生物、致病菌和致敏物质的检测,具有广泛的应用前景。

四、免疫磁珠技术的发展趋势随着科技的不断发展,免疫磁珠技术在食品微生物检测中的应用将会越来越广泛。

未来,免疫磁珠技术将会进一步提高检测的灵敏度和特异性,加快检测速度,降低成本,为食品安全监管提供更加完善的技术支持。

五、结论免疫磁珠技术是一种高效、快速、灵敏、特异性强的检测方法,在食品微生物检测中得到了广泛应用。

免疫磁珠分离技术

免疫磁珠分离技术

磁珠分离技术一、原理免疫磁珠法分离细胞基于细胞表面抗原能与连接在磁珠上的特异性单抗相结合,在外磁场中,通过抗体与磁珠相连的细胞被吸附而滞留在磁场中,无该种表面抗原的细胞由于不能与相连着磁珠的特异性单抗结合而没有磁性,不在磁场中停留,从而使细胞得以分离。

免疫磁珠法分正选法和负选法,也称阳性分选法和阴性分选法。

正选法-磁珠结合的细胞就是所要分离获得的细胞;负选法-磁珠结合的细胞为不需要细胞。

一般负选法分选较为常见,因为此方法获得的所需要的细胞表面不含有抗体及磁珠的干扰。

现以两步法分选小鼠CD4+ CD25+ T 细胞的分选为例分别介绍负选法、正选法如下。

1、材料试剂:<1>、生物素化的,小鼠CD4阴性分选抗体混合物[cocktail ,内含抗B 细胞(CD45R ,B220)、CD8+T 细胞(CD8a ,Ly-2)、造血细胞(CD11b,Mac-1),NK 细胞(CD49b,DX5)等非CD4+T 细胞表面标志的抗体]。

<2>、结合有磁珠的抗生物素抗体(Scimall 科学在线提供);含0.5%BSA (或0.5%FCS )及2mmol/L EDTA 的PBS 缓冲液;抗小鼠CD25-PE 抗体;结合有磁珠的抗PE 抗体(Scimall 科学在线提供);磁珠分离器或分离柱。

2、实验步骤<1>、负性分选小鼠CD4+T 细胞<2>、阳性分选小鼠CD25+ T 细胞二、注意事项:1、如果分离细胞用作培养,全过程注意无菌操作。

2、磁珠分离系统分离的细胞纯度可以达到80%-99%,得率在60%-90%左右,仅次于或相当于流式细胞仪的分选效率,与FACS相比,MACS设备简单,耗时极短,故而应用广泛。

设定不同的程序(细胞得率或纯度不可兼得),连续两次过柱分选可进一步提高分选细胞纯度,通常可达到95%-95%。

3、由于阳性分选得到的细胞表面结合有抗体及磁珠,有可能影响细胞的功能,故目前常用阴性分选的方法分离细胞。

免疫磁珠富集细胞步骤

免疫磁珠富集细胞步骤

免疫磁珠富集细胞步骤
免疫磁珠富集细胞是一种利用抗体包被的磁性微粒对目标细胞进行特异性标记和分离的技术,广泛应用于血液、组织液及其它生物样本中稀有细胞的高效纯化。

以下是免疫磁珠富集细胞的基本步骤:
1.准备磁珠:
选择针对目标细胞表面抗原的特异性抗体包被的免疫磁珠。

根据生产商推荐的方法稀释磁珠,并在适宜条件下活化。

2.样本处理:
收集待处理样本(如血液、骨髓、胸腔积液等),根据需要可能需要进行红细胞裂解或者其它预处理步骤以去除杂质细胞或血细胞成分。

将处理后的样本与已活化的免疫磁珠混合,在一定温度和时间条件下孵育,使磁珠上的抗体与目标细胞表面抗原结合,形成“玫瑰花结”结构。

3.磁性分离:
将孵育好的样品放置于磁场设备中(如MACS分选器或其他磁力架)。

在磁场作用下,结合了磁珠的目标细胞会迅速聚集到管壁或磁力板上,而未结合磁珠的非目标细胞则不会被吸引,从而实现初步的物理分离。

4.洗涤与收集:
温和地移除未结合磁珠的液体部分,通常需进行数次洗涤,以进一步去除非特异性结合的细胞和其他杂质。

当完成洗涤后,关闭或移除磁场,用适当的缓冲液或培养基收集富集的目标细胞。

5.后续操作:
可以直接对收集到的目标细胞进行下游实验分析,例如分子生物学检测、细胞培养、流式细胞术分析等。

6.质量控制:
对分离出的细胞进行计数、活力检测以及目的细胞标志物表达水平的确认,确保富集效果满足实验要求。

以上步骤为一般性的流程描述,具体操作时应参考所使用的免疫磁珠产品说明书和实验室规程。

免疫磁珠分离法

免疫磁珠分离法

免疫磁珠分离法介绍免疫磁珠分离法是一种先进的生物技术方法,可用于分离和纯化特定目标分子。

这种方法基于对特定分子的高度选择性结合,通过使用磁性珠子将目标分子与其他非特异性组分分离开来。

本文将详细介绍免疫磁珠分离法的原理、步骤和应用。

原理免疫磁珠分离法是利用特异性抗体与相关抗原之间的结合力来实现分离和纯化的。

在该方法中,磁性珠子上涂覆有特异抗体,这些抗体能够与目标分子高度选择性地结合。

当样品中包含目标分子时,抗体会与其结合,形成一个稳定的抗原-抗体复合物。

步骤1. 准备磁性珠子在免疫磁珠分离法中,选择合适大小和类型的磁性珠子非常重要。

通常,珠子的大小在1-5微米之间,表面覆盖有一层特异抗体。

磁性珠子可以通过商业供应商购买或自行制备。

2. 样品处理样品处理步骤包括样品的收集、预处理和溶解。

样品中可能包含大量的杂质和非特异性蛋白质,这些都会干扰免疫分离过程。

因此,为了获得高纯度的目标分子,必须对样品进行预处理。

3. 结合反应将磁性珠子加入样品中,并与目标分子进行结合反应。

一般需要在恒温和适当的时间下进行反应,以确保抗原与抗体结合的充分。

4. 磁珠分离利用磁性珠子的磁性特性,将珠子简单地用磁场固定在容器的一侧。

非特异性组分在重力的作用下沉淀到容器底部,而珠子与目标分子形成的复合物会留在悬浮液中。

这样就能够简单、快速地实现目标分子的分离。

应用免疫磁珠分离法在生命科学研究和生物医学领域有广泛的应用。

以下是免疫磁珠分离法的几个常见应用示例:1. 蛋白质纯化免疫磁珠分离法可用于纯化复杂混合物中的特定蛋白质。

通过使用与目标蛋白质结合的抗体修饰的磁性珠子,可以将目标蛋白质高效分离出来,并去除其他非特异性组分。

2. 细胞分离免疫磁珠分离法可用于分离不同类型或特定表面标志物的细胞。

通过选择性使用与目标细胞结合的抗体修饰的磁性珠子,可以实现对混合细胞群体的分离和纯化。

3. 病原体检测免疫磁珠分离法可用于病原体的快速检测。

通过与病原体相关的抗体修饰的磁性珠子,可以高效地将病原体与其他细菌或病毒区分开来,并进行快速分离和鉴定。

免疫磁珠法和荧光细胞分选法的区别

免疫磁珠法和荧光细胞分选法的区别

免疫磁珠法和荧光细胞分选法是生物技术领域中常用的细胞分选方法,在生物医学研究和临床诊断中发挥着重要作用。

它们在原理、应用范围、操作流程等方面存在着一定的差异。

本文将就免疫磁珠法和荧光细胞分选法的区别进行介绍和分析。

1.原理免疫磁珠法是利用免疫磁珠对目标细胞进行标记,通过磁场将标记的细胞分离出来的一种分选技术。

而荧光细胞分选法则是利用流式细胞仪对荧光标记的细胞进行分选,通过激光识别和排序,实现对目标细胞的分离。

2.应用范围免疫磁珠法主要应用于对大量样本进行处理和分选,例如从血液、组织等样本中分离出特定的细胞类型。

而荧光细胞分选法更适用于对多种标记物进行复杂的细胞分选,可以实现对多种目标细胞的高效分离。

3.操作流程免疫磁珠法的操作流程相对简单,主要包括磁珠标记、磁场分选、洗涤等步骤,整个过程较为快速。

而荧光细胞分选法需要流式细胞仪等专业设备的支持,操作相对复杂,需要进行细胞的荧光标记、仪器的调试和样本的分析等多个步骤。

4.分选效果免疫磁珠法可以实现对目标细胞的高效纯化,但在分选的灵活性和多参数分析方面受到一定的限制。

而荧光细胞分选法能够实现对多种标记物的同时识别和排序,分选效果更加准确和可靠。

总结来看,免疫磁珠法和荧光细胞分选法都有各自独特的优势和适用范围,科研和临床工作者可以根据具体的实验需求和条件选择合适的分选方法,以达到更好的研究和临床应用效果。

免疫磁珠法和荧光细胞分选法是在生物技术领域中被广泛应用的细胞分选方法。

它们在生物医学研究、临床诊断和药物研发等领域发挥着重要作用。

本文将继续深入探讨免疫磁珠法和荧光细胞分选法的运作原理、应用范围、操作流程以及分选效果等方面的差异。

5. 存活性在细胞分选过程中,细胞的存活性是一个非常重要的考量因素。

免疫磁珠法相对来说更有利于细胞的存活性,因为它的操作相对温和,不需要暴露于强光或激光的照射下。

相比之下,荧光细胞分选法需要使用流式细胞仪进行激光照射和高压气流来驱动细胞的流速,这可能会对细胞的存活性产生一定的影响。

免疫磁珠纯化蛋白的原理

免疫磁珠纯化蛋白的原理

免疫磁珠纯化蛋白的原理免疫磁珠(Immunomagnetic Bead,IMB)技术是一种利用特定性抗体偶联在磁性珠子表面,通过抗原抗体的非共价结合及磁性珠能够吸附在磁场作用下实现快速、高效及特异性纯化目标蛋白的技术。

这种技术的主要原理是基于抗原和抗体相互作用的原理。

1.免疫复合物的形成免疫磁珠通常是从大肠杆菌酸生产工艺中制备出的磁性颗粒,表面覆盖有可选择某个目标蛋白的特异性抗体。

在蛋白的样品中,这些特异性抗体可以与目标抗原进行结合形成免疫复合物。

2.免疫磁珠的捕获将免疫磁珠加入蛋白样品中,磁性作用会使免疫磁珠快速从样品中被吸附,而目标蛋白结合在免疫磁珠表面的特异性抗体上,形成免疫复合物。

3.洗涤通过旋转磁体或磁珠分离器将免疫复合物从未结合的物质中分离出来,并先后进行多次洗涤以去除非特异物质,减少背景干扰。

4.洗脱将诱导免疫复合物大幅度变形或破裂或降解的缓冲溶液添加到磁珠上,使得免疫磁珠上已捕获目标蛋白质离开免疫磁珠,从而得到纯净的目标蛋白样品。

免疫磁珠纯化蛋白是目前最广泛使用的纯化技术之一,具有以下优点:1、具有高选择性免疫磁珠可以与目标蛋白高度特异性地结合,减少了背景干扰,并最大程度上使目标蛋白净化能够得到升级。

2、易于蛋白高效、快速纯化采用免疫磁珠纯化技术可以轻松地处理大量的样本,并能够快速提取出高纯度的目标蛋白样品。

3、广泛应用范围免疫磁珠技术的应用范围非常广泛,可以应用于蛋白质、抗体、病毒、激素、细胞因子及其它不同种类的分子的纯化和富集。

免疫磁珠纯化蛋白已成为目前重要的实验手段之一,其应用范围已涉及到许多领域,如基因组学、蛋白质组学、生物制药等等。

例如,目标蛋白质的纯化可以用于表达纯化蛋白、生物分子分离、分析和定量测定、抗体制备、生物学研究、诊断检测及疫苗生产等。

在药物研发和生产过程中,也可以应用免疫磁珠技术对生物药物进行纯化和快速纯化。

此外,免疫磁珠技术还可以用于疾病诊断之类的测试。

免疫磁珠分离法原理与应用

免疫磁珠分离法原理与应用

免疫磁珠分离法原理与应用标题:免疫磁珠分离法:原理与应用引言:随着生物技术的快速发展,分离和纯化靶标蛋白成为许多研究人员和生物制药公司关注的重要领域。

在过去的几十年里,形形色色的方法被开发用于从复杂的混合物中纯化特定蛋白质。

其中一种高效且广泛应用的方法是免疫磁珠分离法。

本文将深入探讨免疫磁珠分离法的原理、优点、应用领域以及未来的发展趋势。

一、原理:免疫磁珠分离法是一种基于抗原-抗体相互作用的技术,通过免疫磁珠与靶标蛋白质之间的特异性结合,实现目标蛋白的高效分离和纯化。

其基本原理可以概括为以下几个步骤:1. 免疫反应:免疫磁珠是一种通过磁力控制的微米级磁性颗粒,表面覆盖着特异性抗体。

当样品与免疫磁珠混合时,抗体会与目标蛋白发生特异性结合,形成免疫复合物。

2. 磁珠分离:通过外加磁场,免疫磁珠可以被快速沉降到离心管底部,而其它非特异性成分则会在上清中保持。

这种磁珠分离的特异性和高效性使得目标蛋白质能够被有效地分离和纯化。

3. 洗脱:经过磁珠分离后,目标蛋白质与非特异性成分被分离,而磁珠上的目标蛋白则需要被洗脱下来。

这可以通过改变洗脱缓冲液的pH 值、离子浓度或添加特定的解离剂来实现。

二、优点:免疫磁珠分离法具有许多优点,使其成为生物制药和生物研究领域的重要工具。

以下是一些主要的优点:1. 高度特异性:由于抗体的特异性,免疫磁珠分离法可以实现对目标蛋白的高度特异性结合,从而减少非特异性结合的可能性。

2. 高效性:免疫磁珠分离法可以在短时间内实现目标蛋白的高效分离和纯化。

3. 可逆性:与其他分离方法不同,免疫磁珠分离法可以通过简单地改变外部条件来逆转目标蛋白与磁珠的结合,实现目标蛋白的洗脱和回收。

4. 可扩展性:免疫磁珠分离法可适用于从微量到大规模的样品处理。

三、应用领域:免疫磁珠分离法在多个研究领域和应用中发挥着重要作用。

以下是一些主要的应用领域:1. 生物制药:免疫磁珠分离法已被广泛应用于生物制药领域,用于纯化重组蛋白和单抗等生物药物。

免疫磁珠技术及其在食品微生物检测中的应用

免疫磁珠技术及其在食品微生物检测中的应用

免疫磁珠技术及其在食品微生物检测中的应用随着食品安全问题的不断突出,食品微生物检测成为了食品安全控制的重要环节。

传统的微生物检测方法存在着操作繁琐、检测时间长、检测灵敏度低等问题,难以满足现代食品安全监管的需求。

而免疫磁珠技术作为一种新兴的微生物检测方法,具有操作简单、检测时间短、检测灵敏度高等优点,被广泛应用于食品微生物检测中。

一、免疫磁珠技术的原理免疫磁珠技术是将磁性微珠与抗体结合,形成一种具有特异性的生物活性物质,对目标分子进行捕获和富集,从而实现对目标分子的快速检测。

其主要原理是利用磁性微珠的磁性特性,通过外加磁场的作用将目标分子富集于磁珠表面,再通过洗涤等步骤去除非特异性结合物质,最终通过检测磁珠上的信号来确定目标分子的存在与否。

二、免疫磁珠技术在食品微生物检测中的应用1.快速检测食品中的致病菌免疫磁珠技术可以用于快速检测食品中的致病菌,如大肠杆菌、沙门氏菌等。

通过将磁珠与特异性抗体结合,对目标菌进行富集和捕获,从而实现对食品中致病菌的快速检测。

该方法具有操作简单、检测时间短、检测灵敏度高等优点,能够大大提高食品检测的效率和准确性。

2.检测食品中的过敏原免疫磁珠技术也可以用于检测食品中的过敏原,如花生过敏原、鸡蛋过敏原等。

通过将磁珠与特异性抗体结合,对目标过敏原进行富集和捕获,从而实现对食品中过敏原的快速检测。

该方法具有检测灵敏度高、检测时间短、操作简单等优点,能够有效地避免食品中的过敏反应。

3.检测食品中的添加剂免疫磁珠技术还可以用于检测食品中的添加剂,如防腐剂、色素等。

通过将磁珠与特异性抗体结合,对目标添加剂进行富集和捕获,从而实现对食品中添加剂的快速检测。

该方法具有检测灵敏度高、检测时间短、操作简单等优点,能够有效地保障食品的安全性和质量。

三、结语免疫磁珠技术作为一种新兴的微生物检测方法,具有操作简单、检测时间短、检测灵敏度高等优点,被广泛应用于食品微生物检测中。

随着技术的不断发展和完善,相信免疫磁珠技术将会在食品安全监管中发挥更加重要的作用,为人们的健康保驾护航。

免疫磁珠技术及其在食品微生物检测中的应用

免疫磁珠技术及其在食品微生物检测中的应用

免疫磁珠技术及其在食品微生物检测中的应用随着食品安全问题的日益严重,对食品微生物检测的需求也越来越高。

传统的微生物检测方法存在着操作繁琐、时间长、灵敏度低等问题,因此需要开发一种更加快捷、准确的检测方法。

免疫磁珠技术作为一种新兴的分离和检测技术,具有操作简便、快速、灵敏度高等优点,在食品微生物检测中得到了广泛的应用。

一、免疫磁珠技术的原理及特点免疫磁珠技术是将磁性珠子与特异性抗体结合,通过磁性珠子的快速分离和富集目标微生物,从而实现对微生物的检测。

磁性珠子具有较强的磁性,可以通过外加磁场的作用来实现珠子与微生物的快速分离。

其特点是操作简单、快速、灵敏度高、重复性好、不受样品复杂性的影响,适用于多种样品类型和微生物种类的检测。

二、免疫磁珠技术在食品微生物检测中的应用1.肠道致病菌检测肠道致病菌是食品中最常见的致病微生物之一,其检测对于食品安全至关重要。

传统的肠道致病菌检测方法通常需要进行培养、分离、鉴定等多个步骤,耗时长且容易出现假阳性结果。

而免疫磁珠技术可以通过特异性的抗体富集目标微生物,避免了传统方法中的多个步骤,大大缩短了检测时间。

同时,免疫磁珠技术具有较高的灵敏度和特异性,可以检测到低浓度的微生物,并且不会产生假阳性结果。

2.食品中的真菌和酵母菌检测真菌和酵母菌是常见的食品污染源,其检测对于保障食品安全至关重要。

传统的真菌和酵母菌检测方法通常需要进行培养、分离、鉴定等多个步骤,耗时长且容易出现假阳性结果。

而免疫磁珠技术可以通过特异性的抗体富集目标微生物,避免了传统方法中的多个步骤,大大缩短了检测时间。

同时,免疫磁珠技术具有较高的灵敏度和特异性,可以检测到低浓度的微生物,并且不会产生假阳性结果。

3.食品中的病毒检测食品中的病毒是一种比较难以检测的微生物,其检测对于保障食品安全至关重要。

传统的病毒检测方法通常需要进行多个步骤,耗时长且容易出现假阳性结果。

而免疫磁珠技术可以通过特异性的抗体富集目标病毒,避免了传统方法中的多个步骤,大大缩短了检测时间。

免疫磁珠分离技术及应用

免疫磁珠分离技术及应用

免疫磁珠分离技术及应用一、前沿免疫磁珠分离技术(Immunomagnetic beads sep—aration techniques,IMB) 是将免疫学反应的高度特异性与磁珠特有的磁响应性相结合的一种新的免疫学技术;是一种特异性强、灵质纯化敏度高的免疫学检测方法和抗原纯化手段。

是近年来国内外研究较多的一种新的免疫学技术。

目前该项技术在细胞分离、蛋白、免疫学及微生物学检测等方面均取得了较大的进展,是目前最有推广价值的技术之一。

二、免疫磁珠分离技术介绍1、免疫磁珠分离技术原理利用人工合成的内含铁成分,可被磁铁磁力所吸引,外有功能基团,可结合活性蛋白质(抗体)的磁珠,作为抗体的载体。

当磁珠上的抗体与相应的微生物或特异性抗原物质结合后,则形成抗原-抗体-磁珠免疫复合物,这种复合物具有较高的磁响应性,在磁铁磁力的作用下定向移动,使复合物与其他物质分离,而达到分离、浓缩、纯化微生物或特异性抗原物质的目的。

2、免疫磁珠法分类⑴、阳性分离法磁珠结合的细胞就是所要分离获得的细胞⑵、阴性分离法磁珠结合不需要的细胞,游离于磁场的细胞为所需细胞。

一般而言,阴性分离法的磁珠用量比阳性分离法的大,阳性分离法用的更多。

磁性微珠是以金属离子为核心,外层均匀包裹高分子聚合体的固相颗粒。

磁性微珠上既可标记针对某种细胞表面抗原的特异性抗体(直接法); 也可标记羊抗鼠IgG抗体(间接法),使分离细胞的范围大大扩大。

3、免疫磁性微球的制备基本技术路线:制成磁性材料的微球,再在微球表面引入活性基团,通过载体表面偶联反应可将抗体结合到载体上,形成免疫磁性微球。

优质微载体的性能:合适且均一的磁响应强度,较小且均一的粒径,稳定均一、特异吸附的表面性能。

4、该技术的主要优点⑴、细小而均一的微球为配基与受体的反应提供了较大的接触面积⑵、磁珠的磁性使其可以用磁力收集器方便快速地获得分离,且对被分离物无损伤⑶、检测复杂的生物样本和食品样本等时受到颗粒性杂质等的影响较小⑷、作为一种流动性的固相支持物,其洗涤和反应都进行得更加充分三、免疫磁分离技术的应用1、用于细胞分离和提纯使用IMB进行分离细胞有两种方式;直接从细胞混合液中分离出靶细胞的方法,称为阳性分离;用免疫磁珠去除无关细胞,使靶细胞得以纯化的方法称为阴性分离。

磁珠免疫富集技术在蛋白质检测中的应用

磁珠免疫富集技术在蛋白质检测中的应用

磁珠免疫富集技术在蛋白质检测中的应用磁珠免疫富集技术是一种在蛋白质检测中广泛使用的方法。

该方法利用特定抗体与磁性珠子的结合,可以高效、快速地富集并纯化目标蛋白质分子。

本文将介绍磁珠免疫富集技术的基本原理和在蛋白质检测中的应用。

一、磁珠免疫富集技术的原理磁珠免疫富集技术通过在磁性珠子表面固定特定抗体,利用抗原与抗体的特异性结合,将目标蛋白质从复杂的生物样品中高效地富集出来。

该技术利用了磁性珠子的磁性质,使得在加磁场的作用下,磁珠可以被很方便地分离和洗涤。

同时,磁珠的大比表面积和高亲和性受体的多价结合,使得该技术具有高选择性和灵敏度。

二、磁珠免疫富集技术在蛋白质检测中的应用1. 蛋白质组学研究:磁珠免疫富集技术在蛋白质组学研究中扮演着重要的角色。

通过富集目标蛋白质,可以降低复杂样品的复杂度,提高蛋白质检测的灵敏度和特异性。

该技术在富集血浆中低丰度蛋白、标记蛋白组学和糖基化蛋白质组学等方面的应用广泛。

2. 蛋白质定量分析:磁珠免疫富集技术结合质谱分析,成为常用的蛋白质定量方法之一。

通过将目标蛋白质富集到磁珠上,可以消除样品中的干扰物质,提高检测灵敏度和准确性。

此外,该技术还可以用于生物标记物的探索和发现,对于疾病的早期诊断和治疗具有重要意义。

3. 蛋白质相互作用研究:磁珠免疫富集技术在蛋白质相互作用研究中发挥着重要作用。

通过将抗体固定在磁珠上,并结合共免疫沉淀、串联亲和纯化等技术,可以高效地富集并研究蛋白质复合物、信号通路和蛋白质结构等。

4. 转化医学研究:磁珠免疫富集技术在转化医学研究中具有广泛的应用前景。

通过富集和检测肿瘤标志物、细胞外囊泡和循环肿瘤细胞等,可以为肿瘤的早期诊断、治疗和预后评估提供重要依据。

此外,该技术还可以用于药物研发、基因治疗和个性化医疗等方面。

三、总结磁珠免疫富集技术作为一种高效、便捷的蛋白质检测方法,得到了广泛的应用。

它在蛋白质组学、蛋白质定量分析、蛋白质相互作用研究和转化医学研究等领域发挥着重要作用。

免疫磁珠分离技术专利

免疫磁珠分离技术专利

免疫磁珠分离技术专利免疫磁珠分离技术是一种基于抗原-抗体相互作用的分离技术,广泛应用于细胞分离、蛋白质纯化、核酸检测等领域。

该技术原理是将特异性抗体连接在磁珠上,通过抗原-抗体反应,将目标物质与磁珠结合,然后在磁场作用下,将结合了目标物质的特异性磁珠分离出来。

免疫磁珠分离技术具有简单、快速、高效、无污染等优点,已成为生物医学研究领域的重要工具。

近年来,全球范围内免疫磁珠分离技术的专利申请量逐年增加。

以下是关于免疫磁珠分离技术专利的简要概述:1. 专利申请数量根据检索数据,自2000年以来,全球范围内免疫磁珠分离技术专利申请量呈上升趋势。

尤其在2010年以后,专利申请数量快速增长,表明该技术领域的研究和应用取得了显著成果。

2. 专利申请人从专利申请人来看,国内外许多企业和研究机构均对免疫磁珠分离技术进行了研究开发,并申请了相关专利。

其中,部分专利申请人具有较强的研发实力和市场竞争力。

3. 专利技术分布免疫磁珠分离技术的专利涉及多个方面,包括磁珠制备、抗体修饰、目标物质检测、应用领域等。

其中,磁珠制备方面的专利较多,其次是抗体修饰和目标物质检测。

这些专利技术为免疫磁珠分离技术的发展提供了丰富的技术支持。

4. 专利地域分布免疫磁珠分离技术的专利地域分布较广,涉及美国、德国、日本、中国等多个国家。

其中,美国、德国和日本的专利数量较多,表明这些国家在免疫磁珠分离技术领域具有较强的研发实力和市场竞争力。

5. 发展趋势近年来,免疫磁珠分离技术的发展趋势主要体现在以下几个方面:(1)磁珠材料的研究与开发:新型磁珠材料的研究,如纳米磁珠、磁性纳米颗粒等,以提高磁珠的性能和应用范围。

(2)抗体修饰技术:开发新型抗体修饰方法,提高抗体与目标物质的结合能力和特异性。

(3)目标物质检测技术:结合荧光、酶联免疫吸附等检测技术,提高分离目标的检测灵敏度和准确性。

(4)应用领域的拓展:免疫磁珠分离技术在诊断、治疗、生物工程等领域的应用不断拓展,为临床研究和产业化应用提供支持。

免疫磁珠技术

免疫磁珠技术
免疫磁珠技术(IMB)在食品 有害微生物检测中的应用
目录
1
免疫磁珠技术简介
1.1
免疫磁珠的结构与性质 1.2 免疫磁珠技术
2
2.1
免疫磁珠技术的应用
IMB技术在食品有害微生物检测中的应用 2.2 免疫磁珠与其它检测手段的联用 2.3 免疫磁珠技术在其他领域的应用 2.4 免疫磁珠技术的优缺点及发展方向
6.洗涤:洗涤免疫磁珠混合物。重复上述步骤 4~ 6 。 7.重复上述步骤4 ~ 5 。 8.免疫磁珠悬浮:将免疫磁珠重新悬浮在100 μL PBS-Tween 20洗液中。 9.涂布平板:用漩涡混合器将免疫磁珠混匀,用加样 器各取50 μL免疫磁珠悬液分别转移至CT-SMAC平 板和改良CHROMagar O157弧菌显色琼脂平板一 侧,然后用无菌涂布棒将免疫磁珠涂布平板的一半 ,再用接种环划线接种平板的另一半。待琼脂表面 水分完全吸收后,翻转平板,于36℃士1 0℃培养18 h---24 h 。
1.1.2

免疫磁珠的性质
由于免疫磁珠的大小和形状具有均一性, 从而可使 靶物质迅速和有效地结合到磁珠上,也可使生成的 新复合物在磁场中具有相同的磁响应性,且行为一 致 磁珠的球形结构可消除与不规则形状粒子有关的非 特异性结合 顺磁性可使磁珠置于磁场时显示其磁性,并做定向 移动, 从磁场移出时磁性消除, 磁珠分散, 由此可 方便地进行分离和磁性导向 保护性壳可防止磁性内核漏出或被载液腐蚀; 免疫配基可特异性地结合反应体系中相应的抗原、 抗体、核酸等生物活性物质。
检样25g(mL)
对225mLFB1増菌液(30 ℃士1℃ ,24h士1h)
单 增 李 斯 特 菌 的 检 测 方 法
1mL转种10mL FB2増菌液( 35℃ ,24h士1h)

免疫磁珠方法分选细胞

免疫磁珠方法分选细胞

免疫磁珠方法分选细胞免疫磁珠(immunomagnetic beads)是一种通过特异性抗体与目标细胞表面的抗原结合来实现细胞分选的方法。

该方法结合了磁珠与免疫学相结合的优势,可以高效、精确地进行细胞的筛选和分离,广泛应用于细胞学研究、细胞工程和临床诊断等领域。

免疫磁珠法的原理是利用特定的抗体偶联在磁珠表面,通过与目标细胞表面的抗原结合实现细胞的识别和捕获。

首先,将免疫磁珠与样品中的混合细胞进行接触,磁珠上的抗体与目标细胞表面的抗原结合,从而实现细胞的选择性捕获。

随后,采用外部磁场将带有目标细胞的磁珠聚集在一起,将其与其他细胞分离。

分离后的目标细胞可以通过去除外部磁场或磁力悬浮的方法进行后续的研究或应用。

1.高选择性:不同细胞表面的抗原结构具有明显的差异,使得通过不同的抗体可以实现对目标细胞的高选择性捕获。

2.高灵敏度:由于免疫磁珠具有高亲和力的抗体,可以实现对低表达或稀有细胞的高灵敏度分选。

3.高纯度:通过采用特异性抗体和外部磁场的分离作用,可以将目标细胞与其他非目标细胞迅速、高效地分离,获得高纯度的目标细胞。

4.无毒性:相比其他分选方法(如流式细胞术),免疫磁珠方法对细胞的毒性极小,不会对细胞的功能和生理状态产生较大影响。

5.可应用范围广:免疫磁珠方法适用于各种不同类型的细胞,可以用于细胞学研究、细胞工程和临床诊断等领域。

1.抗体的选择性受限:免疫磁珠方法的分选效果高度依赖于抗体的选择性,抗体的亲和力和特异性都会影响分选的准确性和效率。

2.特异性抗体的获取困难:一些特定的抗原可能缺乏高亲和力和特异性的抗体,限制了免疫磁珠方法在一些特定领域的应用。

3.分选过程中细胞受到的机械刺激:外部磁场对细胞的施加可能会对细胞的形态、功能产生一定的影响,需要注意对分选细胞进行合适的处理以避免这种影响。

免疫磁珠方法在科研领域和临床应用中取得了显著的成果。

在细胞学研究中,免疫磁珠方法被广泛用于分离和纯化各类细胞亚群,并且可用于分析细胞表面标志物的表达和功能。

免疫磁珠技术缺点改进措施及建议

免疫磁珠技术缺点改进措施及建议

免疫磁珠技术缺点改进措施及建议
免疫磁珠技术作为一种重要的生物分离技术,确实存在一些缺点。

以下是一些常见的缺点、改进措施和建议。

1. 缺点:磁珠的非特异吸附。

改进措施:在选择磁珠时应选择具有高亲和力和特异性的抗体或亲和配体,以减少非特异吸附的问题。

此外,可以使用贴近磁珠表面化学修饰的方法,阻止非特异吸附的发生。

2. 缺点:磁珠易聚集。

改进措施:可以通过改变磁珠表面修饰的方法,使其表面带有电荷,减少磁珠之间的吸引力,从而减少聚集现象。

此外,可采用物理方法如超声波震荡来解散磁珠的聚集。

3. 缺点:磁珠回收率低。

改进措施:可以改进磁珠的制备方法,以提高其磁性和稳定性。

此外,也可以优化磁场的设计和操作条件,以提高磁珠的回收率。

4. 缺点:磁珠操作复杂。

改进措施:可以开发出更简洁、高效的操作方法和设备,以降低操作的复杂性和难度。

此外,提供详细的操作指南和培训,也可以帮助操作人员更好地掌握技术。

总而言之,免疫磁珠技术在不断发展中,尽管存在一些缺点,但通过改进措施和技术优化,可以提高其应用效率和可靠性。

免疫磁球技术的原理及应用

免疫磁球技术的原理及应用

免疫磁球技术的原理及应用1. 引言免疫磁球技术是一种基于免疫学和磁学原理的新型分析方法,它将免疫反应与磁性微球相结合,可以在生物样本中快速高效地检测目标物质。

本文将介绍免疫磁球技术的原理及其在医学、生物学领域的应用。

2. 原理免疫磁球技术的原理基于两个主要的概念:免疫反应和磁性微球。

2.1 免疫反应免疫反应是机体对抗外来物质入侵的一种重要机制。

当机体的免疫系统检测到外来抗原时,会产生相应的抗体来与其结合并进行特异性识别。

在免疫磁球技术中,将目标物质作为抗原与相应的抗体结合,形成特异性的抗原-抗体复合物。

2.2 磁性微球磁性微球是一种具有磁性的小颗粒,通常由聚合物或金属氧化物制成。

在免疫磁球技术中,磁性微球表面会涂覆抗体,形成具有特异性识别功能的磁性微球。

这些磁性微球可以通过外加磁场的作用在生物样本中快速分离和捕获目标物质。

3. 应用免疫磁球技术具有许多重要的应用,在医学和生物学领域发挥着重要作用。

3.1 临床诊断免疫磁球技术可以用于临床诊断,快速准确地检测各种疾病标志物。

例如,在肿瘤诊断中,可以使用特定抗体包裹的磁性微球来捕获肿瘤标志物,通过磁性分离和检测方法,可以实现对肿瘤的早期诊断和治疗监测。

3.2 药物传递免疫磁球技术可以用于药物传递系统的设计。

通过将药物负载到磁性微球上,并利用磁场的引导,可以实现对药物的靶向输送。

这种靶向输送系统可以减少药物的剂量和副作用,提高治疗效果。

3.3 生物分离和纯化免疫磁球技术可以用于生物样本中目标物质的分离和纯化。

通过将特定抗体包裹的磁性微球添加到样本中,目标物质可以与磁性微球结合,从而实现对其的快速分离和纯化。

这种方法可以大大提高分离和纯化的效率。

3.4 免疫学研究免疫磁球技术在免疫学研究中也有广泛的应用。

它可以用于研究细胞表面抗原的定位和表达,分析细胞间相互作用和信号传导等。

这种技术可以提供更准确和灵敏的分析手段,促进免疫学研究的发展。

4. 总结免疫磁球技术是一种结合免疫学和磁学原理的新型分析方法。

免疫磁珠分离技术(IMB)及应用

免疫磁珠分离技术(IMB)及应用

是将免疫学+细胞生物学+磁力学结合为一体,利用磁性微球表面功能基团
的专一亲和特性或多孔吸附特性吸附特定组分,然后用外力磁场作用将吸
附了特定物质的磁珠加以分离,再经过洗脱磁珠上吸附的目标物质的一种
新型分离技术,具有广泛的用途。
几种 DNA 分离方法的比较 Comparation of several DNA extraction methods
三 磁性微球的制备
磁性微球制备方法:共沉淀法、悬浮聚合 法、乳液聚合法、分散聚合法、包埋法及 原子转移自由基聚合法等。
1.共沉淀法
金属离子在碱性条件下与高分子共沉淀,一步反应生成磁性高分子微球的方法。 2Fe3++ Fe2++8OH→Fe3O4+4H2O
Pich[等先通过单体聚合反应得到PS-AAEM颗粒分散剂,再把配制好的Fe3+、Fe2+ 溶液加入聚苯乙烯(PS)-乙酰乙酸基甲基丙烯酸乙酯(AAEM)颗粒的分散剂中, 然后滴加NH3·H2O。Fe3O4 粒子在PS-AAEM 表面沉积,制得PS-AAEM为核心、 Fe3O4 粒子为壳层的磁性微球。微球的磁性能通过改变FeCl2 和FeCl3 的浓度或改变 PS-AAEM 核心的尺寸来控制。Xia 等把一定配比的FeCl2、FeCl3 与葡聚糖(dextran T-10)共混,然后滴加NH3·H2O,在超声连续作用下水浴加热,制得以Fe3O4 为 核、dextran 为壳的磁性微球。杨玉东等把一定配比的FeCl3·6H2O、FeCl2·6H2O 与配体(如二亚乙基三胺五乙酸(DTPA)或乙二氨四乙酸(EDTA)等)组成的 混合液体加入到75℃的葡聚糖T-10 溶液中,并快速滴加NH3·H2O,制备了葡聚糖 为壳、氧化铁为核的磁性微球。

免疫磁珠分离法

免疫磁珠分离法

免疫磁珠分离法一、概述免疫磁珠分离法是一种利用特定的抗体与目标分子结合后,通过磁珠的磁性作用将目标分子从混合物中分离出来的方法。

该方法具有操作简便、高效快速、无需特殊设备等优点,在生物医学领域得到广泛应用。

二、原理免疫磁珠分离法的原理基于抗原与抗体之间的特异性结合。

首先,将具有特异性的抗体固定在表面经过改性处理后的磁珠上,形成免疫磁珠。

然后将样品加入反应体系中,待抗体与目标分子结合后,通过外加磁场作用使得免疫磁珠与目标分子一起被吸附在反应管壁上,而其他非目标成分则被洗去。

最后通过改变环境条件(如pH值)或者使用洗脱缓冲液使得目标物从免疫磁珠上脱离下来。

三、步骤1. 免疫磁珠制备:将具有特异性的抗体固定在表面经过改性处理后的超顺磁性磁珠上,形成免疫磁珠。

2. 样品制备:将需要分离的样品进行处理,如细胞裂解、血清去除等。

3. 反应:将样品加入反应管中,加入免疫磁珠并充分混合反应。

4. 磁珠分离:通过外加磁场作用使得免疫磁珠与目标分子一起被吸附在反应管壁上,而其他非目标成分则被洗去。

5. 洗涤:使用洗脱缓冲液进行洗涤,去除非特异性结合的物质。

6. 洗脱:通过改变环境条件(如pH值)或者使用洗脱缓冲液使得目标物从免疫磁珠上脱离下来。

四、优点1. 高效快速:与其他常规方法相比,免疫磁珠分离法具有高效快速的特点,可在较短时间内完成大量样品的处理。

2. 特异性强:由于抗体具有高度特异性,因此该方法可对目标物进行高度选择性纯化和富集。

3. 操作简便:该方法无需特殊设备,操作简便,适合于实验室规模的研究。

4. 可重复性好:该方法具有良好的可重复性,可用于大规模的生产和制备。

五、应用1. 生物医学研究:该方法可用于分离和纯化蛋白质、细胞、细胞器等生物大分子,是生物医学研究中不可或缺的手段。

2. 临床诊断:该方法可用于临床诊断中对血清中的肿瘤标志物等进行检测和分析。

3. 生物制药:该方法可用于生物制药领域中对目标蛋白质进行纯化和富集。

免疫磁珠技术汇总.

免疫磁珠技术汇总.

1.2 免疫磁珠技术

免疫磁珠( immunomagnetic bead, IMB)技术: 是一种以特异的抗原抗体反应为基础的免疫学检测和 分离技术。它是以抗体包被的磁珠为载体,通过抗体 与反应介质中特异性抗原结合,形成抗原—抗体复合 物,此复合物在外加磁场的作用下发生定向移动,从 而达到分离抗原的目的。 基本原理:磁性微球经过一定处理后,可将抗体结合 到磁珠上,形成免疫磁性微球,免疫磁性微球的抗体与 特异性抗原结合形成抗原—微球复合物,该复合物在 磁场中具有与其它组分不同的磁响应性,在磁力作用 下,该复合物发生力学移动,从而达到分离抗原的目的。
3.结合:在18℃~30℃环境中,将上述Eppendorff管 连同磁板架放在Dynal MXl样品混合器上转动或用 手轻微转10 min,使E. coli O157与免疫磁珠充分 接触。 4.捕获:将磁板插人到磁板架中浓缩磁珠。在3 min 内不断地倾斜磁板架,确保悬液中与盖子上的免疫 磁珠全部被收集起来,此时,在Eppendorff管壁 中间明显可见圆形或椭圆形棕色聚集物。 5.吸取上清液:取1支无菌加长吸管,从免疫磁珠聚集 物对侧深人液面,轻轻吸走上清液。当吸到液面通 过免疫磁珠聚集物时,应放慢速度,以确保免疫磁 珠不被吸走。如吸取的上清液内含有磁珠,则应将 其放回到Eppendorff管中,并重复4步骤。每个样品 换用1支无菌加长吸管。

2.1.1 大肠杆菌O157的检测
传统分离E.coli O157∶H7所采用的直接分离 法存在着鉴别力差、抑制杂菌能力弱、耗时长、 工作量大等缺点。 采用免疫磁珠技术,能够快速地从各种食品样 品中分离富集E.coli O157∶H7,满足流行病学 的研究要求和提高控制力度。 现在这种免疫磁珠的方法已经被英国公共健 康服务实验室认定为标准的分离方法,我国也 已将免疫磁珠法对大肠杆菌O157的检测纳入 国家标准(GB/T 4789.36-2008)和出入境检 验检疫行业标准(SN/T 1059.5-2006)。

免疫磁珠法

免疫磁珠法

免疫磁珠法免疫磁珠法是一种基于免疫学原理的生物技术,被广泛应用于生物医学研究和临床诊断等领域。

该技术利用磁珠表面的特定抗体或亲和分子与目标分子结合,通过磁力将目标分子从复杂的生物样品中分离出来,从而实现对目标分子的快速、高效、准确的检测和分析。

一、免疫磁珠的制备免疫磁珠是一种具有磁性的微小颗粒,其表面覆盖着特定的抗体或亲和分子。

制备免疫磁珠的关键在于选择合适的抗体或亲和分子,并将其固定在磁珠表面上。

目前,主要的免疫磁珠制备方法包括交联剂法、生物素-亲和素法、化学交联法、共价交联法等。

在交联剂法中,首先将磁珠表面的羟基化,然后使用交联剂将抗体或亲和分子与磁珠表面交联。

生物素-亲和素法则是利用生物素和亲和素之间的高度特异性结合,将生物素标记在磁珠表面,然后利用亲和素将抗体或亲和分子与磁珠表面结合。

化学交联法则是利用化学反应将抗体或亲和分子与磁珠表面交联,共价交联法则是利用化学或光学方法将抗体或亲和分子与磁珠表面共价结合。

二、免疫磁珠法的原理免疫磁珠法的原理基于免疫学的抗原-抗体反应原理,即在免疫磁珠表面固定特定的抗体或亲和分子,使之与目标分子发生特异性结合,从而实现目标分子的分离和富集。

该技术的基本步骤包括样品处理、免疫磁珠结合、洗涤、分离和检测等。

在样品处理阶段,需要对样品进行前处理,如去除杂质、离心、稀释等。

在免疫磁珠结合阶段,将免疫磁珠与样品混合,通过磁力将免疫磁珠与目标分子结合。

在洗涤阶段,通过洗涤缓冲液将非特异性结合的物质去除,从而减少背景干扰。

在分离阶段,通过磁力将免疫磁珠与目标分子从复杂的生物样品中分离出来。

在检测阶段,通过特定的检测方法对目标分子进行定量或定性分析。

三、免疫磁珠法的应用免疫磁珠法是一种快速、灵敏、特异性高的生物技术,被广泛应用于生物医学研究和临床诊断等领域。

其主要应用包括:1. 蛋白质分离和富集:利用免疫磁珠法可以快速、高效地分离和富集目标蛋白质,从而实现对蛋白质的分析和研究。

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5.吸取上清液:取1支无菌加长吸管,从
6.洗涤:洗涤免疫磁珠混合物。重复上 述步骤 4~ 6 。
7.重复上述步骤4 ~ 5 。
8.免疫磁珠悬浮:将免疫磁珠重新悬浮 在100 μL PBS-Tween 20洗液中。
9.涂布平板:用漩涡混合器将免疫磁珠 混匀,用加样器各取50 μL免疫磁珠悬 液分别转移至CT-SMAC平板和改良 CHROMagar O157弧菌显色琼脂平板 一侧,然后用无菌涂布棒将免疫磁珠涂 布平板的一半,再用接种环划线接种平
免疫磁珠技术(IMB)在食品 有害微生物检测中的应用
目录
1 免疫磁珠技术简介
1.1 免疫磁珠的结构与性质 1.2 免疫磁珠技术
2 免疫磁珠技术的应用
2.1 IMB技术在食品有害微生物检测中的应用 2.2 免疫磁珠与其它检测手段的联用 2.3 免疫磁珠技术在其他领域的应用 2.4 免疫磁珠技术的优缺点及发展方向
1.免疫磁珠技术简介
1.1 免疫磁珠的结构与性质
1.1.1 免疫磁珠的结构 免疫磁珠(IMB), 也称免疫磁性
微球, 是一种均匀、具有超顺磁性及 保护性壳的球形小粒子,基本上由载体 微球和免疫配基结合而成。其核心为顺 磁性粒子,核心外层包裹一层高分子料, 最外层是免疫配基。
羟基(-
载体微球
菌落识别
在CT-SMAC平板上,典型菌落为不发酵山梨醇的圆形、光滑、 较小的无色菌落,中心呈现较暗的灰褐色;发酵山梨醇的菌落 为红色;在改CHROMagar O157弧菌显色琼脂平板上为圆形、 较小的菌落,中心呈淡紫色一紫红色,边缘无色或浅灰色。 初步生化试验:
在CT-SMAC和改良CHROMagar O157弧菌显色琼脂平板上 挑取5个~10个典型或可疑菌落,分别接种TSI琼脂,同时接种 MUG-LST肉汤,于36℃士1℃培养18 h~24 h。必要时进行氧 化酶试验和革兰氏染色。在TSI琼脂中,典型菌株为斜面与底 层均呈阳性反应呈黄色,产气或不产气,不产生硫化氢(H2S)。 置MUG-LST肉汤管于长波紫外灯下观察,无荧光产生者为阳 性结果,有荧光产生者为阴性结果;对分解乳糖且无荧光的菌 株,在营养琼脂平板上分纯,于36℃士1℃培养18 h~24 h,并 进行鉴定。
2.1.1 大肠杆菌O157的检测
传统分离E.coli O157∶H7所采用的直接分离 法存在着鉴别力差、抑制杂菌能力弱、耗时长、 工作量大等缺点。 采用免疫磁珠技术,能够快速地从各种食品样 品中分离富集E.coli O157∶H7,满足流行病学 的研究要求和提高控制力度。
现在这种免疫磁珠的方法已经被英国公共健 康服务实验室认定为标准的分离方法,我国也 已将免疫磁珠法对大肠杆菌O157的检测纳入国 家标准(GB/T 4789.36-2008)和出入境检验检 疫行业标准(SN/T 1059.5-2006)。
1.2 免疫磁珠技术
免疫磁珠( immunomagnetic bead, IMB) 技术:是一种以特异的抗原抗体反应为 基础的免疫学检测和分离技术。它是以 抗体包被的磁珠为载体,通过抗体与反 应介质中特异性抗原结合,形成抗原— 抗体复合物,此复合物在外加磁场的作 用下发生定向移动,从而达到分离抗原 的目的。
基本原理:磁性微球经过一定处理后,
2 .免疫磁珠技术的应用
2.1 食品有害微生物检测中的应用
免疫磁珠技术与常规检验方法相 比具有显著的优点,它能从样品 中迅速、有选择性地分离出目的 微生物,有效地减少了背景的干 扰,提高了精准性。
还能捕获受损伤的靶细菌,而目 前所用的几种常规方法则不具备 这样的能力。目前,免疫磁珠技 术已经广泛应用于食品样品中致
1.1.2 免疫磁珠的性质
由于免疫磁珠的大小和形状具有均一性, 从而可使靶物质迅速和有效地结合到磁 珠上,也可使生成的新复合物在磁场中 具有相同的磁响应性,且行为一致
磁珠的球形结构可消除与不规则形状粒 子有关的非特异性结合
顺磁性可使磁珠置于磁场时显示其磁性, 并做定向移动, 从磁场移出时磁性消 除, 磁珠分散, 由此可方便地进行分 离和磁性导向
磁性物质 O金H属),小
载体微球
高分子层 功能基
如亚乙聚使现疏水颗(3F、e聚胺烯醋其具水、粒F3Oe乙、醇酸表有非-2亲4O)烯聚、乙
免疫配基
免疫配基通过生物高分子的功能基团结合到 磁性载体微球上形成免疫磁珠。由于载体微 球制备材料和方法不同,其表现出的物理性 质也不同, 从而可结合不同的免疫配基, 如 抗原、抗体、凝集素、DNA 和RNA 等。配 基必须具有生物专一性的特点, 而且载体微 球与配基结合要不影响或改变配基原有的生 物学特性, 保证磁珠的特殊识别功能。
3.结合:在18℃~30℃环境中,将上述 Eppendorff管连同磁板架放在Dynal MXl样品混合器上转动或用手轻微转10 min,使E. coli O157与免疫磁珠充分接 触。
4.捕获:将磁板插人到磁板架中浓缩磁珠。 在3 min内不断地倾斜磁板架,确保悬 液中与盖子上的免疫磁珠全部被收集起 来,此时,在Eppendorff管壁中间明显 可见圆形或椭圆形棕色聚集物。
增菌
具体操作步骤
免疫磁珠捕获与分离
1.将Eppendorff管按样品和质控菌株进 行编号,每个样品使用1支Eppendorff 管,然后插人到磁板架上。在漩涡混合 器上轻轻振荡E. coli O157免疫磁珠溶 液后,用开盖器打开每支Eppendorff管 的盖子,每管加人20 μL E. coli 0157免 疫磁珠悬液。
GB/T 4789.36-2008 免疫磁珠捕获 法检测程序
↓ 36± 1oC 18h~24h
涂板CO检2L(挑个酶改5H1阳布和m样~取阴g非5MLR良1(7ESC改mO可性U0疫珠获弧3366CTE±±T个11LMooG良CC疑,-+C磁捕↓↓↓↓↓菌)1S81免-h8a+~h,n~242肉h4菌革h阴Mg2)显血↓↓氧a2汤A落兰,r色5C化m5氏琼平
大肠杆菌o157的检测
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