免疫磁珠技术PPT讲稿

• 菌落识别
在CT-SMAC平板上，典型菌落为不发酵山梨醇的圆形、光 滑、较小的无色菌落，中心呈现较暗的灰褐色;发酵山梨醇的 菌落为红色;在改CHROMagar O157弧菌显色琼脂平板上为 圆形、较小的菌落，中心呈淡紫色一紫红色，边缘无色或浅灰 色。 初步生化试验:
在CT-SMAC和改良CHROMagar O157弧菌显色琼脂平板 上挑取5个~10个典型或可疑菌落，分别接种TSI琼脂，同时 接种MUG-LST肉汤，于36℃士1℃培养18 h~24 h。必要时 进行氧化酶试验和革兰氏染色。在TSI琼脂中，典型菌株为斜 面与底层均呈阳性反应呈黄色，产气或不产气，不产生硫化氢 (H2S)。置MUG-LST肉汤管于长波紫外灯下观察，无荧光产 生者为阳性结果，有荧光产生者为阴性结果;对分解乳糖且无 荧光的菌株，在营养琼脂平板上分纯，于36℃士1℃培养 18 h~24 h，并进行鉴定。
• GB/T 4789.36-2008 免疫磁珠捕获
法检测程序 检样
25g(mL)+225mL改良EC肉汤（mEC+n），均质225mL
↓ 36± 1oC 18h~24h
免疫磁珠捕获
↓
涂布CT-SMAC平板和改良CHROMagar O157弧菌显色琼脂平板
↓ 36± 1oC
18h~24h
挑取可疑菌落5个~10个，氧化酶阴性，革兰氏阴性杆菌接种TSI
1.免疫磁珠技术简介
• 1.1 免疫磁珠的结构与性质
• 1.1.1 免疫磁珠的结构
免疫磁珠（IMB）， 也称免疫磁 性微球， 是一种均匀、具有超顺磁性 及保护性壳的球形小粒子，基本上由载 体微球和免疫配基结合而成。其核心为 顺磁性粒子，核心外层包裹一层高分子 料， 最外层是免疫配基。
• 载体微球
↓
MUG-LST
↓ 36± 1oC 18h~24h
阳性 非O157细菌
阴性
↓
血清学试验
↓
生化试验
↓
报告
• 增菌
具体操作步骤
• 免疫磁珠捕获与分离
1.将Eppendorff管按样品和质控菌株 进行编号，每个样品使用1支 Eppendorff管，然后插人到磁板架上。 在漩涡混合器上轻轻振荡E. coli O157 免疫磁珠溶液后，用开盖器打开每支 Eppendorff管的盖子，每管加人20 μL E. coli 0157免疫磁珠悬液。
1.2 免疫磁珠技术
• 免疫磁珠( immunomagnetic bead, IMB)
技术：是一种以特异的抗原抗体反应为基 础的免疫学检测和分离技术。它是以抗体 包被的磁珠为载体，通过抗体与反应介质 中特异性抗原结合，形成抗原—抗体复合物， 此复合物在外加磁场的作用下发生定向移 动，从而达到分离抗原的目的。
3.结合:在18℃~30℃环境中，将上述 Eppendorff管连同磁板架放在Dynal MXl样品混合器上转动或用手轻微转 10 min，使E. coli O157与免疫磁珠 充分接触。
4.捕获:将磁板插人到磁板架中浓缩磁 珠。在3 min内不断地倾斜磁板架，确 保悬液中与盖子上的免疫磁珠全部被收 集起来，此时，在Eppendorff管壁中 间明显可见圆形或椭圆形棕色聚集物。
1.1.2 免疫磁珠的性质
• 由于免疫磁珠的大小和形状具有均一性，
从而可使靶物质迅速和有效地结合到磁 珠上，也可使生成的新复合物在磁场中 具有相同的磁响应性，且行为一致
• 磁珠的球形结构可消除与不规则形状粒
子有关的非特异性结合
• 顺磁性可使磁珠置于磁场时显示其磁性，
并做定向移动， 从磁场移ห้องสมุดไป่ตู้时磁性消 除， 磁珠分散， 由此可方便地进行分 离和磁性导向
• 基本原理：磁性微球经过一定处理后,可将
2 .免疫磁珠技术的应用
2.1 食品有害微生物检测中的应用
• 免疫磁珠技术与常规检验方法相
比具有显著的优点，它能从样品 中迅速、有选择性地分离出目的 微生物，有效地减少了背景的干 扰，提高了精准性。
• 还能捕获受损伤的靶细菌，而目
前所用的几种常规方法则不具备 这样的能力。目前，免疫磁珠技 术已经广泛应用于食品样品中致
免疫磁珠技术课件
目录
• 1 免疫磁珠技术简介
• 1.1 免疫磁珠的结构与性质 • 1.2 免疫磁珠技术
• 2 免疫磁珠技术的应用
• 2.1 IMB技术在食品有害微生物检测中的应用 • 2.2 免疫磁珠与其它检测手段的联用 • 2.3 免疫磁珠技术在其他领域的应用 • 2.4 免疫磁珠技术的优缺点及发展方向
• 免疫配基
免疫配基通过生物高分子的功能基团结合到 磁性载体微球上形成免疫磁珠。由于载体微 球制备材料和方法不同，其表现出的物理性 质也不同， 从而可结合不同的免疫配基， 如 抗原、抗体、凝集素、DNA 和RNA 等。配 基必须具有生物专一性的特点， 而且载体微 球与配基结合要不影响或改变配基原有的生 物学特性， 保证磁珠的特殊识别功能。
5.吸取上清液:取1支无菌加长吸管，从
6.洗涤:洗涤免疫磁珠混合物。重复上 述步骤 4~ 6 。
7.重复上述步骤4 ~ 5 。
8.免疫磁珠悬浮:将免疫磁珠重新悬浮 在100 μL PBS-Tween 20洗液中。
9.涂布平板:用漩涡混合器将免疫磁珠 混匀，用加样器各取50 μL免疫磁珠悬 液分别转移至CT-SMAC平板和改良 CHROMagar O157弧菌显色琼脂平 板一侧，然后用无菌涂布棒将免疫磁珠 涂布平板的一半，再用接种环划线接种
2.1.1 大肠杆菌O157的检测
传统分离E.coli O157∶H7所采用的直接分离 法存在着鉴别力差、抑制杂菌能力弱、耗时长、 工作量大等缺点。 采用免疫磁珠技术，能够快速地从各种食品样 品中分离富集E.coli O157∶H7，满足流行病学 的研究要求和提高控制力度。
现在这种免疫磁珠的方法已经被英国公共健 康服务实验室认定为标准的分离方法，我国也 已将免疫磁珠法对大肠杆菌O157的检测纳入 国家标准（GB/T 4789.36-2008）和出入境检 验检疫行业标准(SN/T 1059.5-2006)。
磁性物质
金属小颗粒（Fe2O3、Fe3O4）
载体微球
高分子层
如聚乙烯亚胺、聚乙烯醇、聚醋酸乙 烯脂、聚丙烯酸、酶类、多糖（淀粉、 纤维素、葡聚糖、果胶等）、球蛋白 和牛血清白蛋白等，
功能基
如氨基(-NH2)、羧基(-COOH)、 羟基(-OH)，使其表现具有疏水亲水、非极性-极性、带正电荷-带 负电荷等不同的物理性质。