血清谷丙转氨酶测定设计实验ppt演示课件
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血清转氨酶的活性测定PPT课件
4
急性传染性肝炎、血清性肝炎、慢性肝炎活动 期、肝硬变代偿期、阻塞性黄疸、心肌梗死； 急性胰腺炎、胆囊炎、风湿活动性心脏病及一 些对肝脏有毒害的药物如安眠药、麻醉药、锑 剂、砷剂等均可使转氨酶活性升高。 转氨酶升高原因 肝细胞受损伤，使细胞内 酶泄露，进入血液，从而引起酶活性升高。 (转氨酶水平在0—40之间是正常的。)
7
实验操作步骤
1、绘制标准曲线 取5支试管，如下表加入试剂，绘制标
准曲线
8
试剂，mL 对照 丙酮酸标准液 0
1 0.15
2
3
4
0.3
0.45 0.6
ALT底物液 0.6
0.45
0.30 0.10 0
0.1mol/L磷酸盐缓冲液
0.1
0.1
0.1
0.1 0.1
丙酮酸毫克 1
丙氨酸转移酶活力单位/dl=
ALT底物
0.6
0
37 ℃水浴30min （酶促反应）
2，4 －二硝基苯肼 1.0
1.0
ALT底物 0
0.6
水浴20分钟后加入再加入0.4MNaOH溶液2 mL，混匀，10
min/室温，于500nm处测量光吸收值。根据标准曲线查出样品的 ALT活力单位
10
实验操作步骤
3、结果分析计算 按照标准曲线查出样品的酶活力单位数
-------------2.5
*
---0.1
*
100
加入上述试剂后，37 ℃水浴5min ,各管在加入2，4 －二硝基苯肼
溶液0.5 mL，混匀，水浴20min，再加入0.4MNaOH溶液2 mL，混匀， 于500nm处测量光吸收值。
9
实验操作步骤
2、血清ALT测定
急性传染性肝炎、血清性肝炎、慢性肝炎活动 期、肝硬变代偿期、阻塞性黄疸、心肌梗死； 急性胰腺炎、胆囊炎、风湿活动性心脏病及一 些对肝脏有毒害的药物如安眠药、麻醉药、锑 剂、砷剂等均可使转氨酶活性升高。 转氨酶升高原因 肝细胞受损伤，使细胞内 酶泄露，进入血液，从而引起酶活性升高。 (转氨酶水平在0—40之间是正常的。)
7
实验操作步骤
1、绘制标准曲线 取5支试管，如下表加入试剂，绘制标
准曲线
8
试剂，mL 对照 丙酮酸标准液 0
1 0.15
2
3
4
0.3
0.45 0.6
ALT底物液 0.6
0.45
0.30 0.10 0
0.1mol/L磷酸盐缓冲液
0.1
0.1
0.1
0.1 0.1
丙酮酸毫克 1
丙氨酸转移酶活力单位/dl=
ALT底物
0.6
0
37 ℃水浴30min （酶促反应）
2，4 －二硝基苯肼 1.0
1.0
ALT底物 0
0.6
水浴20分钟后加入再加入0.4MNaOH溶液2 mL，混匀，10
min/室温，于500nm处测量光吸收值。根据标准曲线查出样品的 ALT活力单位
10
实验操作步骤
3、结果分析计算 按照标准曲线查出样品的酶活力单位数
-------------2.5
*
---0.1
*
100
加入上述试剂后，37 ℃水浴5min ,各管在加入2，4 －二硝基苯肼
溶液0.5 mL，混匀，水浴20min，再加入0.4MNaOH溶液2 mL，混匀， 于500nm处测量光吸收值。
9
实验操作步骤
2、血清ALT测定
血清谷丙转氨酶测定设计实验
分光光度法的优点是准确度高、重复性好、操作简便等。
03 实验材料
CHAPTER
实验动物
健康成年小鼠
用于正常血清谷丙转氨酶水平的测定 。
肝损伤小鼠模型
通过给予一定剂量的化学物质或病毒 ，建立肝损伤模型，用于测定血清谷 丙转氨酶水平。
试剂和器材
血清采集管和分离胶
用于小鼠血清的采集和分离。
谷丙转氨酶试剂盒
血清谷丙转氨酶测定设计实验
• 实验目的 • 实验原理 • 实验材料 • 实验步骤 • 结果分析 • 实验结论
目录
CONTENTS
01 实验目的
CHAPTER
了解血清谷丙转氨酶测定的意义
• 谷丙转氨酶（Alanine Aminotransferase，简称ALT） 是肝细胞内的一种重要酶类，当 肝细胞受损时，ALT会释放到血 液中，导致血清ALT水平升高。 通过测定血清ALT水平，可以反 映肝细胞损伤的程度，对于肝脏 疾病的诊断、治疗和预后评估具 有重要意义。
数据分析
根据实验目的和数据结果，进行数 据分析，得出结论。
03
02
数据整理
将记录的数据进行整理，计算平均 值、标准差等统计指标。
结果报告
撰写实验报告，将实验结果和结论 呈现出来。
04
05 结果分析
CHAPTER
正常值范围
正常值范围
根据不同年龄和性别，血清谷丙转氨酶的正常值范围有所差异。通常，成人男性正常值为5-40 U/L，成人女性正 常值为5-35 U/L。
临床意义
结合受试者的临床资料，我们对谷丙转氨酶活性的变化进行了临床解释和评估。
对实验的评价与建议
实验优缺点
01
在本次实验中，我们总结出了实验的优点和不足之处。
03 实验材料
CHAPTER
实验动物
健康成年小鼠
用于正常血清谷丙转氨酶水平的测定 。
肝损伤小鼠模型
通过给予一定剂量的化学物质或病毒 ，建立肝损伤模型，用于测定血清谷 丙转氨酶水平。
试剂和器材
血清采集管和分离胶
用于小鼠血清的采集和分离。
谷丙转氨酶试剂盒
血清谷丙转氨酶测定设计实验
• 实验目的 • 实验原理 • 实验材料 • 实验步骤 • 结果分析 • 实验结论
目录
CONTENTS
01 实验目的
CHAPTER
了解血清谷丙转氨酶测定的意义
• 谷丙转氨酶（Alanine Aminotransferase，简称ALT） 是肝细胞内的一种重要酶类，当 肝细胞受损时，ALT会释放到血 液中，导致血清ALT水平升高。 通过测定血清ALT水平，可以反 映肝细胞损伤的程度，对于肝脏 疾病的诊断、治疗和预后评估具 有重要意义。
数据分析
根据实验目的和数据结果，进行数 据分析，得出结论。
03
02
数据整理
将记录的数据进行整理，计算平均 值、标准差等统计指标。
结果报告
撰写实验报告，将实验结果和结论 呈现出来。
04
05 结果分析
CHAPTER
正常值范围
正常值范围
根据不同年龄和性别，血清谷丙转氨酶的正常值范围有所差异。通常，成人男性正常值为5-40 U/L，成人女性正 常值为5-35 U/L。
临床意义
结合受试者的临床资料，我们对谷丙转氨酶活性的变化进行了临床解释和评估。
对实验的评价与建议
实验优缺点
01
在本次实验中，我们总结出了实验的优点和不足之处。
血清谷丙转氨酶.ppt
卡门氏(Karman)分光光度法的原理如下：
由于NADH在波长340nm处有特异的吸收峰，因此ALT的活性可
通过NADH的消失量，即根据340nm处光密度值的减少量间接作出定
量测定。ALT活性的K洲an氏单位的定义是：在分光光度法规定的
条件(karman分光光度计，25℃，340nm，光径1km)下，1毫升血清
电化学法 同位素法
二、酶活力单位及比活
酶的活力单位
U：特定条件下1min内将1μmol底物转化为产物
所需要的酶量。（国际单位）
临床可以用约定成熟的惯用单位表示。
比活
每毫克蛋白含有的E的活力单位数 U/mg蛋白
转换数
每秒每个酶分子转换底物的微摩尔数 μmol/s
ALT活性测定的方法很多，主要有两类：一是卡门氏(Karman) 分光光度法，二是比色测定法。
实验讨论
1. 为什么设定标准空白和测定空白？
2. E活性的表示方法有哪些？
3. E活性测定的原理是什么？
在终止酶反应后，呈色反应中不仅产物丙酮酸能与2，4-二硝基苯肼 形成苯腙而呈色，而且底物α-酮戊二酸也能反应而呈色，尽管二者在 500－520nm处光吸收有较大差异，但这种非特异性的呈色反应对测定结 果影响较大，所以比色法使用的底物浓度很低，与最适底物浓度相差甚 远。在两种底物浓度中尤显偏低的是α-酮戊二酸（2mmol/L）,在此浓度 下酶促反应只能达到最大反应速度65%左右，由于底物浓度的明显不足使 的酶促反应产生丙酮酸的量与酶活性间不能呈现良好的线性关系。2，4二硝基苯肼本身在碱性溶液中也能显色，为了降低空白读数，反应时不 得不使用较低的2，4-二硝基苯肼（1mmol/L）,相当于反应液中酮酸的浓 度（丙酮酸和α-酮戊二酸总浓度为2mmol/L）的1/2。按反应方程式，一 分子酮酸与一分子2，4-二硝基苯肼生成相应的苯腙，但至少有半量的酮 酸没有与2，4-二硝基苯肼作用，在酶反应后丙酮酸和α-酮戊二酸与2， 4-二硝基苯肼形成苯腙呈色存在着一个人们无法控制的机率问题，据信 这是赖氏法重复性差的主要原因。另外，2，4-二硝基苯肼浓度低也是使 显色反应的工作曲线弯曲的原因之一。
由于NADH在波长340nm处有特异的吸收峰，因此ALT的活性可
通过NADH的消失量，即根据340nm处光密度值的减少量间接作出定
量测定。ALT活性的K洲an氏单位的定义是：在分光光度法规定的
条件(karman分光光度计，25℃，340nm，光径1km)下，1毫升血清
电化学法 同位素法
二、酶活力单位及比活
酶的活力单位
U：特定条件下1min内将1μmol底物转化为产物
所需要的酶量。（国际单位）
临床可以用约定成熟的惯用单位表示。
比活
每毫克蛋白含有的E的活力单位数 U/mg蛋白
转换数
每秒每个酶分子转换底物的微摩尔数 μmol/s
ALT活性测定的方法很多，主要有两类：一是卡门氏(Karman) 分光光度法，二是比色测定法。
实验讨论
1. 为什么设定标准空白和测定空白？
2. E活性的表示方法有哪些？
3. E活性测定的原理是什么？
在终止酶反应后，呈色反应中不仅产物丙酮酸能与2，4-二硝基苯肼 形成苯腙而呈色，而且底物α-酮戊二酸也能反应而呈色，尽管二者在 500－520nm处光吸收有较大差异，但这种非特异性的呈色反应对测定结 果影响较大，所以比色法使用的底物浓度很低，与最适底物浓度相差甚 远。在两种底物浓度中尤显偏低的是α-酮戊二酸（2mmol/L）,在此浓度 下酶促反应只能达到最大反应速度65%左右，由于底物浓度的明显不足使 的酶促反应产生丙酮酸的量与酶活性间不能呈现良好的线性关系。2，4二硝基苯肼本身在碱性溶液中也能显色，为了降低空白读数，反应时不 得不使用较低的2，4-二硝基苯肼（1mmol/L）,相当于反应液中酮酸的浓 度（丙酮酸和α-酮戊二酸总浓度为2mmol/L）的1/2。按反应方程式，一 分子酮酸与一分子2，4-二硝基苯肼生成相应的苯腙，但至少有半量的酮 酸没有与2，4-二硝基苯肼作用，在酶反应后丙酮酸和α-酮戊二酸与2， 4-二硝基苯肼形成苯腙呈色存在着一个人们无法控制的机率问题，据信 这是赖氏法重复性差的主要原因。另外，2，4-二硝基苯肼浓度低也是使 显色反应的工作曲线弯曲的原因之一。
肝脏血清酶学检查PPT课件
05 肝脏血清酶学检查的发展趋势与展望
CHAPTER
新技术与新方法的研发与应用
自动化检测技术
提高检测效率，减少人为误差，实现大规模样本的快速检测。
生物传感器技术
灵敏度高、特异性强，可用于实时监测和早期诊断。
蛋白质组学和代谢组学技术
深入挖掘肝脏血清酶学标志物的潜在价值，发现新的诊断指标。
个性化诊疗与精准医学在肝脏血清酶学检查中的应用前景
02
通过比较不同疾病血清酶水平的 差异，可以为临床医生提供诊断 依据，有助于准确诊断肝脏疾病 。
治疗效果的监测与预后评估
通过定期检测肝脏血清酶学指标， 可以监测肝脏疾病的治疗效果。 如果治疗有效，血清酶水平通常
会逐如果血清 酶水平持续升高，可能表明疾病
重要性
肝脏血清酶学检查是肝脏疾病诊断的 重要手段之一，有助于早期发现肝脏 病变，评估疾病严重程度，指导治疗 方案选择和监测疾病进展。
肝脏血清酶的种类与功能
谷丙转氨酶（ALT）
谷草转氨酶（AST）
主要存在于肝细胞浆中，是反映肝细胞损 伤的敏感指标。
分布于肝、心、骨骼肌等组织，肝细胞损 伤时AST升高。
情严重性。
疗效监测
肝脏血清酶学检查可监 测疾病治疗的效果，评
估病情恢复情况。
筛查与预防
肝脏血清酶学检查可用 于肝脏疾病的筛查，提
高预防意识。
02 肝脏血清酶学检查的方法与步骤
CHAPTER
样本采集与处理
01
02
03
样本采集时间
通常在清晨空腹状态下采 集静脉血液样本。
样本处理
血液样本应尽快分离出血 清，避免溶血和污染。
进展或治疗效果不佳。
通过监测肝脏血清酶学指标的变 化，可以为临床医生提供依据， 调整治疗方案或预测患者的预后
血清谷丙转氨酶ALT(精)
光度。由测得的吸 A 光度在曲线上查得
试样溶液中待测组
分的浓度，最后计
算得到试样中待测
组分的含量。
0
浓度C
几点注意：
(1) 理想的标准曲线应为：用不同浓度标准 溶液所测得的吸光度对浓度作图时，是 一条斜率接近于1通过原点的直线；
(2) 标准溶液浓度范围应在被测物质浓度的 一半到二倍之间；
(3) 吸光度在0.05---1.0之间为宜。
A样 = KC样L
A标
KC标L
则：
C样 =
A样 A标
C标
2. 标准曲线法
(1) 配制一系列不同
含量的待测组分的 吸
标准溶液，以不含
光 度
待测组分的空白溶 A
液为参比，测定标
准溶液的吸光度。
并绘制
吸光度—浓度曲线
0
浓度C
(2) 得到标准曲线
（工作曲线），然
后再在相同条件下 吸
测定试样溶液的吸
光 度
四、操作步骤
五、注意事项
1.血清样品的测定需在显色后30分钟内完 成。
2.在血清中加入底物后，应准确记时。
பைடு நூலகம்
六、实验的结果
• 1.第一组同学绘制标准曲线 • 2.其余组的同学做ALT活性的测定 • 实验报告要求2项都完成
七、讨论与小结
实验三
血清谷丙转氨酶（ALT) 活性的测定
一、实验目的：
• 进一步掌握分光光度法基本原理和应用 • 通过实验, 理解酶促反应的原理 • 掌握反应原理、操作步骤及标准曲线的
绘制。
二、原 理
三、方法
分光光度法----标准曲线法
定量分析方法
1. 对比法
将标准与样品分别在相同条件下显色，测 定其吸光度。因是相同物质在相同条件下 测定，故可按下式计算出样品的浓度：
血清谷丙转氨酶测定设计实验ppt课件
注意事项
n 操作中加 0.4N NaOH液时，需以较慢速度 加入，并且边加边摇匀加快时则a一戊酮二 酸引起的发色增强。
n 本实验中各试剂加量都需要准确，并且要 注意控制条件，保温时间要严格
n 本法测定SGTP正常值为40单位以下。
实验讨论
n 分析实验误差产生的原因 n 血清GPT活性测定的意义
• 本实验是在碱性条件下，生成醌类化合物的量反 应丙酮酸的量，即反应了谷丙转氨酶的活性。
• 本法以lml血清与基质液在37℃，保温30分钟生 成2.5μg丙酮酸为谷丙转氨酶活性1单位
• 求酶活性单位的方法：
• 1、标准品对照法： 检品与标准丙酮酸液同样处
理呈色，进行比色，计算出酶活性单位。
• 2、标准曲线法： 取含待测物的一系列标准溶液，
作标准曲线，由标准曲线查得活性单位。
实验操作
一、标准品对照法
取试管4支，标号，按下表加试剂：
56℃放置5分钟。 加0.4N NaOH液5.0ml 慢慢加入 (约1分钟)，边加边混匀。
室温放置 30分钟，
测OD值，波长 520nm，用蒸馏水调零点。
各管混匀，放37℃水浴5分钟 然后各加呈色试剂0.5ml，混匀
实验题目
血清谷丙转氨酶 活性的测定
实验目的
n掌握谷丙转氨酶活性测定的 原理和方法
实验原理
l血清谷丙转氨酶作用于由丙氨酸及a一酮戊 二酸组成的基质。产生丙酮酸及谷氨酸
l血清加基液保温后产生丙酮酸的多少，即反 应出谷丙转氨酶活性的大小。
l丙酮酸与2，4-二硝基苯肼作用生成丙酮酸 二硝基苯腙，在酸性溶液中显黄色，在碱 性溶液中成醌型显棕红色。
56℃放置5分钟。
加0.4N NaOH液5.0ml 慢慢加入 (约钟)，边加边混匀
血清谷丙转氨酶alt的测定ppt演示课件
意义】
肝细胞中含ALT最丰富，因此当肝脏疾病致肝细 胞受损伤时，ALT即大量释放入血液，致使血清 中ALT活性增高。测定ALT是检查肝功能的重要 指标之一。ALT显著增高见于各种急性肝炎及药 物中毒性肝细胞坏死，中等程度增高见于肝癌、 肝硬化、慢性肝炎及心肌梗塞，轻度增高则见于 阻塞性黄疸及胆道炎等疾病。骨骼肌损伤、多发 性肌炎亦可引起转氨酶活性升高。
血清谷—丙转氨酶活性的 测定（改良赖氏法）
1
【目的要求】 1.掌握血清谷丙转氨酶活性测定的基本原理。 2.熟悉血清谷丙转氨酶活性测定的具体操作
方法。 3.了解血清谷丙转氨酶活性测定的临床意义。
2
【实验原理】 血清中的谷-丙转氨酶（ALT），在37℃、
pH7.4的条件下，可催化基质（底物）液中 的丙氨酸与α-酮戊二酸生成谷氨酸和丙酮酸：
5
取干净试管12支，按下表所示标号，要求各S管和U管进行双管平行操 作。先做对照管和测定管，在30min保温期间再做空白管和标准管。
6
【实验结果】 1.赖氏法测定ALT的标准曲线(即计量反应曲线) 在
坐标纸上以上表中An－A 0之值为纵坐标，相应的 酶活性的卡门氏单位为横坐标作图，即得赖氏法 测定ALT的标准曲线 2.标本中ALT活性结果 ⑴查标准曲线 利用测定所得的吸光度结果(AU－ AB)，便可从标准曲线上查得标本的ALT结果 ⑵计算 将实验测得的AU－AB 、AS 代入下面计 算公式，即可算得标本中ALT活性
7
【方法评价 】 ALT活性测定主要有两类。一是卡门氏（Karman）
分光光度法，测定的是酶促反应速率。其原理如 下： 由于NADH在波长340nm处有特异吸收峰，因此 ALT的活性可通过NADH的减少量，亦即通过 340nm吸光度的减少量间接作出定量测定。这一 方法特异性、准确性高。但是此法除要加入待测 酶ALT的底物外，还需要加入指示酶LDH及其辅 酶NADH，又需用紫外分光光度计，因此不易为 一般临床化验室推广。
肝细胞中含ALT最丰富，因此当肝脏疾病致肝细 胞受损伤时，ALT即大量释放入血液，致使血清 中ALT活性增高。测定ALT是检查肝功能的重要 指标之一。ALT显著增高见于各种急性肝炎及药 物中毒性肝细胞坏死，中等程度增高见于肝癌、 肝硬化、慢性肝炎及心肌梗塞，轻度增高则见于 阻塞性黄疸及胆道炎等疾病。骨骼肌损伤、多发 性肌炎亦可引起转氨酶活性升高。
血清谷—丙转氨酶活性的 测定（改良赖氏法）
1
【目的要求】 1.掌握血清谷丙转氨酶活性测定的基本原理。 2.熟悉血清谷丙转氨酶活性测定的具体操作
方法。 3.了解血清谷丙转氨酶活性测定的临床意义。
2
【实验原理】 血清中的谷-丙转氨酶（ALT），在37℃、
pH7.4的条件下，可催化基质（底物）液中 的丙氨酸与α-酮戊二酸生成谷氨酸和丙酮酸：
5
取干净试管12支，按下表所示标号，要求各S管和U管进行双管平行操 作。先做对照管和测定管，在30min保温期间再做空白管和标准管。
6
【实验结果】 1.赖氏法测定ALT的标准曲线(即计量反应曲线) 在
坐标纸上以上表中An－A 0之值为纵坐标，相应的 酶活性的卡门氏单位为横坐标作图，即得赖氏法 测定ALT的标准曲线 2.标本中ALT活性结果 ⑴查标准曲线 利用测定所得的吸光度结果(AU－ AB)，便可从标准曲线上查得标本的ALT结果 ⑵计算 将实验测得的AU－AB 、AS 代入下面计 算公式，即可算得标本中ALT活性
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【方法评价 】 ALT活性测定主要有两类。一是卡门氏（Karman）
分光光度法，测定的是酶促反应速率。其原理如 下： 由于NADH在波长340nm处有特异吸收峰，因此 ALT的活性可通过NADH的减少量，亦即通过 340nm吸光度的减少量间接作出定量测定。这一 方法特异性、准确性高。但是此法除要加入待测 酶ALT的底物外，还需要加入指示酶LDH及其辅 酶NADH，又需用紫外分光光度计，因此不易为 一般临床化验室推广。
血清ALT标准曲线法课件
车即得出所求浓度值，如图13；
13. 如图输入公式 “=31.46*B11-0.0897”, 回
车即得出所求浓度值，如图13；
14. 下拉即可得出其他值，如图14。
正常值=0～38 U/L单位
❖【临床意义】
❖ 肝细胞中含ALT最丰富，因此当肝脏疾病致肝细胞 受损伤时，ALT即大量释放入血液，致使血清中 ALT活性增高。测定ALT是检查肝功能的重要指标 之一。ALT显著增高见于各种急性肝炎及药物中毒 性肝细胞坏死，中等程度增高见于肝癌、肝硬化、 慢性肝炎及心肌梗塞，轻度增高则见于阻塞性黄 疸及胆道炎等疾病。骨骼肌损伤、多发性肌炎亦 可引起转氨酶活性升高。
❖ 【思考题】
❖ 1.血清中谷丙转氨酶的测定有何临床意义？
❖ 2.血清谷丙转氨酶的测定有何注意点？
谢谢！
丙酮酸标准液的制备和样品测定
加入物(mL)
空白管 标准1 标准2 标准3 标准4 标准5 测定管
校准品
0 0.05
0.1 0.15
0.2 0.25
丙氨酸氨基转移酶基质 液
0.5 0.45
0.4 0.35
10.点击“确定”，标准曲线画好，如图10：
11.计算回归方程：点击趋势线（也就是标准曲线）然后 按右键，选趋势线格式，在显示公式和显示R平方值
（直线相关系数）前点一下，勾上。如图11：
12.点击“确定”，公式和相关系数都出来了。如图12：
13. 如图输入公式 “=31.46*B11-0.0897”, 回
【如何用excel制作标准曲线】
1.先作出标准曲线: 测出标准溶液的A值及待测溶液的A值, 输入excel(B列所示), 输入对应的标准溶液浓度, 如图1:
2. 选好两列数值,点取”图表向导”按钮(如图 1),先在图表类型中选“XY散点图”，并选图表
13. 如图输入公式 “=31.46*B11-0.0897”, 回
车即得出所求浓度值，如图13；
14. 下拉即可得出其他值，如图14。
正常值=0～38 U/L单位
❖【临床意义】
❖ 肝细胞中含ALT最丰富，因此当肝脏疾病致肝细胞 受损伤时，ALT即大量释放入血液，致使血清中 ALT活性增高。测定ALT是检查肝功能的重要指标 之一。ALT显著增高见于各种急性肝炎及药物中毒 性肝细胞坏死，中等程度增高见于肝癌、肝硬化、 慢性肝炎及心肌梗塞，轻度增高则见于阻塞性黄 疸及胆道炎等疾病。骨骼肌损伤、多发性肌炎亦 可引起转氨酶活性升高。
❖ 【思考题】
❖ 1.血清中谷丙转氨酶的测定有何临床意义？
❖ 2.血清谷丙转氨酶的测定有何注意点？
谢谢！
丙酮酸标准液的制备和样品测定
加入物(mL)
空白管 标准1 标准2 标准3 标准4 标准5 测定管
校准品
0 0.05
0.1 0.15
0.2 0.25
丙氨酸氨基转移酶基质 液
0.5 0.45
0.4 0.35
10.点击“确定”，标准曲线画好，如图10：
11.计算回归方程：点击趋势线（也就是标准曲线）然后 按右键，选趋势线格式，在显示公式和显示R平方值
（直线相关系数）前点一下，勾上。如图11：
12.点击“确定”，公式和相关系数都出来了。如图12：
13. 如图输入公式 “=31.46*B11-0.0897”, 回
【如何用excel制作标准曲线】
1.先作出标准曲线: 测出标准溶液的A值及待测溶液的A值, 输入excel(B列所示), 输入对应的标准溶液浓度, 如图1:
2. 选好两列数值,点取”图表向导”按钮(如图 1),先在图表类型中选“XY散点图”，并选图表
血清谷丙转氨酶测定.pptx
使用方法
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4 722分光光度计使用方法及注意事项
注意事项
1 手持比色杯磨砂面，比色杯光面对准光路。 2 比色杯内液体体积占总体积2/3，比色杯外壁不可有液体，
则需擦镜纸沾去。
3 与比色杯由下向上所放位置对应，仪器所报数据顺序则由1-5。
第16页/共19页
5 思考题
1
实验操作中第一次37 ℃保温30分钟和第二次37 ℃保 温20分钟，各有什么意义？
以蒸馏水校正零点，测定各管相应吸光度值。
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4 722分光光度计使用方法及注意事项
使用方法
1 接通电源前，检查仪器部件是否完好，工作电压是否正常。 2 接通电源打开暗箱盖，进入光度测量界面。选择 GOTO λ 测定
的波长（520nm）。（见图）
3 将比色杯内放好空白液（蒸馏水）、标准液、标准空白液、测定液、 测定空白液，置于比色池中（由下向上的顺序放置）。（见图）
CH COOH
S CH3
＋CH2
(CH2)2 COOH CH2
谷氨酸
CH丙NH酮2 酸
COOH
丙酮酸 ＋ 2,4－二硝基苯肼 (黄色)
NaOH
COOH
丙酮酸二硝基苯腙
(红棕色)
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2 酶活性测定原理与方法
酶活性测定方法
试管号
标准管
丙酮酸标准液（ml）
0.1
(1ml=100μg)
1
新鲜血清（ml）
1 实验目的
1 掌握血清谷丙转氨酶活性测定的原理 2 熟悉血清谷丙转氨酶活性测定的方法 3 熟悉比色分析法 4 了解722分光光度计的使用方法
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2 酶活性测定原理与方法
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4 722分光光度计使用方法及注意事项
注意事项
1 手持比色杯磨砂面，比色杯光面对准光路。 2 比色杯内液体体积占总体积2/3，比色杯外壁不可有液体，
则需擦镜纸沾去。
3 与比色杯由下向上所放位置对应，仪器所报数据顺序则由1-5。
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5 思考题
1
实验操作中第一次37 ℃保温30分钟和第二次37 ℃保 温20分钟，各有什么意义？
以蒸馏水校正零点，测定各管相应吸光度值。
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4 722分光光度计使用方法及注意事项
使用方法
1 接通电源前，检查仪器部件是否完好，工作电压是否正常。 2 接通电源打开暗箱盖，进入光度测量界面。选择 GOTO λ 测定
的波长（520nm）。（见图）
3 将比色杯内放好空白液（蒸馏水）、标准液、标准空白液、测定液、 测定空白液，置于比色池中（由下向上的顺序放置）。（见图）
CH COOH
S CH3
＋CH2
(CH2)2 COOH CH2
谷氨酸
CH丙NH酮2 酸
COOH
丙酮酸 ＋ 2,4－二硝基苯肼 (黄色)
NaOH
COOH
丙酮酸二硝基苯腙
(红棕色)
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2 酶活性测定原理与方法
酶活性测定方法
试管号
标准管
丙酮酸标准液（ml）
0.1
(1ml=100μg)
1
新鲜血清（ml）
1 实验目的
1 掌握血清谷丙转氨酶活性测定的原理 2 熟悉血清谷丙转氨酶活性测定的方法 3 熟悉比色分析法 4 了解722分光光度计的使用方法
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2 酶活性测定原理与方法
血清丙氨酸氨基转移酶活力的测定PPT课件
【试剂】
5．1.0mmol/L 2，4-二硝基苯肼溶液 称取2，4-二硝基苯 肼（AR）19.8mg，溶于1.0mol/L盐酸100ml，置棕色玻 璃瓶中，室温中保存，若冰箱保存可稳定2个月。若有结 晶析出，应重新配制。 6．0.4mol/L NaOH溶液 称取NaOH 1.6g溶解于蒸馏水中， 并加蒸馏水至100ml，置具塞塑料试剂瓶内，室温中可长 期稳定。 7．2.0mmol/L丙酮酸标准液 准确称取丙酮酸钠（AR） 22.0mg，置于100ml容量瓶中，加0.05mol/L硫酸至刻度。 此液不稳定，应临用前配制。丙酮酸不稳定，开封后易变 质（聚合），相互聚合为多聚丙酮酸，需干燥后使用。 8．待测标本 病人血清或质控血清。
（以蒸馏水代替血清，其它和对照管同样操作）。所以， 成批标本测定时，一般不需要每份标本都作自身血清对照 管，以试剂空白管代替即可，但对超过正常值的血清标本 应进行复查。严重脂血、黄疸及溶血血清可引起测定的吸 光度增高；糖尿病酮症酸中毒病人血中因含有大量酮体， 能和2，4-二硝基苯肼作用呈色，也会引起测定管吸光度 增加。因此，检测此类标本时，应作血清标本对照管。
【计算】
• 测定管吸光度减去样本对照管吸光度的 差值为标本的吸光度。该值在校正曲线上查 得ALT的卡门氏单位
【参考范围】
•
血清ALT：5～25卡门氏单位
临床意义
ALT在肝细胞中含量较多，且主要存在于肝细 胞的可溶性部分。当肝脏受损时，此酶可释放入 血，致血中该酶活性浓度增加，故测定ALT常作 为判断肝脏受损指标。
【操作步骤】
1 . 标准曲线的绘制：取试管5支，按表操作。
编号
0
1
2
3
4
0.1mol/L磷
0.10
谷丙转氨酶医学生生化学习PPT课件
连续监测法测定ALT
ALT测定中存在二个副反应 血清中存在的α-酮酸（如丙酮酸）能消耗 NADH。 血清中谷氨酸脱氢酶（GLDH）增高时，在有 氨存在条件下，亦能消耗NADH。 上述副反应都能消耗NADH，使测定结果偏高。 但在双试剂法，因温育期长，能有效消除干 扰反应。
赖氏法测定ALT
连续监测法测定AST
L-门冬氨酸+α-酮戊二酸 AST 草酰乙酸+L-谷氨 酸 草酰乙酸+NADH+ MOH L-苹果酸+NAD+ 340nm连续测定NADH被氧化为NAD+，从而计算出酶 的活力。 在AST双试剂测定中，首先使血清与缺少α-酮戊二 酸的底物溶液混合，37℃保温5分钟，将样品中所 含的α-酮酸消耗完，然后，加入α-酮戊二酸启动 ALT的催化反应，在波长340nm处连续监测吸光度的 下降速率，根据线性反应期吸光度的下降速率，本 计算ALT的活性浓度。
连续监测法测定AST
连续监测法测定AST的误差可来自内源性和 外源性，内源性干扰主要来源于血清中高浓 度丙酮酸和L-谷氨酸脱氢酶（GLDH）。外源 性干扰来自于试剂中污染的GLDH和AST。内 源性丙酮酸的干扰通过加入高活性的LDH在 温育期间将其迅速转变为乳酸而消除。血清 中的GLDH能催化α-酮戊二酸 和NH3生成谷 氨酸，同时使NADH氧化为NAD&#的肝脏损害，如心功能不全时， 肝淤血导致肝小叶中央带细胞的萎缩或坏死， 可使ALT、AST明显升高，某些化学药物如异 菸肼、氯丙嗪、苯巴比妥、四氯化碳、砷剂 等可不同程度的损害肝细胞，引起ALT的升 高。
连续监测法测定ALT
L-丙氨酸+α-酮戊二酸 ALT α-丙酮酸+L-谷氨酸 α-丙酮酸+NADH+ LD 乳酸+NAD+ 340nm连续测定NADH被氧化为NAD+，从而计算出酶 的活力。 在ALT双试剂测定中，首先使血清与缺少α-酮戊二 酸的底物溶液混合，37℃保温5分钟，将样品中所 含的α-酮酸消耗完，然后，加入α-酮戊二酸启动 ALT的催化反应，在波长340nm处连续监测吸光度的 下降速率，根据线性反应期吸光度的下降速率，本 计算ALT的活性浓度。
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11
实验讨论
分析实验误差产生的原因 血清GPT活性测定的意义
12
个人观点供参考，欢迎讨论！
实验题目
血清谷丙转氨酶 活性的测定
1
实验目的
掌握谷丙转氨酶活性测定的 原理和方法
2
实验原理
血清谷丙转氨酶作用于由丙氨酸及a一酮戊 二酸组成的基质。产生丙酮酸及谷氨酸
血清加基液保温后产生丙酮酸的多少，即 反应出谷丙转氨酶活性的大小。
丙酮酸与2，4-二硝基苯肼作用生成丙酮酸 二硝基苯腙，在酸性溶液中显黄色，在碱 性溶液中成醌型显棕红色。
。
8
各管混匀，放37℃水浴5分钟
然后各加呈色试剂0.5ml，混匀
56℃放置5分钟。
加0.4N NaOH液5.0ml 慢慢加入（约1分钟），边加边混匀
室温放置 30分钟
测定OD值, 波长 520nm，用蒸馏水调零点。
9
一标准对照法 １.原始数据记录
实验结果
2、公式计算酶活性单位（要求带入数据，写出结果） 二、标准曲线法 １.原始数据记录
液，作标准曲线，由标准曲线查得活性单位。
4
实验操作
一、标准品对照法
取试管4支，标号，按下表加试剂：
5
56℃放置5分钟。 加0.4N NaOH液5.0ml 慢慢加入（约1分钟），边加边混匀。
室温放置 30分钟，
测OD值，波长 520nm，用蒸馏水调零点。
6
计算
（ODA-ODB）
X （待测样品丙酮酸含量）
=
（ODs-ODs＇）
50ug/ml × 0.1 ml
X
=
（ODA-ODB） ×5
（ODs-ODs＇）
SGPT单位=
（ODA-ODB） （ODs-ODs＇×）5
0.1 × 2.5
（ODA-ODB）
ห้องสมุดไป่ตู้
= （ODs-ODs＇） × 20
7
二、标准曲线法
配制一系列不同浓度的标准丙酮酸液，并且各加以适量的基质液， 作成标准曲线。具体做法如下表。
2、绘制标准曲线，（要求规范作图）
3、通过方法一的ODA-ODB，在标准曲线中，查得酶活性单位
10
注意事项
操作中加 0.4N NaOH液时，需以较慢速 度加入，并且边加边摇匀加快时则a一戊酮 二酸引起的发色增强。
本实验中各试剂加量都需要准确，并且要 注意控制条件，保温时间要严格
本法测定SGTP正常值为40单位以下。
3
• 本实验是在碱性条件下，生成醌类化合物的量反 应丙酮酸的量，即反应了谷丙转氨酶的活性。
• 本法以lml血清与基质液在37℃，保温30分钟生 成2.5μg丙酮酸为谷丙转氨酶活性1单位
• 求酶活性单位的方法：
• 1、标准品对照法：检品与标准丙酮酸液同样处
理呈色，进行比色，计算出酶活性单位。
• 2、标准曲线法：取含待测物的一系列标准溶
实验讨论
分析实验误差产生的原因 血清GPT活性测定的意义
12
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实验题目
血清谷丙转氨酶 活性的测定
1
实验目的
掌握谷丙转氨酶活性测定的 原理和方法
2
实验原理
血清谷丙转氨酶作用于由丙氨酸及a一酮戊 二酸组成的基质。产生丙酮酸及谷氨酸
血清加基液保温后产生丙酮酸的多少，即 反应出谷丙转氨酶活性的大小。
丙酮酸与2，4-二硝基苯肼作用生成丙酮酸 二硝基苯腙，在酸性溶液中显黄色，在碱 性溶液中成醌型显棕红色。
。
8
各管混匀，放37℃水浴5分钟
然后各加呈色试剂0.5ml，混匀
56℃放置5分钟。
加0.4N NaOH液5.0ml 慢慢加入（约1分钟），边加边混匀
室温放置 30分钟
测定OD值, 波长 520nm，用蒸馏水调零点。
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一标准对照法 １.原始数据记录
实验结果
2、公式计算酶活性单位（要求带入数据，写出结果） 二、标准曲线法 １.原始数据记录
液，作标准曲线，由标准曲线查得活性单位。
4
实验操作
一、标准品对照法
取试管4支，标号，按下表加试剂：
5
56℃放置5分钟。 加0.4N NaOH液5.0ml 慢慢加入（约1分钟），边加边混匀。
室温放置 30分钟，
测OD值，波长 520nm，用蒸馏水调零点。
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计算
（ODA-ODB）
X （待测样品丙酮酸含量）
=
（ODs-ODs＇）
50ug/ml × 0.1 ml
X
=
（ODA-ODB） ×5
（ODs-ODs＇）
SGPT单位=
（ODA-ODB） （ODs-ODs＇×）5
0.1 × 2.5
（ODA-ODB）
ห้องสมุดไป่ตู้
= （ODs-ODs＇） × 20
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二、标准曲线法
配制一系列不同浓度的标准丙酮酸液，并且各加以适量的基质液， 作成标准曲线。具体做法如下表。
2、绘制标准曲线，（要求规范作图）
3、通过方法一的ODA-ODB，在标准曲线中，查得酶活性单位
10
注意事项
操作中加 0.4N NaOH液时，需以较慢速 度加入，并且边加边摇匀加快时则a一戊酮 二酸引起的发色增强。
本实验中各试剂加量都需要准确，并且要 注意控制条件，保温时间要严格
本法测定SGTP正常值为40单位以下。
3
• 本实验是在碱性条件下，生成醌类化合物的量反 应丙酮酸的量，即反应了谷丙转氨酶的活性。
• 本法以lml血清与基质液在37℃，保温30分钟生 成2.5μg丙酮酸为谷丙转氨酶活性1单位
• 求酶活性单位的方法：
• 1、标准品对照法：检品与标准丙酮酸液同样处
理呈色，进行比色，计算出酶活性单位。
• 2、标准曲线法：取含待测物的一系列标准溶