实验六植物组织中总糖和还原糖含量的测定(DNS法)20111017

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5、数据处理与问题
• 5.1、计算浓度
还原糖浓度100 10 3 还原糖含量 100 % 1 总糖浓度100 10 3 0.9 总糖含量 100 % 1
• 5.2、本实验的注意事项？
• 预习实验102.1酵母醇脱氢酶的提纯
3,5-二硝基水杨酸法标准曲线
1.8 1.6 1.4 y = 1.6159x - 0.0121 2 R = 0.9989
浓度（mg/ml）
1.2 1 0.8 0.6 0.4 0.2 0 -0.2 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2
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葡萄糖标准曲线（DNS法）
3.3、糖含量测定方法
物理法
相对密度法 折光法 旋光法
直接滴定法 还原糖法
(改良的兰—爱农法）
高锰酸钾法
萨氏法
化学法
碘量法
3，5—二硝基水杨酸
酚—硫酸法 比色法
蒽酮法
半胱氨酸—咔唑法
纸色谱 薄层色谱 色谱法 GC HPLC β—半乳糖脱氢酶测半乳糖、乳糖 酶法 葡萄糖氧化酶测葡萄糖 发酵法 ——测不可发酵糖 重量法——测果胶、纤维素、膳食纤维素
4、操作步骤
4.1、制定标准曲线
管号 0 1 2 3 4 5
标准葡萄糖溶液/mL
蒸馏水/mL DNS试剂/mL
0
1.0 2.0
0.2
0.8 2.0
0.4Baidu Nhomakorabea
0.6 2.0
0.6
0.4 2.0
0.8
0.2 2.0
1.0
0 2.0
沸水浴中准确煮沸5min，取出，用自来水冷却至室温 蒸馏水/mL 葡萄糖浓度/mg/mL A540 9.0 0 9.0 0.2 9.0 0.4 9.0 0.6 9.0 0.8 9.0 1.0
物，3,5-二硝基水杨酸(黄色）则被还原为棕红色
的3-氨基-5-硝基水杨酸。在一定范围内，还原糖
的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用
分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对
标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖
的含量。
• 由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加
入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。
实验六、植物组织中总糖和 还原性糖含量的测定
1、实验目的
• 掌握总糖和还原糖含量的测定方法
• 学习总糖和还原糖提取的方法
2、实验重点和难点
• 利用3,5-二硝基水杨酸法测定还原糖含量的
实验原理
• 多糖在酸性加热条件下会降解为还原糖
3、实验原理
3.1、还原糖的概念
• 指含有游离的半缩醛（酮）基糖。单糖都是还原 糖；某些二糖是还原糖（如麦芽糖、乳糖等）； 多糖多为非还原糖。 • 葡萄糖分子中含有游离醛基，果糖分子中含有游 离酮基，乳糖和麦芽糖分子中含有游离的醛基， 故它们都是还原糖。
10mL6MHCl
冷却,用 I2-KI检测 沸水浴0.5h NaOH中和, 加水定容 到100mL
4.3、用3,5-二硝基水杨酸法测还原糖、 总糖含量
管号 样液/mL 水 DNS试剂/mL 空白对照 0 1.0 2.0 还原糖 样液管 1.0 0 2.0 总糖样液管 1.0 0 2.0
沸水浴中准确煮沸5min，取出，用自来水冷却至室温 蒸馏水/mL 9.0 9.0 9.0
3.2、3,5-二硝基水杨酸比色法
• 总糖的提取及双、多糖的酸水解。利用糖的溶解 度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分 别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用 酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定， 再分别求出样品中还原糖和总糖的含量。
• 还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产
4.2、植物组织中总糖与还原糖溶液的获取
(1)还原糖：
1g土豆 取滤液作为还 原糖提取液 混匀,过滤
3mL水
研成匀浆 冷却定到 100mL
30mL水冲研 钵2-3次
三角瓶中 50℃水浴0.5h
(2)总糖：
1g土豆 取滤液作为 总糖提取液 混匀,过滤
3mL水
研成匀浆
12mL水冲研 钵2-3次
三角瓶中