生物大分子的分离与制备2013概要
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2018/11/16
2.植物材料：
选材：注意植物品种和生长发育状况不同，其 中所含生物大分子的量变化很大，另外与季节性关 系密切。 种子须泡胀或粉碎才可使用。 含油脂较多的也要进行脱脂处理。 a.提取核DNA：选用黄化苗（生长7－10天小麦， 水稻），防止叶绿体DNA的干扰 b.提取RNA：根据实验目的选用生长幼嫩组织为 好。 保存：冷冻采样后尽快放于－4℃――20℃冰箱 内。 DNA,RNA 采样后，N2速冻，至－70℃冰箱。对 2018/11/16 RNA样，如不立即使用，冷冻保存尤为重要。
的过程。 生物大分子制备物的均一性（即纯度）的 鉴定，要求达到一维电泳一条带，二维电 泳一个点，或HPLC和毛细管电泳都是一个 峰。 产物的浓缩，干燥和保存。
2018/11/16
生物大分子分离纯化的一般步骤和原则
层析法
电泳法
生物组织→ →提取液→ →粗产品→ 超离心法 透析和超滤 │←前处理→│ ←粗分级→ │ ← 细分级 →│ →结晶
3 、微生物
为制备生命大分子物质的主要材料之一。
用离心法收集到的上清液， 可用于制备胞外酶和某些辅基等有效成分； 可置低温下短时间贮存。 收集到的菌体，经破细胞处理后则可从中提取其他有 效成分； 或制成冻干粉，在4℃保存(数月不会变质)。
2018/11/16
第二节 细胞的破碎
胞外物质——直接提取
生物化学研究技术方法
• 生物化学研究技术：
– 分离技术：沉淀、吸附、膜分离（过滤、透析等）、 离心、层析、电泳等； – 分析检测技术：电泳、层析、光谱、质谱、电化学技 术、分子标记等。 – 分子生物学研究技术：基因重组、分子杂交、 PCR 与 反转录、核酸测序、免疫技术、生物芯片等等。
2018/11/16
生物化学分离方法与一般的化学分离方法相比， 有下列几个特点：
•
生物材料组成非常复杂。其中包括数百种甚至数 千种化合物，并且在分离过程中，这些化合物仍 在发生代谢变化，如蛋白质和核酸的水解。 有些化合物的含量极微，如激素等。
许多具有生物活性的物质一旦离开活体，很易 变变性破坏，因此常选用比较温和的条件进行制 备。 生化分离制备几乎都在溶液中进行，影响因素 很多，实验方法经验性较强。
依据原理
•材料选择与处理 •细胞破碎（机械破 碎、溶账和自溶、 酶解、化学处理）
2018/11/16
•盐析（硫酸铵盐析） •等点电沉淀 •有机溶剂沉淀 •离心
• 分子大小 • 溶解度 • 电荷性质 • 吸附性质 • 生物亲和
注意事项
基本原则：防止生物分子变性、降解 1．控制适当的pH 2．控制低温
用。如系大规模生产时，可用电动研磨法。细菌和
植物组织的细胞破碎均可用此法。
2018/11/16
(2) 组织捣碎器法： （大量样品） 用捣碎器(转速8000-10000r/m)处理30-45s可 将植物和动物细胞完全破碎。如用其破碎酵母菌和 细菌的细胞时，须加入石英砂才有效。 在捣碎期间必须保持低温，捣碎的时间不易太 长，以防温度升高引起有效成分变性。现在多用细 胞破碎仪。
胞内物质——破坏细胞壁或细胞膜后提取
细胞破碎的主要方法： 机械破碎 溶胀和自溶 化学处理：如丙酮、氯仿、甲苯、SDS等
生物酶降解
2018/11/16
细胞破碎技术
破碎方式 机械法 非机械法
固体剪切 作用 压榨
液体剪切 作用 高 压 匀 浆 超 声 破 碎
干燥 处理 酶溶法
溶胞 作用 化学法 物理法
珠磨法
2018/11/16
2018/11/16 5
生物化学研究技术方法
经典的研究步骤：
– 分离生化组分（细胞器 和生物分子）； – 分析生化组分的结构； – 分析生化组分的功能和 代谢（合成与分解）及 其相互作用。
2018/11/16
2018/11/16 6
生命现象
改 造 利 用
分离
生化组分
分析
1、结构与性质 2、功能 3、代谢及其细胞调控
理。
2018/11/16
2018/11/16 4
生物化学研究技术方法
生物化学研究的方法：
– 观察：生命现象 – 分离：未知蛋白组分，新基因片段，新的次生代谢物。 （抽提、过滤、离心、色谱） – 分析：
• 结构与性质（序列分析，X- 射线晶体衍射，核磁共 振，波谱，质谱等） • 功能（实验设计与方法） • 代谢及其细胞调控 • 改造及利用
2018/11/16
(4) 压榨法： 是一种温和、彻底破碎细胞的方法。用30MPa 左右的压力迫使几十毫升细胞悬液通过一个小孔 (＜细胞直径的孔)，致使其被挤破、压碎。 (5) 冻融法： 将细胞置低温下冰冻一定时间，然后取出置室 温下(或40℃左右)迅速融化。如此反复冻融多次， 细胞可在形成冰粒和增高剩余胞液盐浓度的同时， 发生溶胀、破碎。
2018/11/16 7
生物化学研究技术方法
•
研究技术的选择：？？？
– 实验的目的：定性分析与定量分析；
– 分离或分析物的物理化学性质； – 研究技术的精确性、准确性及检测限； – 研究成本；
– 潜在的风险与危害。
2018/11/16
2018/11/16 8
生物分子的结构与功能分析：
1. 蛋白质结构分析 2. 酶活力检测 3. 蛋白质组学分析 4. DNA序列分析 5. 聚合酶链反应（PCR）6. 分子杂交 7. 基因克隆 8. 基因组文库构建 9. cDNA文库构建 10. 文库筛选 11. 报告基因检测 12. 基因芯片 13. 基因敲除 14. RNAi 15. 转基因动物
3．注意提取过程中的溶液环境
4．防止提纯过程中丟失一些辅助因子或亚基
2018/11/16
第一节：生物材料的选择
选择生物材料的原则：有效成分含量多，稳定性好；来源
丰富，保持新鲜；提取方法简单；有综合利用价值等。 生物材料一般可以分为两大类：天然生物材料和人工生物 材料。 生物材料一般是指在自然界易采集的、目的物含量较高的 生物个体、器官或组织。
2018/11/16
生物大分子 的提取与制备
2018/11/16
引
言
生物化学研究的三个主要发展阶段：
– 叙述生物化学阶段（1770～1903 年）。又称为静态或形态生 物化学，研究内容以分析生物体内物质的化学组成、性质和含 量为主。 – 动态生物化学阶段（1903～1950 年）。又称为生理化学。主 要研究生物体内组成物质的化学变化及相互转变。 – 功能或分子生物化学阶段（ 1950 年至今）。研究生命的本质 和奥秘：运动、神经、内分泌、生长、发育、繁殖等的分子机
JY92-II D超声波 细胞粉碎机
2018/11/16
超声波破碎的适用范围
超声波破碎是很强烈的破碎方法，适用于多数 微生物的破碎。 一般杆菌比球菌易破碎，G-细菌比G+细菌易破 碎，对酵母菌的效果较差。 但超声波产生的化学自由基团能使某些敏感性 活性物质失活。 超声波破碎的有效能量利用率极低 由于对冷却的要求相当苛刻，所以不易放大， 但在实验室小规模细胞破碎中常用。
人工生物材料又分为三种：
1、 新品种材料 2、组织培养材料
3、生物产品与生物制品材料
2018/11/16
要了解的生物大分子的物理、化学性质主要有： 在水和各种有机溶剂中的溶解性。 在不同温度、 pH 值和各种缓冲液中生物大分子 的稳定性。 固态时对温度、含水量和冻干时的稳定性。 各种物理性质：如分子的大小、穿膜的能力、带 电的情况、在电场中的行为、离心沉降的表现、 在各种凝胶、树脂等填料中的分配系数。 其他化学性质：如对各种蛋白酶、水解酶的稳定 性和对各种化学试剂的稳定性。 对其他生物分子的特殊亲和力。
2018/11/16
超声波破碎的机理： 一般认为在超声波作用下液体发生空化作用 （cavitation), 液体中局部空穴的形成、增大和闭合产生极大 的冲击波和剪切力，引起的粘滞性旋涡在细胞上造 成了剪切力，使细胞内液体发生流动，从而使细胞 破碎。 操作过程产生大量的热，需在冰水或外部冷却 的容器中进行。
2018/11/16
生物大分子相互作用分析:
• 生化反应过程实际上是生物分子间的相互作 用过程。生物大分子间的相互作用是它们的 功能基础。随着分子生物学研究的进展，建 立了一系列研究核酸及蛋白质相互作用的技
术。
2018/11/16
生物大分子相互作用分析技术:
1. 2. 3. 4. 凝胶阻滞分析法 DNA酶Ⅰ足纹分析法 蛋白质芯片 酵母双杂交系统筛选相互作用蛋 白质
效果：作用强烈，但活性 物质易受破坏 操作：低温、短时。
2018/11/16
(3) 超声波法： 借助声波的震动力破碎细胞壁和细胞器的有效 方法。多用于微生物细胞的破碎，一般输出功率 100-200W，破碎时间3—15min。如果在细胞悬浮液 中加石英砂则可缩短时间。 为了防止电器长时间运转产生过多的热量，常 采用间歇处理和降低温度的方法进行。 超声波的细胞破碎效率与细胞种类、浓度和超 声波的声频、声能有关。
2018/11/16
第一章 生物大分子的分离纯化
蛋白质（酶）、核酸存在于一切生物体中，是 非常重要的生物大分子。 蛋白质是生物功能的执行者，担负着生物催化、
物质运输、运动、防御、调控及记忆、识别等
多种生理功能； 核酸是遗传信息的携带者，在生物体中指导各 种蛋白质的合成。
2018/11/16
研磨
2018/11/16
细胞破碎方法及其原理
通过机械运动产生的剪切 力，使组织、细胞破碎。
通过各种物理因素的作用， 使组织、细胞的外层结构破 坏，而使细胞破碎。 通过各种化学试剂对细胞 膜的作用，而使细胞破碎 通过细胞本身的酶系或外 加酶制剂的催化作用，使 细胞外层结构受到破坏， 而达到细胞破碎
机械破碎 物理破碎
现代生化技术概论
教师：王爱英 副研究员 生命科学学院
邮箱：495684278@qq.com
2018/11/16 1
课程要求
平时成绩占30%，包括考勤、课前提问10 分；要求每位同学准备笔记本，记好每堂 课的笔记，占20分。 期末考试占到70%，其中包括名词解释， 填空，简答题，分析及其叙述题 借阅相关的书籍资料进行预习以及复习， 奠定好基础。 课程讲述以专题的形式，涉及相关的实验 技术以及生物化学与分子生物学相关技术 的发展。
捣碎法 研磨法 匀浆法 超声法 温度差破碎法 压力差破碎法 有机溶剂： 表面活性剂： 酸碱 自溶法 外加酶制剂法
化学破碎
酶促破碎
2018/11/16
1. 机械破碎：
(1) 研磨法（小量样品）
剪碎的动物组织如鼠肝、兔肝等置研钵中，用
研磨棒研碎。为了提高研磨效果，可加入一定量的 石英砂。用匀浆器处理，也能破碎动物细胞。此法 较温和，适宜实验室使用。 但加石英砂时，要注意其对有效成分的吸附作
1、动物组织
• 保存：对预处理好的材料，若不立即进行实验， 应冷冻保存。 a.冰冻：剥去脂肪和筋皮等结缔组织，短期保存： －10℃的冰箱内； 长期保存：－70℃低温冰箱 内。 b.干燥：对于像脑垂体一类小组织，可置丙酮液 中脱水，干燥后磨粉储存备用；对于含耐高温有 效成分（如：肝素）的肠粘膜，可在沸水蒸煮处 理，烘干后能长期保存。 冰箱的除霜循环，可能对細胞造成伤害，要特 別小心。解冻時要越快越好，但避免局部過熱。
2018/wk.baidu.com1/16
制备生物大分子的分离纯化方法多种多样， 主要是利用它们之间特异性的差异，如分子 的大小、形状、酸碱性、溶解性、溶解度、 极性、电荷和与其他分子的亲和性等。
2018/11/16
1.动物组织：
选材：必须选择有效成分含量丰富且易分离的 脏器组织为原材料。单酯酶，从含量看，虽然在胰 脏、肝脏和脾脏中较丰如磷酸富，但是因其与磷酸 二酯酶共存，进行提纯时，这两种酶很难分开。所 以实践中常选用含磷酸单酯酶少，但几乎不含磷酸 二酯酶的前列腺作材料。 脱脂：脏器中含量较高的脂肪，容易氧化酸败， 导致原料变质影响纯度操作和制品的率。 常用的脱脂方法有：人工剥去脏器外的脂肪组织； 浸泡在脂溶性的有机溶剂（丙酮，乙醚）中脱脂； 采用快速加热（50℃左右），快速冷却的方法，使 溶化的油滴冷却后凝聚成油块而被除去。 2018/11/16
2018/11/16
生物大分子的制备通常可按以下步骤进行：
确定要制备的生物大分子的目的和要求，
是进行科研、开发还是要发现新的物质。 建立相应的可靠的分析测定方法，这是制 备生物大分子的关键。 通过文献调研和预备性实验，掌握生物大 分子目的产物的物理化学性质。
2018/11/16
生物材料的破碎和预处理。 分离纯化方案的选择和探索，这是最困难
2.植物材料：
选材：注意植物品种和生长发育状况不同，其 中所含生物大分子的量变化很大，另外与季节性关 系密切。 种子须泡胀或粉碎才可使用。 含油脂较多的也要进行脱脂处理。 a.提取核DNA：选用黄化苗（生长7－10天小麦， 水稻），防止叶绿体DNA的干扰 b.提取RNA：根据实验目的选用生长幼嫩组织为 好。 保存：冷冻采样后尽快放于－4℃――20℃冰箱 内。 DNA,RNA 采样后，N2速冻，至－70℃冰箱。对 2018/11/16 RNA样，如不立即使用，冷冻保存尤为重要。
的过程。 生物大分子制备物的均一性（即纯度）的 鉴定，要求达到一维电泳一条带，二维电 泳一个点，或HPLC和毛细管电泳都是一个 峰。 产物的浓缩，干燥和保存。
2018/11/16
生物大分子分离纯化的一般步骤和原则
层析法
电泳法
生物组织→ →提取液→ →粗产品→ 超离心法 透析和超滤 │←前处理→│ ←粗分级→ │ ← 细分级 →│ →结晶
3 、微生物
为制备生命大分子物质的主要材料之一。
用离心法收集到的上清液， 可用于制备胞外酶和某些辅基等有效成分； 可置低温下短时间贮存。 收集到的菌体，经破细胞处理后则可从中提取其他有 效成分； 或制成冻干粉，在4℃保存(数月不会变质)。
2018/11/16
第二节 细胞的破碎
胞外物质——直接提取
生物化学研究技术方法
• 生物化学研究技术：
– 分离技术：沉淀、吸附、膜分离（过滤、透析等）、 离心、层析、电泳等； – 分析检测技术：电泳、层析、光谱、质谱、电化学技 术、分子标记等。 – 分子生物学研究技术：基因重组、分子杂交、 PCR 与 反转录、核酸测序、免疫技术、生物芯片等等。
2018/11/16
生物化学分离方法与一般的化学分离方法相比， 有下列几个特点：
•
生物材料组成非常复杂。其中包括数百种甚至数 千种化合物，并且在分离过程中，这些化合物仍 在发生代谢变化，如蛋白质和核酸的水解。 有些化合物的含量极微，如激素等。
许多具有生物活性的物质一旦离开活体，很易 变变性破坏，因此常选用比较温和的条件进行制 备。 生化分离制备几乎都在溶液中进行，影响因素 很多，实验方法经验性较强。
依据原理
•材料选择与处理 •细胞破碎（机械破 碎、溶账和自溶、 酶解、化学处理）
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•盐析（硫酸铵盐析） •等点电沉淀 •有机溶剂沉淀 •离心
• 分子大小 • 溶解度 • 电荷性质 • 吸附性质 • 生物亲和
注意事项
基本原则：防止生物分子变性、降解 1．控制适当的pH 2．控制低温
用。如系大规模生产时，可用电动研磨法。细菌和
植物组织的细胞破碎均可用此法。
2018/11/16
(2) 组织捣碎器法： （大量样品） 用捣碎器(转速8000-10000r/m)处理30-45s可 将植物和动物细胞完全破碎。如用其破碎酵母菌和 细菌的细胞时，须加入石英砂才有效。 在捣碎期间必须保持低温，捣碎的时间不易太 长，以防温度升高引起有效成分变性。现在多用细 胞破碎仪。
胞内物质——破坏细胞壁或细胞膜后提取
细胞破碎的主要方法： 机械破碎 溶胀和自溶 化学处理：如丙酮、氯仿、甲苯、SDS等
生物酶降解
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细胞破碎技术
破碎方式 机械法 非机械法
固体剪切 作用 压榨
液体剪切 作用 高 压 匀 浆 超 声 破 碎
干燥 处理 酶溶法
溶胞 作用 化学法 物理法
珠磨法
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2018/11/16 5
生物化学研究技术方法
经典的研究步骤：
– 分离生化组分（细胞器 和生物分子）； – 分析生化组分的结构； – 分析生化组分的功能和 代谢（合成与分解）及 其相互作用。
2018/11/16
2018/11/16 6
生命现象
改 造 利 用
分离
生化组分
分析
1、结构与性质 2、功能 3、代谢及其细胞调控
理。
2018/11/16
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生物化学研究技术方法
生物化学研究的方法：
– 观察：生命现象 – 分离：未知蛋白组分，新基因片段，新的次生代谢物。 （抽提、过滤、离心、色谱） – 分析：
• 结构与性质（序列分析，X- 射线晶体衍射，核磁共 振，波谱，质谱等） • 功能（实验设计与方法） • 代谢及其细胞调控 • 改造及利用
2018/11/16
(4) 压榨法： 是一种温和、彻底破碎细胞的方法。用30MPa 左右的压力迫使几十毫升细胞悬液通过一个小孔 (＜细胞直径的孔)，致使其被挤破、压碎。 (5) 冻融法： 将细胞置低温下冰冻一定时间，然后取出置室 温下(或40℃左右)迅速融化。如此反复冻融多次， 细胞可在形成冰粒和增高剩余胞液盐浓度的同时， 发生溶胀、破碎。
2018/11/16 7
生物化学研究技术方法
•
研究技术的选择：？？？
– 实验的目的：定性分析与定量分析；
– 分离或分析物的物理化学性质； – 研究技术的精确性、准确性及检测限； – 研究成本；
– 潜在的风险与危害。
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2018/11/16 8
生物分子的结构与功能分析：
1. 蛋白质结构分析 2. 酶活力检测 3. 蛋白质组学分析 4. DNA序列分析 5. 聚合酶链反应（PCR）6. 分子杂交 7. 基因克隆 8. 基因组文库构建 9. cDNA文库构建 10. 文库筛选 11. 报告基因检测 12. 基因芯片 13. 基因敲除 14. RNAi 15. 转基因动物
3．注意提取过程中的溶液环境
4．防止提纯过程中丟失一些辅助因子或亚基
2018/11/16
第一节：生物材料的选择
选择生物材料的原则：有效成分含量多，稳定性好；来源
丰富，保持新鲜；提取方法简单；有综合利用价值等。 生物材料一般可以分为两大类：天然生物材料和人工生物 材料。 生物材料一般是指在自然界易采集的、目的物含量较高的 生物个体、器官或组织。
2018/11/16
生物大分子 的提取与制备
2018/11/16
引
言
生物化学研究的三个主要发展阶段：
– 叙述生物化学阶段（1770～1903 年）。又称为静态或形态生 物化学，研究内容以分析生物体内物质的化学组成、性质和含 量为主。 – 动态生物化学阶段（1903～1950 年）。又称为生理化学。主 要研究生物体内组成物质的化学变化及相互转变。 – 功能或分子生物化学阶段（ 1950 年至今）。研究生命的本质 和奥秘：运动、神经、内分泌、生长、发育、繁殖等的分子机
JY92-II D超声波 细胞粉碎机
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超声波破碎的适用范围
超声波破碎是很强烈的破碎方法，适用于多数 微生物的破碎。 一般杆菌比球菌易破碎，G-细菌比G+细菌易破 碎，对酵母菌的效果较差。 但超声波产生的化学自由基团能使某些敏感性 活性物质失活。 超声波破碎的有效能量利用率极低 由于对冷却的要求相当苛刻，所以不易放大， 但在实验室小规模细胞破碎中常用。
人工生物材料又分为三种：
1、 新品种材料 2、组织培养材料
3、生物产品与生物制品材料
2018/11/16
要了解的生物大分子的物理、化学性质主要有： 在水和各种有机溶剂中的溶解性。 在不同温度、 pH 值和各种缓冲液中生物大分子 的稳定性。 固态时对温度、含水量和冻干时的稳定性。 各种物理性质：如分子的大小、穿膜的能力、带 电的情况、在电场中的行为、离心沉降的表现、 在各种凝胶、树脂等填料中的分配系数。 其他化学性质：如对各种蛋白酶、水解酶的稳定 性和对各种化学试剂的稳定性。 对其他生物分子的特殊亲和力。
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超声波破碎的机理： 一般认为在超声波作用下液体发生空化作用 （cavitation), 液体中局部空穴的形成、增大和闭合产生极大 的冲击波和剪切力，引起的粘滞性旋涡在细胞上造 成了剪切力，使细胞内液体发生流动，从而使细胞 破碎。 操作过程产生大量的热，需在冰水或外部冷却 的容器中进行。
2018/11/16
生物大分子相互作用分析:
• 生化反应过程实际上是生物分子间的相互作 用过程。生物大分子间的相互作用是它们的 功能基础。随着分子生物学研究的进展，建 立了一系列研究核酸及蛋白质相互作用的技
术。
2018/11/16
生物大分子相互作用分析技术:
1. 2. 3. 4. 凝胶阻滞分析法 DNA酶Ⅰ足纹分析法 蛋白质芯片 酵母双杂交系统筛选相互作用蛋 白质
效果：作用强烈，但活性 物质易受破坏 操作：低温、短时。
2018/11/16
(3) 超声波法： 借助声波的震动力破碎细胞壁和细胞器的有效 方法。多用于微生物细胞的破碎，一般输出功率 100-200W，破碎时间3—15min。如果在细胞悬浮液 中加石英砂则可缩短时间。 为了防止电器长时间运转产生过多的热量，常 采用间歇处理和降低温度的方法进行。 超声波的细胞破碎效率与细胞种类、浓度和超 声波的声频、声能有关。
2018/11/16
第一章 生物大分子的分离纯化
蛋白质（酶）、核酸存在于一切生物体中，是 非常重要的生物大分子。 蛋白质是生物功能的执行者，担负着生物催化、
物质运输、运动、防御、调控及记忆、识别等
多种生理功能； 核酸是遗传信息的携带者，在生物体中指导各 种蛋白质的合成。
2018/11/16
研磨
2018/11/16
细胞破碎方法及其原理
通过机械运动产生的剪切 力，使组织、细胞破碎。
通过各种物理因素的作用， 使组织、细胞的外层结构破 坏，而使细胞破碎。 通过各种化学试剂对细胞 膜的作用，而使细胞破碎 通过细胞本身的酶系或外 加酶制剂的催化作用，使 细胞外层结构受到破坏， 而达到细胞破碎
机械破碎 物理破碎
现代生化技术概论
教师：王爱英 副研究员 生命科学学院
邮箱：495684278@qq.com
2018/11/16 1
课程要求
平时成绩占30%，包括考勤、课前提问10 分；要求每位同学准备笔记本，记好每堂 课的笔记，占20分。 期末考试占到70%，其中包括名词解释， 填空，简答题，分析及其叙述题 借阅相关的书籍资料进行预习以及复习， 奠定好基础。 课程讲述以专题的形式，涉及相关的实验 技术以及生物化学与分子生物学相关技术 的发展。
捣碎法 研磨法 匀浆法 超声法 温度差破碎法 压力差破碎法 有机溶剂： 表面活性剂： 酸碱 自溶法 外加酶制剂法
化学破碎
酶促破碎
2018/11/16
1. 机械破碎：
(1) 研磨法（小量样品）
剪碎的动物组织如鼠肝、兔肝等置研钵中，用
研磨棒研碎。为了提高研磨效果，可加入一定量的 石英砂。用匀浆器处理，也能破碎动物细胞。此法 较温和，适宜实验室使用。 但加石英砂时，要注意其对有效成分的吸附作
1、动物组织
• 保存：对预处理好的材料，若不立即进行实验， 应冷冻保存。 a.冰冻：剥去脂肪和筋皮等结缔组织，短期保存： －10℃的冰箱内； 长期保存：－70℃低温冰箱 内。 b.干燥：对于像脑垂体一类小组织，可置丙酮液 中脱水，干燥后磨粉储存备用；对于含耐高温有 效成分（如：肝素）的肠粘膜，可在沸水蒸煮处 理，烘干后能长期保存。 冰箱的除霜循环，可能对細胞造成伤害，要特 別小心。解冻時要越快越好，但避免局部過熱。
2018/wk.baidu.com1/16
制备生物大分子的分离纯化方法多种多样， 主要是利用它们之间特异性的差异，如分子 的大小、形状、酸碱性、溶解性、溶解度、 极性、电荷和与其他分子的亲和性等。
2018/11/16
1.动物组织：
选材：必须选择有效成分含量丰富且易分离的 脏器组织为原材料。单酯酶，从含量看，虽然在胰 脏、肝脏和脾脏中较丰如磷酸富，但是因其与磷酸 二酯酶共存，进行提纯时，这两种酶很难分开。所 以实践中常选用含磷酸单酯酶少，但几乎不含磷酸 二酯酶的前列腺作材料。 脱脂：脏器中含量较高的脂肪，容易氧化酸败， 导致原料变质影响纯度操作和制品的率。 常用的脱脂方法有：人工剥去脏器外的脂肪组织； 浸泡在脂溶性的有机溶剂（丙酮，乙醚）中脱脂； 采用快速加热（50℃左右），快速冷却的方法，使 溶化的油滴冷却后凝聚成油块而被除去。 2018/11/16
2018/11/16
生物大分子的制备通常可按以下步骤进行：
确定要制备的生物大分子的目的和要求，
是进行科研、开发还是要发现新的物质。 建立相应的可靠的分析测定方法，这是制 备生物大分子的关键。 通过文献调研和预备性实验，掌握生物大 分子目的产物的物理化学性质。
2018/11/16
生物材料的破碎和预处理。 分离纯化方案的选择和探索，这是最困难