皮肤角质形成细胞中TRPVl受体激活后的蛋白质组差异分析
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细胞 。有 研 究 表 明 ， 活化人 表皮 角质形成 细胞 中 Ｔ Ｒ －
ｖ ａ ｎ ｉ ｌ ｌ ｏ ｉ ｄ － １ ， Ｔ Ｒ Ｐ Ｖ１ ） 是表达 于外 周初 级传 人神 经元 上
重要 的 伤 害 感 受 器 ， 参 与 了 急 性 炎 症 痛 敏 的 形 成 ’ 。研究 表 明 ， 辣 椒 素激 活 （ Ｔ Ｒ Ｐ Ｖ １ ） 后， 钙 离 子 通道 开放 ， 钙 离子 内流 ， 胞质 中钙 离子浓 度升高 ， 引起 神经 元及其纤维释放神 经肽 ， 如 Ｐ物质 、 神经激肽 Ａ、 降钙 素 基 因相关 肽 、 血 管活 性 肠肽 和兴 奋 性 氨基 酸 等 。辣椒素受体 （ Ｔ Ｒ Ｐ Ｖ １ ） 可 以被 内源性 、 外源性 香草
１， ６－ ｐｈ ｏ ｓ ｐｈ ｏ ｇ ｌ ｕｃ ０ ｎｏ ｌ ａ ｃ ｔ ｏ ｎ ａ ｓ ｅ，ｃ ａ ｔ ｈ ｅ ｐｓ ｉ ｎ Ｄ ｈ ａ ｄ ｈ ｉ ｇ ｈ ｅ ｒ ｅ ｘ ｐｒ ｅ ｓ ｓ ｉ ｏ ｎ ｉ ｎ ｐ ｅ ｒ ｉ ｔ ｏ ｎ ｅ ａ ｌ ｍａ ｃ ｒ ｏ ｐ ｈ ａ ｇ ｅ ｓ ｏ ｆ ｅ ｘ ｐ ｅ ｒ ｉ ｍｅ ｎｔ ａ ｌ ｅ ｎ ｄｏ ｍｅ ｔ ｒ ｉ ｏ ｓ ｉ ｓ，ｗｈ ｉ ｌ ｅ ｋ ｅ ｒ ａ — ｔ ｉ ｎ １ ４ ａ ｎｄ ６ ０ Ｓ ａ ｃ ｉ ｄｉ ｃ ｒ ｉ ｂｏ ｓ ｏ ｍａ ｌ ｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｉ ｎ Ｐ ２ ｅ ｘ ｐ ｒ ｅ ｓ ｓ ｅ ｄ ｌ ｏ ｗｅ ｒ ． Ｃｏ ｎｃ ｌ ｕｓ ｉ ｏ ｎ Ｉ ｔ ｗａ ｓ ｒ ｅ ｖ ｅ ａ ｌ ｅ ｄ ｔ ｈａ ｔ ｔ ｈｅ ｒ ｅ ｗａ ｓ ａ ｐ ｏ ｔ ｅ ｎｔ ｉ ａ ｌ ｍｅ ｃ ｈ ａ ｎ ｉ ｓ ｍ ｏ ｆ ＴＲ— Ｐ Ｖ１ ａ ｃ ｔ ｉ ｖ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｉ ｎ ｋ ｅ ｒ ａ ｔ ｉ ｎ ｏ ｃ ｙ ｔ ｅ ｓ，ｗｈｉ ｃ ｈ ｇ ａ ｖ ｅ ａ ｎ ｅ ｗ ｓ ｉ ｇ ｈ ｔ ｔ ｏ ｆ ｉ ｎ ｄ ｔ ａ ｒ ｇ ｅ ｔ ｓ ａ ｎ ｄ ｓ ｃ ｒ ｅ ｅ ｎ ｄ ｒ ｕ ｇ ｓ ｉ ｎ ｓ ｋ ｉ ｎ ｄ ｉ ｓ ｏ ｒ ｄ ｅ ｒ ｓ ．
在平 衡 缓 冲 液 Ｉ Ｉ （ ６ ｍ ｏ ｌ ／ Ｌ尿 素 ， ２ ％ Ｓ Ｄ Ｓ ， ０ ． ３ ７ ５
辣椒 素受体 Ｔ Ｒ Ｐ Ｖ １ （ ｔ ｒ ａ ｎ ｓ ｉ ｅ ｎ ｔ ｒ ｅ ｃ ｅ ｐ ｔ ｏ ｒ ｐ ｏ ｔ ｅ ｎ ｔ ｉ ａ ｌ
泛存 在于非 神经 细 胞上 ’ ， 例 如 呼 吸道上 皮 细胞 ， 心 肌细胞 ， 膀胱上 皮细胞 ， 胃壁 上皮 细胞 和 角质 形成
［ 基 金 项 目 ］ 上 海 市 自然 科 学 基 金 （ １ ２ Ｚ Ｒ １ ４ ３ ８ ５ ０ ０） ； 浦 东 新 区卫 生 局
基金（ Ｐ Ｗ２ ０ １ ３ Ａ一 １ ２） ．
性疾病 的治疗带来新 的前景 。 蛋 白质组 学技术 是一种 立体 、 全面 、 快速分 析胞 内蛋 白差异表 达 的重 要方法 。尽 管近年 来生物 质谱
［ Ｋｅ ｙ ｗ ｏ ｒ ｄ ｓ ］
ｔ ｒ ｏ ｐ ｈ ｏ ｒ ｅ ｓ ｉ ｓ
ｔ ｒ ａ ｎ ｓ ｉ ｅ ｎ ｔ ｒ ｅ ｃ ｅ ｐ ｔ ｏ ｒ ｐ ｏ ｔ ｅ ｎ ｔ ｉ ａ ｌ ｖ ａ ｎ ｉ ｌ ｌ ｏ ｉ ｄ 一 １ ； ｈ ｕ ｍ ａ ｎ ｋ ｅ ｒ ａ ｔ ｉ ｎ ｏ ｃ ｙ ｔ ｅ ｓ ； ｃ ａ ｐ ｓ ａ ｉ ｃ ｉ ｎ ； ｔ ｗ ｏ — ｄ ｉ ｍ ｅ ｎ ｓ ｉ ｏ ｎ ａ ｌ ｐ ｏ ｌ ｙ ａ ｅ ｒ ｙ ｌ ａ ｍ ｉ ｄ ｅ ｇ ｅ ｌ ｅ ｌ ｅ ｃ —
定 差 异 蛋 白 。结 果 Ｃ Ａ Ｐ刺 激 Ｈ ａ Ｃ ａ Ｔ细 胞后 ， 磷 酸 甘 油 醛 异 构酶 、 烯醇化 酶 、 ６ 一 磷 酸 葡 萄 糖 酸 内酯 酶 和 组 织 蛋 白 酶 Ｄ蛋 白表
达水平增高 ， 角蛋 白 １ ４和 ６ ０ Ｓ酸 性 核 糖 体 蛋 白 Ｐ ２表 达 量 降低 ， 这 些蛋 白可 能 在 Ｔ Ｒ Ｐ Ｖ １ 激 活 后 影 响 细 胞 功 能 的过 程 中 有 重 要 作 用 。结 论 利 用 蛋 白质 组 学 技术 ， 研究皮 肤角质形成 细胞株 Ｈ ａ Ｃ ａ Ｔ细 胞 中 Ｔ Ｒ Ｐ Ｖ １ 受 体 激 活 后 蛋 白表 达 差 异 ， 为研 究 Ｔ Ｒ —
ｐ ｏ ｌ ｙ ａ ｃ ｒ ｙ ｌ ａ ｍｉ ｄ ｅ ｇ ｅ ｌ ｅ ｌ ｅ ｃ ｔ ｒ ｏ ｐ ｈ ｏ ｒ ｅ ｓ ｉ ｓ （ ２ Ｄ — Ｐ ＡＧＥ） ｃ ｏ ｍｂ ｉ ｎ ｅ ｄ ｗｉ ｔ ｈ ＭＡ Ｌ ＤＩ － Ｔ ＯＦ ／ Ｔ ＯＦ ｉ ｄ ｅ ｎ ｔ ｉ ｆ ｉ ｃ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｗｅ ｒ ｅ ｕ ｓ ｅ ｄ ｔ ｏ ｉ ｎ ｖ ｅ ｓ ｔ ｉ ｇ ａ ｔ ｅ ｔ ｈ ｅ ｅ ｆ ｆ ｅ ｃ ｔ ｏ ｆ Ｔ ＲＰ Ｖ１ ａ ｃ ｔ ｉ ｖ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｎ ｔ ｈ ｅ ｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｏ ｍｅ ｏ ｆ ｋ ｅ ｒ ａ ｔ ｉ ｎ ｏ ｃ ｙ ｔ ｅ ｓ ．Ｒｅ ｓ ｕ ｌ ｔ ｓ Ｃ ｏ ｍｐ ａ ｒ ｅ ｄ ｗ ｉ ｔ ｈ ｂ ｌ ａ ｎ ｋ ｃ ｏ ｎ ｔ ｒ ｏ ｌ ，ｔ ｒ ｉ ｏ ｓ ｅ ｐ ｈ ｏ ｓ ｐ ｈ ａ ｔ ｅ ｉ ｓ ｏ ｍｅ ｒ ａ ｓ ｅ （ Ｔ Ｐ Ｉ ），ｅ ｎ ｏ ｌ ａ ｓ ｅ
被看 作 是 开 发 抗 炎 和镇 痛 药 物 的新 靶 点 。针 对 Ｔ Ｒ Ｐ Ｖ１ 受体 的药物研 究也将 为 局部镇 痛及 皮肤 炎症
醛类 物质 、 热刺 激 、 酸、 炎症 刺激 和组织 损 伤等 激活 。
近来研 究发 现 ， Ｔ Ｒ Ｐ Ｖ１ 不仅 存在 于神经 元细胞 ， 还广
法 皮 肤 角 质 形 成 细 胞 株 Ｈ ａ Ｃ ａ Ｔ细 胞 经 辣 椒 素 （ Ｃ Ａ Ｐ ） 刺激 ２ ４ ｈ后 ， 提 取 蛋 白样 品 ， 采用 双向凝胶 电泳技术分离 Ｈ ａ Ｃ ａ Ｔ细 胞 总蛋 白， 用 Ｐ Ｄ Ｑ ｕ ｅ ｓ ｔ 软件 分 析 对 照 组 和 Ｃ Ａ Ｐ刺 激 组 蛋 白组 图谱 的表 达 差 异 点 ， 再运 用串联飞行时间质谱 （ ＭＡ Ｌ Ｄ Ｉ — Ｔ Ｏ Ｆ — ＭＳ ） 鉴
药学实践杂志
２ ０ １ ３年 ９月 ２ ５日第 ３ １ 卷 第 ５期
Ｊ ｏ ｕ ｒ ｎ ａ ｌ ｏ ｆ Ｐ ｈ ａ ｒ ｍａ ｃ ｅ ｕ ｔ ｉ ｃ ａ ｌ Ｐ ｒ ａ ｃ ｔ ｉ ｃ ｅ， Ｖｏ １ ． ３ １。Ｎｏ ． ５， Ｓ ｅ ｐ ｔ ｅ ｍｂ ｅ ｒ ２ ５， ２ ０１ ３
ｐ ｏ ｔ ｅ ｎ ｔ ｉ ａ ｌ ｖ ａ ｎｉ ｌ ｌ ｏ ｉ ｄ － １ ａ ｃ ｔ ｉ ｖ ａ ｔ ｅ ｄ ｂ ｙ ｃ ａ ｐ ｓ ａ ｉ ｃ ｉ ｎ
ＨＵＡＮＧ Ｊ ｉ ｎ，ＷＡ ＮＧ Ｊ ｉ ａ ｎ，ＹＵ ＡＮ Ｆ ａ ｎ ｇ ，ＨＵ Ｗｅ ｎ — ｊ ｕ ａ ｎ（Ｄ ｅ ｐ ａ ｒ ｔ ｍｅ ｎ ｔ Ｐ ｈ ａ ｒ ｍａ ｃ ｙ ，
技术 、 色 谱技 术及 生 物 信 息学 等 学 科 取 得 了巨 大进
步， 为 高通量 的蛋 白质 组学 研究 拓展 了新 的方 向 ， 但 是双 向凝 胶 电泳技 术仍 然是 目前 蛋 白质组 学研 究 的
主要 方法 ， 也 是 目前 唯 一 可 以在 一块 凝 胶 上 同 时分 离数 千乃 至上 万个 蛋 白质 的方法 。
・
论著 ・
皮 肤 角质 形成 细胞 中 Ｔ Ｒ Ｐ Ｖ １受体激 活 后 的蛋 白质 组差 异分 析
黄 瑾 ， 王 建 ， 袁 芳 ， 胡文娟 （ 上海市 浦东新 区人 民医院药剂科 ， 上海 ２ ０ １ ２ ０ ０ ）
［ 摘要 ］ 目的 研 究 皮 肤 角 质 形 成 细 胞 中辣 椒 素 受体 Ｔ Ｒ Ｐ Ｖ １激 活 后 细胞 中 蛋 白质 组 学 的 变化 ， 并 鉴 定 差 异 蛋 白质 。方
［ 作者简介］ 黄
瑾（ １ ９ ７ ４ 一 ） ， 男， 博士 ， 主管 药 师 ． Ｔ ｅ ｌ ： （ ０ ２ １ ） ５ ８ ９ ２ １ ９ ９ ５ ， Ｅ —
ｍ ａ ｉ ｌ ： ｊ ｏ ｈ ｎ ７ ０ ５ ５ ０ ＠１ ６ ３ ． ｅ ｏ ｍ．
药学实践杂志
２ ０ １ ３年 ９月 ２ ５日第 ３ １卷第 ５期
［ Ｄ ＯＩ ］ １ ０ ． ３ ９ ６ ９ ／ ｊ ． ｉ ｓ ｓ ｎ ． １ ０ ０ ６一 Ｏ １ ｌ １ ． ２ ０ １ ３ ． ０ ５ ． ０ ０ ４
Ｄｉ ｆ ｆ ｅ ｒ ｅ ｎｔ ｉ ａ ｌ ｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｏ ｍｉ ｃ ｓ ａ ｎａ ｌ ｙ ｓ ｉ ｓ ｏ ｆ ｈ ｕｍ ａ ｎ ｋｅ ｒ ａ ｔ ｉ ｎ ｏ ｃ ｙ ｔ ｅ ｓ ｗｉ ｔ ｈ ｔ ｒ ａ ｎ ｓ ｉ ｅ ｎｔ ｒ ｅ ｃ ｅ ｐｔ ｏ ｒ
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Ｐ Ｖ １受 体 能 直 接 导 致 环 氧 酶一 ２ （ Ｃ Ｏ Ｘ 一 ２ ） 的 释 放 。 这个发现说 明 Ｔ Ｒ Ｐ Ｖ １受体 可能在角质 形成 细胞等 非
神 经 细 胞 分 泌 炎 症 因 子 参 与 炎 症 反 应 过 程 中 发 挥 重
要作用 ， 而其参与诱导致 炎因子和缓激 肽等炎症介 质 的分泌表达 ， 会进一步加 重炎症 反应并 刺激末梢 神经 产生痛感 。因此 ， 角质 形成 细 胞 中 Ｔ Ｒ Ｐ Ｖ １受 体 的功 能， 尤其是在皮 肤神 经 网络 中的作 用 日益受 到 重视 ，
２ ０来自百度文库１ ２ ０ ０ ， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ）
［ Ａ ｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ］ ０ ｂ ｊ ｅ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ Ｔ ｏ ｅ ｖ ａ ｌ ｕ ａ ｔ ｅ ｔ ｈ ｅ ｄ ｉ ｆ ｅ ｒ ｅ ｎ ｔ ｉ ａ ｌ ｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｏ ｍ ｉ ｃ ｓ ｏ ｆ ｈ ｕ ｍ ａ ｎ ｋ ｅ ｒ ａ ｔ ｉ ｎ ｏ ｃ ｙ ｔ ｅ ｓ ｗ ｉ ｔ ｈ ｔ ｒ ａ ｎ ｓ ｉ ｅ ｎ ｔ ｒ ｅ ｃ ｅ ｐ ｔ ｏ ｒ ｐ ｏ ｔ ｅ ｎ ｔ ｉ ａ ｌ ｖ ａ —
束， 将胶条取 出 ， 用 滤纸 吸干多余水 分 和矿物 油 ， 放 在平 衡 缓 冲 液 Ｉ （ ６ ｍｏ ｌ ／ Ｌ尿 素 ， ２ ％ Ｓ Ｄ Ｓ ， ０ ． ３ ７ ５
ｍ ｏ ｌ ／ Ｌ Ｔ ｒ ｉ ｓ ， ２ ０ ％甘 油 ， ２ ％ Ｄ Ｔ Ｔ） 中平 衡 １ ０ ｍｉ ｎ ， 再
Ｐ Ｖ １受 体 的 作用 机制 ， 以 及 为 研 发 针对 性 药 物 ， 提 供 新 的 线 索 和方 向 。 ［ 关键词］ 皮 肤 角 质 形 成 细胞 ； 辣椒素受体 ； 双 向 电泳 ； 蛋 白质 组 学 ［ 中图分类号］ Ｒ ３ １ ８ ． ５ ［ 文献标志码］ Ａ ［ 文章编号］
ｖ ａ ｎ ｉ ｌ ｌ ｏ ｉ ｄ － １ ， Ｔ Ｒ Ｐ Ｖ１ ） 是表达 于外 周初 级传 人神 经元 上
重要 的 伤 害 感 受 器 ， 参 与 了 急 性 炎 症 痛 敏 的 形 成 ’ 。研究 表 明 ， 辣 椒 素激 活 （ Ｔ Ｒ Ｐ Ｖ １ ） 后， 钙 离 子 通道 开放 ， 钙 离子 内流 ， 胞质 中钙 离子浓 度升高 ， 引起 神经 元及其纤维释放神 经肽 ， 如 Ｐ物质 、 神经激肽 Ａ、 降钙 素 基 因相关 肽 、 血 管活 性 肠肽 和兴 奋 性 氨基 酸 等 。辣椒素受体 （ Ｔ Ｒ Ｐ Ｖ １ ） 可 以被 内源性 、 外源性 香草
１， ６－ ｐｈ ｏ ｓ ｐｈ ｏ ｇ ｌ ｕｃ ０ ｎｏ ｌ ａ ｃ ｔ ｏ ｎ ａ ｓ ｅ，ｃ ａ ｔ ｈ ｅ ｐｓ ｉ ｎ Ｄ ｈ ａ ｄ ｈ ｉ ｇ ｈ ｅ ｒ ｅ ｘ ｐｒ ｅ ｓ ｓ ｉ ｏ ｎ ｉ ｎ ｐ ｅ ｒ ｉ ｔ ｏ ｎ ｅ ａ ｌ ｍａ ｃ ｒ ｏ ｐ ｈ ａ ｇ ｅ ｓ ｏ ｆ ｅ ｘ ｐ ｅ ｒ ｉ ｍｅ ｎｔ ａ ｌ ｅ ｎ ｄｏ ｍｅ ｔ ｒ ｉ ｏ ｓ ｉ ｓ，ｗｈ ｉ ｌ ｅ ｋ ｅ ｒ ａ — ｔ ｉ ｎ １ ４ ａ ｎｄ ６ ０ Ｓ ａ ｃ ｉ ｄｉ ｃ ｒ ｉ ｂｏ ｓ ｏ ｍａ ｌ ｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｉ ｎ Ｐ ２ ｅ ｘ ｐ ｒ ｅ ｓ ｓ ｅ ｄ ｌ ｏ ｗｅ ｒ ． Ｃｏ ｎｃ ｌ ｕｓ ｉ ｏ ｎ Ｉ ｔ ｗａ ｓ ｒ ｅ ｖ ｅ ａ ｌ ｅ ｄ ｔ ｈａ ｔ ｔ ｈｅ ｒ ｅ ｗａ ｓ ａ ｐ ｏ ｔ ｅ ｎｔ ｉ ａ ｌ ｍｅ ｃ ｈ ａ ｎ ｉ ｓ ｍ ｏ ｆ ＴＲ— Ｐ Ｖ１ ａ ｃ ｔ ｉ ｖ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｉ ｎ ｋ ｅ ｒ ａ ｔ ｉ ｎ ｏ ｃ ｙ ｔ ｅ ｓ，ｗｈｉ ｃ ｈ ｇ ａ ｖ ｅ ａ ｎ ｅ ｗ ｓ ｉ ｇ ｈ ｔ ｔ ｏ ｆ ｉ ｎ ｄ ｔ ａ ｒ ｇ ｅ ｔ ｓ ａ ｎ ｄ ｓ ｃ ｒ ｅ ｅ ｎ ｄ ｒ ｕ ｇ ｓ ｉ ｎ ｓ ｋ ｉ ｎ ｄ ｉ ｓ ｏ ｒ ｄ ｅ ｒ ｓ ．
在平 衡 缓 冲 液 Ｉ Ｉ （ ６ ｍ ｏ ｌ ／ Ｌ尿 素 ， ２ ％ Ｓ Ｄ Ｓ ， ０ ． ３ ７ ５
辣椒 素受体 Ｔ Ｒ Ｐ Ｖ １ （ ｔ ｒ ａ ｎ ｓ ｉ ｅ ｎ ｔ ｒ ｅ ｃ ｅ ｐ ｔ ｏ ｒ ｐ ｏ ｔ ｅ ｎ ｔ ｉ ａ ｌ
泛存 在于非 神经 细 胞上 ’ ， 例 如 呼 吸道上 皮 细胞 ， 心 肌细胞 ， 膀胱上 皮细胞 ， 胃壁 上皮 细胞 和 角质 形成
［ 基 金 项 目 ］ 上 海 市 自然 科 学 基 金 （ １ ２ Ｚ Ｒ １ ４ ３ ８ ５ ０ ０） ； 浦 东 新 区卫 生 局
基金（ Ｐ Ｗ２ ０ １ ３ Ａ一 １ ２） ．
性疾病 的治疗带来新 的前景 。 蛋 白质组 学技术 是一种 立体 、 全面 、 快速分 析胞 内蛋 白差异表 达 的重 要方法 。尽 管近年 来生物 质谱
［ Ｋｅ ｙ ｗ ｏ ｒ ｄ ｓ ］
ｔ ｒ ｏ ｐ ｈ ｏ ｒ ｅ ｓ ｉ ｓ
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定 差 异 蛋 白 。结 果 Ｃ Ａ Ｐ刺 激 Ｈ ａ Ｃ ａ Ｔ细 胞后 ， 磷 酸 甘 油 醛 异 构酶 、 烯醇化 酶 、 ６ 一 磷 酸 葡 萄 糖 酸 内酯 酶 和 组 织 蛋 白 酶 Ｄ蛋 白表
达水平增高 ， 角蛋 白 １ ４和 ６ ０ Ｓ酸 性 核 糖 体 蛋 白 Ｐ ２表 达 量 降低 ， 这 些蛋 白可 能 在 Ｔ Ｒ Ｐ Ｖ １ 激 活 后 影 响 细 胞 功 能 的过 程 中 有 重 要 作 用 。结 论 利 用 蛋 白质 组 学 技术 ， 研究皮 肤角质形成 细胞株 Ｈ ａ Ｃ ａ Ｔ细 胞 中 Ｔ Ｒ Ｐ Ｖ １ 受 体 激 活 后 蛋 白表 达 差 异 ， 为研 究 Ｔ Ｒ —
ｐ ｏ ｌ ｙ ａ ｃ ｒ ｙ ｌ ａ ｍｉ ｄ ｅ ｇ ｅ ｌ ｅ ｌ ｅ ｃ ｔ ｒ ｏ ｐ ｈ ｏ ｒ ｅ ｓ ｉ ｓ （ ２ Ｄ — Ｐ ＡＧＥ） ｃ ｏ ｍｂ ｉ ｎ ｅ ｄ ｗｉ ｔ ｈ ＭＡ Ｌ ＤＩ － Ｔ ＯＦ ／ Ｔ ＯＦ ｉ ｄ ｅ ｎ ｔ ｉ ｆ ｉ ｃ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｗｅ ｒ ｅ ｕ ｓ ｅ ｄ ｔ ｏ ｉ ｎ ｖ ｅ ｓ ｔ ｉ ｇ ａ ｔ ｅ ｔ ｈ ｅ ｅ ｆ ｆ ｅ ｃ ｔ ｏ ｆ Ｔ ＲＰ Ｖ１ ａ ｃ ｔ ｉ ｖ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｎ ｔ ｈ ｅ ｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｏ ｍｅ ｏ ｆ ｋ ｅ ｒ ａ ｔ ｉ ｎ ｏ ｃ ｙ ｔ ｅ ｓ ．Ｒｅ ｓ ｕ ｌ ｔ ｓ Ｃ ｏ ｍｐ ａ ｒ ｅ ｄ ｗ ｉ ｔ ｈ ｂ ｌ ａ ｎ ｋ ｃ ｏ ｎ ｔ ｒ ｏ ｌ ，ｔ ｒ ｉ ｏ ｓ ｅ ｐ ｈ ｏ ｓ ｐ ｈ ａ ｔ ｅ ｉ ｓ ｏ ｍｅ ｒ ａ ｓ ｅ （ Ｔ Ｐ Ｉ ），ｅ ｎ ｏ ｌ ａ ｓ ｅ
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近来研 究发 现 ， Ｔ Ｒ Ｐ Ｖ１ 不仅 存在 于神经 元细胞 ， 还广
法 皮 肤 角 质 形 成 细 胞 株 Ｈ ａ Ｃ ａ Ｔ细 胞 经 辣 椒 素 （ Ｃ Ａ Ｐ ） 刺激 ２ ４ ｈ后 ， 提 取 蛋 白样 品 ， 采用 双向凝胶 电泳技术分离 Ｈ ａ Ｃ ａ Ｔ细 胞 总蛋 白， 用 Ｐ Ｄ Ｑ ｕ ｅ ｓ ｔ 软件 分 析 对 照 组 和 Ｃ Ａ Ｐ刺 激 组 蛋 白组 图谱 的表 达 差 异 点 ， 再运 用串联飞行时间质谱 （ ＭＡ Ｌ Ｄ Ｉ — Ｔ Ｏ Ｆ — ＭＳ ） 鉴
药学实践杂志
２ ０ １ ３年 ９月 ２ ５日第 ３ １ 卷 第 ５期
Ｊ ｏ ｕ ｒ ｎ ａ ｌ ｏ ｆ Ｐ ｈ ａ ｒ ｍａ ｃ ｅ ｕ ｔ ｉ ｃ ａ ｌ Ｐ ｒ ａ ｃ ｔ ｉ ｃ ｅ， Ｖｏ １ ． ３ １。Ｎｏ ． ５， Ｓ ｅ ｐ ｔ ｅ ｍｂ ｅ ｒ ２ ５， ２ ０１ ３
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技术 、 色 谱技 术及 生 物 信 息学 等 学 科 取 得 了巨 大进
步， 为 高通量 的蛋 白质 组学 研究 拓展 了新 的方 向 ， 但 是双 向凝 胶 电泳技 术仍 然是 目前 蛋 白质组 学研 究 的
主要 方法 ， 也 是 目前 唯 一 可 以在 一块 凝 胶 上 同 时分 离数 千乃 至上 万个 蛋 白质 的方法 。
・
论著 ・
皮 肤 角质 形成 细胞 中 Ｔ Ｒ Ｐ Ｖ １受体激 活 后 的蛋 白质 组差 异分 析
黄 瑾 ， 王 建 ， 袁 芳 ， 胡文娟 （ 上海市 浦东新 区人 民医院药剂科 ， 上海 ２ ０ １ ２ ０ ０ ）
［ 摘要 ］ 目的 研 究 皮 肤 角 质 形 成 细 胞 中辣 椒 素 受体 Ｔ Ｒ Ｐ Ｖ １激 活 后 细胞 中 蛋 白质 组 学 的 变化 ， 并 鉴 定 差 异 蛋 白质 。方
［ 作者简介］ 黄
瑾（ １ ９ ７ ４ 一 ） ， 男， 博士 ， 主管 药 师 ． Ｔ ｅ ｌ ： （ ０ ２ １ ） ５ ８ ９ ２ １ ９ ９ ５ ， Ｅ —
ｍ ａ ｉ ｌ ： ｊ ｏ ｈ ｎ ７ ０ ５ ５ ０ ＠１ ６ ３ ． ｅ ｏ ｍ．
药学实践杂志
２ ０ １ ３年 ９月 ２ ５日第 ３ １卷第 ５期
［ Ｄ ＯＩ ］ １ ０ ． ３ ９ ６ ９ ／ ｊ ． ｉ ｓ ｓ ｎ ． １ ０ ０ ６一 Ｏ １ ｌ １ ． ２ ０ １ ３ ． ０ ５ ． ０ ０ ４
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Ｐ Ｖ １受 体 能 直 接 导 致 环 氧 酶一 ２ （ Ｃ Ｏ Ｘ 一 ２ ） 的 释 放 。 这个发现说 明 Ｔ Ｒ Ｐ Ｖ １受体 可能在角质 形成 细胞等 非
神 经 细 胞 分 泌 炎 症 因 子 参 与 炎 症 反 应 过 程 中 发 挥 重
要作用 ， 而其参与诱导致 炎因子和缓激 肽等炎症介 质 的分泌表达 ， 会进一步加 重炎症 反应并 刺激末梢 神经 产生痛感 。因此 ， 角质 形成 细 胞 中 Ｔ Ｒ Ｐ Ｖ １受 体 的功 能， 尤其是在皮 肤神 经 网络 中的作 用 日益受 到 重视 ，
２ ０来自百度文库１ ２ ０ ０ ， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ）
［ Ａ ｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ］ ０ ｂ ｊ ｅ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ Ｔ ｏ ｅ ｖ ａ ｌ ｕ ａ ｔ ｅ ｔ ｈ ｅ ｄ ｉ ｆ ｅ ｒ ｅ ｎ ｔ ｉ ａ ｌ ｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｏ ｍ ｉ ｃ ｓ ｏ ｆ ｈ ｕ ｍ ａ ｎ ｋ ｅ ｒ ａ ｔ ｉ ｎ ｏ ｃ ｙ ｔ ｅ ｓ ｗ ｉ ｔ ｈ ｔ ｒ ａ ｎ ｓ ｉ ｅ ｎ ｔ ｒ ｅ ｃ ｅ ｐ ｔ ｏ ｒ ｐ ｏ ｔ ｅ ｎ ｔ ｉ ａ ｌ ｖ ａ —
束， 将胶条取 出 ， 用 滤纸 吸干多余水 分 和矿物 油 ， 放 在平 衡 缓 冲 液 Ｉ （ ６ ｍｏ ｌ ／ Ｌ尿 素 ， ２ ％ Ｓ Ｄ Ｓ ， ０ ． ３ ７ ５
ｍ ｏ ｌ ／ Ｌ Ｔ ｒ ｉ ｓ ， ２ ０ ％甘 油 ， ２ ％ Ｄ Ｔ Ｔ） 中平 衡 １ ０ ｍｉ ｎ ， 再
Ｐ Ｖ １受 体 的 作用 机制 ， 以 及 为 研 发 针对 性 药 物 ， 提 供 新 的 线 索 和方 向 。 ［ 关键词］ 皮 肤 角 质 形 成 细胞 ； 辣椒素受体 ； 双 向 电泳 ； 蛋 白质 组 学 ［ 中图分类号］ Ｒ ３ １ ８ ． ５ ［ 文献标志码］ Ａ ［ 文章编号］