免疫组化和原位杂交技术检测人工感染PRRSV猪体内病毒定位的比较
PRRSV致病机制及其相关检测技术研究进展
达９ ％，说 明Ｐ ＲＳ ９ Ｒ Ｖ毒株 问存在 基 因重组 。Ｉ ｕ ｔ 等通 过 ｏ
属 ，是一种 不分 节段 的单股 正链Ｒ Ａ病毒 ，含有 ８ 开 Ｎ 个 放 阅读 框（ Ｆ） ＯＲ ｓ，ＯＲ 编码 非结构 蛋 白，Ｏ Ｆ ～ Ｆ Ｆｔ Ｒ ２ ＯＲ ７
编 码 结 构 蛋 白 。 其 中 Ｏ Ｆ 编 码 的核 衣 壳 （ ） 白￣ Ｏ Ｆ Ｒ７ Ｎ蛋 ＩＲ６ ］ 编 码 的 非 糖 基 化 基 质 （ 蛋 白 为 优 势 结 构 蛋 白 。 猪 繁 殖 Ｍ） 与 呼 吸 综 合 征 病 毒 基 因组 存 在 广 泛 的 遗 传 变 异 性 ，Ｍ 蛋 白和 Ｎ蛋 白在 所 有 的 毒 株 之 间相 对 比较 保 守 ，可 作 为 血
胞 对 Ｐ ＲＳ Ｒ Ｖ最 易 感 。 这 是 为 什 么 感 染 的 幼 猪 病 情 最 严 重 的原 因所 在 。单 核 细胞 或Ｐ 用 巨噬 细胞 群体 刺激 ＡＭ 因 子 处 理 ， 促 使 其 激 活 或 成 熟 ， 可 以 调 节 表 面 标 记 的 表 达 和 对 Ｐ ＲＳ Ｒ Ｖ增 殖 的 易 感 性 。 各 种 组 织 的 巨 噬 细 胞 、 单 核 细 胞 、 内 皮 细 胞 、 平 滑 肌 细 胞 和 成 纤 维 细 胞 用 原 位 杂 交 和 免 疫 组 织 化 学 等 技 术 可 对 Ｐ ＲＳ Ｒ Ｖ抗 原 作 出 鉴 定 。 在 猪 体 内Ｐ Ｒ Ｖ只 能 在 Ｐ 、 单 核 细 胞 和 小 Ｒ Ｓ ＡＭ
生 长 。６ 龄 以下 小 猪 的 Ｐ Ｍ 、 尤 其 是 不 成 熟 的 巨噬 细 周 Ａ
ａ ｒｓｎ ｒ Ｒ Ｓ 是 目前养猪 业中一种 严重 的病 毒性传 ｔ ｙｙ ｄ，Ｐ Ｒ ） ｏ 染病 ，引起猪严 重繁殖障碍 和呼吸道疾 病 。猪繁 殖与呼 吸综合 征是 由猪繁殖 与呼 吸综合征 病毒（Ｒ Ｓ ￣起 的 Ｐ Ｒ Ｖ） ｌ
DNA原位杂交和免疫组化染色检测HPV的比较
DNA原位杂交和免疫组化染色检测HPV的比较禤瑞霞【摘要】目的:探讨DNA原位杂交和免疫组化染色检测人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)的效果.方法:选择103例外阴尖锐湿疣患者,分别采用DNA 原位杂交、免疫组化染色方法进行检测,比较分析两种检测结果.结果:DNA原位杂交的阳性检测率为93.20％,高于免疫组化阳性检测率(66.02％)(P<0.05).结论:DNA原位杂交检测技术用于尖锐湿疣患者中具有较高阳性率,可作为尖锐湿疣诊断及治疗的可靠依据.【期刊名称】《包头医学院学报》【年(卷),期】2018(034)011【总页数】2页(P64-65)【关键词】DNA原位杂交;免疫组化染色;尖锐湿疣【作者】禤瑞霞【作者单位】中山市中医院,广东中山 528400【正文语种】中文尖锐湿疣是由人乳头瘤病毒(human papilloma virus，HPV)感染所导致的性传播疾病，多发生于40岁左右人群，好发在外生殖器[1]。
其临床表现及特征性病理变化较多，诊断标准中存在着许多问题，无法准确做出诊断，易与假性湿疣混淆。
因此，HPV的实验室检查显得尤为重要。
本文分析了DNA原位杂交(in-situhybridization，ISH)和免疫组化(immunohistochemistry，IHC)染色检测HPV的效果，现报告如下。
1 对象与方法1.1 对象选择2013年1月至2018年2月我院收治的103例外阴尖锐湿疣患者作为此次研究对象。
纳入标准：理解并签署本研究制定的知情同意书，自愿参与本次研究。
排除标准：孕妇、哺乳产妇、严重肝肾功能障碍、精神病。
103例患者年龄34～56岁、平均年龄43.5岁；皮损大小0.5 cm×0.3 cm×0.2 cm～0.8cm×0.5 cm×0.5 cm，平均皮损大小0.3 mm×0.2 mm×0.3 mm±0.1 mm×0.3 mm×0.2 mm。
猪场常见呼吸系统疾病的临床区别诊断核心探索
猪场常见呼吸系统疾病的临床区别诊断核心探索
猪场常见的呼吸系统疾病包括猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）感染、猪流行性腹泻病毒（PEDV）感染、猪传染性咳嗽病（PI3）感染和猪流行性感冒病毒（PIV）感染等。
这
些疾病的临床表现相似，但其核心诊断方法有一定的区别。
首先是PRRSV感染。
该病主要通过空气传播和直接接触传播。
感染的猪出现呼吸困难、咳嗽、发热、食欲减退、精神不振等症状。
临床诊断的核心是通过实验室检测，包括酶联
免疫吸附试验（ELISA）、荧光抗体方法（IFA）和聚合酶链反应（PCR）等。
其次是PEDV感染。
该病主要通过消化道传播。
感染的猪表现为腹泻、呕吐、食欲减退等，严重时可导致猪只死亡。
核心诊断方法是通过实验室检测，包括PCR、免疫组化等。
在临床诊断时，根据不同疾病的症状、流行情况以及实验室检测结果，可以对这些呼
吸系统疾病进行区别诊断。
及时采取相应的防控措施，加强猪场的卫生管理，可以有效控
制这些疾病的传播和流行。
基于RNAscope(R)原位杂交技术对PRRSV感染组织样本的检测分析
基于RNAscope(R)原位杂交技术对PRRSV感染组织样本的检测分析MA Ze-lin;ZHANG Yong-li;LIU Qiang;HU Shou-ping;ZHANG Zhuo;HE Xi-jun 【摘要】为扩大RNAscope(R) 原位杂交技术(RNAscope(R) ISH)在猪繁殖与呼吸综合征病-毒(PRRSV)基础研究中的应用范围,本研究将该技术与免疫组织化学技术(IHC)相结合,通过条件优化建立了RNAscope(R)ISH-IHC双重染色技术.经检测不同病毒感染的组织切片中的PRRSV表明该技术具有良好的特异性.采用该双重染色技术检测PRRSV感染的猪淋巴结组织切片中巨噬细胞感染PRRSV情况,结果显示PRRSV核酸主要存在于巨噬细胞胞浆中,在胞核中也有分布,但在一些非巨噬细胞中也散在PRRSV阳性信号,表明PRRSV不仅在猪淋巴结巨噬细胞中复制.利用该双重染色技术检测PRRSV感染后不同时间点猪胸腺组织切片中凋亡相关调节基因Bid、Bcl-xl表达水平,结果显示一段时间内Bid基因转录水平上调、Bcl-xl基因转录水平下调,与同条件下荧光定量PCR结果一致.综上,本研究建立的RNAscope(R) ISH-IHC双重染色技术结合了RNAscope(R) ISH与IHC各自的优势,不仅能够检测病毒感染后在组织中的定位,还可以分析病毒感染后宿主内源性基因转录的变化趋势,实现了在同一组织切片中对核酸与蛋白的双重检测.经验证该检测方法适用于PRRSV实验室研究,为PRRSV的相关基础研究提供新的检测手段.【期刊名称】《中国预防兽医学报》【年(卷),期】2019(041)001【总页数】6页(P40-45)【关键词】RNAscope(R) 原位杂交;免疫组织化学;细胞凋亡;猪繁殖与呼吸综合征病毒【作者】MA Ze-lin;ZHANG Yong-li;LIU Qiang;HU Shou-ping;ZHANG Zhuo;HE Xi-jun【作者单位】【正文语种】中文【中图分类】S852.65原位杂交技术(In situ hybridization，ISH)是以碱基互补配对为原则，通过检测探针标记物间接检测目的基因序列的一种技术。
免疫组化和原位杂交检测结果_概述说明
免疫组化和原位杂交检测结果概述说明1. 引言1.1 概述本文旨在对免疫组化和原位杂交检测结果进行综合概述和解释。
免疫组化和原位杂交是两种常用的生物学实验技术，用于检测细胞或组织中特定蛋白质或核酸的表达情况。
通过对这两种技术的原理、方法、应用领域以及实验步骤和注意事项的介绍，可以使读者更好地理解并合理应用这些检测结果。
1.2 文章结构本文分为五个主要部分：引言、免疫组化检测结果、原位杂交检测结果、免疫组化与原位杂交比较分析以及结论。
在引言部分，我们将简要介绍本文的目的和文章结构，提供一个整体的框架来帮助读者理解后续内容。
1.3 目的本文旨在全面说明和讨论免疫组化和原位杂交检测结果，并对它们之间的异同进行比较分析。
通过了解免疫组化和原位杂交技术的基本原理、应用领域以及实验步骤等方面信息，读者可以更好地理解和解释这些检测结果，从而能够更科学地进行相关研究工作。
此外，我们将通过案例分析和发展趋势的讨论，对免疫组化和原位杂交技术在未来的应用进行展望，并提供一些建议。
2. 免疫组化检测结果：2.1 原理和方法：免疫组化是一种常用的实验技术，通过特异性抗体对目标分子进行检测。
该技术基于免疫学原理，利用抗体与相应的抗原结合来定位和可视化感兴趣的蛋白质或分子。
在免疫组化实验中，首先需要选择合适的抗体，该抗体可以是单克隆或多克隆抗体，并且需要与所需检测的目标分子有高度的特异性和亲和力。
然后，在样本处理过程中，对组织或细胞进行固定、包埋等步骤以保持其形态结构，并消除内源性酶活性。
接下来，将样本切片后进行染色处理，通常采用荧光标记物或酶标记物进行可视化显示。
最后，使用显微镜观察并记录结果。
2.2 应用领域：免疫组化技术广泛应用于生物医学研究领域。
它在肿瘤学、神经科学、器官发育等领域起着重要作用。
例如，在肿瘤学中，通过免疫组化可以检测肿瘤组织中的细胞分子标记，从而对肿瘤类型、分级和预后进行鉴定。
在神经科学领域，免疫组化可以帮助研究人员探索神经元的分布、表达和功能。
不同品种猪感染HP-PRRSV后肺组织间PRRSV受体基因差异表达的研究
不同品种猪感染HP-PRRSV后肺组织间PRRSV受体基因差异表达的研究康润敏;姬高升;曾凯;吕学斌;殷明郁【摘要】In order to understand the molecular mechanism of host susceptibility differential to highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome (HP-PRRSV) infection among three breeds ofpig,Tibetan pig,ZangMei Black and Yorkshire,the mRNA level of five reported PRRSV receptor genes (HSPG2,SIGLEC1,CD163,VIM and NMMHC-Ⅱ A) expressed in lung were investigated on 0,4,7 and 14 days post infection (dpi) with HP-PRRSV JXA1 isolate.The Real-time RT-PCR results showed that the expression of HSPG2 in Tibetan pig increased significantly on 4 and 14 dpi and decreased significantly on 7 dpi compared with the expression on 0 dpi (P＜0.05),and its expression in ZangMei Black on 14 dpi was significantly higher than that of on 7 dpi (P＜0.05);An increased expression of SIGLEC1 in Tibetan pig was observed on 4 and 14 dpi (P＜0.05),and a decreased expression of the same gene was detected in Yorkshire on 4,7 and 14 dpi (P＜0.05);The expression of CD163 elevated significantly on 14 dpi in both Tibetan pig and ZangMei Black (P＜0.05),however its expression reduced significantly on 7 and 14 dpi in Yorkshire (P＜0.05);The expression of VIM gene was significantly higher on 7 dpi in Tibetan pig and significantly lower on 7 dpi in Yorkshire (P＜0.05);And the expression of NMMHCⅡ A was significantly higher on 4 dpi in ZangMei Black,which was also significantly higher in Yorkshire on 4 and14 dpi (P＜0.05).In conclusion,SIGLEC1 and VIM might be important genes to influence the host resistance of Tibetan pig,ZangMei Black and Yorkshire to HP-PRRSV infection.%为进一步了解藏猪、藏梅猪和大约克夏猪对高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV) JXA1分离株具有不同易感性的分子机理,本研究建立实时荧光定量RT-PCR方法比较分析藏猪、藏梅猪和大约克夏猪感染JXA1分离株前、感染后4、7和14d肺脏中HSPG2、SIGLEC1、CD163、VIM和NMMHC-ⅡA5个PRRSV受体基因的差异表达情况.结果显示,藏猪感染JXA1分离株后4和14 d肺脏中HSPG2的表达量显著高于感染前(P＜0.05),而感染后7 d HSPG2的表达量显著低于感染前(P＜0.05),藏梅猪在感染后14 d HSPG2的表达量显著高于感染后7 d (P＜0.05);藏猪感染后4和14 d肺脏中SIGLEC1的表达量显著高于感染前(P＜0.05),大约克夏猪感染后4、7和14 d SIGLEC1的表达量均显著低于感染前(P＜0.05);藏猪和藏梅猪感染后14 d肺脏中CD163的表达量均显著高于感染前(P＜0.05),大约克夏猪则感染后7和14 d均显著低于感染前(P＜0.05);藏猪感染后7d肺脏中VIM的表达量显著高于感染前(P＜0.05),大约克夏猪在感染后7d显著低于感染前(P＜0.05);藏梅猪感染后4d肺脏中NMMHC-ⅡA的表达量显著高于感染前(P＜0.05),大约克夏猪在感染后4和14 d NMM-HC-ⅡA的表达量显著高于感染前(P＜0.05).结果表明,5个PRRSV受体基因中,SIGLEC1和VIM基因可能是影响藏猪、藏梅猪和大约克夏猪对JXA1分离株易感性存在差异的潜在关键基因.【期刊名称】《中国畜牧兽医》【年(卷),期】2017(044)002【总页数】8页(P538-545)【关键词】JXA1分离株;藏猪;藏梅猪;大约克夏猪;PRRSV受体基因;差异表达【作者】康润敏;姬高升;曾凯;吕学斌;殷明郁【作者单位】四川省畜牧科学研究院,动物遗传育种四川省重点实验室,成都610066;四川大学生命科学学院,动物疫病防控与食品安全四川省重点实验室,生物资源与生态环境教育部重点实验室,成都610064;四川省畜牧科学研究院,动物遗传育种四川省重点实验室,成都610066;四川省畜牧科学研究院,动物遗传育种四川省重点实验室,成都610066;四川省畜牧科学研究院,动物遗传育种四川省重点实验室,成都610066【正文语种】中文【中图分类】S855.3猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)引起的怀孕母猪繁殖障碍[1]，公猪性欲缺乏和精子活力下降[2]，哺乳仔猪生长迟缓、间质性肺炎和死亡率增高[3]的高致病性传染病，给全球养猪业造成了巨大的经济损失[4-6]。
猪自然感染PRRSV后组织学及免疫组化变化
猪自然感染ＰＲＲＳＶ后组织学及免疫组化变化
Ｔｕａｎｇｔｈｏｎｇ Ｐａｔｃｈｉｍａｓｉｒｉ
引言
泰国１９８６血清学检测到有ＰＲＲＳＶ，１９９６年首次分离出
ＰＲＲＳＶ病毒。
ＰＲＲＳＶ是正链ＲＮＡ病毒属于动脉炎病毒属。
该属病毒包括小鼠促乳酸脱氢酶病毒、马动脉炎病毒、和猴
出血热病毒２。
该病导致的繁殖障碍、易于继发其他疾病，
给养猪业带来巨大的经济损失，很多国家都在试图控制和消
除该疾病。
然而该病毒易于通过直接接触传播和配种传播，
导致该病仍然流行。
本文报道在泰国中部的猪场，８头猪自
然感染ＰＲＲＳＶ ＵＳ株后组织学和免疫免疫组化的变化。
黄亚平。
采用RNAscope原位杂交技术检测PRRSV与PCV2的共感染
采用RNAscope原位杂交技术检测PRRSV与PCV2的共感染王晓捷;崔蒙蒙;常天明;王刚;李江南;何希君;刘长明;熊涛;翁长江【摘要】RNAscope原位杂交是一种检测细胞内靶标RNA的新型检测技术,为验证该技术能否用于检测猪繁殖与呼吸综合征病毒-猪圆环病毒2型(PRRSV-PCV2)的共感染,本研究针对PRRSV N基因和PCV2 Rep基因序列,分别设计两组特异性探针,利用RNAscope原位杂交技术分别检测了PRRSV和PCV2单独感染或PRRSV-PCV2共感染的猪肺泡巨噬细胞(PAMs)以及一例PRRSV-PCV2共感染猪的多个组织样品,同时采用间接免疫荧光试验(IFA)以及RNAscope原位杂交联合IFA对PRRSV和PCV2单独感染或PRRSV-PCV2共感染的PAMs进行检测.结果显示,通过RNAscope原位杂交技术检测PRRSV N基因和PCV2 Rep基因检测到同一PAM中的PRRSV和PCV2共感染;通过IFA检测PRRSV Nsp9蛋白和PCV2 Cap蛋白检测到同一PAM中的PRRSV和PCV2共感染;两种方法联合使用结果显示,通过RNAscope探针检测PRRSV N基因和IFA方法检测PCV2 Cap蛋白,或者通过RNAscope探针检测PCV2 Rep基因同时用IFA方法检测PRRSV Nsp9蛋白来检测同一PAM中的PRRSV和PCV2共感染.同时,RNAscope原位杂交技术能够在PRRSV-PCV2共感染猪的肺脏、脾脏和淋巴结的组织切片中检测到PRRSV和PCV2共感染的细胞.以上结果表明RNAscope原位杂交技术适用于PRRSV-PCV2共感染的细胞和组织样品的检测,为研究PRRSV-PCV2共感染及协同致病机制奠定了基础.【期刊名称】《中国预防兽医学报》【年(卷),期】2018(040)011【总页数】5页(P1015-1019)【关键词】猪繁殖与呼吸综合征病毒;猪圆环病毒2型;RNAscope;共感染【作者】王晓捷;崔蒙蒙;常天明;王刚;李江南;何希君;刘长明;熊涛;翁长江【作者单位】长江大学生命科学学院,湖北荆州434025;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江哈尔滨150069;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江哈尔滨150069;华中农业大学动物医学院,湖北武汉430070;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江哈尔滨150069;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江哈尔滨150069;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江哈尔滨150069;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江哈尔滨150069;长江大学生命科学学院,湖北荆州434025;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江哈尔滨150069【正文语种】中文【中图分类】S852.65猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS)是由PRRS病毒(PRRSV)引起的一种严重威胁世界养猪业的高度接触性传染病，该病可导致母猪流产、产死胎、木乃伊胎等繁殖障碍以及各日龄猪特别是育肥仔猪的严重呼吸道症状[1]。
免疫组化和原位杂交法诊断尖锐湿疣的对比研究
免疫组化和原位杂交法诊断尖锐湿疣的对比研究摘要目的:探讨原位杂交(ISH)和免疫组化(IHC)方法诊断尖锐湿疣(CA)的敏感性与特异性,并与组织病理相比较;了解湘潭地区CA患者感染人乳头瘤病毒(HPV)的基因类型及分布。
方法:分别用原位杂交和免疫组化方法对临床和(或)病理组织学诊断CA的124例病例进行检测。
结果:IHC检测HPV-P阳性84例,HPV16阳性82例,总阳性率为694%(86/124),阳性细胞主要分布在棘细胞上层及颗粒细胞层;ISH检测HPV6/11阳性108例(8709%),HPV16/18阳性14例(1129%),HPV16/18阳性的12例中有6例合并有HPV6/11阳性(48%)。
ISH 总阳性率为935%(116/124),HPV6/11、HPV16/18同时感染4285%,阳性细胞广泛出现在棘层中上层、颗粒层及角化不全细胞核内,在角化不全层被挤压的细胞核内也可见到阳性表达可见。
结论:原位杂交和免疫组化是诊断尖锐湿疣的重要辅助手段;原位杂交法检测HPV6/11、HPV16/18比免疫组化法敏感性和特异性都要高,且定位准确、背景清晰,能对感染有准确的组织学定位,更有助于HPV分型研究,因此是诊断和研究CA的较好和先进的方法。
湘潭地区CA以HPV11和6感染为主,有较高的混合感染率。
关键词尖锐湿疣HPV 原位杂交免疫组化AbstractObjective:To investigate the sensitivity and specificity of in situ hybridization(ISH)and immunohistiochemistry(IHC)associated with the diagnosis of Condyloma Acuminatum(CA)and compare it with histopathological feature.To understand the HPV genotype that the CA patients infect and the distribution pattern of HPV genotypes in infected CA patients in XiangTan area.Methods:CA samples were obtained from 124 patients with pathological diagnosis or clinical diagnosis and were examined with ISH and IHC,respectively.Results:84 cases were positive for HPV-P and 82 positive for HPV-16 by IHC.Overall positive rate is 69.35%.Expression of HPV-P and HPV-16 was evident in the upper spinous and granular layer.108(87.09%)cases were positive for HPV6/11 and 14(1129%)caseswere positive for HPV16/18,6 of which were positive for HPV6/11 by ISH.The overall positive rate of HPV expression by ISH is 93.5% and the positive rate of double infections(HPV6/11+HPV16/18)analyzed by ISH was 42.85%.In addition to the upper spinous and granular layer,the strongest reaction was observed in lower or middle stratum spinosum and stratum basale.Conclusion:IHC and ISH were the necessary assisted examinations for the diagnosis of CA.ISH can detect HPV sensitvity and specially,and locate positice of the Virus in histopathology of CA.And this technique can be used to detect the type of HPV.Results:Revealed that the predominant types from patients in XiangTan were HPV11 and HPV6 with mixedinfection.Key WorodsCondyloma Acuminatum(CA);Human Papilloma Virus(HPV);In Situ Hybridization(ISH);Immunohistiochemistry(IHC)HPV(Human Papilloma Virus)的中文名称为人乳头状瘤病毒,属于Papovaviridae家族,是一种环状双链DNA病毒,长约8kb[1]。
猪流感病毒在自然感染猪中定植区域的研究
猪流感病毒在自然感染猪中定植区域的研究郑 杰 赵 朴 译 卢中华 校 (河南农业大学牧医工程学院 郑州 450002) 猪流感病毒感染是全世界养猪国家常遇到的一种呼吸道疾病。
感染猪通常表现为突发呼吸道疾病、高热、食欲减退、体重减轻、嗜眠、眼和鼻有分泌物、咳嗽、呼吸困难;高发病率和低死亡率(病死率<5%)最普遍。
组织学检查可发现支气管和细支气管上皮退化、坏死。
支气管、细支气管、肺泡腔内充满了含有脱落细胞、嗜中性细胞、单核细胞的渗出物。
猪流感病毒属于正粘病毒科流感病毒属成员,基因组为八个片段的单链副股RNA分子。
已从猪中分离到两个亚型的A型流感病毒:H1N1(经典代表株H1N1和禽H1N1)和H3N2(代表株为人H3N2)。
RNA片段5编码主要的结构蛋白与RNA的片段型特异性抗原组成核蛋白。
核蛋白是典型的抗原,用于区分A、B、C型流感病毒。
A型SIV核蛋白基因的核苷酸序列与其它流感病毒显著不同(同源率为60%),但在不同A型流感病毒株之间表现为高度保守(同源率可达90%)。
因此,以核蛋白基因转录的互补DNA(cDNA)可特异性地用于A型SIV的检测。
病毒的分离是诊断猪流感病毒(SIV)感染的经典方法。
然而,病毒的培养既费时又昂贵。
从可能被病毒污染的样品中分离病毒时要小心处理,防止在分离过程中传染给人。
人感染SIV,一部分是致死性的,这在美国、欧洲已有报道。
由于SIV的流行特点,人们已经采用基于单抗、多抗介导的免疫组化不同检测方法检测用甲醛固定,石蜡包埋组织中的抗原。
检测猪流感病毒的另一种方法是原位杂交,原位杂交是用于评价组织和细胞中基因表达水平的RNA的有力助手,它的主要优点是能够确定样品混合物中的哪些组织和细胞表达目的RNA,病毒RNA的cDNA探针原位杂交技术已经成功地用于病毒核苷酸的检测。
本研究的一个目的就是利用地高辛标记的,互补SIV核蛋白的基因保守区的582bp的单股cDNA探针检测用甲醛固定,石蜡包埋的组织中SIV的核酸。
原位杂交免疫组化学
原位杂交免疫组化学
原位杂交和免疫组化是两种在组织学和病理学中常用的分子生物学技术，它们都能够在细胞或组织的自然环境中定位特定生物大分子。
原位杂交：
-该技术主要用于检测组织切片中DNA或RNA分子的存在与分布。
通过设计并标记一段与目标核酸序列互补的寡核苷酸探针，在组织切片上进行杂交反应。
当探针与靶标分子结合后，可以通过显色或者荧光信号来观察目标核酸的位置。
免疫组化：
-免疫组化则主要用来定位蛋白质等抗原物质。
它利用抗体与抗原特异性结合的原理，将能识别特定蛋白质的抗体标记上可见的示踪物（如酶、荧光素、金属离子或放射性同位素），然后让这些标记抗体与组织切片上的抗原发生特异性结合，通过显色反应显示出目标蛋白在组织中的位置和分布。
联合应用：
-在病毒学和其他领域研究中，有时会将原位杂交与免疫组化结合起来，即同时在同一组织切片上进行ISH和IHC实验。
这样可以
同时检测病毒基因及其编码的蛋白质产物在细胞内的表达及分布情况，从而获得更为全面深入的生物学信息。
这种技术称为“双标记”或“多标记”技术，有助于揭示病毒感染过程、宿主响应机制以及病原体与细胞相互作用的复杂关系。
细胞生物学中的免疫组化和原位杂交技术
细胞生物学中的免疫组化和原位杂交技术细胞生物学是研究细胞结构、功能和特性的学科，其中免疫组化和原位杂交技术是重要的实验手段和研究工具。
本文将介绍免疫组化和原位杂交技术的原理、应用以及未来的发展方向。
一、免疫组化技术免疫组化技术是通过特异性抗体与目标分子结合来检测细胞内或组织内的特定蛋白质的方法。
免疫组化技术的原理是利用抗体与抗原之间的亲和性，通过特异性结合实现对蛋白质的检测和定位。
1. 原理免疫组化技术主要包括以下步骤：取材、固定、切片、抗原恢复、阻断、抗体标记、显色和观察。
首先，将需要检测的组织固定并制作切片。
然后，对切片进行抗原恢复处理，以破坏固定过程中引起的抗原和抗体的交联反应。
接下来，进行阻断步骤，防止非特异性抗体的结合。
随后，使用特异性抗体标记目标蛋白质。
最后，通过显色反应观察标记的抗体的位置和数量。
2. 应用免疫组化技术在细胞生物学领域有多种应用。
它可以用于检测特定蛋白质的存在和定位，从而研究细胞内各种生物分子的分布。
此外，免疫组化技术还可以用于诊断疾病，例如通过检测肿瘤标志物的表达来判断肿瘤的类型和分级。
此外，免疫组化技术还能够评估细胞的增殖、分化和凋亡等生理过程。
二、原位杂交技术原位杂交技术是通过标记的探针与靶RNA或DNA结合，从而在组织或细胞水平上检测靶分子的方法。
原位杂交技术可以提供靶RNA和DNA的空间分布和细胞定位信息。
1. 原理原位杂交技术主要包括以下步骤：制备探针、固定组织、加氢解固、杂交反应、洗涤和检测。
首先，制备标记的探针，通常使用放射性同位素或荧光标记。
然后，将组织固定，以防止RNA或DNA降解。
接着，进行加氢解固步骤，以使靶分子的结构恢复。
随后，进行杂交反应，将探针与靶RNA或DNA结合。
最后，通过洗涤和检测步骤，确定探针的结合位置和数量。
2. 应用原位杂交技术在细胞生物学和遗传学领域有广泛的应用。
它可以用于研究基因表达和功能的调控机制，例如通过检测特定RNA的存在来研究基因的转录水平。
猪圆环病毒3型近五年的研究进展
猪圆环病毒3型近五年的研究进展作者：来源：《国外畜牧学·猪与禽》2023年第05期王晶晶王丽萍译自Virus Research，Vol.314（2022）：198764唐芬兰校张配配审孟祥光制图摘要：猪圆环病毒3型（porcine circovirus type 3，PCV3）属于圆环病毒科，是一种无包膜、环状、单链DNA病毒。
猪圆环病毒属成员最初于2016年被报道，能够感染猪，其结构特征、临床症状、发病机制和猪感染后的免疫反应在之后的研究中得到了进一步的阐述。
本综述旨在总结PCV3相关研究在病毒基因组特征、流行病学、发病机制、免疫应答和诊断方法方面的进展。
PCV3在全球各年龄段的猪上均有检出，并与一系列临床症状相关，包括多系统炎症综合征、繁殖障碍、猪皮炎与肾病综合征以及亚临床感染。
实验性研究发现猪感染PCV3后成功地再现了多系统炎症，但并未暴发临床疾病。
这些发现，再加上大量关于PCV3并发感染的报道，表明仅感染PCV3可能不足以导致猪出现明显的临床疾病。
目前尚未充分阐明PCV3的发病机制，也未能确定促进病毒入侵细胞的受体，但已证实PCV3可在受感染猪的滋养层细胞、心肌细胞、皮肤脂肪细胞和神经元等多种类型的细胞中复制。
PCV3似乎可以逃避宿主的免疫反应，在实验性和田间研究中，猪感染病毒42 d后会出现持续性毒血症就证明了这一现象，不过感染猪有强烈的体液反应。
已经观察到宿主细胞因子谱和外周细胞介导的反应的微小差异，但毫无疑问，许多问题仍然围绕着PCV3逃避免疫反应的机制。
PCV3的流行病学尚不清楚，确切的传播途径也未有明确的描述；但PCV3可通过猪的唾液、鼻腔分泌物、粪便、初乳和公豬精液传播，这表明了水平和垂直传播在病毒传播上的重要性。
在牛、狗、小鼠、野猪、羚羊、狍子、蜱虫和蚊子等众多家养和野生动物中检测到了PCV3，表明该病毒可能存在多个贮存宿主，并且可跨物种传播。
目前，PCV3诊断性试验技术能够将PCV3与其他PCV区分开来，并证实其存在于病变中。
猪圆环病毒病及防控措施
猪圆环病毒病及防控措施刘本权 /辽宁省丹东市东港农业综合行政执法队 118300刘成军/辽宁省盖州市梁屯动物卫生监督所 115205摘 要：感染猪圆环病毒（PCV）会引发猪系统功能障碍性等疾病，临床上以仔猪先天震颤（CT）、断奶仔猪多系统衰竭综合征（PMWS）、猪皮炎肾病综合征（PDNS）以及呼吸、繁殖障碍等为主要表现形式。
PCV在我国猪群中具有阳性率高、传播面广且常伴随其它病毒和细菌的混合感染的特点，给养猪业经常造成严重的经济损失。
自发现猪圆环病毒（PCV）以来，专家学者们一直针对该病毒从各个方面进行深入研究，尽可能降低其对养猪业造成的危害。
本文对PCV病原、流行特点、发病特点等进行简要介绍，以及对相关防控措施进行分析阐述，为PCV的防控等提供技术参考。
关键词：猪圆环病毒；防控措施猪圆环病毒（PCV）属于圆环病毒科圆环病毒属，为闭环单股负链DNA病毒，无囊膜，是世界迄今为止已知的最小的动物病毒之一。
截至目前，已发现4种猪圆环病毒，分别为猪圆环病毒1型（PCV1）、猪圆环病毒2型（PCV2）、猪圆环病毒3型（PCV3）、猪圆环病毒4型（PCV4）。
1 猪圆环病毒1.1 PCV1 PCV1最早发现于1974年，普遍存在于猪体内，但对猪无明显的致病性。
但相关文献报道，PCV1全基因组中大多数核苷酸序列与PCV2全基因组核苷酸序列具有高度一致性，且PCV1可能具有潜在致病性或影响猪只感染疫病后病情的发展。
1.2 PCV2 我国于2000年首次报道PCV2感染，目前在养猪业中，PVC2的感染已呈全球性流行，给养猪业造成严重的经济损失，且几乎不可能实现净化。
PCV2传播方式多样，通过消化道、呼吸道、胎盘、精液均可传播，对不同年龄、品种的猪均可实现感染，是引起猪群免疫抑制性疾病的主要病原之一。
在我国猪群中也具有感染率高、流行时间长、污染面广，与其他病原如猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪瘟病毒（CSFV）、伪狂犬病病毒（PRV）、细小病毒（PPV）、以及副猪嗜血杆菌链球菌、放线杆菌等多种细菌混合感染较严重等流行特点。
PRRS疫苗免疫猪群的PRRS病原与抗体检测
PRRS疫苗免疫猪群的PRRS病原与抗体检测何海健;邢刚;马涛;邱小伙;张耐【摘要】设计一对能区分经典株与变异株的PRRSV特异性引物,建立PRRSV经典株与变异株的鉴别诊断方法,用该方法对2013年实验室收集到的来自131个免疫PRRS弱毒疫苗猪场的493份临床送检样品进行RT-PCR检测.PRRSV的检出率为27.2％(134/493),其中变异株的检出率为23.1％(114/493),经典株的检出率为8.11％(40/493),20份样品可以同时检出PRRSV变异株和经典株,检出率为4.1％(20/493).对临床送检的30个免疫PRRS活疫苗猪场的62个猪群1 079份血清,用IDEXX PRRS X3抗体检测试剂盒进行了血清学分析,结果显示总体阳性率为91.01％(982/1079),育肥猪群阳性率最高,达95.26％;其次为母猪群,阳性率高达93.7％;保育猪相对较低,为82.72％.根据猪群临床症状和PRRS状况将猪群分为四种类型.对62个免疫PRRS弱毒疫苗的规模化猪场进行了抗体分析,PRRSV抗体的离散度超过40％的猪场达59.7％(37/62).这些结果说明,变异株为主要流行毒株,同时存在经典株与变异株的混合感染;免疫猪群抗体不整齐,目前弱毒疫苗免疫效果不理想.【期刊名称】《金华职业技术学院学报》【年(卷),期】2016(016)006【总页数】7页(P72-78)【关键词】PRRS;免疫猪群;抗体;病原;监测【作者】何海健;邢刚;马涛;邱小伙;张耐【作者单位】金华职业技术学院,浙江金华321007;浙江大学农业部动物病毒学重点实验室,浙江杭州310058;浙江同点生物科技有限公司,浙江杭州310030;浙江同点生物科技有限公司,浙江杭州310030;浙江同点生物科技有限公司,浙江杭州310030【正文语种】中文【中图分类】S852.65+1猪繁殖与呼吸障碍综合征（PRRS），是一种由猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒（PRRSV）引起的，是以母猪繁殖障碍及仔猪和育肥猪呼吸道疾病为特征的急性病毒性传染病。
PCR诊断技术在生猪疾病诊断上的优缺点
PCR诊断技术在生猪疾病诊断上的优缺点生命科学学院09动物科学2009084543 叶兴洁指导老师：戴爱玲【摘要】：PCR技术以其敏感、特异、快速、准确的优点成为目前病毒学诊断、分子生物学实验最常用的技术之一，也是生猪病原检测和定型中最常用的技术。
目前国内外已经建立了多种检测生猪疾病的PCR技术。
【关键词】：PCR 诊断疾病抗原转录PCR技术以其敏感、特异、快速、准确的优点成为目前病毒学诊断、分子生物学实验最常用的技术之一，也是生猪病原检测和定型中最常用的技术。
目前国内外已经建立了多种检测生猪疾病的PCR技术。
一、PCR技术的基本原理PCR基本原理及方法是依据体内细胞分裂中的DNA半保留复制机理以及体内dNTP分子在不同温度下双链和单链可以互相转变的性质，人为地控制体外合成系统的温度，以促使双链变成单链DNA；单链DNA与人工合成的引物退火以及在dNTP存在下，耐高温的DNA 聚合酶使引物沿单链模板延伸成为双链DNA。
PCR是由高温变性(denaturation)、低温退火(annealing)、适温延伸(ex—tension)等三个基本反应(称一轮循环)组成的反复循环过程。
①高温变性，即在95℃高温下将所要扩增的靶基因或DNA双链解离成单链DNA；②低温退火，即以单链DNA为模板在37℃～55℃低温下与人工合成引物按碱基配对原则相结合；③延伸，在耐热TaqDNA聚合酶、M g2+、72℃、合适缓冲液、4种dNTP条件下合成互补DNA新链。
整个PCR过程一般只需30个循环。
每循环一次，目的DNA的拷贝数加倍。
由于前轮反应所扩增的DNA可作为后一轮反应的模板，因此最后扩增得到的DNA数量为Y=(1+x)n。
式中Y为DNA的量，X为反应平均效率，n为PCR的循环次数。
若反应的平均效率为100％，循环反应20次后，大约扩增了106倍。
每循环一次仅需几分钟，因此在2-4小时内即可使DNA扩增106。
通常在正常的反应条件下，经30次循环之后，酶的催化反应趋于饱和，就会出现“平台效应”，产物的量不再增加。
原位杂交与免疫组化方法在子宫颈病变中检测HPV效果对比分析
原位杂交与免疫组化方法在子宫颈病变中检测HPV效果对比分析何春年;翟金萍;徐翠清;陈琛;石卫东【期刊名称】《现代预防医学》【年(卷),期】2007(34)15【摘要】[目的]探讨在子宫颈活检组织中检测人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)较敏感和准确的技术方法。
[方法]采用一组子宫颈鳞状细胞癌(cervical squamous cell carcinoma,CSCC)和子宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)活检组织病例,分别做原位杂交(In situ hybridization,ISH)技术检测HPV-DNA和免疫组化(immunohistochemical,IHC)技术检测HPV-Ag。
在光镜下对比观察,统计分析。
[结果]30例CSCC和33例CIN,用ISH方法阳性率分别为56.7%和69.7%;用IHC方法阳性率分别为0.0%和15.2%,ISH与IHC对比,阳性率显著增高(P﹤0.01)。
5例IHC的阳性病例,ISH检测全部为阳性;IHC阴性的病例,ISH检测64.3%阳性,在连续切片上显示,ISH比IHC 的阳性细胞数明显增多,且强度增加。
[结论]用ISH技术检测HPV特异性好,灵敏度高,明显优于IHC方法,提倡在妇科临床病理工作中放弃IHC,应用ISH检测技术,有益于HPV的检出与防治。
【总页数】3页(P2812-2814)【关键词】人乳头瘤病毒;原位杂交;免疫组化;子宫颈鳞状细胞癌;子宫颈上皮内瘤变【作者】何春年;翟金萍;徐翠清;陈琛;石卫东【作者单位】河北省人民医院【正文语种】中文【中图分类】R373【相关文献】1.HPV分型检测、Aptima HPV检测和cobas 4800 HPV检测在诊断宫颈病变中的应用效果对比 [J], 魏媛;梁慧2.女阴尖锐湿疣及宫颈病变免疫组化与原位杂交HPV DNA的对比研究 [J], 杨建萍;宫亚红;古雅丽;王明臣3.不同石蜡标本预处理方法对原位杂交检测子宫颈组织中HPV16/18的影响 [J], 徐明堂;何春年;赵焕芬;王树松;段国臣;张秀智4.原位杂交与免疫组化技术在HPV检测中的应用 [J], 李雯;陈金培;梁颜笑;刘国荣5.原位杂交与免疫组化技术在HPV检测中的应用 [J], 刘春荣因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
病猪肺组织中PRRSV抗原免疫组织化学Envision法的原位检测
病猪肺组织中PRRSV抗原免疫组织化学Envision法的原位检测杨鸿;钱君娣;何启盖;马春全;卢玉葵;邓桦;曾振灵【期刊名称】《中国兽医科学》【年(卷),期】2009(39)3【摘要】为探讨肺组织中猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗原的定位诊断方法,制备了兔抗PRRSV抗体,采用免疫组织化学Envision法对疑似PRRS病猪肺组织中的病毒抗原进行了定位和半定量检测。
SDS-PAGE和Western-blotting检测结果表明,制得的兔抗PRRSV IgG纯度较高,具有良好的特异性,可用于原位检测病猪肺组织中PRRSV抗原的分布;Envision法的检测结果显示,PRRSV抗原的阳性表达产物主要出现在肺巨噬细胞胞浆内,其次为肺泡上皮细胞和细支气管黏膜上皮细胞;通过对5份经RT-PCR检测确认的PRRS病猪肺组织进行检测,均有较高的阳性细胞表达,平均阳性细胞率为46.5%。
证明Envi-sion法具有高敏感、低背景、快速简便的特点,可用于肺组织中PRRSV抗原的快速检测。
【总页数】4页(P237-240)【关键词】Envision法;猪生殖与呼吸综合征病毒;检测;肺【作者】杨鸿;钱君娣;何启盖;马春全;卢玉葵;邓桦;曾振灵【作者单位】佛山科学技术学院生命科学学院,广东佛山528231;华中农业大学动物医学院,湖北武汉430070;华南农业大学兽医学院,广东广州510642【正文语种】中文【中图分类】S852.659【相关文献】1.荧光原位杂交法与免疫组织化学法检测乳腺癌HER-2基因扩增及蛋白表达的对比研究 [J], 眭维国;欧明林;陈洁晶;彭红波;万友华;黄河;齐旻芳;戴勇2.免疫组织化学和荧光原位杂交检测肺腺癌ROS1表达的对比 [J], 梁小芹;王玲;刘凤磊;王卓;赵凤辉;郭应芳;王金穗3.用免疫组织化学染色法检测猪生殖-呼吸综合征病毒(PRRSV)抗原的研究 [J], 张晓梅;杨汉春4.免疫组化Envision法检测肺组织中猪圆环病毒抗原的研究 [J], 杨鸿;林涛;邓桦;何启盖;陈冬焕;马春全;卢玉葵5.荧光原位杂交法与免疫组织化学法检测乳腺癌HER2表达的差异性分析 [J], 王胜男;戴玉鑫;佟力军;孟令娜;夏冰因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
两种猪肺炎支原体原位杂交检测方法的应用
两种猪肺炎支原体原位杂交检测方法的应用王占伟;熊祺琰;冯志新;刘茂军;白方方;邵国青【期刊名称】《中国兽医杂志》【年(卷),期】2012(48)11【摘要】为了比较研究3种猪肺炎支原体(Mhp)的检测方法,利用已建立的显色原位杂交(CISH)和量子点荧光原位杂交(QD-FISH),并结合PCR方法,检测人工感染Mhp的试验猪、自然感染Mhp的试验猪和疑似感染Mhp的临床样品.结果显示,3种检测方法对人工感染组和自然感染组的检测率均为100％；对临床样品,PCR的检测率为90％,CISH的检测率为70％,QD-FISH的检测率为75％.结果表明,用于检测Mhp感染,PCR是最佳检测方法,但CISH和QD-FISH在Mhp检测和致病机理研究方面具有一定的应用价值.【总页数】4页(P6-8,中插1)【作者】王占伟;熊祺琰;冯志新;刘茂军;白方方;邵国青【作者单位】江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心,江苏南京210014;南京天邦生物科技有限公司,江苏南京210012;江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心,江苏南京210014;;江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心,江苏南京210014;;江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心,江苏南京210014;;江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心,江苏南京210014;;江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心,江苏南京210014【正文语种】中文【中图分类】S852.62【相关文献】1.肺炎支原体两种检测方法的临床应用效果分析 [J], 杨丽琳2.两种血清学检测方法在婴、幼儿肺炎支原体感染早期诊断中的应用研究 [J], 倪少娟;黄丽英;曾尚娟;陶春凤;张雪花;佘尚扬3.两种肺炎支原体检测方法的比较及临床应用 [J], 郭谦;王晓健;张爱爱;曹荣;张文平4.两种儿童肺炎支原体检测方法的对比分析及临床应用 [J], 黄梅霞5.两种猪瘟抗体检测方法的应用比较 [J], 郑教雀因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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猪 繁殖 与呼 吸综 合征 （ Ｐ ｏ ｒ ｃ ｉ ｎ ｅ ｒ ｅ ｐ ｒ ｏ ｄ ｕ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ ａ ｎ ｄ ｒ ｅ ｓ ｐ ｉ ｒ ａ ｔ ｏ ｒ ｙ ｓ ｙ ｎ ｄ ｒ ｏ ｍｅ ， Ｐ Ｒ Ｒ Ｓ ） 是 由猪 繁殖 与 呼吸 综 合 征病 毒 （ Ｐ ｏ ｒ ｃ ｉ ｎ ｅ ｒ ｅ ｐ ｒ ｏ ｄ ｕ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ ａ ｎ ｄ ｒ ｅ ｓ ｐ ｉ ｒ ａ ｔ ｏ ｒ ｙ ｓ ｙ ｎ ｄ ｒ ｏ ｍｅ ｖ ｉ ｒ ｕ ｓ ， Ｐ ＲＲ Ｓ Ｖ） 引起 的、 以母 猪 繁 殖 障 碍 和仔 猪 呼吸道综 合征 为主 要特征 。该 病 也称 猪 蓝耳
基 三 乙氧基硅 烷） ， ＤＥ Ｐ Ｃ （ 焦碳 酸二 乙酯 ） ， 去 离子 甲 酰胺 ， 鲑精 Ｄ ＮＡ， 硫 酸葡 聚糖 ， 蛋 白酶 Ｋ， Ｂ Ｓ Ａ（ 牛血
清 白蛋 白） ， Ａｖ ｉ ｄ ｉ ｎＳ Ｄ Ｓ（ 十二烷基 硫酸钠 ） ，ＮＢ Ｔ ／ Ｂ Ｃ Ｉ Ｐ（ 四 唑 氮
１ ９ ９ ６年 郭 宝 清 等 率 先在 国 内从 血 清 学调 查 和病 毒
分 离两 方 面 证 实 该 病 在 我 国存 在 ｌ ＿ ２ ］ 。２ ０ ０ ６年 来 我 国部分 地 区发 生 高 致病 性 猪 蓝 耳 病疫 情 ， 给养 猪 业 带 来 了巨 大 的 经 济 损 失 ］ 。Ｐ Ｒ Ｒ Ｓ是 威 胁 养 猪 业
组化 、 原位 杂 交的 方 法检 测人 工 感染 Ｐ ＲＲ Ｓ Ｖ 猪 的组 织 ， 结果在 人 工 感染后 ７ ｄ ， 用 免 疫 组 化 在 肝 脏 、脾 脏 、 肺脏 、 肾脏 、 扁桃 体 、 胸腺、 肺 门淋 巴 结 、 肠检 测到 阳性信 号 ； 用 原 位 杂 交 在 肝 脏 、脾 脏 、 肺脏、 肾脏 、 扁桃 体 、 胸 腺、 肺 门淋 巴结 、 十二指肠 、 大脑 检 测 到 阳性 信 号 ， 两组 结果 差异不 大 ； 但在 感 染后 ３ ５ ｄ ， 用免 疫 组 化 检 测 只 有 肺 门淋 巴 结 为 阳 性 ， 而 原 位 杂 交检 测 显 示 肝 脏 、脾 脏 、 肺脏、 肾脏 、 扁桃体 、 胸腺 、 肺 门淋 巴结 、 十二 指肠 、 大 脑
重要 的疫 病之 一 ， 用 于 检测 Ｐ Ｒ ＲＳ Ｖ 的方 法很 多 ， 如
蓝／ ５ 一 溴一 ４ 一 氯一 ３ 一 吲哚一 磷酸 盐 ） 等 均 为 成 都 天 泰 公 司
产 品； 探 针： ５ 一 Ｇ ＧＣ ＡＴ Ａ ＧＧ Ｇ ＧＡＣ ＡＡ（ Ｇ ＴＴ Ｔ ＡＣ Ｃ ＡＣ ＴＣ Ｃ Ｃ ＴＧ Ｔ ＴＴ ＡＡＣ 一 ３ ， 生物 素于 ５ 末
李 雪梅 。 ， 张 平英 。 ～， 程 安春 ” ， 汪铭 书。
（ １ 宜宾职业技术学院 ， 四川 宜 宾 ６ ４ ４ ０ ０ ３ ； ２长 江 大学 动物 科 学 学 院 ， 湖北 荆 州 ４ ３ ４ ０ ２ ５ ；
３动 物 疫 病 与 人 类 健 康 四川 省 重 点 实 验 室 ， 四川 Ｉ 雅安 ６ ２ ５ ０ １ ４ ）
１ ． １ ． ２ 主要 试 剂 自制兔 抗 Ｐ Ｒ ＲＳ Ｖ Ｉ ｇ Ｇ； 羊 抗 兔
过 氧化 物酶标 抗体 ， 显色剂 ＤＡＢ （ ３ ， ３二氨基 联 苯胺
四盐酸 ） 为 华 美 生 物 工 程 公 司 产 品 ；ＡＰ Ｅ Ｓ （ ３ － 氨 丙
美 国每 年因 Ｐ Ｒ Ｒ Ｓ造 成 的 经 济损 失 达 几 亿 美 元＿ ＿ １ ］ 。
摘 要 ： 探 讨 免疫组化 （ Ｉ ＨＣ） 和 原位杂 交 （ Ｉ Ｓ Ｈ） 方 法 检 测 石 蜡 切 片 中 猪 繁 殖 与 呼 吸 综 合 征 病 毒
（ Ｐ ＲＲ Ｓ Ｖ） 的特异性 和敏 感性 ， 为Ｐ Ｒ Ｒ Ｓ Ｖ 在 猪 体 内的 定位 、 致 病机 理研 究等提 供 有效 的试 验 手段 。用 免 疫
动 物医学 进展 。 ２ Ｏ １ ３ ， ３ ４ （ ６ ） ： ８ — １ ２
Ｐｒ ｏｇ ｒ ｅ ｓ ｓ ｉ ｎ Ｖｅ ｔ ｅ ｒ ｉ ｎａ ｒ ｙ Ｍｅ ｄｉ ｃ ｉ ｎｅ
免 疫 组 化 和原 位 杂 交技 术 检 测 人 工 感 染 Ｐ ＲＲＳ Ｖ 猪 体 内病 毒 定 位 的 比较
Ｅ Ｉ Ｉ Ｓ Ａ、 Ｒ Ｔ — Ｐ Ｃ Ｒ、 实 时 荧 光 定 量 ＲＴ — Ｐ Ｃ Ｒ等， 都 能
达 到 快 速 诊 断 的 目的 ， 但 不能对 病原 进行 追 踪定 位 ，
端 标记 为 Ｓ ａ ｎ ｇ ｏ ｎ美 国 Ｐ Ｅ公 司合 成和标 记 。
１ ． ２ 方 法
运 用免 疫组织 化学 方法 和原位 杂交 技术 则是 病 原定
病， 于 １ ９ ８ ７年 在 美 国 首 次 发 现 后 迅 速 蔓 延 到 各 地 。
的 １ ２头 ２ ８日龄仔 猪 。Ｐ Ｒ ＲＳ Ｖ病毒（ １ ０ ＴＣ Ｉ Ｉ ） ） 从 四川分 离 的 Ｐ Ｒ ＲＳ Ｖ Ｓ Ｃ 一 １ 株， 序列 分析 属美洲 型 ，
由动物疫 病 与人类 健康 四川 省重 点实 验室保 存 。
仍 为 阳性 。
关键 词 ： 免疫组 化 ； 原 位 杂交 ； 猪繁 殖 与呼吸 综合征 病毒
中图 分 类 号 ： ￥ ８ ５ ２ ． ６ ５ ９ ． ６ 文献标识码 ： Ａ 文章编号 ： １ ０ ０ ７ — ５ ０ ３ ８ （ ２ ０ １ ３ ） ０ ６ — ０ ０ ０ ８ — ０ ５
位 和分 布研究 的重 要手 段 ， 能 将 病 原 感染 与组 织 病
１ ． ２ ． １ 组 织样 品 来 源 ２ ８ 日龄 的 仔 猪 ｌ ２头 ， Ｐ Ｒ ＲＳ Ｖ 抗体 检测 阴性后 ， 用其 中 ２ 头 猪作 为空 白对