免疫组化和原位杂交技术检测人工感染PRRSV猪体内病毒定位的比较
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位 和分 布研究 的重 要手 段 ， 能 将 病 原 感染 与组 织 病
１ ． ２ ． １ 组 织样 品 来 源 ２ ８ 日龄 的 仔 猪 ｌ ２头 ， Ｐ Ｒ ＲＳ Ｖ 抗体 检测 阴性后 ， 用其 中 ２ 头 猪作 为空 白对
猪 繁殖 与呼 吸综 合征 （ Ｐ ｏ ｒ ｃ ｉ ｎ ｅ ｒ ｅ ｐ ｒ ｏ ｄ ｕ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ ａ ｎ ｄ ｒ ｅ ｓ ｐ ｉ ｒ ａ ｔ ｏ ｒ ｙ ｓ ｙ ｎ ｄ ｒ ｏ ｍｅ ， Ｐ Ｒ Ｒ Ｓ ） 是 由猪 繁殖 与 呼吸 综 合 征病 毒 （ Ｐ ｏ ｒ ｃ ｉ ｎ ｅ ｒ ｅ ｐ ｒ ｏ ｄ ｕ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ ａ ｎ ｄ ｒ ｅ ｓ ｐ ｉ ｒ ａ ｔ ｏ ｒ ｙ ｓ ｙ ｎ ｄ ｒ ｏ ｍｅ ｖ ｉ ｒ ｕ ｓ ， Ｐ ＲＲ Ｓ Ｖ） 引起 的、 以母 猪 繁 殖 障 碍 和仔 猪 呼吸道综 合征 为主 要特征 。该 病 也称 猪 蓝耳
重要 的疫 病之 一 ， 用 于 检测 Ｐ Ｒ ＲＳ Ｖ 的方 法很 多 ， 如
源自文库
蓝／ ５ 一 溴一 ４ 一 氯一 ３ 一 吲哚一 磷酸 盐 ） 等 均 为 成 都 天 泰 公 司
产 品； 探 针： ５ 一 Ｇ ＧＣ ＡＴ Ａ ＧＧ Ｇ ＧＡＣ ＡＡ（ Ｇ ＴＴ Ｔ ＡＣ Ｃ ＡＣ ＴＣ Ｃ Ｃ ＴＧ Ｔ ＴＴ ＡＡＣ 一 ３ ， 生物 素于 ５ 末
１ ． １ ． ２ 主要 试 剂 自制兔 抗 Ｐ Ｒ ＲＳ Ｖ Ｉ ｇ Ｇ； 羊 抗 兔
过 氧化 物酶标 抗体 ， 显色剂 ＤＡＢ （ ３ ， ３二氨基 联 苯胺
四盐酸 ） 为 华 美 生 物 工 程 公 司 产 品 ；ＡＰ Ｅ Ｓ （ ３ － 氨 丙
美 国每 年因 Ｐ Ｒ Ｒ Ｓ造 成 的 经 济损 失 达 几 亿 美 元＿ ＿ １ ］ 。
摘 要 ： 探 讨 免疫组化 （ Ｉ ＨＣ） 和 原位杂 交 （ Ｉ Ｓ Ｈ） 方 法 检 测 石 蜡 切 片 中 猪 繁 殖 与 呼 吸 综 合 征 病 毒
（ Ｐ ＲＲ Ｓ Ｖ） 的特异性 和敏 感性 ， 为Ｐ Ｒ Ｒ Ｓ Ｖ 在 猪 体 内的 定位 、 致 病机 理研 究等提 供 有效 的试 验 手段 。用 免 疫
李 雪梅 。 ， 张 平英 。 ～， 程 安春 ” ， 汪铭 书。
（ １ 宜宾职业技术学院 ， 四川 宜 宾 ６ ４ ４ ０ ０ ３ ； ２长 江 大学 动物 科 学 学 院 ， 湖北 荆 州 ４ ３ ４ ０ ２ ５ ；
３动 物 疫 病 与 人 类 健 康 四川 省 重 点 实 验 室 ， 四川 Ｉ 雅安 ６ ２ ５ ０ １ ４ ）
仍 为 阳性 。
关键 词 ： 免疫组 化 ； 原 位 杂交 ； 猪繁 殖 与呼吸 综合征 病毒
中图 分 类 号 ： ￥ ８ ５ ２ ． ６ ５ ９ ． ６ 文献标识码 ： Ａ 文章编号 ： １ ０ ０ ７ — ５ ０ ３ ８ （ ２ ０ １ ３ ） ０ ６ — ０ ０ ０ ８ — ０ ５
Ｅ Ｉ Ｉ Ｓ Ａ、 Ｒ Ｔ — Ｐ Ｃ Ｒ、 实 时 荧 光 定 量 ＲＴ — Ｐ Ｃ Ｒ等， 都 能
达 到 快 速 诊 断 的 目的 ， 但 不能对 病原 进行 追 踪定 位 ，
端 标记 为 Ｓ ａ ｎ ｇ ｏ ｎ美 国 Ｐ Ｅ公 司合 成和标 记 。
１ ． ２ 方 法
运 用免 疫组织 化学 方法 和原位 杂交 技术 则是 病 原定
动 物医学 进展 。 ２ Ｏ １ ３ ， ３ ４ （ ６ ） ： ８ — １ ２
Ｐｒ ｏｇ ｒ ｅ ｓ ｓ ｉ ｎ Ｖｅ ｔ ｅ ｒ ｉ ｎａ ｒ ｙ Ｍｅ ｄｉ ｃ ｉ ｎｅ
免 疫 组 化 和原 位 杂 交技 术 检 测 人 工 感 染 Ｐ ＲＲＳ Ｖ 猪 体 内病 毒 定 位 的 比较
１ ９ ９ ６年 郭 宝 清 等 率 先在 国 内从 血 清 学调 查 和病 毒
分 离两 方 面 证 实 该 病 在 我 国存 在 ｌ ＿ ２ ］ 。２ ０ ０ ６年 来 我 国部分 地 区发 生 高 致病 性 猪 蓝 耳 病疫 情 ， 给养 猪 业 带 来 了巨 大 的 经 济 损 失 ］ 。Ｐ Ｒ Ｒ Ｓ是 威 胁 养 猪 业
基 三 乙氧基硅 烷） ， ＤＥ Ｐ Ｃ （ 焦碳 酸二 乙酯 ） ， 去 离子 甲 酰胺 ， 鲑精 Ｄ ＮＡ， 硫 酸葡 聚糖 ， 蛋 白酶 Ｋ， Ｂ Ｓ Ａ（ 牛血
清 白蛋 白） ， Ａｖ ｉ ｄ ｉ ｎ — ＡＰ（ 亲 和 素一 碱 性 磷 酸 酶 结 合 物） ， Ｓ Ｄ Ｓ（ 十二烷基 硫酸钠 ） ，ＮＢ Ｔ ／ Ｂ Ｃ Ｉ Ｐ（ 四 唑 氮
病， 于 １ ９ ８ ７年 在 美 国 首 次 发 现 后 迅 速 蔓 延 到 各 地 。
的 １ ２头 ２ ８日龄仔 猪 。Ｐ Ｒ ＲＳ Ｖ病毒（ １ ０ ＴＣ Ｉ Ｉ ） ） 从 四川分 离 的 Ｐ Ｒ ＲＳ Ｖ Ｓ Ｃ 一 １ 株， 序列 分析 属美洲 型 ，
由动物疫 病 与人类 健康 四川 省重 点实 验室保 存 。
组化 、 原位 杂 交的 方 法检 测人 工 感染 Ｐ ＲＲ Ｓ Ｖ 猪 的组 织 ， 结果在 人 工 感染后 ７ ｄ ， 用 免 疫 组 化 在 肝 脏 、脾 脏 、 肺脏 、 肾脏 、 扁桃 体 、 胸腺、 肺 门淋 巴 结 、 肠检 测到 阳性信 号 ； 用 原 位 杂 交 在 肝 脏 、脾 脏 、 肺脏、 肾脏 、 扁桃 体 、 胸 腺、 肺 门淋 巴结 、 十二指肠 、 大脑 检 测 到 阳性 信 号 ， 两组 结果 差异不 大 ； 但在 感 染后 ３ ５ ｄ ， 用免 疫 组 化 检 测 只 有 肺 门淋 巴 结 为 阳 性 ， 而 原 位 杂 交检 测 显 示 肝 脏 、脾 脏 、 肺脏、 肾脏 、 扁桃体 、 胸腺 、 肺 门淋 巴结 、 十二 指肠 、 大 脑
１ ． ２ ． １ 组 织样 品 来 源 ２ ８ 日龄 的 仔 猪 ｌ ２头 ， Ｐ Ｒ ＲＳ Ｖ 抗体 检测 阴性后 ， 用其 中 ２ 头 猪作 为空 白对
猪 繁殖 与呼 吸综 合征 （ Ｐ ｏ ｒ ｃ ｉ ｎ ｅ ｒ ｅ ｐ ｒ ｏ ｄ ｕ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ ａ ｎ ｄ ｒ ｅ ｓ ｐ ｉ ｒ ａ ｔ ｏ ｒ ｙ ｓ ｙ ｎ ｄ ｒ ｏ ｍｅ ， Ｐ Ｒ Ｒ Ｓ ） 是 由猪 繁殖 与 呼吸 综 合 征病 毒 （ Ｐ ｏ ｒ ｃ ｉ ｎ ｅ ｒ ｅ ｐ ｒ ｏ ｄ ｕ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ ａ ｎ ｄ ｒ ｅ ｓ ｐ ｉ ｒ ａ ｔ ｏ ｒ ｙ ｓ ｙ ｎ ｄ ｒ ｏ ｍｅ ｖ ｉ ｒ ｕ ｓ ， Ｐ ＲＲ Ｓ Ｖ） 引起 的、 以母 猪 繁 殖 障 碍 和仔 猪 呼吸道综 合征 为主 要特征 。该 病 也称 猪 蓝耳
重要 的疫 病之 一 ， 用 于 检测 Ｐ Ｒ ＲＳ Ｖ 的方 法很 多 ， 如
源自文库
蓝／ ５ 一 溴一 ４ 一 氯一 ３ 一 吲哚一 磷酸 盐 ） 等 均 为 成 都 天 泰 公 司
产 品； 探 针： ５ 一 Ｇ ＧＣ ＡＴ Ａ ＧＧ Ｇ ＧＡＣ ＡＡ（ Ｇ ＴＴ Ｔ ＡＣ Ｃ ＡＣ ＴＣ Ｃ Ｃ ＴＧ Ｔ ＴＴ ＡＡＣ 一 ３ ， 生物 素于 ５ 末
１ ． １ ． ２ 主要 试 剂 自制兔 抗 Ｐ Ｒ ＲＳ Ｖ Ｉ ｇ Ｇ； 羊 抗 兔
过 氧化 物酶标 抗体 ， 显色剂 ＤＡＢ （ ３ ， ３二氨基 联 苯胺
四盐酸 ） 为 华 美 生 物 工 程 公 司 产 品 ；ＡＰ Ｅ Ｓ （ ３ － 氨 丙
美 国每 年因 Ｐ Ｒ Ｒ Ｓ造 成 的 经 济损 失 达 几 亿 美 元＿ ＿ １ ］ 。
摘 要 ： 探 讨 免疫组化 （ Ｉ ＨＣ） 和 原位杂 交 （ Ｉ Ｓ Ｈ） 方 法 检 测 石 蜡 切 片 中 猪 繁 殖 与 呼 吸 综 合 征 病 毒
（ Ｐ ＲＲ Ｓ Ｖ） 的特异性 和敏 感性 ， 为Ｐ Ｒ Ｒ Ｓ Ｖ 在 猪 体 内的 定位 、 致 病机 理研 究等提 供 有效 的试 验 手段 。用 免 疫
李 雪梅 。 ， 张 平英 。 ～， 程 安春 ” ， 汪铭 书。
（ １ 宜宾职业技术学院 ， 四川 宜 宾 ６ ４ ４ ０ ０ ３ ； ２长 江 大学 动物 科 学 学 院 ， 湖北 荆 州 ４ ３ ４ ０ ２ ５ ；
３动 物 疫 病 与 人 类 健 康 四川 省 重 点 实 验 室 ， 四川 Ｉ 雅安 ６ ２ ５ ０ １ ４ ）
仍 为 阳性 。
关键 词 ： 免疫组 化 ； 原 位 杂交 ； 猪繁 殖 与呼吸 综合征 病毒
中图 分 类 号 ： ￥ ８ ５ ２ ． ６ ５ ９ ． ６ 文献标识码 ： Ａ 文章编号 ： １ ０ ０ ７ — ５ ０ ３ ８ （ ２ ０ １ ３ ） ０ ６ — ０ ０ ０ ８ — ０ ５
Ｅ Ｉ Ｉ Ｓ Ａ、 Ｒ Ｔ — Ｐ Ｃ Ｒ、 实 时 荧 光 定 量 ＲＴ — Ｐ Ｃ Ｒ等， 都 能
达 到 快 速 诊 断 的 目的 ， 但 不能对 病原 进行 追 踪定 位 ，
端 标记 为 Ｓ ａ ｎ ｇ ｏ ｎ美 国 Ｐ Ｅ公 司合 成和标 记 。
１ ． ２ 方 法
运 用免 疫组织 化学 方法 和原位 杂交 技术 则是 病 原定
动 物医学 进展 。 ２ Ｏ １ ３ ， ３ ４ （ ６ ） ： ８ — １ ２
Ｐｒ ｏｇ ｒ ｅ ｓ ｓ ｉ ｎ Ｖｅ ｔ ｅ ｒ ｉ ｎａ ｒ ｙ Ｍｅ ｄｉ ｃ ｉ ｎｅ
免 疫 组 化 和原 位 杂 交技 术 检 测 人 工 感 染 Ｐ ＲＲＳ Ｖ 猪 体 内病 毒 定 位 的 比较
１ ９ ９ ６年 郭 宝 清 等 率 先在 国 内从 血 清 学调 查 和病 毒
分 离两 方 面 证 实 该 病 在 我 国存 在 ｌ ＿ ２ ］ 。２ ０ ０ ６年 来 我 国部分 地 区发 生 高 致病 性 猪 蓝 耳 病疫 情 ， 给养 猪 业 带 来 了巨 大 的 经 济 损 失 ］ 。Ｐ Ｒ Ｒ Ｓ是 威 胁 养 猪 业
基 三 乙氧基硅 烷） ， ＤＥ Ｐ Ｃ （ 焦碳 酸二 乙酯 ） ， 去 离子 甲 酰胺 ， 鲑精 Ｄ ＮＡ， 硫 酸葡 聚糖 ， 蛋 白酶 Ｋ， Ｂ Ｓ Ａ（ 牛血
清 白蛋 白） ， Ａｖ ｉ ｄ ｉ ｎ — ＡＰ（ 亲 和 素一 碱 性 磷 酸 酶 结 合 物） ， Ｓ Ｄ Ｓ（ 十二烷基 硫酸钠 ） ，ＮＢ Ｔ ／ Ｂ Ｃ Ｉ Ｐ（ 四 唑 氮
病， 于 １ ９ ８ ７年 在 美 国 首 次 发 现 后 迅 速 蔓 延 到 各 地 。
的 １ ２头 ２ ８日龄仔 猪 。Ｐ Ｒ ＲＳ Ｖ病毒（ １ ０ ＴＣ Ｉ Ｉ ） ） 从 四川分 离 的 Ｐ Ｒ ＲＳ Ｖ Ｓ Ｃ 一 １ 株， 序列 分析 属美洲 型 ，
由动物疫 病 与人类 健康 四川 省重 点实 验室保 存 。
组化 、 原位 杂 交的 方 法检 测人 工 感染 Ｐ ＲＲ Ｓ Ｖ 猪 的组 织 ， 结果在 人 工 感染后 ７ ｄ ， 用 免 疫 组 化 在 肝 脏 、脾 脏 、 肺脏 、 肾脏 、 扁桃 体 、 胸腺、 肺 门淋 巴 结 、 肠检 测到 阳性信 号 ； 用 原 位 杂 交 在 肝 脏 、脾 脏 、 肺脏、 肾脏 、 扁桃 体 、 胸 腺、 肺 门淋 巴结 、 十二指肠 、 大脑 检 测 到 阳性 信 号 ， 两组 结果 差异不 大 ； 但在 感 染后 ３ ５ ｄ ， 用免 疫 组 化 检 测 只 有 肺 门淋 巴 结 为 阳 性 ， 而 原 位 杂 交检 测 显 示 肝 脏 、脾 脏 、 肺脏、 肾脏 、 扁桃体 、 胸腺 、 肺 门淋 巴结 、 十二 指肠 、 大 脑