(完整版)常用免疫学检验技术的基本原理
免疫学检测技术的基本原理及其应用 ppt课件
要
免疫学检测技术主要应用： 对多种免疫性疾病的诊断、疗效评估、 发病机制探讨; 对抗原性物质、免疫细胞、细胞因子、 粘附分子或细胞受体等的定性、定量检测。
PPT课件
1
第一节
抗原或抗体的检测
抗原-抗体反应包括：
沉淀反应、凝集反应、溶解反应、补体 结合反应、中和反应等。
抗原-抗体反应可用已知的特异性抗体检测 未知的抗原；也可用已知的抗原检测未知的 抗体。
将待测血清标本作琼脂将待测血清标本作琼脂凝胶电泳不同分子量凝胶电泳不同分子量蛋白组分开然后与电蛋白组分开然后与电泳方向平行挖一泳方向平行挖一小槽加入加入相应的相应的抗血清抗血清与不同区带的蛋白抗原作不同区带的蛋白抗原作双向免疫扩散在各区双向免疫扩散在各区带相应的位置形成带相应的位置形成沉淀沉淀常用于血清蛋白种类分常用于血清蛋白种类分也称免疫扩散是把单向免疫扩散同电也称免疫扩散是把单向免疫扩散同电泳结合在一起的方法
用荧光素、同位素或酶等示踪物质 标 记抗体（或抗原）进行抗原-抗体反应。 能极大地提高了反应的灵敏度，可以对 微量物质进行定量、定性或定位检测。 三种基本类型：免疫荧光技术、免疫酶 技术和同位素标记技术。
PPT课件
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免疫荧光显微技术 (Immunofluorescence Technique)
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免疫电泳 （Immunoelectrophoresis)
将待测血清标本作琼脂 凝胶电泳，不同分子量 蛋白组分开，然后与电 泳方向平行挖一小槽， 加入相应的抗血清，与 不同区带的蛋白抗原作 双向免疫扩散，在各区 带相应的位置形成沉淀 弧。 常用于血清蛋白种类分 析。
PPT课件 15
免疫学检验的基本原理与方法
免疫学检验的基本原理与方法免疫学检验是一种常见的实验室技术，在医学、生物学等领域具有广泛的应用。
本文将介绍免疫学检验的基本原理和常用的方法，并探讨其在疾病诊断、病毒检测和药物研发中的应用。
一、免疫学检验的基本原理免疫学检验基于机体免疫系统的特性，利用抗原与抗体之间的特异性结合反应来检测和定量分析抗原或抗体的存在。
其基本原理如下：1. 特异性识别：抗体可以识别并结合与之对应的抗原，形成特异性的抗原-抗体复合物。
2. 高度敏感性：免疫学检验可以检测极低浓度的抗原或抗体，提供高度敏感的结果。
3. 双重验证：通过采用一对互补的抗原和抗体，可以用于验证检测结果的准确性。
二、常见的免疫学检验方法在免疫学检验中，常用的方法包括酶联免疫吸附实验（ELISA）、免疫印迹（Western Blotting）、免疫荧光等。
下面将对这些方法进行具体介绍：1. 酶联免疫吸附实验（ELISA）ELISA是一种常见且广泛应用的免疫学检验技术。
它利用酶标记的抗体与待检测样品中的抗原结合，形成抗原-抗体-酶标记物复合物。
通过添加底物，酶标记物能够催化底物的反应，产生可测量的信号。
ELISA可用于定量或半定量测定目标物的浓度，并可应用于多种领域，如感染性疾病的诊断、蛋白质的定量等。
2. 免疫印迹（Western Blotting）免疫印迹是一种常用于检测特定蛋白质的免疫学技术。
该方法通过将复杂的蛋白质混合物经SDS-PAGE电泳分离后，将之转移到固体载体上。
然后，用特异性抗体与目标蛋白质结合，并通过酶标记的二抗与一抗结合，产生可见的信号。
免疫印迹可用于诊断疾病、检测蛋白质相对分子质量和检测表达水平等。
3. 免疫荧光免疫荧光是一种利用抗体对荧光染料标记的抗原进行特异性识别的免疫学技术。
该技术通过与荧光探针结合并激发荧光信号，来检测细胞或组织中特定抗原的定位和表达。
免疫荧光广泛应用于免疫组织化学、细胞信号转导、病毒感染等领域，可用于研究细胞和组织的结构、功能以及疾病的发生机制。
免疫学检测技术的基本原理演示文稿
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* 间接法：用于检测抗体
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* 双抗体夹心法：用于检测抗原。
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B 免疫组化技术—检测组织中或细胞表面的抗原。 对抗原进行定性、定量、定位检测。
C 酶联免疫斑点试验（ELISPOT）
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（三）免疫标记技术
用荧光素、同位素或酶等示踪物质 标记抗体
（或抗原）进行抗原-抗体反应。
标记物质与抗体（或抗原）的化学连接未改变 抗体（或抗原）的免疫学特性，且极大的提高了 反应的灵敏度，可以对微量物质进行定量、定性 或定位检测。
免疫标记技术主要有三种基本类型： 免疫荧光技术
该法是将凝胶电泳与固相免疫相接合的检测技术，即将电泳 分区的蛋白质转移到固相载体，再用酶免疫、放射免疫技术测定 。
常用于检测多种病毒的抗原或抗体。如检测HIV抗体。
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免疫学检测技术的基本原理演 示文稿
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免疫学检测技术的基本原理
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抗原抗体比例对反应现象的影响
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三. 检测抗原和抗体的体外试验
（一）凝集反应
颗粒性抗原（RBC、细菌等）与相应抗体
结合形成肉眼可见凝集物的现象或反应。 1．直接凝集试验
（1）玻片凝集试验：用于定性测抗原。
如ABO血型鉴定，细菌的鉴定、分型等。
常用的临床免疫学检测技术【可编辑全文】
可编辑修改精选全文完整版常用的临床免疫学检测技术第一讲免疫浊度技术一、免疫浊度法基本原理免疫浊度法是可溶性抗原、抗体在液相中特异结合，产生一定大小的复合物，形成光的折射或吸收，测定这种折射或吸收后的透射光或散射光作为计算单位。
二、免疫比浊法的特点：1、自动化免疫分析稳定性好，敏感性高(达ng/L)、精确度高（CV<5%)，干扰因素少，结果判断更加客观、准确，也便于进行室内及室间质量控制。
2、自动化免疫分析快速、简便，结果回报时间短，便于及时将各种信息向临床反馈，又可节约大量人力物力，利于大批量样品的处理。
3、自动化免疫分析能更好地避免标本之间的污染及标本对人的污染。
4、自动化免疫分析可利用多道计数器、测光仪，同一份样品同时测定几十种和临床有关的分析项目，血清用量少，具有明显的应用优势。
三、免疫浊度法分类（一）透射光免疫浊度法透射光免疫浊度法是个极简便的方法，测定方式是测定入射光因反射、吸收或散射后的衰减，读数以吸收光单位（A）或OD表示，这种A值反映了入射光和透射光的比率。
（二）散射比浊法散射比浊法应用越来越多，且有替代其他免疫定量法的趋势。
散射比浊的原理是根据雷利(Rayleigh)公式提出的，当复合物较小时（<3*10）呈全透射，透射与散射相当。
当复合物大于入射光波的1/20时，形成不对称前向散射，在90o以前的角度测量散射光皆取得最佳效果，散射光的量代表复合物的量。
1、终点散射比浊法2、速率散射比浊法速率法的灵敏度与特异性都优于终点法，前者的灵敏度比后者高出3个数量级之多，但终点法稳定性好。
所谓速率，是在某单位时间内形成大于3*10以上的复合物量（不是积累数），当仪器测定到某一时间单位内形成的速率下降时，即出现速率峰，该峰值的高低，即代表抗原的量。
速率散射比浊法有三大特点：1、时间快，一般在30-60s之内就可完成测试；2、比较准确，因其测定形成速率，抗原多，速率快；3、节省试剂。
常用免疫学检验技术的基本原理
常用免疫学检验技术得基本原理免疫学检测即就是根据抗原、抗体反应得原理,利用已知得抗原检测未知得抗ﻫ体或利用已知得抗体检测未知得抗原.由于外源性与内源性抗原均可通过不同得抗原递呈途径诱导生物机体得免疫应答，在生物体内产生特异性与非特异性Tﻫ细胞得克隆扩增,并分泌特异性得免疫球蛋白(抗体)。
由于抗体－抗原得结合具有特异性与专一性得特点，这种检测可以定性、定位与定量地检测某一特异得蛋白(抗原或抗体).免疫学检测技术得用途非常广泛,它们可用于各种疾病得ﻫ诊断、疗效评价及发病机制得研究。
ﻫ最初得免疫检测方法就是将抗原或抗体得一方或双方在某种介质中进行扩散，通过观察抗原-抗体相遇时产生得沉淀反应，检测抗原或抗体,最终达到诊断得目得。
这种扩散可以就是蛋白得自然扩散,例如环状沉淀试验、单向免疫扩散ﻫ试验、双向免疫扩散实验。
单向免疫扩散试验就就是在凝胶中混入抗体,制成含有ﻫ抗体得凝胶板,而将抗原加入凝胶板预先打好得小孔内，让抗原从小孔向四周得凝胶自然扩散,当一定浓度得抗原与凝胶中得抗体相遇时便能形成免疫复合物,出现以小孔为中心得圆形沉淀圈，沉淀圈得直径与加入得抗原浓度成正比.ﻫ利用蛋白在不同酸碱度下带不同电荷得特性，可以利用人为得电场将抗原、ﻫ抗体扩散,例如免疫电泳试验与双向免疫电泳。
免疫电泳首先将抗原加入凝胶中ﻫ电泳,将抗原各成分依次分散开。
然后沿电泳方向平行挖一直线形槽,于槽内加入含有针对各种抗原得混合抗体,让各抗原成分与相应抗体进行自然扩散,形成沉淀线.然后利用标准得抗原-抗体沉淀线进行抗原蛋白(或抗体)得鉴别。
ﻫ上述得方法都就是利用肉眼观察抗原-抗体反应产生得沉淀,因此灵敏度有很大得ﻫ局限。
比浊法引入沉淀检测产生得免疫比浊法就就是利用浊度计测量液体中抗原－ﻫ抗体反应产生得浊度,根据标准曲线来计算抗原(或抗体)得含量。
该方法不但ﻫ大大提高了检测得灵敏度,且可对抗原、抗体进行定量得检测.ﻫ免疫印迹法则首先通过电泳分离标准得已知抗原，然后将电泳分离得蛋白质转移到硝酸纤维膜上，浸于待测血清中。
免疫学检测技术的基本原理-精品医学课件
2．间接凝集反应
概念：将可溶性抗原/抗体先结合于一种
与免疫无关的颗粒状载体表面，成为致敏颗 粒，再与相应抗体/抗原结合，出现的凝集现 象。
载体颗粒：红细胞、乳胶颗粒、活性炭 颗粒等。
正向间接凝集反应如：类风湿因子的检测
可溶性 载体 抗原
抗体
间接凝集
反向间接凝集反应：若将抗体结 合于载体微球上检测抗原。
淋巴细胞转化试验 （形态计数法）
• 原理：人T细胞表面有PHA或ConA受体，T细 胞在体外受PHA或ConA的刺激后能转化为体 积较大、代谢旺盛、且能进行分裂的淋巴细胞， 以此测定T细胞的功能。
PHA刺激
48~72小时
mitogens small T lymphocyte
lymphoblast
免
疫 测
( Ag*-Ab)+ (Ag-Ab) 抗原抗体复合物
定
法
分离Ag*-Ab 和游离Ag*
(RIA)
示
测定Ag*-Ab和/或游离Ag*放射性
意
图
从标准曲线上读知含量
第二节 免疫细胞功能的测定
免疫细胞的分离与鉴定 免疫细胞功能测定
一、淋巴细胞的分离与鉴定
• 根据细胞的密度、粘附性能、表面标志 等，采用不同方法分离外周血单个核细 胞、淋巴细胞及不同亚群。
免疫荧光显微技术
间 接 免 疫 荧 光 法 示 意 图
抗核抗体(FITC-IgG）)
(2)酶免疫测定法（EIA):
常用酶：HRP、ALP • ELISA：双抗夹心法、间接法、竞争法等。
基本步骤
底物
显色
二抗 一抗
不同Ag
to detect Ab to detect Ag
免疫学技术基本原理
免疫学技术基本原理
引言
免疫学技术是研究和应用免疫系统原理的科学，广泛应用于医学、生物学和生物技术领域。
本文将介绍免疫学技术的基本原理。
抗原与抗体
在免疫学中，抗原是指能够诱导机体产生免疫应答的物质。
抗
体是免疫系统产生的一种特殊蛋白质，能够与抗原结合形成免疫复
合物。
免疫反应与特异性
免疫系统的主要作用是识别和消灭外来物质，即抗原。
免疫反
应的特异性是指免疫系统可以针对不同的抗原做出不同的应答。
免疫学技术的分类
免疫学技术可以分为直接和间接方法。
直接方法包括免疫印迹、免疫组织化学和流式细胞术等，它们可以直接检测抗原或抗体的存在。
间接方法则利用标记物（如酶或荧光染料）来检测免疫反应。
常用的免疫学技术
免疫印迹
免疫印迹是一种通过检测特定抗体与抗原结合形成的免疫复合
物来检测蛋白质的方法。
它可以用于确定蛋白质的分子量和定量分析。
免疫组织化学
免疫组织化学是一种利用免疫反应检测组织或细胞中抗原的方法。
它可以用于研究组织和细胞的分布和表达。
流式细胞术
流式细胞术是一种通过荧光标记的抗体来鉴定和分离细胞的方法。
它可以用于研究细胞表面标记物的表达和分析细胞群体的组成。
结论
免疫学技术是研究和应用免疫系统原理的重要工具。
免疫学技
术的基本原理包括抗原与抗体的相互作用、免疫系统的特异性和免
疫学技术的分类与应用。
通过免疫学技术，我们能够更好地理解和
研究免疫系统的功能和疾病机制。
常用免疫学检验技术的基本原理
常用免疫学检验技术的基本原理免疫学检测即是根据抗原、抗体反应的原理，利用已知的抗原检测未知的抗体或利用已知的抗体检测未知的抗原。
由于外源性和内源性抗原均可通过不同的抗原递呈途径诱导生物机体的免疫应答，在生物体内产生特异性和非特异性T细胞的克隆扩增，并分泌特异性的免疫球蛋白（抗体）.由于抗体－抗原的结合具有特异性和专一性的特点，这种检测可以定性、定位和定量地检测某一特异的蛋白（抗原或抗体)。
免疫学检测技术的用途非常广泛,它们可用于各种疾病的诊断、疗效评价及发病机制的研究。
最初的免疫检测方法是将抗原或抗体的一方或双方在某种介质中进行扩散，通过观察抗原－抗体相遇时产生的沉淀反应，检测抗原或抗体，最终达到诊断的目的。
这种扩散可以是蛋白的自然扩散，例如环状沉淀试验、单向免疫扩散试验、双向免疫扩散实验。
单向免疫扩散试验就是在凝胶中混入抗体，制成含有抗体的凝胶板，而将抗原加入凝胶板预先打好的小孔内，让抗原从小孔向四周的凝胶自然扩散，当一定浓度的抗原和凝胶中的抗体相遇时便能形成免疫复合物，出现以小孔为中心的圆形沉淀圈,沉淀圈的直径与加入的抗原浓度成正比.利用蛋白在不同酸碱度下带不同电荷的特性，可以利用人为的电场将抗原、抗体扩散，例如免疫电泳试验和双向免疫电泳。
免疫电泳首先将抗原加入凝胶中电泳，将抗原各成分依次分散开.然后沿电泳方向平行挖一直线形槽，于槽内加入含有针对各种抗原的混合抗体，让各抗原成分与相应抗体进行自然扩散，形成沉淀线。
然后利用标准的抗原－抗体沉淀线进行抗原蛋白（或抗体)的鉴别。
上述的方法都是利用肉眼观察抗原－抗体反应产生的沉淀，因此灵敏度有很大的局限.比浊法引入沉淀检测产生的免疫比浊法就是利用浊度计测量液体中抗原－抗体反应产生的浊度，根据标准曲线来计算抗原(或抗体）的含量。
该方法不但大大提高了检测的灵敏度，且可对抗原、抗体进行定量的检测。
免疫印迹法则首先通过电泳分离标准的已知抗原,然后将电泳分离的蛋白质转移到硝酸纤维膜上，浸于待测血清中。
免疫学检测技术的基本原理
第一节 基于 抗原-抗体 反应的检测 方法
一．抗原抗体反应概念
抗原与相应抗体在体内、外发生的高度特异性结 合反应。在合适条件下所进行的体外反应中，抗 原与相应抗体特异性结合可呈现某种反应现象 （如凝集、沉淀）。由于实验所用抗体存在于血 清中，故又称血清学反应。
二、抗原抗体反 应的特点
高度特异性
通过记录溶血空斑的数 目可知抗原特异性B细胞 的数目
细胞毒试验
51Cr释放法
乳酸脱氢酶释放法
细胞染色法
靶细胞被杀伤后， 向体系中加入台盼 兰，可进入膜破损 的细胞内，将细胞 染成蓝色。活细胞 拒染而不着色。
凋亡细胞 检测法
琼脂糖电泳法
正常细胞基因组DNA 凋亡细胞
TUNEL法
在细胞中加入末端脱氧 核苷酸转移酶(TdT)和 生物素标记的核苷酸
血浆
单 个核细 胞
(PBMC，包
离心
括淋巴细胞、 C和NK)
红细胞和 粒细胞
外周血单个核细胞的分离
稀释 血液
淋巴细胞分 离液(葡聚糖 -泛影葡胺 r=1.078)
血浆
单 个核细胞 (PBMC，包
括淋巴细胞、
DC和NK)
离心
红细胞和 粒细胞
淋巴细胞及其亚群的分离
磁珠分离法
1
免疫吸附分 离法
2
流式细胞术
三．表面化学基团之间的可逆结合
抗原抗体结合除了空间结构互补外，主要以氢键、范德华力和疏水键 等非共价结合。易受温度、酸碱度和离子强度的影响而解离，解离后 抗原抗体仍具有原有特性，可借助亲和层析法纯化抗原或抗体。
抗原抗体反应的2个阶段
○ 第1阶段是抗原抗体特异性结合，可在数秒钟至几分钟内完成；第2阶段 是小的抗原抗体复合物靠正负电荷吸引形成较大复合物，所需时间从数 分钟至数日不等。
免疫学检测原理
免疫学检测原理
免疫学检测是一种常用的生物学分析方法，用于检测体内的抗体或抗原。
其原理基于免疫反应，即抗原与抗体之间的特异性相互作用。
免疫学检测通常分为直接和间接检测两种方法。
直接检测中，样品中的抗原与标记有特定抗体的探针结合，形成抗原-抗体
复合物。
这种复合物可以通过各种方法来检测，例如流式细胞仪、免疫组化等。
间接检测中，样品中的抗原与特定抗体结合后，再与标记有第二抗体的探针结合。
这种方法通常用于检测抗体。
在免疫学检测中，探针的选择很关键。
探针可以是放射性同位素、酶、荧光剂或荧光素等，这些标记物能够产生可检测的信号。
通过测量标记物的信号强度，可以确定样品中的目标抗原或抗体的存在和数量。
免疫学检测方法的选择取决于具体的实验要求以及所需要检测的抗体或抗原类型。
常见的免疫学检测方法包括酶联免疫吸附试验（ELISA）、西方印迹（Western blotting）和免疫组化等。
总的来说，免疫学检测是一种快速、敏感且特异的方法，被广泛应用于临床诊断、生物医学研究和药物开发等领域。
通过免疫学检测，可以获得关于免疫系统功能和疾病状态的重要信息，有助于了解疾病的发展机制和制定相应的治疗策略。
免疫学检测技术的基本原理2012
BAS-ELISA法：敏感性更高。用于抗原、抗 体以及DNA、RNA的检测。
卵白及某些微生物中的蛋白质
抗原或抗体的检测
微粒捕获酶免疫分析技术 常用于检测肿瘤标志物(CEA、AFP)
性激素、甲状腺素（T3、T4）、HCG等微 量可溶性抗原 。将已知抗体致敏的微粒 与生物素亲和素酶放大系统结合，最后 酶作用于荧光底物，通过检测荧光强度 来判断未知抗原的含量。
磁性微粒子固相：直径2.8微米，粒子小，悬 液类似液相；包被面积大；磁吸引分离方便。
抗原或抗体的检测
免疫组化技术：指带显色剂（酶）标 记的特异性抗体或抗原在组织细胞原位 发生抗原抗体反应和组织化学的呈色反 应，对相应抗原或抗体进行定位、定性 、定量检测的技术。
免疫组化技术
(2)免疫荧光技术 是用荧光素标记一抗或二抗，检
免疫学检测技术的基本原理2012
免疫学诊断
●抗原或抗体的检测 ●淋巴细胞的测定 ●免疫学检测方法的应用
目的要求
1.掌握：凝集反应、沉淀反应、免疫 标记技术的概念；凝集反应、沉淀 反应、免疫标记技术的常用方法及 实际应用.
2.熟悉：细胞免疫检测法的基本原理 及实际应用;
3.了解：其他免疫学检测方法及其应用
1:8
1:16
⑵ 间接凝集反应的应用
常用的载体颗粒：人O型血红细胞 和 聚苯乙烯乳胶颗粒
应用：链球菌O抗体的检测实验; 类风湿因子的检测. Coombs试验
抗原或抗体的检测
2.沉淀反应 可溶性抗原与相应抗体结合后出现
沉淀物称沉淀反应。 ★免疫比浊法
★单向免疫扩散
第二十二章免疫学检测技术的基本原理
第一节 体外抗原抗体结合反应的 特点及影响因素
（一）抗原抗体反应的特点 1. 高度特异性 2. 表面化学基团之间的可逆结合 3. 适宜的抗原抗体浓度和比例 4. 抗原抗体反应的两个阶段
1. 高度特异性 抗原表位与抗体分子的超变区互补结合 抗体检测抗原： 抗伤寒杆菌的抗体：检测伤寒杆菌 抗原检测抗体： 乙肝病毒：检测乙肝病毒抗体
13年
在胆汁中适应性生 长，充分减毒成为 预防肺结核的疫苗。
230次传代
卡介苗 Bacillus Calmette-Guerin （BCG）
灭活疫苗
选用免疫原性强的病原体，经人工大量培养后， 用理化方法灭活制成。又称“死疫苗”。
如：流感疫苗、甲肝疫苗
优点：安全
缺点：免疫原性较差，主要诱导特异性抗体的
淋巴细胞转化试验（形态学示意图）
原理：人T细胞表面有PHA或ConA受体， T细胞在体外受PHA或ConA的刺激后能转 化为体积较大、代谢旺盛、且能进行分裂 的淋巴细胞，以此测定T细胞的功能。
PHA刺激 48~72小时
淋巴细胞增殖—3H-TdR掺入法
原理：将单个核细胞中加入PHA共同 培养，在终止培养前8~15小时加入氚 标记的胸腺嘧啶核苷（3H-TdR), 经β液体闪烁仪检测淋巴细胞DNA的3HTdR掺入量，推测淋巴细胞增殖的程 度。
自动免疫 显性感染 隐性感染
被动免疫 胎儿或新生 儿从母体获 得抗体
主动免疫
被动免疫 注射抗体或 细胞因子
注射疫苗
获得免疫的途径
自然主动免疫
主动免疫（Artificial active immunity） 人工主动免疫
给机体输入抗原性物质，激活机体的免疫应答，使机体自身 产生抵抗疾病的能力。 自然被动免疫
免疫学检测技术的基本原理
免疫学检测技术的基本原理“哇，这免疫学检测技术到底是啥玩意儿啊？”我，一个对世界充满好奇的小学生，最近对免疫学检测技术产生了浓厚的兴趣。
咱先说说这免疫学检测技术的基本原理是啥吧。
就好像警察抓坏人一样，免疫学检测技术就是要找出身体里的“坏家伙”。
这里面有一些关键的部件呢！比如说抗体，它就像是勇敢的小卫士，专门去识别那些“坏家伙”。
还有抗原，这抗原呢，就像是那些“坏家伙”身上的标志，抗体一看到这个标志，就知道要去攻击谁了。
那这免疫学检测技术都有啥主要技术和工作原理呢？嘿嘿，这可有意思啦！有一种叫酶联免疫吸附测定法，简称ELISA。
这就好比一场大搜索行动。
先把可能有“坏家伙”的东西放在一个盘子里，然后加入特定的抗体。
如果有“坏家伙”，抗体就会和它们结合在一起。
接着再加入一些其他的东西，让它们发生反应，最后就能看出有没有“坏家伙”啦！还有一种叫免疫荧光技术，这就像在黑夜里用手电筒找东西。
给抗体加上一些会发光的东西，这样一旦抗体找到了“坏家伙”，就会发出亮光，我们就能看到啦！现在咱来说说这免疫学检测技术在日常生活中的应用场景吧。
有一天，我和爸爸妈妈一起去医院看望生病的奶奶。
医院里人来人往，医生和护士们都忙得不可开交。
我看到医生拿着一些小瓶子和纸片，在那里摆弄着。
我好奇地问：“爸爸，医生在干什么呀？”爸爸说：“医生在给奶奶做检查呢，用的就是免疫学检测技术。
”我又问：“这技术有啥用呀？”妈妈接过话茬说：“这技术可以帮助医生知道奶奶身体里有没有病毒或者细菌，这样就能对症下药，让奶奶快点好起来。
”我似懂非懂地点点头。
在医院里，我还看到其他病人也在做各种检查。
我心想，这免疫学检测技术可真厉害啊！就像超级英雄一样，能把那些让人生病的“坏家伙”给找出来。
要是没有它，医生们可就不好给病人治病了。
这免疫学检测技术不就像我们生活中的小侦探吗？它默默地守护着我们的健康，让我们能远离疾病的困扰。
我觉得这技术真的太神奇了！它让我明白了，科学的力量是无穷的。
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常用免疫学检验技术的基本原理
免疫学检测即是根据抗原、抗体反应的原理，利用已知的抗原检测未知的抗
体或利用已知的抗体检测未知的抗原。
由于外源性和内源性抗原均可通过不同的抗原递呈途径诱导生物机体的免疫应答，在生物体内产生特异性和非特异性T
细胞的克隆扩增，并分泌特异性的免疫球蛋白（抗体）。
由于抗体－抗原的结合具有特异性和专一性的特点，这种检测可以定性、定位和定量地检测某一特异的蛋白（抗原或抗体）。
免疫学检测技术的用途非常广泛，它们可用于各种疾病的诊断、疗效评价及发病机制的研究。
最初的免疫检测方法是将抗原或抗体的一方或双方在某种介质中进行扩
散，通过观察抗原－抗体相遇时产生的沉淀反应，检测抗原或抗体，最终达到诊断的目的。
这种扩散可以是蛋白的自然扩散，例如环状沉淀试验、单向免疫扩散试验、双向免疫扩散实验。
单向免疫扩散试验就是在凝胶中混入抗体，制成含有抗体的凝胶板，而将抗原加入凝胶板预先打好的小孔内，让抗原从小孔向四周的凝胶自然扩散，当一定浓度的抗原和凝胶中的抗体相遇时便能形成免疫复合物，出现以小孔为中心的圆形沉淀圈，沉淀圈的直径与加入的抗原浓度成正比。
利用蛋白在不同酸碱度下带不同电荷的特性，可以利用人为的电场将抗原、
抗体扩散，例如免疫电泳试验和双向免疫电泳。
免疫电泳首先将抗原加入凝胶中电泳，将抗原各成分依次分散开。
然后沿电泳方向平行挖一直线形槽，于槽内加入含有针对各种抗原的混合抗体，让各抗原成分与相应抗体进行自然扩散，形成沉淀线。
然后利用标准的抗原－抗体沉淀线进行抗原蛋白（或抗体）的鉴别。
上述的方法都是利用肉眼观察抗原－抗体反应产生的沉淀，因此灵敏度有很大的局限。
比浊法引入沉淀检测产生的免疫比浊法就是利用浊度计测量液体中抗原－抗体反应产生的浊度，根据标准曲线来计算抗原（或抗体）的含量。
该方法不但大大提高了检测的灵敏度，且可对抗原、抗体进行定量的检测。
免疫印迹法则首先通过电泳分离标准的已知抗原，然后将电泳分离的蛋白
质转移到硝酸纤维膜上，浸于待测血清中。
如果血清中含有与一种或几种抗原相对应的抗体的话，则在该抗原印迹部位形成免疫复合物沉淀。
在洗去未结合的抗原和抗体后，在膜上加标记的抗人免疫球蛋白的抗体，此抗体可以和病毒抗原与人抗体形成的免疫复合物发生反应，最后加入显色底物（可以是普通显色剂，化学发光剂或放射性同位素等）进行显色。
由于利用了第二种抗体进行了信号放大，并且可以利用高灵敏的显色方式，灵敏度也得到了很大的提高。
目前该方法已经利用凝集反应检测抗原－抗体反应也是较传统的手段之一。
利用带有抗原的乳胶颗粒等不溶性的颗粒抗原与相应抗体结合形成凝集团块，通过凝集现象，就可以达到检测的目的。
无论是直接凝集法还是间接凝集法都可对抗原或抗体进行检测。
还可以利用二抗对信号进行放大，从而提高检测的灵敏度。
利用补体介导的反应（例如溶血反应），检测抗原－抗体反应也是过去常
用的方法。
抗体与细胞表面抗原相遇，形成红细胞-抗体复合物即可使加入反应
中的补体活化，导致细胞的溶解，此方法可用于红细胞的各种抗原或相应抗体的
检测，此外利用补体反应的竞争效应，也可对抗原－抗体反应进行定量的检测
利用带有标记（荧光素、同位素、胶体金或酶）的抗体（抗原）检测抗原－
抗体反应是目前应用最广泛、最灵敏的方法，使用放射性同位素标记法可使检测
的灵敏度达到pg 级。
由于带标记的抗体能准确而可靠地反映出抗原的位置和数量，且利用二抗可对信号进行放大，因此该方法可用于抗原定性、定量或定位检测。
以下是几种常用的免疫学技术：
1．免疫荧光技术
免疫荧光技术是利用荧光素标记的抗体（或抗原）检测组织、细胞或血清
中的相应抗原（或抗体）的方法。
由于荧光抗体具有安全、灵敏的特点，因此已
广泛应用在免疫荧光检测和流式细胞计数领域。
根据荧光素标记的方式不同，可
分为直标荧光抗体和间标荧光抗体。
间标荧光抗体中一抗并不直接连接荧光素，
而是先将一抗结合到蛋白，然后带有荧光素的二抗再结合至一抗。
通过二抗的结合，能将信号进行放大，因此能在一定程度上提高检测的灵敏度，但是随之带来
的高背景也降低了检测的特异性。
近年来，随着荧光素和荧光检测技术的不断进步，荧光检测的灵敏度已经接近同位素检测的水平，直接标记的荧光抗体逐渐取
代间接标记抗体。
这些标记了荧光素的抗体直接结合至抗原，大大提高了检测的
特异性，使检测的结果更加准确可靠。
荧光检测技术的发展，使得免疫荧光技术
在传染病诊断上有广泛的用途，如在细菌、病毒、螺旋体感染的疾病，检查IgM 抗体，做为近期接触抗原的标志。
利用单克隆荧光直接标记抗体鉴定淋巴细胞的
亚类。
通过流式细胞仪，针对细胞表面不同抗原，可以同时使用多种不同的荧光
抗体，对同一细胞进行多标记染色。
2．放射免疫检测
放射免疫检测技术是目前灵敏度最高的检测技术，利用放射性同素标记抗
原（或抗体），与相应抗体（或抗原）结合后，通过测定抗原抗体结合物的放射
性检测结果。
放射性同位素具有pg 级的灵敏度，且利用反复曝光的方法可对痕
量物质进行定量检测。
但放射性同位素对人体的损伤也限制了该方法的使用。
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3．酶联免疫吸附试验（ELISA）
酶联免疫检测是目前应用最广泛的免疫检测方法。
该方法是将二抗标记上
酶，抗原抗体反应的特异性与酶催化底物的作用结合起来，根据酶作用底物后的
显色颜色变化来判断试验结果，其敏感度可达ng 水平。
常见用于标记的酶有辣
根过氧化物酶(HRP)、碱性磷酸酶（AP）等。
由于酶联免疫法无需特殊的仪器，
检测简单，因此被广泛应用于疾病检测。
常用的方法有间接法、夹心法以及BAS －ELISA。
间接法是先将待测的蛋白抱被在孔板内，然后依次加入一抗、标记了
酶的二抗和底物显色，通过仪器（例如酶标仪）定量检测抗原。
这种方法操作简
单但由于高背景而特异性较差。
目前已逐渐被夹心法取代。
夹心法利用二种一抗
对目标抗原进行捕获和固定，在确保灵敏度的同时大大提高了反应的特异性。
近
年来，抗原的定量检测技术也不断推陈出新。
近年来，在夹心法ELISA 的基础上，开发了多抗原检测试剂盒，能同时检测微量液相样本中多个抗原含量。
这项技术
的应用大大缩短了诊断的时间，提高诊断的可靠性和及时性。
4．免疫金胶体技术
胶体金技术经过30 多年的发展到现在已日趋成熟，该方法是将二抗标记上
胶体金颗粒，利用抗原抗体间的特异性反应，最终将胶体金标记的二抗吸附于渗滤膜上，此方法简单，快速，广泛应用于临床筛查。