石蜡包埋
石蜡包埋组织包埋安全操作及保养规程
石蜡包埋组织包埋安全操作及保养规程引言石蜡包埋技术广泛应用于生物医学科研领域中的组织学研究。
通过标本包埋可保证标本的稳定性和完整性，提高组织的质量，利于后续组织切片和病理学观察。
然而，在实验过程中，必须严格遵守包埋安全操作规程，否则将对实验者和实验设备造成极大的危害。
本文就石蜡包埋组织的包埋安全操作及保养规程进行详细介绍，帮助实验室进行风险评估及规范化操作，同时确保实验人员健康安全。
包埋前准备1. 安全设备•戴防护手套、口罩、护目镜等个人防护设备。
•保证操作环境通风良好，设置有洗眼器、呼吸器等应急设备。
2. 化学品准备及处理•质量上乘的石蜡及甘油，以及其他包埋设备。
•所有化学药品都应密闭存放，定期进行检查和更换。
3. 质量控制•理想包埋试剂应经过多次检测，并标注有试验效果包伊证明。
•操作人员应掌握正确认识标本组织特异性和处理时应注意的地方。
只有通过规范化的操作流程，才能保证标本质量。
操作流程1. 标本准备•采用新鲜、健康、质量优良的标本，并在取出后立刻进行处理和包埋。
新鲜的标本处理效果更佳。
2. 组织处理•将组织放入去离子水中多次清洗，去掉附在组织表面的油脂和血液等物质。
•将组织浸泡于甲醇中，去掉细胞内外的水分，使组织达到亲水性状态。
•通过升序乙醇溶液去除细胞内物质，然后通过石蜡溶解处理使组织形成半固态包埋块。
•最后，包埋块应置于冷柜中进行冷却处理。
3. 操作注意事项•操作人员应当避免直接接触化学试剂，以免造成化学伤害。
•石蜡温度不可过高，以免造成包埋物溢出和操作人员烫伤。
•包埋物应放置于冷却器中进行冷却处理，以便加速固化。
•包埋设备应保持干净，每次使用前应进行消毒以去除细菌和病毒污染。
维护保养1. 设备维护•每周对包埋设备进行检查，检查包埋机、石蜡剪切器和剖切机的使用情况是否正常，并在发现问题后及时修理和保养。
•每三个月更换一次石蜡维护油，并进行包埋人门更换，以确保包埋设备的稳定性和可靠性。
2. 石蜡管理•石蜡应存放于干燥、通风的环境中，以免发生化学变化。
石蜡包埋技术
石蜡包埋技术制作石蜡切片，切片前须将石蜡渗透组织包埋于石蜡中，而水与石蜡又是不相混合的，所以在浸蜡，包埋前必须将组织内所含的水分脱去。
而大多数的组织固定剂是水溶液，随后的水冲洗也使其含有大量水分，因此必须先行脱水，一般是浸入逐级增加浓度的酒精来完成。
由于酒精和石蜡不能混合，须再用一种石蜡的溶剂来置换酒精，因大多数石蜡溶剂有使组织的折光率增高并表现为透明或半透明状，所以此步骤又称透明。
最后用石蜡浸渍组织并铸制成坚实的蜡块。
常规的石蜡包埋过程包括五个基本步骤，即固定，脱水，透明，浸蜡和包埋，前一章中已述过固定。
第一节脱水脱水就是用脱水剂完全除去组织内的水分，为下一步透明及浸蜡创造条件。
此外，脱水还可以使组织再次发生一定的硬化，脱水剂必须是与水在任何比例下均能混合的液体。
一．常用的脱水剂1．酒精：是制片最常用的试剂，可与水在任何比例下相混合，酒精的脱水能力比较强，又能硬化组织。
但是酒精的船头速度很快，对于组织会有明显的收缩作用。
因此在以酒精作为脱水剂时，应该先从浓度较低的酒精开始，然后递增其浓度，这样可以避免组织过度收缩。
第一瓶酒精浓度随固定剂，脱水组织的大小和种类而异，经水溶性固定剂固定的细柔组织需要慢慢脱水，从50％酒精开始。
如眼球，组胚组织等大多数组织标本则是从70％酒精开始，再经80％，95％以至无水酒精。
但是有时为了某种特殊要求，例如要做糖元的切片标本或是要做尿酸结晶染色切片标本，为了防止糖元和尿酸结晶在水中消失却要直接投入无水酒精中固定，而不需要经过水洗和低浓度酒精的脱水过程。
经无水酒精固定后的组织只需要再经过换一次无水酒精脱水即可。
用AAF固定液固定的组织可直接置于95％酒精开始脱水。
用醇性固定剂（如Carnoy）则可置于高浓度无水酒精内，但应多次换液以除酸。
一般情况下，组织经过70％，80％，90％，95％，以至无水酒精的脱水程序，即可达到脱水的要求。
但是为了能使大量的组织块同时进行脱水，则要求保持液体的浓度以保证脱水的作用，最好是以两次95％酒精，两次100％酒精重复进行脱水，以保证组织的水分脱净。
石蜡包埋技术实验报告
一、实验目的1. 掌握石蜡包埋技术的基本原理和操作步骤。
2. 熟悉石蜡包埋在组织切片制作过程中的重要作用。
3. 了解石蜡包埋技术在病理诊断、科研等领域的应用。
二、实验原理石蜡包埋技术是一种常用的组织切片制备方法，其基本原理是将组织固定、脱水、透明、浸蜡后，将其包埋在石蜡中，形成硬化的组织块，便于后续的切片和染色等操作。
石蜡具有较好的透明度和可塑性，且与组织切片易于分离，有利于显微镜观察。
三、实验材料1. 新鲜组织样本：如肿瘤组织、正常组织等。
2. 固定液：4%多聚甲醛溶液。
3. 脱水剂：75%酒精、85%酒精、90%酒精、95%酒精、无水乙醇I、无水乙醇II、醇苯、二甲苯I、二甲苯II、蜡I、蜡II、蜡III。
4. 包埋剂：石蜡。
5. 切片机：石蜡切片机。
6. 其他：手术刀、剪刀、镊子、载玻片、盖玻片、烘箱、显微镜等。
四、实验步骤1. 组织固定：将新鲜组织样本放入4%多聚甲醛溶液中固定24小时以上。
2. 取材：将固定好的组织从固定液中取出，用手术刀将目的部位组织修平整，并切取适当大小的组织块。
3. 脱水：将组织块依次放入75%酒精、85%酒精、90%酒精、95%酒精、无水乙醇I、无水乙醇II中，每个酒精浓度处理1小时。
4. 透明：将组织块放入醇苯中处理5-10分钟，再放入二甲苯I中处理5-10分钟，最后放入二甲苯II中处理5-10分钟。
5. 浸蜡：将组织块放入石蜡I中处理1小时，再放入石蜡II中处理1小时，最后放入石蜡III中处理1小时。
6. 包埋：将浸好蜡的组织块放入包埋模具中，待蜡凝固后取出，修整蜡块。
7. 切片：将修整好的蜡块置于石蜡切片机上，切片厚度约为4微米。
8. 摊片：将切片漂浮于摊片机40℃温水上，将组织展平，用载玻片将组织捞起，并放进60℃烘箱内烤片。
9. 脱蜡：将烤干的切片依次放入二甲苯30分钟、无水乙醇10分钟、95%酒精5分钟、90%酒精5分钟、80%酒精中处理。
10. 染色：将脱蜡后的切片进行HE染色或其他染色。
组织块石蜡包埋
组织块石蜡包埋的步骤：1.取材：尽量活杀，在处死30min内取材完毕，组织块的大小一般为（1.0-1.5cm）*1.0cm*(0.2-0.3cm)2.固定：常用甲醛液浓度为4%，是40%甲醛溶液和水按1:9比例配制而成。
固定时间以12-24h为宜。
（4℃冰箱可放置1-3个月）3.冲洗：将组织块放在固定的容器中用流水冲洗24h.4.脱水：一次70%酒精2h, 80%酒精2h, 90%酒精1h, 95%酒精40min,无水乙醇Ⅰ40min,无水乙醇Ⅱ30min。
可将组织放于70%酒精中过夜。
5.透明：将脱水后组织直接浸入二甲苯透明剂中（二甲苯Ⅰ, 二甲苯Ⅱ），每次透明为10min。
6.浸蜡：常规制片常用熔点高于56℃以上的石蜡，普通采用56℃-58℃石蜡。
先将组织浸入软蜡Ⅰ1h左右, 再浸入软蜡Ⅱ40min；硬蜡Ⅰ40min, 硬蜡Ⅱ1h。
（一般浸蜡时间为3-4h）软蜡熔点为45℃-50℃，硬蜡熔点为55℃-60℃。
7.包埋：将蜡液注入包埋硬具中，迅速将组织块平放入蜡液中，摆正并铺平，然后移至冷却台，使组织块同蜡液凝固在一起的过程。
（硬蜡凝固定型）石蜡切片法：在切片前应先切去标本周围过多的石蜡（此过程称为“修块”），但也不能留得太少，否则易造成组织破坏，连续切片时分片困难。
一般切片厚度为4-6μm。
贴片时先在干净的载玻片上涂一层蛋白甘油，然后于60℃恒温箱中烘烤1h，若未烤干可适当延长时间；若组织剥脱可涂一层蛋清加以固定。
做免疫组化时，玻片应涂多聚赖氨酸，亦可买防脱玻片。
HE染色的步骤：二甲苯Ⅰ5-10min→二甲苯Ⅱ5-10min→无水乙醇Ⅰ1-3min→无水乙醇Ⅱ1-3min→90%酒精1min→80%酒精1min→70%酒精1min→水洗→苏木精3-5min→水洗→盐酸酒精1-3s→水洗→饱和碳酸锂（氨水）10-30s→水洗→伊红3-5min→水洗（短）→70%酒精1-2s→80%酒精3-5min→90%酒精3-5min→95%酒精3-5min→无水乙醇5-10min→二甲苯Ⅰ3-5min→二甲苯Ⅱ3-5min→中性树胶封片染色液的配制：1.Harris苏木精的配制苏木精 1g硫酸铝钾 15g无水乙醇 10ml蒸馏水 200ml先用蒸馏水加热溶解硫酸铝钾，用无水乙醇溶解苏木精再倒入已溶解的硫酸铝钾蒸馏水中，煮沸1min后，稍冷却，慢慢加入红色氧化汞0.5g，继续加热至染液变为紫红色，用纱布盖瓶口，用滤纸过滤后每100ml加冰醋酸5ml。
《病理检验技术》课件——石蜡包埋组织切片
石蜡包埋组织切片
7.若天气太冷，切片时组织蜡片容易碎裂，对着组织蜡块面 呵一口气后进行切片，可改善组织蜡片容易碎裂的情况，但 所切出的第一、二张组织蜡片厚度会比原来设定的切片厚度 稍厚一些，因此，前一、二张切出的组织蜡片不要。
石蜡包埋组织切片
6.调节切片刀的切片角度：切片机刀座上都有标 示切片刀切片角度的刻度，切片前需调节切片刀 至合适的切片角度，才能切好片。通常切片机上 刀座刻度范围为0°～10°，一般设定切片刀的 角度在8°左右为宜。但真正的切片角度是余隙 角。 所谓余隙角是指切片刀下刀锋倾斜面与组织蜡块 面的夹角。余隙角避免了切片时切片刀往返过程 中刀与组织蜡块面之间的摩擦。最理想的余隙角 是2°～4°，太大或太小都不能切好片。
3.如用金属框包埋组织蜡块，必须把四边修整平行，否 则在切片时会切出弯曲的组织蜡片带。
4.切片用毛笔应选用松软毛的水彩画笔，清扫切片刀上 的蜡屑时应顺着刀背往刀锋扫，避免刀锋切割笔毛，损 坏刀锋。
石蜡包埋组织切片
5.切片时转动切片手轮或推拉切片刀的动作要轻， 用力均匀。若用力太猛和速度太快，将会引起切片 压缩，也易导致轮转式切片机齿轮的磨损。
病理检验技术
石蜡包埋组织切片
石蜡包埋组织切片
组织石蜡切片 石蜡包埋组织切片
石蜡包埋组织切片
送检组织经过固定、 脱水、透明、浸蜡和 石蜡包埋制成组织蜡 块后即可马上进行切 片，称石蜡包埋组织 切片，简称石蜡切片。
石蜡包埋组织切片
一、石蜡切片操作过程
1.组织蜡块排序、冷冻：按病理号排序，先切在 前；蜡块组织面朝下放在一盘平整的冰块或冷冻 台上冷冻（-4～0℃）几分种后开始切片。
石蜡包埋
石蜡切片及HE染色过程一石蜡切片1. 取材: 刀片要求锋利而薄,组织厚度约2—3mm, 大小1.5×1.5×0.2～0.3cm为宜. 取材时间越快越好.2. 固定: 组织取下后应立即放入10%福尔马林(相当于4%甲醛)固定.注意: (1). 固定液量应为组织块体积的40倍.(2) 固定时间固定时间与使用的固定液种类和组织块大小, 温度等有关. 一般为3—24h.(3)固定温度大多可在室温固定, 在低温(4℃)时间应延长.(4)固定容器应大些.3. 漂洗: 流水冲洗2—10h.4. 脱水: 从低浓度酒精到高浓度酒精.70%(数分钟)→80%(60-120’)→90%(60-120’)→95%(60-120’)→95%(60-120’)→100%(60-120’)→100%(6 0-120’).5. 透明: 组织块脱水后必须经过一种既能与酒精混合又能溶解石蜡的溶剂, 而使石蜡进入组织块. 常用二甲苯, 一般浸泡30m即可.6. 浸蜡: 组织经透明后在熔化的石蜡内浸渍的过程称浸蜡. 一般需经2—3次浸渍才能完成, 总时间为3—4h. 用于浸蜡的石蜡熔点为52—56℃.7. 包埋: 先将熔化的石蜡倒入包埋框再用加热的镊子将组织块放入. 包埋面必须平整. 包埋后石蜡稍凝后可移入冷水或冰箱中加速凝固.8. 切片: 修块→切片→展片→捞片→烤片.二HE染色1. 染色前切片处理(1) 脱福尔马林色素.(2) 脱汞盐结晶.(3) 脱黑色素.2. 染色步骤二甲苯脱蜡(10’)→ 无水乙醇洗去二甲苯(1’×2次)→95%酒精(1’)→90%酒精(1’)→85%酒精(1’)→自来水洗(2’)→苏木精染色(1—5’)→自来水洗(1’)→1%盐酸酒精分化20s→自来水洗(1’)→稀氨水(1%)反蓝30s→自来水或蒸馏水洗(1’)→伊红染色(20s—5min)→自来水洗(30s)→85%酒精脱水(20s)→90%酒精脱水(30s)→95%酒精(1’)→95%酒精(1’)→100%酒精(2’)→100%酒精(2’)→二甲苯(2’)→中性树胶封片.3. 染色结果: 细胞核呈兰色, 胞浆呈红色.三盐酸酒精的配制浓盐酸0.5—1ml + 75%酒精99ml.此液用一段时间后需延长或更换液体, 新液体分化时间要短.脑组织的石蜡包埋过程中有很多干预因素，一个环节处理的不好就会影响整个实验，我把我们的制作方法说一下，供参考。
石蜡脱水包埋
四、透蜡（放在恒温箱内，温度为59℃）
石蜡①②③各40min
五、包埋
1.提前2h开启包埋机
2.将脱水后的标本Leabharlann 同包埋盒一起放入液态石蜡中（右侧）
3.取出包埋盒置于操作台面上(热台面)
4.取出不锈钢包埋底模，倒入一定量的液体石蜡，刚好没过底部为宜，迅速将标本从包埋盒中取出并置于不锈钢包埋底模中（注意放置的方向和角度，这步会影响切片角度）
石蜡脱水包埋（手动，含晶体）
准备工作：
1.0.9%生理盐水或1xPBS、培养皿(洗眼球用)、石蜡包埋盒、铅笔、塑料盒2个（乙醇脱水用及二甲苯透明用）
2.乙醇（浓度70%、80%、95%、100%123）各一瓶回收；二甲苯、固态石蜡块（sigma）
3.恒温箱、包埋机、不锈钢包埋底模
步骤：
一取标本
1.小鼠全眼球置于4%多聚甲醛固定（至少过夜24h,文献48-72h）
2.取出固定好的标本于0.9%生理盐水或1xPBS反复荡涤，洗干净（洗掉固定液）
3.用定性滤纸吸干标本水分
4.将标本置于石蜡包埋盒内，做好标记，置于脱水用塑料（装乙醇用）
二脱水程序
1.70%乙醇2h
2.80%乙醇1h
3.95%乙醇1h
4.100%乙醇 各1h
三透明
1.二甲苯 1h
2.二甲苯 1h
3.二甲苯 40min(放在恒温箱内，温度59℃)
石蜡包埋
石蜡包埋固定透明脱水浸蜡：4%甲醛固定（过夜）→自来水冲（8h）→70%乙醇（4℃，不超过1周）→80%乙醇（1h）→90%乙醇（1h）→100%乙醇A（1h）→100%乙醇B（1h）→丙酮（30min）→二甲苯A（30min）→二甲苯B（30min）→石蜡A（1h）→石蜡B（1h）→石蜡C（1h）→包埋包埋：1.将蜡块浸于包埋仪蜡槽约30min；2.将包埋框置于蜡槽预热备用；3.取出铁框，装清洁蜡，将组织置于其中，注意平整面朝下；4.将铁框放置于平台，保持组织块在蜡块范围内，平整面朝下；5.将包埋框压于表面，冷却凝固即可；6.蜡块凝固后可掰下放于4℃过夜；7.次日置于-20℃约25min；8.掰下铁框，修正蜡块周边不平整蜡，室温放置备用。
备注：※1：开水浴锅，确认水浴锅启动（摇晃），62.5℃。
※2：此处请务必保证时间的准确性,丙酮用于快速脱水,处理时间过久易使组织收缩硬化;二甲苯透明时间过短，则透明不彻底，石蜡难于浸入组织；透明时间过长，则组织硬化变脆，不易切出完整切片。
※3：提前1.5小时打开包埋仪,待包埋缸石蜡完全熔化后,再将标本框放入浸蜡30min左右,即可进行包埋。
※4：标本框可先在纱布上把试剂扣干之后,再移入下一个试剂,可确保试剂的使用效果及效率。
需注意的细节：1、固定。
新鲜标本放入甲醛（10%福尔马林）24 h～1W（不超过1W），甲醛固定液可重复使用一次。
（附）组织长时间的固定，福尔马林会产生一种酸，影响核的染色。
对于固定很长时间的陈列性标本制片后切片染色不鲜艳，显得非常陈旧。
另外，长时间的固定往往会出现福尔马林色素，尤其是造血器官的标本，更应注意。
固定时间过长，可降低抗原的活性。
2、冲水。
从甲醛中取出包埋块，放入包埋块盒，盖好盖子。
先用自来水冲洗2～3遍，然后用流动自来水冲洗包埋块盒6～8 h，间中移动数次。
3、脱水。
冲洗完后，把包埋块装在一个网兜里，放入70%乙醇，4℃过夜。
石蜡包埋的原理
石蜡包埋的原理
石蜡包埋是一种常用于组织学研究中的样本处理方法，其原理是利用石蜡的固态性质将组织样本固定在包埋模块内部，使得组织样本可以被切片并进行显微镜观察。
石蜡包埋的具体步骤是：首先，将组织样本进行固定处理，一般是使用缓冲液、酒精等溶液进行固定。
然后，将固定后的组织样本逐渐浸入石蜡溶液中，利用石蜡的渗透性质逐渐替代组织内的水分，使得组织样本逐渐被石蜡取代。
此外，为了使得组织样本更加均匀地包埋在石蜡中，可以采用多次浸渍的方法，即将组织样本依次浸渍在不同浓度的石蜡溶液中。
最后，将浸渍后的组织样本放置于包埋模块中，再倒入石蜡液体，使得组织样本完全浸泡在石蜡中。
随后，石蜡会在常温下快速固化，使得组织样本固定在包埋模块内部。
此时，可以使用切片机将石蜡固化的组织样本切割成薄片，以便进行显微镜观察。
总的来说，石蜡包埋通过利用石蜡的渗透性和固态性质，使得组织样本在石蜡中得以固定和保护，并且可以进行切片制备，为后续的显微镜观察提供方便。
石蜡包埋(小鼠脑组织)
石蜡包埋放入4%的多聚甲醛中过夜（12h）；12小时（注意水流不需要太大，不可将水流直接冲击组织）60%酒精4h白天（或者60%酒精4℃过夜12h）→第三天：→70%酒精4h→80%酒精4h→90%酒精4h→95%酒精4℃过夜(不一定12小时) →第四天：→100%酒精Ⅰ2h→100%酒精Ⅱ2h→100%酒精Ⅲ2h→5+3 min→二甲苯Ⅱ5+3 min→二甲苯Ⅲ 5+3 min→二甲苯Ⅳ 3+2 min→（此处注意，在透明过程进行到此处时，应在浸完后拿出脑组织观察一下透明是否彻底，一般来说透明完全的脑组织是呈现为一个通体琥珀状，如果是发现脑组织内部仍呈现不通透的白色则继续酌情追加浸泡（透明）时间）2h→软蜡Ⅱ2h→软蜡Ⅲ 2h→备注：1、软蜡是指熔点48-50℃的石蜡，中蜡是指熔点58—60℃的石蜡。
在包埋前应该提前将各种蜡准备好，放在对应的蜡缸里融好，注意不要加热太长时间。
待蜡完全融好后关上煤气，冷却至烧杯上沿不是太烫手且蜡也未凝固是将蜡挪到６０℃温箱里备用。
在融蜡时要注意通风橱使用规范。
2、包埋组织块时要注意动作熟练紧凑，时间过长就会导致蜡温不够，影响包蜡质量。
放组织块时要注意切面一定要放正确，待切的面朝向包埋铁框面。
包埋时勿将气泡带入。
可以稍微倾斜一些放置塑料包埋框。
3、酒精串缸结束后，可以将组织拿出一部分出来观察一下是否切面平整，是否厚薄一致，以免影响透明的整齐度，导致组织透明的时间不一致。
４、酒精串缸结束后，把包埋盒用滤纸尽量弄干，然后再往二甲苯中放。
5蜡块包埋完成后不要急于挪动，待蜡块凝固后再将蜡块放到－２０℃冰箱里冷藏10ｍｉｎ，以利于将铁框和包埋盒分离。
组织石蜡包埋和塑料包埋技术
一、石蜡包埋技术石蜡包埋技术制作石蜡切片，切片前须将石蜡渗透组织包埋于石蜡中，而水与石蜡又是不相混合的，所以在浸蜡、包埋前必须将组织内所含的水分脱去。
常规的石蜡包埋过程包括5 个基本步骤、即固定、脱水、透明、浸蜡和包埋。
1.脱水用脱水剂完全除去固定好的组织内的水分，为下一步透明及浸蜡创造条件，还可使组织再次形成一定的硬化。
一般情况下组织需经过75％，85％，95％，100% 乙醇的脱水程序。
脱水时间视组织种类，组织块大小，厚薄和固定剂的不同确定。
脱水一定要充分、彻底。
2.透明纯乙醇不能与石蜡相溶，还需用能与乙醇和石蜡相溶的媒浸液，替换出组织内的乙醇。
组织在这类媒浸液中浸渍，出现透明状态，此液即称透明剂，透明剂浸渍过程称透明。
二甲苯和氯仿是常用的透明剂。
组织在氯仿和二甲苯中不宜放置过久，否则会造成组织脆硬，不利切片。
3.浸蜡组织经透明剂的透明作用之后，移入熔化的石蜡内浸渍，石蜡逐渐浸入组织间隙，取代透明剂，这一程序就叫浸蜡。
根据所用石蜡的熔点，浸蜡需要在60 ～62℃温箱内进行。
为了尽可能排除透明剂，浸蜡可以分两缸进行。
浸蜡时间应根据组织种类，组织块大小，厚薄确定，一般为1 ～4 h。
4.包埋是将已经经过固定、脱水、透明、浸蜡的组织块从最后的蜡浴取出，置入充满熔化石蜡的包埋框内，包埋成块，使组织和包埋剂相熔一体并迅速冷却，这个程序称为包埋。
包埋剂凝固后，进一步加强了组织的硬度和韧度而便于进行切片。
全自动石蜡包埋机包埋组织，采用金属包埋框盒。
通常石蜡采用熔点为60 ～62℃，包埋机设定温度64 ～65℃，先把组织材料放置于金属包埋框底，石蜡放满于金属包埋框内，组织用弯头镊子平整调整到底部，若镊子上的石蜡凝固，在乙醇灯上烤（温度不宜过高，以石蜡熔化为宜，否则将损坏组织）。
组织长径尽量与包埋框盒长径垂直，在石蜡表面发白时，放置塑料蜡块托（边上用铅笔标记病理号），按四角压紧。
待石蜡完全凝固后取出组织蜡块。
石蜡包埋步骤
石蜡包埋步骤
一、组织固定
按1：20将组织放入固定液【小块组织如卵巢可放入2ml EP管中加入2ml的bouins 固定液（4℃冰箱摇床中2~3h）或PFA固定液】；如果不进行下一步，可放于70%酒精中4℃冰箱中长期保存。
1组织脱水、渗透与包埋
○1脱水：
70% 乙醇（30min）→85%乙醇(30min) →95%乙醇(30min)→100%乙醇(30min)→100%乙醇(30min)。
注：○1若组织数量过多时，应分开脱水（20个组织左右）
○2脱水的体积至少为组织体积的4倍
○3乙醇纯度越高时，脱水的时间减少，否则引起组织过硬
○4最好能搅拌，使脱水充分
○2透明：
二甲苯I (30min)→二甲苯II(30min)。
注：在二甲苯的时间不宜过短或过长。
时间过短引起透明不充分，影响后面渗透包埋；时间过长则引起组织变脆。
○3渗透：
石蜡I (60min)→石蜡II(60min),62℃烘箱中。
○4包埋：
将组织放入盛有石蜡的模具中，摆好位置，于石蜡包埋机的冷台上冷却。
注：包埋时，切忌用手按石蜡盒中间，因为冷凝后，中间仍较软。
2 切片和贴片
将包埋好的组织块于切片机中约5µm，放于漂片机中展开，再将切片捞于多聚赖氨酸附膜载玻片上，编号，70℃干烤1h，贴片后60℃烤5h。
石蜡包埋原理
石蜡包埋原理石蜡包埋是一种常用的组织学技术，用于固定和保护生物组织样本，以便于后续的切片和染色。
石蜡包埋的原理是利用石蜡的渗透性和包埋性，将组织样本包裹在石蜡中，使其保持形态和结构完整。
下面将详细介绍石蜡包埋的原理及其操作步骤。
首先，石蜡包埋的原理是基于石蜡的渗透性。
石蜡是一种疏水性物质，具有较强的渗透性，可以渗透到细胞和组织的内部。
在包埋过程中，石蜡可以渗透到组织样本的细胞间隙中，填充其中的空隙，从而固定组织结构，防止组织在后续处理过程中的变形和损坏。
其次，石蜡包埋的原理还在于石蜡的包埋性。
石蜡具有良好的包埋性，可以将组织样本包裹在其中，形成坚固的包埋块。
在包埋过程中，石蜡可以与组织样本充分接触并凝固，形成坚固的包埋块，保持组织的形态和结构完整，便于后续的切片和染色操作。
操作步骤：1. 组织固定，将待处理的组织样本进行固定处理，通常使用福尔马林等固定剂进行固定，以保持组织的形态和结构。
2. 脱水，将固定的组织样本进行脱水处理，逐渐用乙醇或其他脱水剂替代样本中的水分，使组织逐渐脱水并渗透。
3. 渗透，将脱水后的组织样本进行渗透处理，使用石蜡溶液替代脱水剂，使石蜡逐渐渗透到组织样本中，填充组织的空隙。
4. 包埋，将渗透后的组织样本置于熔化的石蜡中，使其完全包裹在石蜡中，形成坚固的包埋块。
5. 固化，将包埋后的组织样本冷却固化，使石蜡完全凝固，形成坚固的包埋块。
通过以上步骤，就完成了组织样本的石蜡包埋处理。
这样处理后的组织样本可以保持形态和结构完整，便于后续的切片和染色操作，为组织学研究提供了可靠的样本基础。
总结：石蜡包埋是一种重要的组织学技术，其原理是基于石蜡的渗透性和包埋性。
通过固定、脱水、渗透、包埋和固化等步骤，可以将组织样本包裹在石蜡中，保持其形态和结构完整，为后续的组织学研究提供了可靠的样本基础。
熟练掌握石蜡包埋的原理和操作步骤对于组织学研究具有重要意义。
石蜡包埋技术
石蜡包埋技术制作石蜡切片，切片前须将石蜡渗透组织包埋于石蜡中，而水与石蜡又是不相混合的，所以在浸蜡，包埋前必须将组织内所含的水分脱去。
而大多数的组织固定剂是水溶液，随后的水冲洗也使其含有大量水分，因此必须先行脱水，一般是浸入逐级增加浓度的酒精来完成。
由于酒精和石蜡不能混合，须再用一种石蜡的溶剂来置换酒精，因大多数石蜡溶剂有使组织的折光率增高并表现为透明或半透明状，所以此步骤又称透明。
最后用石蜡浸渍组织并铸制成坚实的蜡块。
常规的石蜡包埋过程包括五个基本步骤，即固定，脱水，透明，浸蜡和包埋，前一章中已述过固定。
第一节脱水脱水就是用脱水剂完全除去组织内的水分，为下一步透明及浸蜡创造条件。
此外，脱水还可以使组织再次发生一定的硬化，脱水剂必须是与水在任何比例下均能混合的液体。
一．常用的脱水剂1．酒精：是制片最常用的试剂，可与水在任何比例下相混合，酒精的脱水能力比较强，又能硬化组织。
但是酒精的船头速度很快，对于组织会有明显的收缩作用。
因此在以酒精作为脱水剂时，应该先从浓度较低的酒精开始，然后递增其浓度，这样可以避免组织过度收缩。
第一瓶酒精浓度随固定剂，脱水组织的大小和种类而异，经水溶性固定剂固定的细柔组织需要慢慢脱水，从50％酒精开始。
如眼球，组胚组织等大多数组织标本则是从70％酒精开始，再经80％，95％以至无水酒精。
但是有时为了某种特殊要求，例如要做糖元的切片标本或是要做尿酸结晶染色切片标本，为了防止糖元和尿酸结晶在水中消失却要直接投入无水酒精中固定，而不需要经过水洗和低浓度酒精的脱水过程。
经无水酒精固定后的组织只需要再经过换一次无水酒精脱水即可。
用AAF固定液固定的组织可直接置于95％酒精开始脱水。
用醇性固定剂（如Carnoy）则可置于高浓度无水酒精内，但应多次换液以除酸。
一般情况下，组织经过70％，80％，90％，95％，以至无水酒精的脱水程序，即可达到脱水的要求。
但是为了能使大量的组织块同时进行脱水，则要求保持液体的浓度以保证脱水的作用，最好是以两次95％酒精，两次100％酒精重复进行脱水，以保证组织的水分脱净。
石蜡切片包埋的原理是什么
石蜡切片包埋的原理是什么
石蜡切片包埋是一种常用的组织学技术，用于在光学显微镜下观察组织的形态和结构。
其原理如下：
1. 组织处理：首先，将组织标本进行固定和脱水处理。
固定可以使用甲醛等化学物质，以保持组织的形态和结构。
然后，通过一系列浓度梯度的醇溶液，如丙酮或乙醇，逐渐将水分从组织中取出，使得组织进一步脱水。
2. 渗透剂浸泡：在脱水处理后，将组织标本浸泡在溶解于有机溶剂中的石蜡中。
通常使用的有机溶剂是乙烯基石蜡（ethylene vinyl acetate copolymer），其可以很好地与水相宜，能进一步移除标本中的水分并渗透到组织中。
3. 包埋：将浸泡在石蜡中的组织标本放入包埋模具中，并加入熔融的纯石蜡。
在加热的条件下，纯石蜡会渗透到组织中，并在标本固定在模具底部的同时填充模具的其余空间。
这样，组织标本就被完全包裹在石蜡中，保持了其形态和结构。
4. 固化：放置包埋模具在冷却台上，使得石蜡迅速冷却固化。
这样，石蜡将固定住组织，并使其成为一块坚固的切片。
5. 切片：采用专门的组织切片机将固化的石蜡切成薄片，通常为5-8微米的厚度。
这些切片可以通过去石蜡和染色等步骤，进行光学显微镜观察下的染色和分
析。
常规的石蜡包埋过程包括五个基本步骤
常规的石蜡包埋过程包括五个基本步骤，即固定，脱水，透明，浸蜡和包埋制作石蜡切片，切片前须将石蜡渗透组织包埋于石蜡中，而水与石蜡又是不相混合的，所以在浸蜡，包埋前必须将组织内所含的水分脱去。
而大多数的组织固定剂是水溶液,随后的水冲洗也使其含有大量水分，因此必须先行脱水,一般是浸入逐级增加浓度的酒精来完成。
由于酒精和石蜡不能混合，须再用一种石蜡的溶剂来置换酒精，因大多数石蜡溶剂有使组织的折光率增高并表现为透明或半透明状，所以此步骤又称透明。
最后用石蜡浸渍组织并铸制成坚实的蜡块。
常规的石蜡包埋过程包括五个基本步骤,即固定,脱水,透明，浸蜡和包埋,前一章中已述过固定。
第一节脱水脱水就是用脱水剂完全除去组织内的水分，为下一步透明及浸蜡创造条件.此外，脱水还可以使组织再次发生一定的硬化，脱水剂必须是与水在任何比例下均能混合的液体.一．常用的脱水剂1．酒精：是制片最常用的试剂，可与水在任何比例下相混合，酒精的脱水能力比较强，又能硬化组织。
但是酒精的船头速度很快，对于组织会有明显的收缩作用。
因此在以酒精作为脱水剂时,应该先从浓度较低的酒精开始,然后递增其浓度，这样可以避免组织过度收缩。
第一瓶酒精浓度随固定剂，脱水组织的大小和种类而异,经水溶性固定剂固定的细柔组织需要慢慢脱水，从50％酒精开始。
如眼球，组胚组织等大多数组织标本则是从70％酒精开始，再经80％，95％以至无水酒精。
但是有时为了某种特殊要求，例如要做糖元的切片标本或是要做尿酸结晶染色切片标本，为了防止糖元和尿酸结晶在水中消失却要直接投入无水酒精中固定，而不需要经过水洗和低浓度酒精的脱水过程。
经无水酒精固定后的组织只需要再经过换一次无水酒精脱水即可.用AAF固定液固定的组织可直接置于95%酒精开始脱水.用醇性固定剂(如Carnoy）则可置于高浓度无水酒精内，但应多次换液以除酸.一般情况下，组织经过70％，80％，90％,95％,以至无水酒精的脱水程序，即可达到脱水的要求.但是为了能使大量的组织块同时进行脱水,则要求保持液体的浓度以保证脱水的作用，最好是以两次95％酒精，两次100％酒精重复进行脱水，以保证组织的水分脱净。
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石蜡切片及HE染色过程
一石蜡切片
1. 取材: 刀片要求锋利而薄,组织厚度约2—3mm, 大小1.5×1.5×0.2～0.3cm为宜. 取材时间越快越好.
2. 固定: 组织取下后应立即放入10%福尔马林(相当于4%甲醛)固定.
注意: (1). 固定液量应为组织块体积的40倍.
(2) 固定时间固定时间与使用的固定液种类和组织块大小, 温度等有关. 一般为3—24h.
(3)固定温度大多可在室温固定, 在低温(4℃)时间应延长.
(4)固定容器应大些.
3. 漂洗: 流水冲洗2—10h.
4. 脱水: 从低浓度酒精到高浓度酒精.
70%(数分钟)→80%(60-120’)→90%(60-120’)→95%(60-120’)→95%(60-120’)→100%(60-120’)→100%(6 0-120’).
5. 透明: 组织块脱水后必须经过一种既能与酒精混合又能溶解石蜡的溶剂, 而使石蜡进入组织块. 常用二甲苯, 一般浸泡30m即可.
6. 浸蜡: 组织经透明后在熔化的石蜡内浸渍的过程称浸蜡. 一般需经2—3次浸渍才能完成, 总时间为3—4h. 用于浸蜡的石蜡熔点为52—56℃.
7. 包埋: 先将熔化的石蜡倒入包埋框再用加热的镊子将组织块放入. 包埋面必须平整. 包埋后石蜡稍凝后可移入冷水或冰箱中加速凝固.
8. 切片: 修块→切片→展片→捞片→烤片.
二HE染色
1. 染色前切片处理
(1) 脱福尔马林色素.
(2) 脱汞盐结晶.
(3) 脱黑色素.
2. 染色步骤
二甲苯脱蜡(10’)→ 无水乙醇洗去二甲苯(1’×2次)→95%酒精(1’)→90%酒精(1’)→85%酒精(1’)→自来水洗(2’)→苏木精染色(1—5’)→自来水洗(1’)→1%盐酸酒精分化20s→自来水洗(1’)→稀氨水(1%)反蓝30s→自来水或蒸馏水洗(1’)→伊红染色(20s—5min)→自来水洗(30s)→85%酒精脱水(20s)→90%酒精脱水(30s)→95%酒精(1’)→95%酒精(1’)→100%酒精(2’)→100%酒精(2’)→二甲苯(2’)→中性树胶封片.
3. 染色结果: 细胞核呈兰色, 胞浆呈红色.
三盐酸酒精的配制
浓盐酸0.5—1ml + 75%酒精99ml.
此液用一段时间后需延长或更换液体, 新液体分化时间要短.
脑组织的石蜡包埋过程中有很多干预因素，一个环节处理的不好就会影响整个实验，我把我们的制作方法说一下，供参考。
1，后固定充分的脑组织放于0.01mol/L PBS中，40minx3次
2，50%的酒精4小时
3，70%4小时
4，80%4小时
5，90%过夜
6，95%6小时（1.5x4次）
7，100%6小时（1.5x4次）
8，二甲苯透明的时间要看组织块大小了，一般我们的经验是4毫米厚的组织块一般是45分钟，基本可以。
薄一点呢就取40，后一点就取50，这步其实很关键，建议taratara 先用一个空白组的大鼠脑组织先做一次，看条件怎么样，然后再调整一下时间。
9，浸蜡，一般是4.5--5小时，蜡一1小时，蜡二1小时，蜡三2.5--3小时。
以上就是我们的作法，希望对你有所帮助。
如果脑组织不能及时包埋，就用原来的固定液继续固定，放于4度冰箱中，最好不要时间太长，小于一个月，越早包埋越好。
祝实验顺利！
脑组织包埋过程基本上和其它组织是相同的。
但对于某个具体的组织块来说，脱水、透明、浸蜡的时间需要摸索。
虽然相差不大，可是有些原则。
比如：
1.在组织块大小相同的情况下处理疏松的组织需要较短一点的时间；
2.肌肉组织比脂肪组织时间短；
3.纤维组织比结构细腻、细胞成分多的组织时间长。
4.组织块越大需要处理时候越长；等等。
所以你处理脑组织的具体时间需要自己摸索，并不是有很现成的步骤的。
建议你去病理科, 是因为这些过程不是一次两次就可以摸索透彻的。
病理科一般不会擅自切你的标本的，也不会切掉你需要的组织。
他们只是包埋，又不是帮你取材。
你的目的是做HE切片或者免疫组化之类的实验吧？如果不去病理科，难道你连片子也自己切吗？
GOOD LUCK!
我们实验室的做法通常是：
固定: 组织取下后应立即放入4℃的4%甲醛过夜.（注意:固定液量应为组织块体积的20倍.）脱水: 从低浓度酒精到高浓度酒精依次：（注意：不能时间太长，否则组织易碎。
）
70%酒精1min----80%酒精2-4小时----95%酒精2-4小时----95%酒精2-4小时----100%酒精2-4小时----100%酒精2-4小时。
透明: 常用二甲苯, 一般浸泡30min即可.
浸蜡: 组织经透明后放入熔化的石蜡（熔点为52℃）内，1小时/次，共三次。
可以试一下冰冻切片，我们实验室先是用石蜡做大脑的免疫组化，后发现冰冻孵片法方便，而且抗原丢失少，具有很多优点。
我们石蜡的过程如下：
1. 前固定：脑组织最好经心脏灌流进行前固定——麻醉动物，暴露心脏，从左心室灌注生理盐水或0.1M PBS几百毫升（一般为动物体积2－3倍），同时在右心房剪一口。
然后再灌注几百体积4％多聚甲醛等固定液。
2. 后顾定：然后取脑，置于固定液中后顾定24小时
3. 脱水: 从低浓度酒精到高浓度酒精依次：（注意：高浓度酒精时间不能太长，否则组织易
碎。
）
70%酒精可过夜－－80%酒精2小时－－95%酒精1小时两次－－100%酒精1小时两次。
4. 透明: 1：1酒精二甲苯1小时－－常用二甲苯, 一般浸泡30－45min即可。
5. 浸蜡: 组织经透明后放入熔化的软蜡（熔点为52－54℃）内，2小时；然后入硬蜡（熔点56－58℃）2－3小时。
6. 包埋: 将熔化的硬蜡倒入包埋框再将组织块放入，放入时不能有气泡。
建议：大鼠脑袋大，若不影响实验可切开，有利于上述步骤。
祝试验成功！
石蜡的过程如下：
1. 前固定：脑组织最好经心脏灌流进行前固定——麻醉动物，暴露心脏，从左心室灌注生理盐水或0.1M PBS几百毫升（一般为动物体积2－3倍），同时在右心房剪一口。
然后再灌注几百体积4％多聚甲醛等固定液。
2. 后固定：取脑，置于固定液中后固定液24小时。
3. 脱水: 从低浓度酒精到高浓度酒精依次：（注意：高浓度酒精时间不能太长，否则组织易碎。
）70%酒精可过夜80%酒精2小时95%酒精1小时两次100%酒精1小时两次。
（50%酒精6小时,70%4小时,80%4小时,90%过夜，95%1.5小时x 4次无水1.5小时x4次）
4. 透明: 1：1的酒精和二甲苯1小时常用二甲苯, 一般浸泡30－45min即可。
（二甲苯透明10分x4次）
5. 浸蜡: 组织经透明后放入熔化的软蜡（熔点为52－54℃）内，2小时；然后入硬蜡（熔点56－58℃）2－3小时。
6.包埋: 将熔化的石蜡倒入包埋框再将组织块放入，放入时不能有气泡.（注意：1.包埋面必须平整，否则不好切片！2.建议石蜡最好反复融化几次，以使其变得更加致密，便于以后切片。
）
7.切片：组织厚度2mm 建议：大鼠脑大，若不影响实验可切开。