石蜡包埋和HE染色的制作过程

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步骤一:取材与固定:

取动物新鲜组织块(一般厚度不超过0.5厘米)投入预先配好的固定液中(10%福尔马林,Bouin氏固定液)使组织、细胞的蛋白质变性凝固,以防止细胞死后的自溶或细菌的分解,从而保持细胞本来的形态结构。

步骤一:脱水透明:

一般用由低浓度到高浓度酒精作脱水剂,逐渐脱去组织块中的水份。再将组织块置于既溶于酒精,又溶于石蜡的透明剂二甲苯中透明,以二甲苯替换出组织块的中酒精,才能浸蜡包埋。

步骤三:浸蜡包埋:

将已透明的组织块置于已溶化的石蜡中,放入溶蜡箱保温。待石蜡完全浸入组织块后进行包埋:先制备好容器(如折叠一小纸盒),倒入已溶化的石蜡,迅速夹取已浸透石蜡的组织块放入其中。冷却凝固成块即成。包埋好的组织块变硬,才能在切片机上切成很薄的切片。

步骤四:切片与贴片:

将包埋好的蜡块固定于切片机上,切成薄片,一般为5—8微米厚。切下的薄片往往皱折,要放到加热的水中烫平,再贴到载玻片上,放45℃恒温箱中烘干。

步骤四:脱蜡

常用HE染色,以增加组织细胞结构各部分的色彩差异,利于观察。苏木精(Hematoxylin,H)是一种碱性染料,可将细胞核和细胞内核糖体染成蓝紫色,被碱性染料染色的结构具有嗜碱性。伊红(Eosin,E)是一种酸性染料,能将细胞质染成红色或淡红色,被酸性染料染色的结构具有嗜酸性。染色前,须用二甲苯脱去切片中的石蜡,再经由高浓度到低浓度酒精,最后入蒸馏水,就可染色。

酒精用了2次先有低到高,再有高到低,这是为什么?

步骤五:染色

HE染色过程是:

①将已入蒸馏水后的切片放入苏木精水溶液中染色数分钟。

②酸水及氨水中分色,各数秒钟。

③流水冲洗1小时后入蒸馏水片刻。

④入70%和90%酒精中脱水各10分钟。————又要脱水!

⑤入酒精伊红染色液染色2—3分钟。

步骤六:脱水透明:

染色后的切片经纯酒精脱水,再经二甲苯使切片透明。

又要用一次无水酒精,这是为什么?

步骤七:封固:

将已透明的切片滴上加拿大树胶,盖上盖玻片封固。待树胶略干后,贴上标笺,切片标本就可使用。

不要以为这是技术员的事情,这里面肯定是有学问的。

各种浓度的酒精一共用四次!

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