实验6 噬菌体噬斑观察
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头部 蝌 蚪 形 噬 菌 体 蛋白质外壳 核酸：DNA or RNA 尾领 尾髓 尾鞘 尾板：含溶菌酶 尾刺 尾丝：粘附功能
尾部
噬菌体的分类
（1）毒性噬菌体与溶菌反应
毒性噬菌体（virulent phage）：感染宿主菌后，能在 宿主菌细胞内独立复制增殖，产生许多子代噬菌体，并 最终裂解宿主菌的噬菌体。 溶菌反应的结果： 液体培养基：菌液由混浊变清亮。 固体培养基：形成称为噬斑（Plaque）
（验证性实验）
微生物学教研室
郭棵棵
实验内容
录像：厌氧菌的分离与鉴定 上次课结果观察 操作： 1、肠道菌的分离与鉴定（三） （接种半固体、蛋白胨水、尿素、斜面） 2、噬菌体培养（平板法） 材料： 1、半固体、蛋白胨水、尿素、斜面 各1支/人 2、普通平板 1块/3人 3、菌种及噬菌体标本 各1支/6人
操 作： 平板法
（1）平板一分为二，分别标记为1、2区。
（2）接种环蘸取菌液分别在1区和2区均匀密集划线， 1区接种DH5a ，2区接种对照菌。 （3）用接种环蘸取DH5a的噬菌体贴加于1区和2区。 （4）于37℃烘箱培养24h观察结果。
思考题
1. 有可疑伤寒或副伤寒患者，应采取什么标本？ 怎样进行微生物学检验？
2. 细菌性痢疾的细菌学检验有哪些特点？
3. 何谓噬菌体? 温和噬菌体有哪两种生活周期?
变形杆菌阳性？阴性？
痢疾志贺菌阳性？阴性? 伤寒、副伤寒阳性？阴性？
尿素酶试验
检测细菌是否产生尿素酶，分解尿素产氨？
变形杆菌 → 尿素 → 氨 酚红 红色 +
—
+
肠科杆菌尿素酶试验结果：
大肠埃希菌阳性？阴性？
变形杆菌阳性？阴性？ 痢疾志贺菌阳性？阴性? 伤寒、副伤寒阳性？阴性？ 尿素酶试验结果
（酚红颜色改变：酸黄碱红）
大肠杆菌
未产生H2S：无黑色FeS出现
分解葡萄糖：高层变黄 不分解乳糖：斜面仍为红色 不产气：无气泡、裂隙出现 未产生H2S：无黑色FeS出现
痢疾杆菌
甲型副伤寒杆菌
分解葡萄糖：高层变黄 不分解乳糖：斜面红色 产气：培养基出现气泡、裂隙 未产生H2S：无黑色FeS出现
乙型副伤寒杆菌
分解葡萄糖：高层变黄 不分解乳糖：斜面红色 产气：培养基出现气泡、裂隙 产生H2S：出现黑Leabharlann BaiduFeS
操作二
噬菌体培养
噬菌体（Bacteriophage）是一类能感染细菌、 放线菌、螺旋体、支原体和真菌等微生物的病毒。
生物学特点：
（1）个体微小，能通过除菌滤器； （2）结构简单：核酸+蛋白； （3）种类繁多，分布广泛；
（4）专性细胞内寄生；
（5）严格宿主特异性。
噬菌体的形态与结构
在电镜下，呈蝌蚪形，微球形及细杆形三种形态。
Why？
克氏双糖铁培养基（复习）
葡萄糖、乳糖： 可被细菌分解产酸产气，通常将培养基的 高层的颜色改变代表葡萄糖，斜面代表乳糖。
蛋白胨：细菌分解可产生H2S
硫酸亚铁：与H2S结合形成FeS黑色沉淀
酚红指示剂: pH范围6.8-8.4 (酸黄碱红)
克氏双糖培养基培养结果判断
分解葡萄糖乳糖产酸产气： —— 高层、斜面均变黄 —— 培养基出现气泡、裂隙
取克氏双糖铁培养基斜面上的菌苔，分别接种
半固体培养基观察细菌有无动力。 蛋白胨水培养基用于观察细菌能否分解色氨酸产生
靛基质。
尿素培养基是根据酚红指示剂变色来判断细菌是否 分解尿素产碱。 斜面培养基是为下一次血清学鉴定提供菌种。
半固体培养 —— 动力试验
用于检查细菌是否具有鞭毛，能否运动？
[ 教学目标 ]
了解： 厌氧菌的分离鉴定方法 噬菌体的生物学特点 掌握： 噬菌体培养的方法和意义
[ 重点难点 ]
重点： 噬菌体培养的操作方法
难点： 噬菌体培养的操作方法
上次结果观察
克氏双糖铁培养基培养结果观察：
部分培养基高层变黄，斜面维持原有红色； 部分培养基高层、斜面均变为黄色； 有的培养基不光有颜色变化，还出现气泡或裂隙； 有的培养基出现黑色物质。
加 入 指 示 剂 TTC
（ 氯 化 三 苯 四 氮 唑 ）
肠科杆菌动力试验结果：
大肠埃希菌阳性？阴性？
痢疾志贺菌阳性？阴性? 伤寒沙门菌阳性？阴性？
蛋白胨水培养 —— 吲哚（indol）试验
检测细菌是否分解色氨酸产生吲哚（靛基质）？
色氨酸 吲哚
对位二甲基氨基苯甲醛 靛基质指示剂
玫瑰吲哚
红色
肠科杆菌吲哚试验结果： 大肠埃希菌阳性？阴性？
伤寒杆菌
分解葡萄糖：高层变黄 不分解乳糖：斜面红色 产生H2S：出现黑色FeS 不产气：培养基无气泡、裂隙出现
操作
肠道菌分离鉴定步骤（续）
脓血便、肛拭子 标本 S.S平板，KIA 选择/鉴别培基 半固体,蛋白胨水,尿素培养基，斜面 生化反应
玻片凝集试验
血清学鉴定
操作一
肠道菌分离与鉴定（三） （接种半固体、蛋白胨水、尿素、斜面）
噬斑（plaque）：噬菌体和宿 主菌在固体培养基上共同培养 后形成的透明或半透明区域。 一个噬斑是由一个噬菌体复制 增殖并裂解宿主菌后形成的。
（2）温和性噬菌体与溶源性反应
温和噬菌体（temperate phage）：噬菌体基因组与宿主 菌染色体基因组整合，随细菌基因组的复制而复制，并 随细菌分裂而传代，细菌不裂解，也不产生子代噬菌体， 也称之为溶原性噬菌体。 前噬菌体（Prophage）：整合在细菌染色体上的噬菌体 基因组。 溶原性细菌（lysogenic bacterium）：带前噬菌体基因 组的细菌。
尾部
噬菌体的分类
（1）毒性噬菌体与溶菌反应
毒性噬菌体（virulent phage）：感染宿主菌后，能在 宿主菌细胞内独立复制增殖，产生许多子代噬菌体，并 最终裂解宿主菌的噬菌体。 溶菌反应的结果： 液体培养基：菌液由混浊变清亮。 固体培养基：形成称为噬斑（Plaque）
（验证性实验）
微生物学教研室
郭棵棵
实验内容
录像：厌氧菌的分离与鉴定 上次课结果观察 操作： 1、肠道菌的分离与鉴定（三） （接种半固体、蛋白胨水、尿素、斜面） 2、噬菌体培养（平板法） 材料： 1、半固体、蛋白胨水、尿素、斜面 各1支/人 2、普通平板 1块/3人 3、菌种及噬菌体标本 各1支/6人
操 作： 平板法
（1）平板一分为二，分别标记为1、2区。
（2）接种环蘸取菌液分别在1区和2区均匀密集划线， 1区接种DH5a ，2区接种对照菌。 （3）用接种环蘸取DH5a的噬菌体贴加于1区和2区。 （4）于37℃烘箱培养24h观察结果。
思考题
1. 有可疑伤寒或副伤寒患者，应采取什么标本？ 怎样进行微生物学检验？
2. 细菌性痢疾的细菌学检验有哪些特点？
3. 何谓噬菌体? 温和噬菌体有哪两种生活周期?
变形杆菌阳性？阴性？
痢疾志贺菌阳性？阴性? 伤寒、副伤寒阳性？阴性？
尿素酶试验
检测细菌是否产生尿素酶，分解尿素产氨？
变形杆菌 → 尿素 → 氨 酚红 红色 +
—
+
肠科杆菌尿素酶试验结果：
大肠埃希菌阳性？阴性？
变形杆菌阳性？阴性？ 痢疾志贺菌阳性？阴性? 伤寒、副伤寒阳性？阴性？ 尿素酶试验结果
（酚红颜色改变：酸黄碱红）
大肠杆菌
未产生H2S：无黑色FeS出现
分解葡萄糖：高层变黄 不分解乳糖：斜面仍为红色 不产气：无气泡、裂隙出现 未产生H2S：无黑色FeS出现
痢疾杆菌
甲型副伤寒杆菌
分解葡萄糖：高层变黄 不分解乳糖：斜面红色 产气：培养基出现气泡、裂隙 未产生H2S：无黑色FeS出现
乙型副伤寒杆菌
分解葡萄糖：高层变黄 不分解乳糖：斜面红色 产气：培养基出现气泡、裂隙 产生H2S：出现黑Leabharlann BaiduFeS
操作二
噬菌体培养
噬菌体（Bacteriophage）是一类能感染细菌、 放线菌、螺旋体、支原体和真菌等微生物的病毒。
生物学特点：
（1）个体微小，能通过除菌滤器； （2）结构简单：核酸+蛋白； （3）种类繁多，分布广泛；
（4）专性细胞内寄生；
（5）严格宿主特异性。
噬菌体的形态与结构
在电镜下，呈蝌蚪形，微球形及细杆形三种形态。
Why？
克氏双糖铁培养基（复习）
葡萄糖、乳糖： 可被细菌分解产酸产气，通常将培养基的 高层的颜色改变代表葡萄糖，斜面代表乳糖。
蛋白胨：细菌分解可产生H2S
硫酸亚铁：与H2S结合形成FeS黑色沉淀
酚红指示剂: pH范围6.8-8.4 (酸黄碱红)
克氏双糖培养基培养结果判断
分解葡萄糖乳糖产酸产气： —— 高层、斜面均变黄 —— 培养基出现气泡、裂隙
取克氏双糖铁培养基斜面上的菌苔，分别接种
半固体培养基观察细菌有无动力。 蛋白胨水培养基用于观察细菌能否分解色氨酸产生
靛基质。
尿素培养基是根据酚红指示剂变色来判断细菌是否 分解尿素产碱。 斜面培养基是为下一次血清学鉴定提供菌种。
半固体培养 —— 动力试验
用于检查细菌是否具有鞭毛，能否运动？
[ 教学目标 ]
了解： 厌氧菌的分离鉴定方法 噬菌体的生物学特点 掌握： 噬菌体培养的方法和意义
[ 重点难点 ]
重点： 噬菌体培养的操作方法
难点： 噬菌体培养的操作方法
上次结果观察
克氏双糖铁培养基培养结果观察：
部分培养基高层变黄，斜面维持原有红色； 部分培养基高层、斜面均变为黄色； 有的培养基不光有颜色变化，还出现气泡或裂隙； 有的培养基出现黑色物质。
加 入 指 示 剂 TTC
（ 氯 化 三 苯 四 氮 唑 ）
肠科杆菌动力试验结果：
大肠埃希菌阳性？阴性？
痢疾志贺菌阳性？阴性? 伤寒沙门菌阳性？阴性？
蛋白胨水培养 —— 吲哚（indol）试验
检测细菌是否分解色氨酸产生吲哚（靛基质）？
色氨酸 吲哚
对位二甲基氨基苯甲醛 靛基质指示剂
玫瑰吲哚
红色
肠科杆菌吲哚试验结果： 大肠埃希菌阳性？阴性？
伤寒杆菌
分解葡萄糖：高层变黄 不分解乳糖：斜面红色 产生H2S：出现黑色FeS 不产气：培养基无气泡、裂隙出现
操作
肠道菌分离鉴定步骤（续）
脓血便、肛拭子 标本 S.S平板，KIA 选择/鉴别培基 半固体,蛋白胨水,尿素培养基，斜面 生化反应
玻片凝集试验
血清学鉴定
操作一
肠道菌分离与鉴定（三） （接种半固体、蛋白胨水、尿素、斜面）
噬斑（plaque）：噬菌体和宿 主菌在固体培养基上共同培养 后形成的透明或半透明区域。 一个噬斑是由一个噬菌体复制 增殖并裂解宿主菌后形成的。
（2）温和性噬菌体与溶源性反应
温和噬菌体（temperate phage）：噬菌体基因组与宿主 菌染色体基因组整合，随细菌基因组的复制而复制，并 随细菌分裂而传代，细菌不裂解，也不产生子代噬菌体， 也称之为溶原性噬菌体。 前噬菌体（Prophage）：整合在细菌染色体上的噬菌体 基因组。 溶原性细菌（lysogenic bacterium）：带前噬菌体基因 组的细菌。