内毒素的检测及意义ppt课件

显色法检测的特点 显色基质法系利用鲎试剂与内 毒素反应过程中产生的凝固酶 使特定底物显色释放出的呈色 团的多少而测定内毒素含量的 方法，根据产物颜色判断内毒 素浓度。
此法试剂较昂贵，操作较 复杂，在一定范围之内灵敏度、 特异性较高，但检测范围窄；
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动态浊度法检测的特点
动态浊度法 检测的特点
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试剂盒特点
鲎试剂是唯一能够检测内毒素水平的生物试剂
采用更为准确的动态浊度法进行检测 鲎试剂盒由鲎试剂、I号II号检测前处理液、除菌 除热原试管和采血管、吸头及检测用水组成 精心设置血液前处理流程，有效去除血细胞和蛋 白的干扰，准确评估待测样本中的内毒素水平 采用内毒素国家工作标准品进行质控测评，保 证检测结果准确无误
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内毒素的理化性质
耐 热源自文库性：彻底灭活需250高温干烤一小时 可滤过性：能够穿透滤过膜 水 溶 性：LPS的O-特异性Ag呈亲水性 被吸附性：可被活性碳所吸附 易被强酸、强碱和强氧化剂破坏
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人体内毒素的来源
外源性途径
内源性途径
骨折 烧伤 开放性创伤
感染 休克 肝脏疾病
注射药品及溶液
3～7天，慢 × ×
＜20%
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内毒素与血培养的结果比较
科室
脑外科 ICU ICU ICU
肾内科 肝移植科 肝移植科
内毒素结果(EU/ml)
0.4808 0.2136 0.5904 0.1408 13.4727
发热原因的快速辅助诊断（< 1小时）
早期判断革兰阴性菌的感染情况
（Gˉ菌所致）重症疾患的早期诊断 帮助临床医生快速合理筛选适当的抗生素
判断抗感染治疗效果及预后
肠源性内毒素血症的预判及评估
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发热原因的快速辅助诊断
发热
结缔组织 病毒
感染 细菌
恶性肿瘤 真菌等
Gˉ
G+
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帮助临床医生快速筛选合理抗生素
采用国际通用的内毒素活性单位（EU/ml）来准 确衡量待测样本中的内毒素致病效能
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内毒素的单位—EU/ml
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BET-24A采用国际 通用的内毒素活性 单位EU/ml来表示 检测出的内毒素结 果；
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活性单位指的是在 生物试剂在检测某 些具有某些活性的 生物时，它测得的 是这种生物说是致 病力，而不是这种 生物的重量；
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大手术术后
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仪器试剂的介绍及实验原理
BET-24A细菌内毒素分析仪 天津大学天大天发科技有限公司生产
人体液检测专用鲎试剂盒 湛江博康海洋生物制品有限公司生产
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鲎
20世纪六十年代，人
们发现一种古老的海
洋生物，被称为“海
洋活化石”的鲎，它
的血液与内毒素接触
后会发生特异性的凝
集反应，人们经过大
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不同的Gˉ菌释放的 内毒素活性不同，而 对临床最有诊断价值 的是观测到的内毒素 的致病力大小，所以 内毒素水平用活性单 位来表示更客观，更 有科学意义。
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实验原理
内毒素与鲎试剂的凝胶反应
通过鲎试剂与内毒素溶 液混合会发生凝集反应 产生浊度变化，通过浓 度—时间反应曲线，得 出待测样品的内毒素浓 度；
利用细菌内毒素在与鲎试剂形成凝 胶过程中浊度动态变化定量测定细 菌内毒素水平
动态浊度法法检测范围宽，检测范 围为 0.005EU/ml 100EU/ml， 应用范围广
对样本的内毒素含量可以定量检测 ，标准化程度高，适合用于临床体 液细菌内毒素引起发热及重症疾病 的早期诊断检测
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内毒素定量检测的临床意义
Gˉ
内毒素
头孢菌素类
喹诺酮类
碳氢霉烯类
氨基糖甙类
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25 第82回日本泌尿器科学会 1994.4
内毒素检测与微生物培养的关系
确定菌种 指导用药 检测速度 评估病情轻重 重疾早期预警 阳性率
内毒素检测
菌种确定 √
≯1h 快 √ √
＞80%
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微生物培养
精确确定 √
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内毒素的组成
O–特异性抗原
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核心多糖 脂质A
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内毒素的定义和危害
定义
危害
内毒素（Endotoxin） 是革兰阴性菌细胞壁 外膜的脂多糖（LPS） 成分，是革兰阴性菌 生长时释放或死亡后 裂解出来的毒性产物， 其中起主要致病作用 的是非结合的游离脂 多糖（FLPS）。
内毒素能够直接作用于 人体，激活组织内的炎 性细胞和炎症因子，导 致机体发热并产生全身 性炎症反应，继而引起 弥散性血管内凝血、休 克、多脏器功能衰竭等 严重的病理生理症状， 危及生命。
定性检测
定量检测
凝胶法
光度（浊度）法 显色（比色）法
动
法
态 浊
度
终
法
点 浊
度
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动
法
态 显
色
终
法
点 显
色
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几种检测方法的比较
凝胶法检测的特点
“限量”检测，是一种传统 经典的检测方法；
凝胶法是以试管内反应物凝 胶牢固程度为判断标准， 易受人为因素影响；
限量检查的最低检测限仅为 0.035EU/ml，因供试品稀 释倍数所限，容易被供试 品干扰，误差大。因此， 凝胶法不适合在临床用于 体液的细菌内毒素检查；
量研究和实验从它的
血液中提取出了用来
检测内毒素的“鲎试
剂”。
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鲎试剂的发明
1968年1月Jack Levin和 Frederik B.Bang教授在 美国马塞诸塞州Wools Hole海洋生物实验室成 功分离提取鲎血细胞并 研制成能够检测细菌内 毒素的鲎试剂，开辟了 人类认识和检测内毒素 的新纪元！
光密度 OD
时间（分钟）
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实验原理
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实验原理
鲎试剂与内毒素反 应是特异性的“S” 曲线，取光密度 值为0.02点时作 为反应终点时间， 内毒素的浓度与 反应时间成反比
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BET检测标本范围
腹腔积液
尿液
透析液和透析用水
脑脊液
胸腔积液
血液
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检测内毒素的方法
内毒素培训
--吴贤锋
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三大知识点
1 内毒素的基础知识 2 仪器试剂的简单介绍及实验原理 3 临床检验关心的问题
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内毒素发现的历史
1892年,科学家Richard在研究 霍乱弧菌的时候,发现革兰阴性 菌细胞壁外膜中有一种不溶性 成分,它能够引起人体发热、休 克、器官损害等病理表现，因 其毒性效应和性质与外毒素有 显著差异，就用内毒素这一术 语来描述该物质。随后多年对 革兰阴性菌细胞壁外膜的超微 结构技术和生物分析技术，证 实内毒素是磷脂双分子层结构。