无菌检验室、微生物限度检验室、阳性对照室验证方案
无菌检验室微生物限度检验室阳性对照检验室验证方案(20200602183231)
无菌检验室微生物限度检验室阳性对照检验室验证方案
> 编号：
无菌检验室 微生物限度检验室 阳性对照检验室 空 气净化系 统 验证方案
验证方案起草人： 验证方案批准人：
日期： 日期：
企业名称 年月
.
.
目录
1 ．引言 1． 1 概述 1． 2 验证的目的 2 ．验证标准 3 ．检验室的自净器和层流罩安装确认 4 ．检验室的自净器和层流罩运行确认 4． 1 风速测定 4． 2 压差测定 4． 3 温湿度测定 5 ．洁净度测定 5． 1 悬浮粒子测定 5． 2 沉降菌测定 6 ．验证结果及评价 7 ．责任 8 ．时间安排
30 分钟后进行。
5.1.2 测试结果
悬浮粒子测试记录
房间名称：无菌检验操作室
1 万级区
测试状态：静态
.
.
取样 点
次数
粒径
1
2
3
4
第一次
0.5 μｍ 5 μｍ
第二次
0.5 μｍ 5 μｍ
第三次
0.5 μｍ 5 μｍ
平均值 0.5 μｍ 个 , 5 μｍ 个
房间名称：无菌检验操作室
层流罩下
测试状态：静态
无菌检验室
30 分钟后进行。
房间名称
采样点数目
培养皿数
菌落数
操作室 10 万级
2
2
2
层流罩下
2
14
0
微生物检验室 房间名称 操作室 10 万级 层流罩下
采样点数目 2 2
培养皿数 2 14
菌落数 3 0
阳性对照检验室 房间名称
采样点数目
.
培养皿数
菌落数
.
操作室 10 万级
阳性对照实验室说明
实验室说明
阴性对照实验区、阳性对照实验区共用人流物流通道未能有效严格区分，易出现交叉污染。
且在《药品检验所实验室质量管理规范》(试行)在第十八条：无菌检查室与阳性对照室应严格分开。
在GMP检查中的2802条项中明确规定：无菌检查室不得与阳性对照室使用同一实验室。
条项解释中提到“无菌室和阳性对照室不可公用更衣室及缓冲间，防止污染无菌室”。
再结合《医药工业洁净厂房设计规范》（GB50457-2008）5.1.13条第2款：各类实验室的设置，应符合下列要求：
1）阳性对照、无菌检查、微生物限度检查和抗生素微生物检定等实验室，以及放射性同位素检定室等应分开设置。
2)无菌检查室、微生物限度检查室应为无菌洁净室，其空气洁净度等级不应低于10000级，并应设置相应的人员净化和物料净化设施。
中检所苏德模老师等主编的《药品微生物学检验技术》一书中提到：现代微生物学实验室应基本满足下列要求：（1）具有开展无菌检查、微生物限度检查、无菌采样等严格分开的、环境洁净度均为10000级、局部100级洁净室。
（2）抗生素微生检定、抗菌作用测定等实验应各自有分开的半无菌实验室。
并与无菌检查、微生物限度检查的实验室严格分开，注意防止抗生素污染引起的实验结果假阴性。
（3）单独分开的细菌培养室、霉菌培养室。
无菌检验室微生物限度检验室阳性对照检验室
无菌检验室微生物限度检验室阳性对照检验室验证方案无菌检验室微生物限度检验室阳性对照检验室验证方案编号：无菌检验室微生物限度检验室阳性对照检验室空气净化系统验证方案验证方案起草人：日期：验证方案批准人：日期：企业名称年月目录1．引言1．1概述1．2验证的目的2．验证标准3．检验室的自净器和层流罩安装确认4．检验室的自净器和层流罩运行确认4．1风速测定4．2压差测定4．3温湿度测定5．洁净度测定5．1悬浮粒子测定5．2沉降菌测定6．验证结果及评价7．责任8．时间安排1．引言1．1概述无菌检验室是专供医疗器械无菌检验用，微生物限度检验室是专供医疗器械微生物检验用，阳性对照检验室是专供医疗器械菌检时阳性对照实验用，这三个实验室专用。
,检验室顶棚安装自净器一台,向室内送洁净空气,洁净级别为10000级,室内还安装层流罩一个,层流罩下洁净级别为100级。
1．2验证的目的1.2.1检查并确认检验室的自净器层流罩的安装符合设计要求。
1.2.2检测并确认检验室的自净器层流罩的运行性能应能达到药品菌检要求及验证标准。
1.2.3洁净度测试,确认检验室能达到规定的洁净度。
2．验证标准洁净级别项目10000级100级压差Pa5Pa尘埃粒子/M3≥0.5μm ≥5μm ≤3500000≤20000≤3500沉降菌CFU/皿≤10≤1温度/相对湿度18～26℃/45～65%3．检验室的自净器和层流罩安装确认3．1部件安装确认部件名称设计要求安装情况风机风量 1000m3/h 风压 150Pa电机功率 2.2kw高效空气过滤器480×4804个层流罩BCZⅡ-1220/6101个部件名称设计要求安装情况风机风量 1000m3/h 风压 150Pa 电机功率 2.2kw高效空气过滤器480×4804个层流罩BCZⅡ-1220/6101个部件名称设计要求安装情况风机风量 1000m3/h 风压 150Pa 电机功率 2.2kw高效空气过滤器480×4804个层流罩BCZⅡ-1220/6101个检查人: 日期:3．2高效过滤器的检漏测试采用尘埃粒子计数器对高效过滤器进行检漏测试，采样头离过滤器距离约2cm，沿过滤器出风侧及内边框来回扫描。
微生物限度检查方法及其验证报告(修改)
文档来源为:从网络收集整理.word 版本可编辑.欢迎下载支持.文件编号：73021微生物限度检查方法及其验证报告目录样品相关信息 基本信息主要仪器设备和试验耗材信息 主要使用的仪器设备 试验用培养基 试验用试剂 试验用菌种 试验环境 无菌室 洁净工作台 生物安全柜 试验方案 验证试验目的微生物限度检查方法草案 方法验证试验菌液制备计数培养基适用性检查控制菌检查用培养基使用性检查 供试液制备 方法验证菌落计数方法验证试验 控制菌检查方法的验证方法验证结论供试品微生物限度检查结果 样品相关信息 基本信息（三批）1 1.12 2.1 2.2 2.3 2.4 3 3.1 3.2 3.3 4 4.1 4.25 5.1 5.2 5.3 5.4 5.5 5.5.15.5.2 5.6 6 1 1.12主要仪器设备和试验耗材信息2.1主要使用的仪器设备2.2试验用培养基2.2.1对照培养基2.2.2试验用培养基2.3试验用试剂2.4试验用菌种3试验环境《中国药典》2015版规定，微生物限度检查应在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内进行。
本公司微生物限度室、阳性对照室、生物安全柜及超净工作台洁净度检测无特殊情况下每季度进行一次。
3.1无菌室无菌室按《医药工业洁净厂房设计规范》GB50457-2008监测，静态洁净度检测结果符合GB50457-2008对10000级洁净度要求。
3.2超净工作台超净工作台按《医药工业洁净厂房设计规范》GB50457-2008监测，静态洁净度检测结果符合GB50457-2008对100级洁净度要求。
超净工作台沉降菌检测记录3.3生物安全柜生物安全柜按《生物安全实验室建筑技术规范》GB50346-2011监测，静态洁净度检测结果符合GB50457-2008对100级洁净度要求。
生物安全柜沉降菌监测记录4试验方案按《中国药典》2015年版第四部：（通则1105）非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法、（通则1106）非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法、（通则1107）非无菌药品微生物限度标准及（通则1121）抑菌效力检查法规定，本品微生物限度标准为：1g供试品中，需氧菌总数不得过lOOOcfu,霉菌和酵母菌总数不得过lOOcfu，大肠埃希菌不得检出。
32 微生物限度检测室和阳性对照室管理规程
1.2.2.3人员进出程序：
1.2.2.3.1进：第二更衣间脱外衣，换洁净拖鞋后，洗手烘干，进入第三更衣间穿戴洁净服，进入缓冲间酒精消毒，进入微检室。
1.2.2.3.2出：出到第三更衣间脱洁净服，叠放整齐后放收纳箱中待清洗。到第二更衣间洗手烘干，将洁净拖鞋放鞋架，穿工作鞋和工作服后出。
1.2.2.4穿戴洁净服程序：
1.2.2.4.1先戴帽子，以站立姿势穿洁净服，应避免洁净服接触地面，然后罩口罩，最后穿上无菌鞋。
1.2.2.4.2微生物限度检查室或阳性对照室一切专用物品不得随意拿出；无菌操作中不得外出（如上厕所、接电话、聊天、接待外人等）；进出微生物限度检查室或阳性对照室要随手关门；不能通过传递窗将大的物品搬进微生物限度检查室或阳性对照室时，先要在一般环境中擦洗干净后在缓冲区内进行进一步清洁、消毒之后再搬进微生物限度检查室或阳性对照室；不同洁净室有各自专用的清洁用品，不得混用。
4.4.3每日清洁准备间。
4.5微生物限度检查室或阳性对照室非本室人员未经检测中心负责人批准不得入内。微生物限度检查室或阳性对照室外应有“非本室人员未经批准不得入内”的警示标识。非本室人员进入微生物限度检查室或阳性对照室要填写《微生物限度检测室出入记录》或《阳性对照室出入记录》。经批准的入
室人员要熟知《无菌室个人卫生安全管理规程》、《洁净室更衣操作规程》或由检测中心负责人告知《无菌室个人卫生安全管理规程》、《洁净室更衣操作规程》，并依此规程进入微生物限度检查室或阳性对照室。
1.1.2无菌操作结束后，将其外面朝里反叠整理好，放入专用布袋内，工作鞋放入指定地点。
1.1.3洁净工作服不得外借，不得穿出室外。
无菌、微生物限度检查及方法验证
01
02
03
直接接种法
将样品接种在培养基上， 观察是否有微生物生长。
薄膜过滤法
将样品通过薄膜过滤，收 集滤膜上的微生物，再进 行培养。
离心沉淀法
将样品离心，收集沉淀物 中的微生物，再进行培养 。
无菌检查的注意事项
确保环境洁净
无菌检查需要在洁净的环境中进行，以避免 外界微生物的污染。
避免样品中防腐剂的影响
方法验证
方法验证的定义与目的
定义
方法验证是对检测方法的可靠性、准确性和可重复性的评估过程，以确保该方 法能够满足预期的检测要求。
目的
方法验证的目的是确保所采用的无菌、微生物限度检查方法具有足够的灵敏度 、特异性、重现性和可操作性，以保证检测结果的准确性和可靠性。
方法验证的流程
准备验证计划
制定详细的验证计划，包括验 证实验的设计、实验步骤、数 据收集和分析等内容。
进出口检验
进出口药品需要进行严格的微生物限度检查，以确保药品符合进口 国或地区的质量标准，保障公众健康。
方法验证在药品质量控制中的应用
验证无菌、微生物限度检查方法的可靠性
通过方法验证可以确保无菌、微生物限度检查方法的准确性和可靠性，提高药品质量控制 水平。
评估检测方法的性能指标
方法验证过程中需要对检测方法的性能指标进行评估，如灵敏度、特异性、重现性等，以 确保检测结果的准确性和可靠性。
如果样品中含有防腐剂，可能会抑制微生物 的生长，因此需要进行相应的处理。
正确选择培养基
根据待测样品的特性，选择适合的培养基， 以确保微生物能够正常生长。
定期进行方法验证
无菌检查方法需要定期进行验证，以确保其 可靠性。
0义与目的
无菌检验室微生物限度检验室阳性对照检验室验证方案
无菌检验室微生物限度检验室阳性对照检验室验证方案Company Document number：WTUT-WT88Y-W8BBGB-BWYTT-19998无菌检验室微生物限度检验室阳性对照检验室验证方案编号：无菌检验室微生物限度检验室阳性对照检验室空气净化系统验证方案验证方案起草人：日期：验证方案批准人：日期：企业名称年月目录1．引言1．1概述1．2验证的目的2．验证标准3．检验室的自净器和层流罩安装确认4．检验室的自净器和层流罩运行确认4．1风速测定4．2压差测定4．3温湿度测定5．洁净度测定5．1悬浮粒子测定5．2沉降菌测定6．验证结果及评价7．责任8．时间安排1．引言1．1概述无菌检验室是专供医疗器械无菌检验用，微生物限度检验室是专供医疗器械微生物检验用，阳性对照检验室是专供医疗器械菌检时阳性对照实验用，这三个实验室专用。
,检验室顶棚安装自净器一台,向室内送洁净空气,洁净级别为10000级,室内还安装层流罩一个,层流罩下洁净级别为100级。
1．2验证的目的1.2.1检查并确认检验室的自净器层流罩的安装符合设计要求。
1.2.2检测并确认检验室的自净器层流罩的运行性能应能达到药品菌检要求及验证标准。
1.2.3洁净度测试,确认检验室能达到规定的洁净度。
3．检验室的自净器和层流罩安装确认3．1部件安装确认检查人: 日期:3．2高效过滤器的检漏测试采用尘埃粒子计数器对高效过滤器进行检漏测试，采样头离过滤器距离约2cm，沿过滤器出风侧及内边框来回扫描。
检漏测试结果记录在自净器和层流罩运行确认记录上。
4．自净器和层流罩的运行确认4．1风速测定采用风速仪贴近高效过滤器出风口测定，一般测定4个点，求出平均风速。
层流罩测定8个点，求平均风速。
4．2压差测定采用微压表测定4．3温度、相对湿度测定采用干湿球温度计测定自净器和层流罩测试人: 日期:结果分析及评价:5．洁净度的测定5．1悬浮粒子测定5.1.1方法:采用尘埃粒子计数器,每个检验操作室测试3次,每个检验操作室采样点2个,层流罩下采样点4个,采样点的高度离地面1m。
无菌检验室微生物限度检验室阳性对照检验室验证方案
无菌检验室微生物限度检验室阳性对照检验室验证
方案
验证方案的目标是确认无菌检验室、微生物限度检验室和阳性对照检验室的准确性和可重复性。
下面是一个可能的验证方案：
1. 确定验证样品：从无菌检验室中收集一批被认为是无菌的样品，从微生物限度检验室中收集一批已知微生物数量的样品，从阳性对照检验室中收集一批已知阳性结果的样品。
2. 准备验证样品：将收集到的样品进行标识和编号，并进行必要的处理和准备，以便符合相关的检验要求和规程。
3. 进行测试：将验证样品分别送入无菌检验室、微生物限度检验室和阳性对照检验室进行测试。
确保测试过程严格按照相应的操作规范和检验要求进行。
4. 记录结果：记录每个检验室测试的结果，包括阳性结果、微生物数量或无菌结果，以及相应的测试日期和操作人员信息。
5. 数据分析：对测试结果进行统计和分析，比较各个检验室的结果，并评估结果的一致性和可重复性。
根据统计结果，确定各个检验室的准确性和可靠性。
6. 校正和改进：根据测试结果和数据分析的结论，对无菌检验室、微生物限度检验室和阳性对照检验室的工作程序、设备和操作进行必要的调整和改进。
例如，如果某个检验室的结果与其他检验室存在偏差，则需要确定和纠正问题的原因，并采取相应的措施进行改进。
7. 重复测试：在进行校正和改进后，重复整个测试过程，以验证改进措施的有效性。
记录新的测试结果，并与之前的结果进行比较。
8. 编写验证报告：根据测试和分析的结果，编写验证报告。
报告应包括测试过程和结果的详细描述，数据分析的结论，以及校正和改进措施的说明。
需要注意的是，验证方案应根据具体的实验室和检验要求进行调整和定制。
无菌室清洁消毒验证方案
1目的确认无菌室（阳性对照室、微生物检验室）清洁消毒后环境是否符合无菌检验要求。
2范围无菌室（阳性对照室、微生物检验室）清洁消毒验证。
3责任验证领导小组、检验项目小组。
4方案4.1概述：无菌检验室、阳性对照室、微生物检验室等配套房间为万级环境，其清洁消毒采用75%乙醇或新洁尔灭，并两种消毒剂轮换使用消毒，本次即验证使用75%乙醇或0.1%新洁尔灭的清洁消毒周期及消毒效果。
4.2验证目的：在对无菌室（包括阳性对照室、微生物检验室）的墙壁、地面、门、操作台、无菌服、口罩、鞋及手消毒处理后,按规定取样进行微生物检测，从而确认其消毒剂消毒效果。
4.3验证小组成员及责任4.3.1小组成员4.3.2职责小组成员严格按方案要求进行验证，检测时提供数据科学、真实、有意义。
操作过程中，可随时按〔QUIT 〕键退出。
4.4验证方法：4.4.1按照《无菌室清洁消毒规程》对无菌室、微生物室、阳性室及配套使用房间进行清洁消毒，使用消毒剂为75%乙醇或0.1%新洁尔灭，然后按照《无菌室使用标准操作规程》开启空调及紫外线灯运行0.5小时后，对无菌室、微生物室、阳性室及配套使用房间的墙壁、地面、操作台、门及无菌服、口罩、鞋及75%乙醇消毒处理的手取样进行微生物检测。
4.4.2取样方法：用无菌镊子夹取，经注射用水浸润并灭菌的棉签擦拭墙壁、地面、操作台、无菌服、口罩、鞋表面25cm 2，擦拭时要缓慢均匀，棉签匀速转动。
取样点在缝隙和死角处，要用棉签反复擦拭取样，然后将棉签放入pH 值7.0无菌氯化钠—蛋白胨缓冲液中，封好进行微生物限度检查。
棉签擦拭取样图如下：4.4.3类别划分：墙壁和地面、操作台为一类、无菌服、口罩和鞋、手为一类。
4.4.4在对无菌室的墙壁、地面、操作台、门、无菌服、口罩、鞋及75%乙醇消毒处理的手取样后进行微生物数检测。
4.4.5实验次数和取样时间：按照验证要求，无菌检验室应每天使用前、使用后分别进行消毒处理，消毒剂为75%乙醇和0.1%新洁尔灭；为确认最佳消毒周期时间，我们分别在消毒前、消毒后及消毒24小时后、消毒48小时后、消毒72小时后、消毒84小时取样检测，每次取样要区别于上次取样部位，以证明消毒的实际效果。
GMP检查细则(菌检室)
GMP检验细则（）
2802 生物检定、微生物程度检定和放射性同位素检定等应分室进行。
-- 微生物检测室通常分：无菌检测室、微生物程度检测室、阳性对照室。
-- 无菌室检测室：万级背景下百级层流。
有条件企业可采取隔离操作系统，确保环境条件优于或等于生产环境，预防假阳性
-- 微生物程度检测室：万级背景下百级层流
-- 阳性对照室：用于微生物判别、毒、菌种传代等。
条件好企业能够使用生物安全柜，避免致病菌扩散。
条件差可使用层流柜，但必需是垂直流。
阳性对照室回风应经过处理后直排。
-- 抗生素效价测定、不溶性微粒测定通常要求在避菌条件下进行，可在层流操作台下完成。
◇检验微生物试验室应注意：
-- 无菌室和微生物程度室不可公用更衣室及缓冲间，预防污染无菌室；
-- 无菌检验时要监测环境，同时作沉降菌检验；定时对微生物试验室作环境监控，测悬浮粒子及沉降菌。
-- 检验企业是否做无菌室及层流柜高效过滤器检漏试验，是否定时验证。
1．无菌检验室应按无菌操作区管理，最少应在10，000级背景下局部100级超净工作台内进行，不得和生物检定、微生物程度检验，污染菌判别和阳性对照试验使用同一试验室。
2．无菌检验室和非无菌操作间共享人流通道时，有没有对应管理方法，如避免在同一时间同时做不一样性质试验；对检品外表面进行取样，看消毒是否达成预期效果等。
3．微生物程度试验、生物负荷（Ambient load或Bioburden）检验可在同一室进行；孢子D值测定、污染菌判别和阳性对照试验可在同室进行但应使用不一样LAF操作台；细菌内毒素检验不需要无菌操作条件。
这些试验均应有书面规程，并有预防污染方法。
无菌检验室微生物限度检验室阳性对照检验室验证方案
无菌检验室微生物限度检验室阳性对照检验室验证方案一早，阳光透过实验室的窗户洒在我的桌子上，我泡了一杯咖啡，打开电脑，准备着手写这个方案。
这个方案对我来说，早已驾轻就熟，十年的经验让我对这类项目有了深刻的理解。
就让我用最自然的语言，把这个方案呈现出来。
我们得明确这个方案的目的。
简单来说，就是为了验证无菌检验室和微生物限度检验室的阳性对照检验室是否符合规定，确保检验结果的准确性和可靠性。
一、方案背景随着生物制品行业的迅速发展，对无菌检验室和微生物限度检验室的要求越来越高。
阳性对照检验室作为这两个检验室的重要组成部分，其验证工作的开展显得尤为重要。
本方案旨在对阳性对照检验室进行全面的验证，以确保检验结果的准确性和可靠性。
二、验证项目1.无菌检验室阳性对照检验室（1）环境验证：包括空气质量、温湿度、压力等指标的检测。
（2）设备验证：包括培养箱、生物安全柜、高压蒸汽灭菌器等设备的性能检测。
（3）操作规程验证：包括操作流程、检验方法、数据处理等环节的验证。
2.微生物限度检验室阳性对照检验室（1）环境验证：包括空气质量、温湿度、压力等指标的检测。
（2）设备验证：包括培养箱、生物安全柜、高压蒸汽灭菌器等设备的性能检测。
（3）操作规程验证：包括操作流程、检验方法、数据处理等环节的验证。
三、验证方法1.环境验证（1）空气质量检测：采用尘埃粒子计数器、空气培养箱等设备，对实验室空气质量进行检测。
（2）温湿度检测：采用温湿度计对实验室温湿度进行检测。
（3）压力检测：采用压力计对实验室压力进行检测。
2.设备验证（1）培养箱验证：采用标准菌株对培养箱进行温度、湿度、培养效果等方面的验证。
（2）生物安全柜验证：采用生物安全柜测试仪对生物安全柜的性能进行检测。
（3）高压蒸汽灭菌器验证：采用生物指示剂对高压蒸汽灭菌器的灭菌效果进行验证。
3.操作规程验证（1）操作流程验证：通过实际操作，对操作流程进行验证，确保操作过程的合规性。
（2）检验方法验证：采用标准菌株对检验方法进行验证，确保检验结果的准确性。
无菌检测和微生物限度常见问题
无菌检测和微生物限度常见问题1、问:做无菌验证时阳性对照菌是怎么加入的？可以在加完培养基后用无菌的注射器把菌液注入吗？答:严格的说是要在最后一遍冲洗液中加入阳性对照菌的,这主要是考量滤膜对于阳性菌的截留性～但是滤器如果可以提供滤膜对于阳性菌的充分截留的话在最后的培养体系中加入阳性菌也是未尝不可的.如果供试品没有抑菌作用,可以在加完培养基后用无菌的注射器把菌液注入,摇匀如果供试品有抑菌作用,正如安哥洛卡所讲,在最后一次冲洗液中加入阳性对照菌,摇匀,抽虑,加培养基.无菌检查，加入阳性的方法可以有许多种，可以根据个人的习惯。
只是注意：1、避免人为污染。
2、阳性菌加入数量2、问:离心沉淀法的原理、操作和注意事项是什么?答:原理:利用沉降系数的差异将供试品和微生物进行分离;操作:取规定量的供试液，3000转/分离心20分钟（供试液如有沉淀，先以500转/分离心5分钟，取全部上清液再离心），弃去上清液，留底部集菌液约2ml，加稀释剂至原规定量.注意事项:真菌由于沉降系数比较小,500r/min离心5min，黑曲霉、白色念珠菌回收率为20%,因此其检查不适宜用低速离心沉淀法.3、问:稳定性实验的微生物及无菌检查,是否每次都要做?答:是;原因:一实验期内可能会染菌;二灭菌后微生物并不是就彻底"死亡",有些成为碎片,这些碎片在一定的条件和时间下,可以自我修复而复活.三稳定性的考察，也应包括药品有效期的考察，在此期间所有的项目都应是合格的，无菌也是其中之一，如果在有效期内无菌不合格，也可以说明该药品存在一定的缺陷，至少，有效期有问题。
4、问:眼部给药制剂如何做卫生学检验?答:液体制剂:无菌检查;半固体及固体制剂:微生物限度检查5、问:滴眼液的微生物限度为何进行无菌检查?答:一滴眼剂产品系按照无菌工艺生产且终产品为灭菌产品,故其成品的微生物质量应要求统一为无菌;所以,滴眼剂产品的临床合理用药应与其卫生标准要求一致,即将其微生物质量要求统一为无菌,显然更为合理;二滴眼剂的微生物质量要求为无菌,是与各国药典在滴眼剂要求上的统一,及对《中国药典》此项规定合理性的补充及完善等方面看,滴眼剂成品的微生物质量要求统一为无菌具有必要性。
生物检验室无菌室验证方案
生物检验室无菌洁净室验证方案Biological Laboratory Sterile clean room Validation1.目的purpose:检查并确认无菌检验室的安装，运行，性能是否符合中国药典2010年版《Chinese Pharma copoeia2010》的要求。
2. 范围scope：生物检验室无菌洁净室Sterile clean room,微生物限度检验室Microorganisms Laboratory。
3. 责任duty：检验员依据标准：中国药典2010年版《Chinese Pharma copoeia2010》GB 50457-2008 医药工业洁净厂房设计规范《Code for design of pharmaceutical industry clean room》GB/T 16292-2010, GB/T 16293-2010, GB/T 16294-2010,洁净区悬浮粒子，浮游菌，沉降菌测试方法《airborne particles，airborne viable particles，sedimental viable particles test》第1 页共5 页注意保存4. 安装确认IQ：标准名称：生物检验室无菌室验证方案4.2 结论：安装到位检查人：日期： 2011 年月日4.3 安装IQ确认结论：经确认安装符合中国药典2010年版《Chinese Pharma copoeia2010》的要求 :检测环境10000级，局部洁净度100级确认人：日期：2011年月日附录1检验室分布图第3 页共9 页注意保存5.运行O Q确认：5.1高效过滤器风速wind speed测定。
测定仪器：数字式风速仪→QDF-6型→北京远大仪器仪表。
测定方法：在高效过滤器的出口采样，把风速仪贴近风口处定点测量，采用5点法取其平均值。
测定点选择如下所示：5.1.1检查情况：高效过滤器 2 个，测定个数 2个，超净工作台2个风口面积0.48×0.48㎡，房间面积：微生物限度室面积6.67㎡，无菌检验室面积4.14㎡房间高度：2.32m5.1.2风量测试及换气次数计算。
阳性对照检验室验证方案
编号：IV-03微生物限度检验室阳性对照检验室空气净化系统验证方案验证方案起草人：日期：验证方案批准人：日期：药业有限责任公司2000年月目录1．引言1．1概述1．2验证的目的2．验证标准3．检验室的自净器和层流罩安装确认4．检验室的自净器和层流罩运行确认4．1风速测定4．2压差测定4．3温湿度测定5．洁净度测定5．1悬浮粒子测定5．2沉降菌测定6．验证结果及评价7．责任8．时间安排1．引言1．1概述无菌检验室是专供药品无菌检验用，微生物检验室是专供药品微生物检验用，阳性对照检验室是专供药品菌检时阳性对照实验用，这三个实验室必须专用。
每个检验室面积均为20.2M2,检验室顶棚安装自净器一台,向室内送洁净空气,洁净级别为10万级,室内还安装层流罩一个,层流罩下洁净级别为100级。
1．2验证的目的1.2.1检查并确认检验室的自净器层流罩的安装符合设计要求。
1.2.2检测并确认检验室的自净器层流罩的运行性能应能达到药品菌检要求及验证标准。
1.2.3洁净度测试,确认检验室能达到规定的洁净度。
2．验证标准3．检验室的自净器和层流罩安装确认3．1部件安装确认检查人: 日期:3．2高效过滤器的检漏测试采用尘埃粒子计数器对高效过滤器进行检漏测试，采样头离过滤器距离约2cm，沿过滤器出风侧及内边框来回扫描。
检漏测试结果记录在自净器和层流罩运行确认记录上。
4．自净器和层流罩的运行确认4．1风速测定采用风速仪贴近高效过滤器出风口测定，一般测定4个点，求出平均风速。
层流罩测定8个点，求平均风速。
4．2压差测定采用微压表测定4．3温度、相对湿度测定采用干湿球温度计测定自净器和层流罩测试人: 日期: 结果分析及评价:5．洁净度的测定5．1悬浮粒子测定5.1.1方法:采用尘埃粒子计数器,每个检验操作室测试3次,每个检验操作室采样点2个,层流罩下采样点4个,采样点的高度离地面1m。
求平均值。
悬浮粒子测定在自净器和层流罩运行30分钟后进行。
无菌检验室、微生物限度检验室、阳性对照室验证方案
无菌检验室微生物限度检验室阳性对照检验室黑曲霉对照检验室验证方案沈阳上善医疗器械有限公司2011年月目录１.验证的目的２.验证小组成员３.验证小组分工４.验证依据５.标准内容６.检验室的自净器和超净台安装确认7.自净器和超净台的运行确认8.洁净度的测定9.验证结果及评价：10.责任1．验证的目的1.1检查并确认检验室的自净器和超净台的安装符合设计要求。
1.2检测并确认检验室的自净器和超净台的运行性能应能达到检验要求及验证标准。
1.3洁净度测试,确认检验室能达到规定的洁净度。
3验证小组分工：3.1组长：负责审核验证方案是否可行。
3.2副组长：负责组织实施验证、审核测试结果、评价及结论，负责验证报告的会签与批准。
3.3组员：负责无菌检验室、微生物检验室、阳性对照检验室、黑曲霉对照检验室的验证过程；提供监测结果。
3.4组员：负责无菌室正常管理。
4.验证依据：GB—T16294—1996 医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法YY0033-2000 无菌医疗器具生产管理规范5．验证标准6．检验室的自净器和超净台安装确认6.1部件安装确认6.2高效过滤器的检漏测试采用尘埃粒子计数器对高效过滤器进行检漏测试，采样头离过滤器距离约2cm，沿过滤器出风侧及内边框来回扫描。
检漏测试结果记录在自净器和超净台运行确认记录上。
7．自净器和超净台的运行确认7.1风速测定采用风速仪贴近高效过滤器出风口测定，一般测定4个点，求出平均风速。
超净台测定8个点，求平均风速。
7.2压差测定采用微压表测定7.3温度、相对湿度测定采用温湿度记录仪测定7.4结果记录如下：无菌检验室结果分析及评价:8．洁净度的测定8.1尘埃粒子数测定采用尘埃粒子计数器,每个检验操作室测试3次,每个检验操作室采样点2个,超净台采样点4个,采样点的高度离地面1m。
求平均值。
尘埃粒子数测定在自净器和超净台运行30分钟后进行。
尘埃粒子数测试记录( )平均值0.5μm 个, 5μm1 个平均值0.5μm 个, 5μm 个测试人: 日期:结果分析及评价:8.2沉降菌测定医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法》有关要求采用φ90mm培养皿，将培养皿按要求放置后，打开平皿盖，使培养基表面暴露30分钟后，将平皿盖盖上，然后在30—35℃下培养48小时后计数。
微生物限度检查方法验证方案
微生物限度检查方法验证方案目录1. 目的 (3)2. 适用范围 (3)3. 参考标准 (3)4. 接受标准 (3)5. 人员职责 (3)6. 抽样计划 (4)7. 设备、试剂和菌种信息 (4)8. 方法适用性试验 (5)9. 文件控制 (6)10. 不合格情况处理 (6)11. 再验证周期 (6)12. 附件清单 (6)1.目的根据中国药典2020版微生物限度检查法的要求，对产品的微生物限度检查法进行验证，以确定所采用的方法适合于本产品的微生物限度检查，即确认本品在该检查量及该检验条件下无抑菌活性或其抑菌活性已被充分消除到可以忽略不计。
保证检验结果的准确、可靠及检验方法的完整性。
2.适用范围适用于本司产品的微生物限度检查。
3.参考标准《中华人民共和国药典》（2020版第四部1105非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法）《医疗器械的灭菌微生物学方法第1部分：产品上微生物总数的测定》《医疗器械的灭菌微生物学方法第1部分：产品上微生物总数的估计》4.接受标准4.1.阴性对照组不长菌；4.2.回收率（试验组菌落数减去供试品对照组菌落数的值与菌液对照组菌落数的比值）应在0.5~2范围内；4.3.若回收率小于0.5，考虑产品有抑菌性，则重新考虑检查方法的建立。
5.人员职责5.1.成员及其职责详见表一：表一人员及职责5.2.培训要求确保参与验证的所有人员了解其职责和角色，以及验证的过程和要求。
验证开始前，负责本次验证的检验员将对参与确认执行的人员讲解验证的过程和要求，并记录在《培训记录》中。
适用时，培训考核记录作为附录包含在验证报告中。
6. 抽样计划随机抽取3个批次，每个批次随机抽取7套样品。
具体信息详见表二：表二 样品信息确认人/日期： 复核人/日期： 7. 设备、试剂和菌种信息 7.1. 设备信息详见表三表三 设备信息确认人/日期：复核人/日期： 7.2. 试剂信息详见表四表四 试剂信息确认人/日期： 复核人/日期： 7.3. 菌种信息详见表五表五 菌种信息确认人/日期：复核人/日期：7.4.菌液的制备用接种环取枯草芽孢杆菌的斜面培养物用0.9％无菌氯化钠溶液制成浓度≤100cfu/mL的菌悬液；用接种环取金黄色葡萄球菌的斜面培养物用0.9％无菌氯化钠溶液制成浓度≤100cfu/mL的菌悬液；用接种环取铜绿假单胞菌的斜面培养物用0.9％无菌氯化钠溶液制成浓度≤100cfu/mL的菌悬液；用接种环取白色念珠菌的斜面培养物用0.9％无菌氯化钠溶液制成浓度≤100cfu/mL的菌悬液；用接种环取黑曲霉的斜面培养物，向培养物中加入10mL0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱，转移孢子悬液至无菌试管内，用0.9%无菌氯化钠溶液制成浓度≤100cfu/mL的孢子悬液。
无菌、微生物限度检查及方法验证
冷冻真空干燥保藏法
主要是将待保藏菌种混于有保护作用介质内制成菌液，分装在安 瓿中于冷冻条件下使其快速冻结，因冻结可使晶型细致，不致损伤活 菌细胞。然后用真空抽气减压，是安瓿内的冰晶液体升华，水气迅速 被真空抽走，冰晶型的菌液很快变成疏松的干燥固体物，最后在真空 状态下熔封管口，使干燥物在局部真空条件下封存，并置冷暗处，在 很长时间内菌种仍可维持活力不变。
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微生物实验室的质量管理
一、实验室设施与设备和管理
• • • • • 设施—洁净室、净化工作台、生物安全柜。 设备—高压蒸汽灭菌器、电热恒温干烤箱、培养箱、冰箱。 实验仪器—全封闭薄膜过滤装置、电动匀浆仪、电热恒温水浴箱、离心 机、显微镜，及刻度吸管、试管、三角烧瓶、培养皿等。 建立主要设施、设备、仪器的明细记录，内容包括名称、型号、生产厂 家、购买日期。 质量保证档案：购买发票、安装验收或开箱验收记录、调试记录、计量 检定或运行校验合格证、指定专人负责、制订标准操作规程（SOP）、 建立使用登记册，维修、保养记录、改造或更新记录、直至报废记录。
微生物实验室的质量管理
实验室使用管理
1. 每天工作前用消毒液消毒工作台，开紫外灯（最少半小时）进行空气消 毒，每月定期做彻底清洁工作，适当时用消毒剂进行熏蒸。
2. 非必要品禁止带入实验室，必要资料和记录应消毒后进入并应远离操作 台。 3. 实验人员进入洁净室（无菌室）不得化妆、戴手表、戒指等首饰；不得 吃东西。应严格按更衣程序更衣。 4. 记录温湿度是否在规定的范围内，每次实验时，对操作室和层流台做微 生物沉降菌落计数并记录；如发现问题应找原因，及时报修和报告并将 报修原因和结果记录归档。如遇停电，应立即停止实验，重新进入无菌 室前，至少开启机房运转1小时以上。 5. 在每次实验结束时，应用消毒剂及时按消毒规程中的要求消毒操作台和 洁净室（区），并开启室内紫外灯以杀灭存留微生物。 6. 使用后的器具如平皿、试管，所有微生物培养物，染菌/带菌物品等应 用消毒液浸泡（至少24小时以上），经煮沸或灭菌后清洗或丢弃。
化验室空调净化系统验证方案
1概述化验室空调净化系统工程由江西省医药设计院设计和苏州振药净化工程有限公司承建，由净化空调系统、局部排风系统组成。
化验室的洁净室主要为微生物检验室、阳性对照室，二室各自拥有一个独立的小型空调机组。
微生物限度检测室为更衣一室、更衣二室、缓冲间、操作间。
阳性对照室为更衣一室、更衣二室、缓冲间、操作间。
其中微生物检验室的面积为8.5m2,阳性对照室的面积为8.68m2,共计31.5m2。
微生物检验室与阳性对照室平面图见附件1。
2验证目的检查并确认化验室空气净化调节系统（HVAC）符合GMP标准及设计要求，所制定的标准及文件符合GMP 要求。
通过安装确认、运行确认、性能确认一系列说明及试验提供的数据证明该系统在生产中的可靠性和稳定性，满足生产需要。
3验证范围本验证方案适用于化验室的微生物检验室、阳性对照室空调净化系统的验证。
4验证小组成员及责任；4.1验证小组成员验证小组成员4.2验证小组责任验证小组组长-负责验证方案起草、验证方案实施及验证全过程的组织和完成验证报告；负责验证协调工作,及偏差的处理工作，以保证本验证方案按预定的规定项目顺利实施。
验证副组长-负责配合组长完成验证工作，负责方案实施中各参数的确认，负责收集各项验证记录,负责偏差的处理工作，最终完成空调方案的实施工作。
4.3验证工作中各部门及验证小组成员的责任验证委员会-负责空调验证方案的批准;负责验证数据及结果的审核;负责验证报告的审批;负责验证证书的发放。
工程设备部成员-参加验证方案、验证报告、验证结果的会审会签；负责保证验证过程中设备的运行和调试符合验证方案要求。
质量部成员-负责协助验证小组进行有关验证协调工作，负责设备开箱验收，负责对验证全过程实施监控及检验工作；负责建立验证档案，及时将批准实施的验证资料收存归档。
负责组织验证方案、验证报告、验证结果的会审会签；5验证文件及合格标准5.2验证合格标准药品检验所需的洁净区可分为以下2个级别： A 级通常用超净工作台来维持该区的环境状态。
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无菌检验室微生物限度检验室阳性对照检验室黑曲霉对照检验室验证方案
沈阳上善医疗器械有限公司
2011年月
目录
１.验证的目的
２.验证小组成员
３.验证小组分工
４.验证依据
５.标准内容
６.检验室的自净器和超净台安装确认
7.自净器和超净台的运行确认
8.洁净度的测定
9.验证结果及评价：
10.责任
1．验证的目的
1.1检查并确认检验室的自净器和超净台的安装符合设计要求。
1.2检测并确认检验室的自净器和超净台的运行性能应能达到检验要求及验证标准。
1.3洁净度测试,确认检验室能达到规定的洁净度。
2.验证小组成员：
3验证小组分工：
3.1组长：负责审核验证方案是否可行。
3.2副组长：负责组织实施验证、审核测试结果、评价及结论，负责验证报告的会签与批准。
3.3组员：负责无菌检验室、微生物检验室、阳性对照检验室、黑曲霉对照检验室的验证过程；提供监测结果。
3.4组员：负责无菌室正常管理。
4.验证依据：
GB—T16294—1996 医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法
YY0033-2000 无菌医疗器具生产管理规范
5．验证标准
6．检验室的自净器和超净台安装确认
6.1部件安装确认
检查人: 日期:
6.2高效过滤器的检漏测试
采用尘埃粒子计数器对高效过滤器进行检漏测试，采样头离过滤器距离约2cm，沿过滤器出风侧及内边框来回扫描。
检漏测试结果记录在自净器和超净台运行确认记录上。
7．自净器和超净台的运行确认
7.1风速测定
采用风速仪贴近高效过滤器出风口测定，一般测定4个点，求出平均风速。
超净台测定8个点，求平均风速。
7.2压差测定
采用微压表测定
7.3温度、相对湿度测定
采用温湿度记录仪测定
7.4结果记录如下：
测试人: 日期:
结果分析及评价:
8．洁净度的测定
8.1尘埃粒子数测定
8.1.1方法:
采用尘埃粒子计数器,每个检验操作室测试3次,每个检验操作室采样点2个,超净台采样点4个,采样点的高度离地面1m。
求平均值。
尘埃粒子数测定在自净器和超净台运行30分钟后进行。
8.1.2测试结果
尘埃粒子数测试记录( )
平均值0.5μm 个, 5μm 个
平均值0.5μm 个, 5μm 个
测试人: 日期:
结果分析及评价:
8.2沉降菌测定
8.2.1方法：最少采样点数目及最小培养皿数按《GB—T16294—1996 医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法》有关要求采用φ90mm培养皿，将培养皿按
要求放置后，打开平皿盖，使培养基表面暴露30分钟后，将平皿盖盖上，然后在30—35℃下培养48小时后计数。
沉降菌测定在自净器和超净台运行30分钟
后进行。
8.2.2测试结果:
沉降菌测定记录表
测试人: 日期:
结果分析及评价:
9．验证结果及评价：
9.1 4个检验室自净器和超净台安装均符合设计要求。
9.2 4个检验室风速、压差均符合运行设计要求。
9.3 洁净度测定表明,4个检验室内尘埃粒子数和沉降菌均符合验证标准。
超净
台工作区均达到洁净级别100级。
9.4 建议对4个检验室应加强日常监测,当更换高效空气过滤器后应重新测定风
速和洁净度。
10．责任
验证小组负责验证方案的制定、批准及实施；
品管部经理负责无菌检验室、微生物检验室、阳性对照检验室的验证过程；验证小组负责审核测试结果、评价及结论，负责验证报告的会签与批准，
负责制定无菌检验室、微生物检验室、阳性对照检验室验证的周期。