牛膝薄层色谱以及显微鉴别
广东土牛膝与土牛膝的鉴别方法
图1 广东土牛膝粉末显微图木纤维; 2.厚壁细胞; 3.石细胞; 4.具缘纹孔导管; 5.棕色块; 6.分泌道碎片图2 土牛膝粉末显微图1.木纤维;2.导管;3.草酸钙簇晶;4.方晶土牛膝石细胞众多,成群或散在无厚壁细胞单个散在或数个成群偶见导管多为具缘纹孔导管具缘纹孔、梯纹及螺纹导管结晶簇晶、方晶棕色块无分泌道碎片无表1 广东土牛膝与土牛膝粉末特征主要区别图3 广东土牛膝横切面简图①作者简介:张德培:副总经理、主管中药师、执业药师。
通讯作者:黄海波:Tel:186********,Email:bobhwang@。
中国卫生产业型电热恒温干燥箱(沪南实验仪器厂);GSK-11型恒温水浴锅;RE-52AA 旋转式蒸发器(金坛市晶玻实验仪器厂);DWF100型粉碎机。
实验所用试剂均为分析纯。
2 实验方法2.1 粉末分别取广东土牛膝和土牛膝,粉碎,过筛,分别做水装片、水合氯醛装片和水合氯醛加热透化片观察,绘图。
2.2 横切面分别取广东土牛膝和土牛膝的根鲜品适量,用蒸馏水浸润,采用徒手切片法,水合氯醛透化后观察,绘图。
2.3 薄层鉴别2.3.1 供试品液制备 分别取广东土牛膝和土牛膝干品粉末各2g,加75％乙醇20mL,超声提取30min,滤过,滤液加稀盐酸2mL,超声20min,放冷,加氢氧化钠试液调节pH至7,用三氯甲烷20mL提取,提取液蒸干,残渣加三氯甲烷1mL使溶解,作为供试品溶液。
2.3.2 色谱条件 照薄层色谱法[4](中国药典一部附录ⅥB)试验。
吸取上述2种溶液各10、20ul,分别点于同一硅胶G薄层板上,以乙醚—正己烷(2:1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以磷钼酸试液,在105℃加热至斑点显色清晰,置紫外灯(365nm)下检视[5]。
3 结果3.1 粉末3.1.1 广东土牛膝 (1)粉末颜色为棕黄色。
(2)厚壁细胞多,淡黄绿色。
(3)石细胞多见,多呈长条形、类方形、类圆形,壁厚木化,层纹、孔沟及纹孔明显。
三七木瓜液中三七 木瓜 牛膝的薄层色谱鉴别
三七木瓜液中三七木瓜牛膝的薄层色谱鉴别
陆连英;邓雪华
【期刊名称】《辽宁中医药大学学报》
【年(卷),期】2007(9)1
【摘要】三七木瓜液是本院研制开发的中药制剂，由三七、木瓜、牛膝等12味中药加工制成具有祛风除湿，活络止痛的功效，主治风湿痹痛，肢体麻木，跌打损伤，在临床上取得满意效果。
为了控制其质量，笔者对制剂中的三七、木瓜、牛膝的鉴别方法加以探索，建立了可行的质量控制方法。
【总页数】1页(P140-140)
【关键词】三七木瓜液;三七;禾瓜;牛膝;薄层色谱法
【作者】陆连英;邓雪华
【作者单位】郧阳医学院附属东风医院;郧阳医学院药学系
【正文语种】中文
【中图分类】R284.1
【相关文献】
1.定坤丹中的人参与三七的薄层色谱鉴别 [J], 刘秀梅;黄青
2.木瓜与其混淆品光皮木瓜的性状与薄层色谱鉴别 [J], 汤圭
3.木瓜齐墩果酸和熊果酸等三萜酸类薄层色谱分离鉴别 [J], 程菁菁;谢晓梅;张圣龙;葛晓郡;黄丽丹
4.三七木瓜液制备工艺质量标准的研究 [J], 余良武;彭洁
5.中药木瓜薄层色谱鉴别研究 [J], 代琪;叶俏波;罗霄
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GC-YL-10230牛膝检验操作规程
A样×C对×f
含量% =×100%
m×（1－水分）×A对
式中：
A样-------------------------样品的面积。
A对------------------------ -对照品的面积。
C对-------------------------对照品的浓度(mg/ml)。
m-------------------------样品的重量（g）。
f-------------------------稀释体积。
【鉴别】
（1）显微鉴别
仪器与试剂：生物显微镜、酒精灯，水合氯醛等。
方法：取本品，用水合氯醛装片，置显微镜下观察：本品横切面：木栓层为数列扁平细胞，切向延伸。栓内层较窄。异型维管束外韧型，断续排列成2～4轮，最外轮的维管束较小，有的仅1至数个导管，束间形成层几连接成环，向内维管束较大；木质部主要由导管及小的木纤维组成，根中心木质部集成2～3群。薄壁细胞含有草酸钙砂晶。
【检查】
水分不得过15.0%（通则0832第二法）。
仪器：电热鼓风干燥箱、分析天平、粉碎机、药筛等。
方法：取供试品2～5g，平铺于干燥至恒重的扁形称量瓶中，厚度不超过5mm，疏松供试品不超过10mm，精密称定，开启瓶盖在100～105℃干燥5小时，将瓶盖盖好，移置干燥器中，放冷30分钟，精密称定，再在上述温度干燥1小时，放冷，称重，至连续两次称重的差异不超过5mg为止。根据减失的重量，计算供试品中含水量（％）。
仪器：粉碎机、药筛、分析天平、坩埚、箱式电阻炉等。
方法：取供试品2～3g，过二号筛混合均匀后，置炽灼至恒重的坩埚中称定重量，缓缓炽热，注意避免燃烧，至完全炭化时，逐渐升高温度至500～600℃，使完全灰化至恒重。根据残渣重量，计算供试品中总灰分的含量（%）。
川牛膝质量标准提高研究
中药与临床Phamacy and Clinics o f C hinese Materia Medica 2Q2Q;\\(4)•品种品质' •川牛膝质量标准提高研究覃辞辞\齐景梁2,苟琰2,耿昭2,周娟2，高必兴2[摘要]目的：产地及市场了解川牛膝品种情况，建立川牛膝与其混淆品的鉴别方法，为川牛膝标准提高工作奠定基础。
方法：对川牛膝进行调研，并收集基原准确川牛膝及其混淆品的样品；依照2015年版《中国药典》一部川牛膝项下的方法对所收集的样品进行检测；依据基原、性状、显微鉴别、薄层色谱，泡沫试验及分子生物学（ITS)建立川牛膝及其混淆品的鉴别方法。
结果：调研发现产地及市场存在川牛膝、麻牛膝及杂牛膝混种混用情况；现有标准无法鉴别此三种牛膝，杯莧甾鲷的含量川牛膝>杂牛膝>麻牛膝。
新建立的鉴别方法可从基原、TLC鉴别、泡沫实验及分子生物学方法进行明显的区分。
结论：川牛膝及其混淆品混种混用现象严重，现有标准无法对其进行区分，新建立的鉴别方法可区分川牛膝及其混淆品，为其标准提高工作打下基础。
[关键词]川牛膝及其混淆品；产地调研；标准检验；鉴别[中图分类号]R 282 [文献标识码]A [文章编号]l674-926X(2〇2〇)〇4-001-07Study on the improvement of quality standard of Chuanniuxi/g/JVG Ting-ting1, QI Ji-liang2, GOU Yarf, GENG Zhao2, ZHOU Juan2, GAO Bi-xing2//(l. Chengdu Pidu District Hospital o f TCM,Chengdu 611370, Sichuan; 2.Sichuan Institute for Food and DmgControl/Key Labomtoryof Q uality E valuation o f Chinese Patent Medicines NMPA, Chengdu 611731，Sichuan) [Abstract] Objective: To understand the origin and market conditions of Chuanniuxi, and to establish the identification method of Chuanniuxi and the adulterants, so as to lay a foundation for improving the standard of Chuanniuxi. Method: The origin and market of Chuanniuxi was investigated, and samples of Chuanniuxi and adulterant products were collected. The collected samples were tested in accordance with the method of Chuanniuxi recorded in Chinese Pharmacopoeia (Part 1, 2015 edition). The identification method was established according to origin, characteristic, microscopic identification, thin layer chromatography, foam test and molecular biology (ITS) test. Result: The survey found that there was a confusion use of Chuanniuxi, Maniuxi and Zhaniuxi in the place of production and the market.The existing standards cannot distinguish the three kinds of Niuxi, and the content of cyasterone in Chuanniuxi was higher than Zhaniuxi which was higher than Maniuxi. The newly established identification method can be used for the identification of orgin, TLC, foam test and molecular biology methods to clearly distinguish Chuanniuxi and its adulterants. Conclusion: The confusion use of Chuanniuxi and its adulterants is serious, and the existing standards cannot distinguish them. The newly established identification method can distinguish Chuanniuxi and its adulterants, laying the foundationfor the improvement of its standards.[Key words] Chuanniuxi and the adulterants; investigation of producing areas; standard inspection; identification川牛膝，为苋科杯苋属川牛膝Kuan的干燥根。
实验五 牛膝、黄芩药材鉴定
新的形成层，形成单一型、
复合型外韧维管束。——何
首乌等。
直根类——牛膝
【来源】
苋科植物牛膝Achyranthes bidentata Bl.的 干燥根。
直根类——牛膝
【显微鉴定】——组织构造（根 横切面） 1.异型维管束同心环状断续排 列成2～4轮，最外轮维管束较
பைடு நூலகம்
小，向内较大。
2.中央有正常维管束。初生木 质部二元型。
载培品较细长，多有分枝。 表面浅黄棕色，外皮紧贴，纵皱纹 较细腻。断面黄色或浅黄色，略呈 角质样。味微苦。
2.显微鉴别 根横切面：
①木栓层多除去或残留数列， 偶有石细胞散在。
②栓内层狭窄。
③韧皮部有多数石细胞与韧皮 纤维，单个或成群散在，石 细胞多分布于外侧，韧皮纤 维多分布于内侧。 ④形成层多成环。 ⑤木质部在老根中央有栓化细 胞环，栓化细胞有单环的， 有成数个同心环的。 ⑥薄壁细胞中含有淀粉粒。
粉末：黄色。 ①韧皮纤维单个散在或数个成束 ，梭形，壁厚，孔沟细。 ②石细胞类圆形、类方形或长方 形，壁较厚或甚厚。
③木栓细胞多角形、棕黄色。
④网纹导管多见。 ⑤木纤维多碎断，有稀疏的斜纹 孔。 ⑥淀粉粒甚多。
实验 牛膝的鉴定（粉末）
一、实验目的：
1.掌握根类药材粉末观察注意点。 2.掌握牛膝药材粉末特征。 3.进一步熟练粉末标本片制片方法的操作步骤。 二、实验材料：
三、实验内容：
1. 牛膝：草酸钙砂晶、木纤维、具缘纹孔导管。 四、实验步骤：——实验报告要求详细描述操作步骤！ 五、实验结果：绘制牛膝的粉末显微特征图。
牛膝
川牛膝
直根类——牛膝
【显微鉴定】—粉末：
土黄色
1.薄壁细胞含草酸钙砂晶。
牛膝的功效与作用
牛膝的功效与作用牛膝的简介：牛膝学名：Achyranthes bidentata为苋科牛膝属的植物。
分布于非洲、俄罗斯、越南、印度、马来西亚、菲律宾、朝鲜以及中国除东北外全国各地等地，生长于海拔200米至1,750米的地区，常生长在山坡林下，目前尚未由人工引种栽培。
牛膝商品呈细长圆柱形，有时稍弯曲，上端较粗，长30～60cm。
直径0.2～lcm。
表面灰黄色或淡棕色，有细纵皱纹及侧根痕。
质硬脆，受潮变柔韧，易折断，断面淡黄色，角质样，有黄白色小点异常维管束断续排列成数轮同心环。
气微，味微甜涩。
牛膝的主要成分是根含三萜皂甙, 水解后生成齐墩果酸Oleanolic acid.亦含蜕皮甾酮Ecdysterone、牛膝甾酮Inokosterone、紫茎牛膝甾酮Rubrosterone.尚含多糖类、氨基酸、生物碱类、香豆素类.根含大量钾盐及甜菜碱Betaine、蔗糖等野生牛膝亦有药用.但功效与栽培品略有不同，为“土牛膝”的一种.其性状特征为：根茎呈圆柱状，长1～3cm，直径5～10mm，灰棕色，上端有茎基残留，周围着生多数粗细不一的根，根呈长圆柱形，略弯曲，长多在15cm、以下，较细，直径最大可达4mm;表面淡灰棕色，有细密细纵纹。
质稍柔软，干后易折断，断面黄棕色，可见成圈状散列的维管束。
气微，昧微甜.在河南、山西，河北、山东、江苏等地及西南均有分布。
牛膝统货一般在9元上下，一等选货价格在20元，鲜货2元，价格浮动在1元左右。
是什么?1、补肾强筋牛膝，味苦、酸，性平;归肝、肾经。
补肝肾;强筋骨;活血通经;引敌国火下行;利尿通淋。
主腰膝酸痛;下肢痿软;血滞经闭;痛经;产后血瘀腹痛;征瘕;胞衣不下;热淋;血淋;跌打损伤;痈肿恶疮;咽喉肿痛。
2、怀牛膝功效功偏滋补肝肾，壮腰膝：用于肝肾不足引起的筋骨酸软、腰膝疼痛。
3、野生土牛膝功效为苋科植物牛膝的野生种及柳叶牛膝、粗毛牛膝钝叶上牛膝的根及根茎。
通常生用，擅长泻火解毒。
牛膝质量标准及检验操作规程
xxxxxxx有限企业原料质量标准与查验操作规程标题牛膝质量标准及查验操作规程文件号部门批阅日期批准日期颁发部门散发部门草拟人QA 批阅奏效日期草拟日期第 1 页日期共 4 页更改记录文件订正号更改版本更改时间更改原由1品名：1.1 中文名：牛膝1.2 汉语拼音： Niuxi2代码3取样文件编号：4查验方法文件编号：5依照：《中国药典》（2020 年版一部）。
6质量标准：项目法定标准内控标准本品为苋科植物牛膝Achyranthes bidentata Bl. 的干燥根。
冬天茎叶枯败时采挖，除掉须根及泥沙，捆成小把，晒至干皱后，将顶端切齐，晒干。
本品呈修长圆柱形，挺直或稍曲折，长15～ 70cm，直径0.4～ 1cm。
表面灰黄色或淡棕色，有微歪曲的细纵皱纹、摆列稀少的侧根痕和横长皮性状孔样的崛起。
质硬脆，易折断，受潮后变软，断面平展，淡棕色，略呈同法定标准角质样而油润，中心维管制木质部较大，黄白色，其外周散有多半黄白点状维管制，断续摆列成2～ 4 轮。
气微，味微甜而稍苦涩。
（ 1）本品横切面：木栓层为数列扁平细胞，切向延长。
栓内层较窄。
外韧型维管制断续摆列成2～4轮，最外轮维管制较小，有时仅1鉴识同法定标准至数个导管，束间形成层几连结成环，向内维管制较大；木质部由导管及小的木纤维构成，根中心木质部集成2～3群。
薄壁细胞含草酸钙砂晶。
（2）取本品粉末 4g，加 80% 甲醇 50ml，加热回流 3 小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水 15ml ，微热使溶解，加在 Dl01 型大孔吸附树脂柱（内径为 1.5cm，柱高为 15cm）上，用水 l00ml 洗脱，弃去水液，再用20% 乙醇 100ml 洗脱，弃去洗脱液，继用80%乙醇 100ml 洗脱，采集洗脱液，蒸干，残渣加80%甲醇 1ml 使溶解，作为供试品溶液。
另取牛膝比较药材4g，同法制成比较药材溶液。
再取伊蜕皮甾酮比较品、人参皂苷Ro 比较品，加甲醇分别制成每1ml 含1mg 的溶液，作为比较品溶液。
牛膝
商品种类
牛膝：播种当年的11月，茎叶枯萎时采收，除去细根、泥沙，捆成小把， 晒至干皱后，将顶端切齐，晒干。
牛膝段：取原药材，拣去杂质，大小分开，去芦，洗净，用清水浸泡六 七成透时，捞出，润透，切段，晒干或烘干。
酒牛膝：取净段喷淋黄酒拌匀，闷1-2h，微火加热翻炒至颜色变深，取 出，晾干。
贮藏
▪ 药材扎成捆，麻袋包裹；饮片白色硬质塑 料袋包装，置阴凉干燥处，防潮。
▪ 易受潮变软，高温易走油变黑，宜置于 30℃以下的阴凉干燥处，密封。
附注
▪ 麻牛膝
与川牛膝是同属植物，植物形态似川牛膝， 唯有花球团干后呈暗褐色，有时未及时清苗，在 采收时相混，因药材性味与川牛膝不同，不宜混 用，应注意区别。
对照品进行TLC。供试品在与对照品相应位置上，显相同的颜色的斑 点。 5、纯净度 水分不得过15.0％； 总灰分不得过9.0％；酸不溶性灰分不得过1.0％。
质量要求
1、性状评价 以根长、皮细、肉肥、色黄白者为佳。 2、浸出物 水饱和正丁醇浸出物(热)含量，药材不得少于6.5％；
饮片不得少于5.0％； 酒牛膝不得少于4.0％ 。 3、含量测定 HPLC测定，商品含-蜕皮甾酮不得少于0.030%。
盐牛膝 形同酒牛膝，多焦斑，味咸。
鉴别与检查
1、荧光检查 饮片于紫外光灯（365nm）下，显黄白色荧光； 滴加 1%氢氧化铵，显淡黄绿色荧光。 2、化学定性 粉末滴加冰醋酸及浓硫酸，显紫红色。
粉末加水10ml，激烈振摇，产生持续性泡沫（皂苷）。 4、薄层色谱 以-蜕皮甾酮、人参皂苷R0 对照品，牛膝对照药材为
川牛膝
▪ 【历史记载】
▪ 始载于《滇南本草》。
▪ 【性味功效】
牛膝的鉴别方法
1、药材鉴别：干燥根呈细长圆柱形，有时稍弯曲，上端较祖，下端较细，长约30-90匣米，直径约0.5-1厘米。表面呈土黄色或淡棕色；具细微的纵皱纹和稀疏的侧根痕。质坚脆，易折断，断面平坦；微呈角质状。气特殊，味微甜而涩。以根粗长，皮细坚实，色淡黄者为佳。一等（头肥）：根条均匀，中部直径0.6cm以上，长50cm以上；二等（二肥）：根条均匀，中部直径0.4cm以上，长35cm以上；三等（平条）：中部直径0.4cm以下，但不小于0.2cm，长短不分，间有冻条、油条、破条。
2、显微鉴别：根横切面，木栓层为数列细胞，皮层狭窄。中柱占根的大部分，布有多数维管束，断续排列成2-4-8轮，最外轮维管束较小，形成层几连接成环；向内数轮维管束较大，射线宽狭不一；木质部有导管、木纤维及木薄壁细胞组成，根中心部的次生木质部集成2-3叉状，初生木质部2-3原型。薄壁细胞中含草酸钙砂晶。
ห้องสมุดไป่ตู้
3、理化鉴别：
①泡沫试验：取本品粉末少量，加10倍量水充分振摇，产生大量泡沫，经久不消。（检查皂甙）
②溶血试验：取用生理盐水稀释的1%新鲜兔血1ml，沿管壁加入本品的生理盐水浸液（1：10）若干，迅速发生溶血现象。（检查皂甙）
③薄层色谱：取本品粉末2g，加乙醇20ml，回流提取40min，静置。取上清液10ml，加盐酸1ml，回流提取1h，浓缩至约5ml,加水10ml，用石油醚（60-90℃）20ml提取，提取液蒸干，残渣加乙醇2ml溶解，作供试品溶液。另取齐墩果酸加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作对照品溶液。吸取供试品溶液10-20μl，对照品溶液10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇（40：1）溶液展开，取出晾干，喷以磷钼酸试液，110℃供约10min。供试品色谱中，在与对照品色谱中相应的位置上，显相同的蓝色斑点。
三妙丸中苍术,牛膝的薄层色谱鉴别
三妙丸中苍术,牛膝的薄层色谱鉴别
相淞华
【期刊名称】《广西中医药》
【年(卷),期】1995(018)002
【摘要】应用薄层层析法，以茅苍术和齐墩果酸为对照品分别鉴别三妙丸中的苍术和牛膝。
【总页数】1页(P51)
【作者】相淞华
【作者单位】无
【正文语种】中文
【中图分类】R286.0
【相关文献】
1.薄层色谱法鉴别广东土牛膝中的泽兰素 [J], 谢仕伟
2.舒筋通络颗粒中牛膝的薄层色谱鉴别 [J], 卢树杰;张纲;甄兰敏
3.消食平胃散中苍术的微量升华薄层色谱鉴别 [J], 苏梅
4.复方土牛膝糖浆中水杨梅的薄层色谱鉴别研究 [J], 曾聪彦;梅全喜;高玉桥
5.济生肾气丸中牛膝的薄层色谱鉴别 [J], 佘孟祥
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关于牛膝的活性成分分析
７８ ～
色谱、薄层 色谱 、反相 高效液相 色谱等分 离手段进行化 学分 离，得到 ３ 种含量较 大的化合物 。
关 键 词 ：牛 膝 ；活 性 ；分 析
中图分类号 ：Ｎ３ ４
文献 标识码 ：Ａ
文章编 号 ：１ ０ —５ ９（ ０ ０）０ —０ ８０ ０ ７９ ９ ２ １ １０ ７ －１
牛膝为苋科牛膝 Ａｃ ｙｅ ｔｅ ｉｅｔｔ 的干燥根 ，主产于河南 ｈ ｒｎｈ ｓ ｄｎａ ＢＩ ｂ ａ
２ ）牛膝醋酸 乙酯层 的分离 。取牛膝醋酸 乙酯层浸 膏适 量，用 石 油醚． 丙酮进行梯度硅胶柱层析，溶剂梯度变化顺序 为：石油醚一 丙酮
（ ０ ：１ 、石 油 醚 酮 （ ０ ２ ） 丙 １ ０：１ 、石 油 醚 一 酮 （０ ： ） 石 油 醚 ） 丙 ５ １、
一
丙 酮 （０ ： ） 石 油 醚 ． 酮 （ ０：１ 、石 油 醚 ． 酮 （ ２ １、 丙 １ ） 丙 ５：１ 、 石 油 ）
对照品 ｐ谷 甾醇 Ｒｆ 同，和对照品混合后熔点不降低。故鉴定为 ｐ 一 相 一
谷 甾 醇（ —ｔｓ ｒ１。 ｐｓｏ ｔ ｏ） ｉ ｅ 化 合 物 Ｉ： 白色 粉 末 ， ｍｐ ３ ３ ３ ５ ，Ｌｂｒ ｎ －ｕｃ ａｄ和 Ｉ ０￣ ０ ℃ ｉｅｍａ ｎＢ ｒｈｒ
硅胶，青岛海洋化学试剂厂提供。
胶制备薄 层进行 制备，以石油醚一 丙酮 （ ５：１ ）为展开系统，氯仿一 甲
醇 重结 晶 得化 合 物 Ｉ。
［］ 晓娟 ，朱玲 玲 ． 膝皂 苷 的化 学成 分研 究［］ 四 军医大 学学 ２王 牛 Ｊ， 第
报 ，９ ６１ （ １９ ，７ ６）：２ ４７
～
当洗 脱溶 剂 为石 油 醚一 酮 （ 丙 ２：１ ）时 ，收集 馏 分 １２１ ９ ９ —９ ，经 硅
川牛膝检验标准操作规程
原药材检验标准操作规程目的：建立一个中药饮片原药材检验标准操作程序，确保检验结果准确可靠。
适用范围：中药原药材。
责任人：质量保证部主任、质量控制部主任、化验员。
标准来源：《中华人民共和国药典》2010年版一部、《安徽省中药饮片炮制规范》。
内容：1、性状取本品适量，放入白瓷盘中，用眼观察，可见以下性状特征：本品呈近圆柱形，微扭曲，向下略细长或有少数分枝，长30～60cm，直径0.5～3cm。
表面黄棕色或灰褐色，具纵皱纹、支根痕和多数横长的皮孔样突起。
质韧，不易折断，断面浅黄色或棕黄色，维管束点状，排列成数轮同心环。
气微，味甜。
2、鉴别主要使用仪器：电子分析天平、电子显微镜、紫外光灯等。
2.1显微鉴别：2.1.1 试液配制2.1.1.1 水合氯醛试液：取水合氯醛50克，加水15毫升与甘油10毫升使溶解，即得。
2.1.1.2 甘油醋酸试液：取甘油、醋酸及水各等份混匀，即得。
2.1.1.3 稀甘油：取甘油33毫升，加水稀释至100毫升，再加樟脑一小块或液化苯酚1滴，即得。
2.1.2 供试品制备2.1.2.1 取本品10g，研细后取少量粉末，置载玻片上，滴加水合氯醛搅拌均匀，置酒精灯上加热透化；加稀甘油数滴，搅拌均匀，分装2~3片，加盖玻片，即得。
2.1.2.2 取研细的粉末少量置载玻片上，加甘油醋酸试液，搅拌均匀，加盖玻片，即得。
2.1.2.3取研细后取少量粉末，置载玻片上，滴加水搅拌均匀，同时滴加少许稀甘油，加盖玻片，即得。
2.1.2.4横切面制备：取供试品欲观察部位，经软化处理后，用徒手切片法切成10~20μm的薄片，选取平整的薄片置载玻片上，滴加水合氯醛试液后，在酒精灯上加热透化，并滴加稀甘油，盖上盖玻片。
2.1.3 置显微镜下观察可见本品横切面：木栓细胞数列。
栓内层窄。
中柱大，三生维管束外韧型，断续排列成4～11轮，内侧维管束的束内形成层可见；木质部导管多单个，常径向排列，木化；木纤维较发达，有的切向延伸或断续连接成环。
川牛膝药材及其成方制剂薄层鉴别方法研究
川牛膝药材及其成方制剂薄层鉴别方法研究宋国红;李卿【摘要】目的改进2015年版《中国药典(一部)》川牛膝药材及其制剂的薄层鉴别方法.方法在与《中国药典》相同层析条件下,改进川牛膝药材及制剂中供试品溶液制备方法.结果在现行《中国药典》层析条件下,川牛膝药材及与川牛膝配伍的不同剂型、不同入药方式、不同生产工艺的中药成方制剂,均检出与杯苋甾酮对照品相应的特征斑点,薄层色谱分离良好,斑点清晰.结论改进后的薄层鉴别方法效果良好,为药典的修订提供了参考.【期刊名称】《中国药业》【年(卷),期】2018(027)011【总页数】2页(P25-26)【关键词】中国药典;川牛膝;薄层鉴别【作者】宋国红;李卿【作者单位】重庆市中药研究院,重庆 400065;重庆市中药研究院,重庆 400065【正文语种】中文【中图分类】R282.71;R286.0川牛膝 Cyathula offcinalis Kuan是川产道地药材之一，其性善下行，可引血(火)下行，既能逐瘀通经，又能补益肝肾[1]，为历版《中国药典》收载，在中医临床配方及中成药制剂中广泛应用，发挥着重要作用[2－4]。
2015年版《中国药典(一部)》川牛膝药材中鉴别项下收载以川牛膝对照药材和杯苋甾酮对照品为阳性对照的薄层鉴别方法，与川牛膝配伍的中药成方制剂有数10种，在薄层鉴别方法项下，有的收载有川牛膝的薄层鉴别方法，有的未收载；在收载有川牛膝薄层鉴别方法的中药制剂中，有的以川牛膝对照药材为阳性对照，有的以杯苋甾酮对照品为阳性对照，特征性不完全一致。
川牛膝化学成分主要为蜕皮甾酮类、皂苷类、异黄酮类、脂肪酸类及多糖类化合物等，川牛膝中杯苋甾酮有促进蛋白质合成、抗血小板聚集等活性，已作为川牛膝药材及中药成方制剂重要特征性成分[5－6]。
在试验过程中发现，按照现行标准进行试验，川牛膝药材薄层色谱分离清楚，斑点清晰，但操作过程不易控制；该方法用于川牛膝中药成方制剂进行薄层鉴别时，大部分上市品种供试品不能达到纯化效果，色谱鉴别困难，斑点不明晰，易造成判断偏差。
牛膝薄层色谱以及显微鉴别
牛膝薄层色谱以及显微鉴别（一）牛膝简介牛膝为常用中药。
为苋科植物牛膝Achyranthes bidentata Bl．的干燥根。
始载于《神农本草经》。
具有补肝肾、强筋骨、散瘀通经、利尿通淋、引血下行的功能。
用于腰膝酸痛、筋骨无力、经闭癓瘕、肝阳眩晕等病症。
牛膝中药饮片呈圆柱形的段。
外表皮灰黄色或淡棕色，有微细的纵皱纹及横长皮孔。
质硬脆，易折断，受潮变软。
切面平坦，淡棕色或棕色，略呈角质样而油润，中心维管束木部较大，黄白色，其外围散有多数黄白色点状维管束，断续排列成2〜4 轮。
气微,味微甜而稍苦涩。
见下图（二）薄层色谱鉴别分别取牛膝中药饮片（购自河南、安徽）约1g,剪碎，各加80%甲醇30ml,加热回流3小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水15ml，微热使溶解，加在D101型大孔吸附树脂柱（内径为1.5cm,柱高为10cm)上，用水100ml洗脱，弃去水液，再用20%乙醇100ml洗脱，弃去洗脱液，继用80%乙醇100ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加80% 甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。
另取牛膝对照药材1g，同法制成对照药材溶液。
照薄层色谱法(中国药典2015年版通则0502)试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液各5µl分别点于同一硅胶G 薄层板上，以三氣甲烷-甲醇-水-甲酸（7 : 3 : 0.5 : 0.05)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，在105°C加热至斑点显色淸晰。
置紫外光365nm下供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
见下图（三）牛膝显微鉴别牛膝薄壁细胞中含有草酸钙砂晶牛膝纤维牛膝导管。
牛膝配方颗粒
国家药品监督管理局国家药品标准YBZ-PFKL-2021098牛膝配方颗粒Niuxi Peifangkeli【来源】本品为苋科植物牛膝Achyranthes bidentata Bl.的干燥根经炮制并按标准汤剂的主要质量指标加工制成的配方颗粒。
【制法】取牛膝饮片1300g，加水煎煮，滤过，滤液浓缩成清膏（干浸膏出膏率为39%~55%），加入辅料适量，干燥（或干燥，粉碎），再加入辅料适量，混匀，制粒，制成1000g，即得。
【性状】本品为浅黄色至棕黄色的颗粒；气微，味微甜而稍苦涩。
【鉴别】取本品3g，研细，加80%甲醇50ml，加热回流3小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水15ml，微热使溶解，加在D101型大孔吸附树脂柱（内径为1.5cm，柱高为15cm）上，用水100ml洗脱，弃去水液，再用20%乙醇100ml洗脱，弃去洗脱液，继用80%乙醇100ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加80%甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。
另取牛膝对照药材3g，加水100ml，煮沸30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加80%甲醇50ml，同法制成对照药材溶液。
再取 -蜕皮甾酮对照品、人参皂苷Ro对照品，加甲醇分别制成每l ml含l mg的溶液，作为对照品溶液。
照薄层色谱法（中国药典2020年版通则0502）试验，吸取上述四种溶液各4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水-甲酸（7∶3∶0.5∶0.05）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。
供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
【特征图谱】照高效液相色谱法（中国药典2020年版通则0512）测定。
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（柱长为100mm，内径为2.1mm，粒径为1.6μm）；以乙腈为流动相A，以0.05%甲酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；流速为每分钟0.3ml；柱温为40℃；检测波长为270nm。
川牛膝化学成分的鉴定
１ ２ １ ３ １ ４
１ ５
２ ． ３０ Ｏ２ ４７ ０９ ． ９ ８３ １ ． ２１
３ ． ４ ０ ５ｌ
ＣＨ２ Ｃ Ｃ
ＣＨ２
２ ７ ２ ８ ２ ９
１ ．２ ３ ５ ４ ７ ．４ ｌ ９ ６ １ ．２ ８ ９ ３
ＣＨ３ ＣＨ ＣＨ３
（ Ｈ， ，， ７ ６ Ｈｚ Ｈ一 ９ 与 １ ． ３ Ｃ ２ ） ３ ｄ ｜一 ． ， ２ ） ９ ２ ８（ 一 ９ ，
ｒ］ ５
Ｐ ｕｅ ａｖｌａｉ Ｅ］ ｔ ｈｍ ｓｙ ９ ０ ２ （） ２ ５ ｒｎｌ ｕｇ ｒ Ｊ．尸 ｏ ｅ ｉｒ ，１９ ， ９ ７ ： ３５ ｌ ｓ ｃ ｔ
２３ ７ ５ ．
［ ３ Ｈｉ ｎ Ｎ ｍｏｏＫ， ａ ｅ ｏ ｏ ２ ｋ ｏＨ， ｏ ｔ ｉ Ｔ ｋ ｍ ｔ Ｔ． ｅ ｇ ｓｅｏ ｅ ａ ｓｃ Ｓ ｎ ｏ ｔｒｎ ， ｎｉ ｅｔ ｎ
１ １ ３ ３ ， ｜＝ ６ ４Ｈｚ Ｈ一 ７ 与 ｌ ． ４ （ 一 ７ ， ． ７ （ Ｈ ｄ， ， ． ， ２ ） ５ ２ ３ Ｃ ２ ） １ ０ ２（ Ｈ ， ， ２ ） ． ７ ３ Ｓ Ｈ １ 与 ２ ． ６ （ 一 １ ， ０ ８ ３ Ｏ ７ ９ Ｃ ２ ） ． ５ （Ｈ ， ， １ ） ３ Ｓ Ｈ一 ９ 与 １ ． ８ （ 一 ９ ， ０ ７ ６ ３ ， ， ７ ２ ６ Ｃ １ ） ． ６ （ Ｈ Ｓ Ｈ一
位 置
１ ２ ３ ４
５
ＤＥＰ Ｔ
３６ ７ ． ６９ ６６ ７ ． ３９ ６． ０ ６ ９３ ３ ． ８０ ０９
３ ． ６ ３ ３２
位 置
１ ６ １ ７ １ ８ １ ９
２ Ｏ
ＤＥ Ｔ Ｐ
３ 、６ ４ ｌ ６ ４ ．０ ５ ８ ２ ２ ．９ ２ ３ ８ ｌ 、２ ６ ７ ８
牛膝质量标准
1.目的：通过制定牛膝质量标准，为采购和检验提供依据，确保牛膝的质量。
2.范围：适用于牛膝的质量控制。
3.责任：质量管理部、生产技术部、储运部、采购部。
4.内容：4.1基本信息4.1.1物料名称品名：牛膝汉语拼音：Niuxi拉丁名：ACHYRANTHIS BIDENTATAE RADIX4.1.2物料代码：Z344.1.3质量标准依据:《中国药典》2015年版一部（第72～73页）、四部通则0502、2301、0832、2302、2331、2201、05124.1.4批准供应商：见质量管理部批准的供应商清单4.2取样及检验操作规程编号物料、中间产品（待包装产品）、成品取样标准操作程序 2S-307703 牛膝检验标准操作规程 2S-3379034.3定性和定量的限度要求4.3.1法定质量标准【来源】本品为苋科植物牛膝Achyranthes bidentata Bl.的干燥根。
冬季茎叶枯萎时采挖，除去须根和泥沙，捆成小把，晒至干皱后，将顶端切齐，晒干。
【性状】本品呈细长圆柱形，挺直或稍弯曲，长15～70cm，直径0.4～1cm。
表面灰黄色或淡棕色，有微扭曲的细纵皱纹、排列稀疏的侧根痕和横长皮孔样的突起。
质硬脆，易折断，受潮后变软，断面平坦，淡棕色，略呈角质样而油润，中心维管束木质部较大，黄白色，其外围散有多数黄白色点状维管束，断续排列成2～4轮。
气微，味微甜而稍苦涩。
【鉴别】（1）本品横切面：木栓层为数列扁平细胞，切向延伸。
栓内层较窄。
异型维管束外韧型，断续排列成2～4轮，最外轮的维管束较小，有的仅1至数个导管，束间形成层几连接成环，向内维管束较大；木质部主要由导管及小的木纤维组成，根中心木质部集成2～3群。
薄壁细胞含有草酸钙砂晶。
（2）取本品粉末4g，加80%甲醇50ml，加热回流3小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水15ml，微热使溶解，加在D101型大孔吸附树脂柱（内径为1.5cm，柱高为15cm）上，用水100ml洗脱，弃去水液，再用20%乙醇100ml 洗脱，弃去洗脱液，继用80%乙醇100ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加80%甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。
川牛膝不同变种的品质评价
川牛膝不同变种的品质评价
谭玉柱;陈宝华;李敏;谢运飞;赵高琼;董小萍
【期刊名称】《中成药》
【年(卷),期】2012(034)009
【摘要】目的对川牛膝不同变种进行品质评价研究.方法通过薄层色谱鉴别、特征指纹化学对比以及杯苋甾酮测定三方面进行品质评价.结果 TLC及特征指纹化学对比显示3种川牛膝化学成分存在明显差异,杯苋甾酮测定结果显示,白牛膝含有量较红牛膝和杂交牛膝高.结论白牛膝品质在变种川牛膝中为佳.
【总页数】4页(P1770-1773)
【作者】谭玉柱;陈宝华;李敏;谢运飞;赵高琼;董小萍
【作者单位】成都中医药大学药学院,四川成都611137
【正文语种】中文
【中图分类】R283
【相关文献】
1.不同生长年限川牛膝中葛根素和杯苋甾酮含量比较与分析研究 [J], 王奎鹏;余海滨
2.川牛膝不同组分体内抗凝血活性研究 [J], 孟宪群;梁珊珊;赵奕;王秋红;匡海学
3.不同产地川牛膝,川白芷横切面无机成份分布特点 [J], 胡孝丰;陈善墉
4.川牛膝不同产地药材质量综合评价研究 [J], 丁刚;李隆云;宋旭红;付绍智
5.不同生长期川牛膝根的发育变化 [J], 郭庆梅;卫云;兰亦青
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川牛膝
·26·川牛膝ChuanniuxiRADIX CYATHULAE本品为苋科植物川牛膝Cyathula officinalis Kuan的干燥根。
秋、冬二季采挖，除去芦头、须根及泥沙，烘或晒至半干，堆放回润，再烘干或晒干。
【性状】本品呈近圆柱形，微扭曲，向下略细或有少数分枝，长30～60cm，直径0.5～3cm。
表面黄棕色或灰褐色，具纵皱纹、支根痕和多数横长的皮孔样突起。
质韧，不易折断，断面浅黄色或棕黄色，维管束点状，排列成数轮同心环。
气微，味甜。
【鉴别】本品横切面：木栓细胞数列。
栓内层窄。
中柱大，三生维管束外韧型，断续排列成4～11轮，内侧维管束的束内形成层可见；木质部导管多单个，常径向排列，木化；木纤维较发达，有的切向延伸或断续连接成环。
中央次生构造维管系统常分成2～9股，有的根中心可见导管稀疏分布。
薄壁细胞含草酸钙砂晶、方晶。
粉末棕色。
草酸钙砂晶、方晶散在，或充塞于薄壁细胞中。
具缘纹孔导管直径10～80µm，纹孔圆形或横向延长呈长圆形，互列，排列紧密，有的导管分子末端呈梭形。
纤维长条形，弯曲，末端渐尖，直径8～25µm，壁厚3～5µm，纹孔呈单斜纹孔或人字形，也可见具缘纹孔，纹孔口交叉成十字形，孔沟明显，疏密不一。
【检查】水分照水分测定法(附录Ⅸ H第一法)测定，不得过16.0％。
总灰分取本品切制成直径在3mm以下的颗粒，依法检查，不得过8.0％(附录Ⅸ K)。
酸不溶性灰分取本品切制成直径在3mm以下的颗粒，依法检查，不得过1.5％(附录Ⅸ K)。
【浸出物】取本品直径在3mm以下的颗粒，照水溶性浸出物测定法项下的冷浸法(附录X A)测定，不得少于65.0％。
【炮制】川牛膝除去杂质及芦头，洗净，润透，切薄片，干燥。
本品为圆形薄片，厚0.1～0.2cm，直径0.5～3cm。
表面灰棕色，切面淡黄色或棕黄色，可见多数黄色点状维管束。
酒川牛膝取净川牛膝片，照酒炙法(附录Ⅱ D)炒干。
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牛膝薄层色谱以及显微鉴别
（一）牛膝简介
牛膝为常用中药。
为苋科植物牛膝Achyranthes bidentata Bl．的干燥根。
始载于《神农本草经》。
具有补肝肾、强筋骨、散瘀通经、利尿通淋、引血下行的功能。
用于腰
膝酸痛、筋骨无力、经闭癓瘕、肝阳眩晕等病症。
牛膝中药饮片呈圆柱形的段。
外表皮灰黄色或淡棕色，有微细的纵皱纹及横长皮孔。
质硬脆，易折断，受潮变软。
切面平坦，淡棕色或棕色，略呈角质样而油润，中心维管束木部较大，黄白色，其外围散有多数黄白色点状维管束，断续排列成2〜4 轮。
气微,味微甜而稍苦涩。
见下图
（二）薄层色谱鉴别
分别取牛膝中药饮片（购自河南、安徽）约1g,剪碎，各加80%甲醇30ml,加热回流3小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水15ml，微热使溶解，加在D101型大孔吸附树脂柱（内径为1.5cm,柱高为10cm)上，用水100ml洗脱，弃去水液，再用20%乙醇100ml洗脱，弃去洗脱液，继用80%乙醇100ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加80% 甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。
另取牛膝对照药材1g，同法制成对照药材溶液。
照薄层色谱法(中国药典2015年版通则0502)试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液各5µl分别点于同一硅胶G 薄层板上，以三氣甲烷-甲醇-水-甲酸（7 : 3 : 0.5 : 0.05)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，在105°C加热至斑点显色淸晰。
置紫外光365nm下供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
见下图
（三）牛膝显微鉴别
牛
膝
薄
壁
细
胞
中
含
有
草
酸
钙
砂
晶
牛膝纤维
牛膝导管。