植物组织培养的一些注意事项1
植物组织培养流程图及注意事项
5.培养：放在合适的环境里，温度、光照、湿度都得控制好哇！
6.观察和记录：要时刻盯着，看看有没有啥异常情况，及时做好记录哟！
接下来讲讲注意事项哈！
1.无菌操作：这可是重中之重呢！任何一个环节都不能让细菌病毒钻空子呀！
2.培养基配方：哎呀呀，配方得合适，营养不均衡可不行！
9.仪器设备清洁：用完的仪器得洗干净消毒好，为ห้องสมุดไป่ตู้一次使用做好准备哦！
10.人员培训：操作人员得经过专业培训，不然容易出错哟！
怎么样，这些流程图和注意事项是不是很重要呀？希望能对您有所帮助哇！
3.外植体来源：得保证来源可靠，质量过关呀！
4.培养条件控制：温度不能高也不能低，光照时间和强度都得恰到好处，你说难不难？
5.防止污染：哇，一旦污染了，那可就前功尽弃啦！
6.定期观察：可别偷懒，要经常看看植物的生长情况，及时调整条件呢！
7.操作规范：每个步骤都得按照标准来，不能随心所欲哟！
8.材料处理：处理外植体的时候，手法要熟练，不能损伤了它们呀！
植物组织培养流程图及注意事项
嘿呀！以下就是植物组织培养的流程图及注意事项啦！
首先咱们来说说流程图哈！
1.准备阶段：哎呀呀，这可得把各种器具都准备齐全呢！像培养皿、培养基、消毒工具等等，一个都不能少呀！
2.外植体选取：哇，这可重要啦！得挑那些健康、无病害的部位，你说是不是？
3.消毒处理：这一步可不能马虎哟！要用合适的消毒剂，把外植体好好消消毒，不然细菌病毒啥的可就捣乱啦！
植物组织培养总结
植物组织培养总结引言植物组织培养是一种常用的生物技术方法，可以通过体外培养的方式，实现植物的繁殖、育苗、育种等目的。
在植物组织培养过程中，通过培养基、激素、外植体的选择等手段，可以控制植物的生长和发育，从而获取植物的种子、幼苗或新品种。
本文旨在总结植物组织培养的基本原理、操作步骤以及注意事项，帮助读者了解和掌握植物组织培养技术。
基本原理植物组织培养的基本原理包括以下几个方面：1.培养基：培养基是进行植物组织培养的重要基础。
常用的培养基包括MS培养基、B5培养基等。
培养基中含有的营养物质、激素和其他添加剂可以提供植物生长所需的营养和生长因子。
2.外植体选择：外植体是进行植物组织培养时所依赖的基础材料。
常见的外植体包括植物的茎、叶片、花序等。
选择外植体时，应考虑其代表性、易于获取和处理等因素。
3.激素调控：植物组织培养中的生长调节物质主要包括植物激素，如生长素、脱落酸等。
通过调节激素的种类和浓度，可以控制植物的生长和发育过程。
例如，高浓度的生长素可以促进植物的根系发育，而脱落酸则可以促进植物的侧芽分化。
操作步骤植物组织培养的操作步骤如下：1.外表消毒：将外植体表面的细菌和真菌消毒，以避免其对培养过程的影响。
通常使用过氧化氢或酒精进行外表消毒。
2.分离和培养：将外植体分离为适当的大小，并将其培养于含有适量营养物质和激素的培养基中。
根据具体的实验目的，可以选择不同的培养基和添加物。
3.培养条件控制：对培养过程中的温度、湿度、光照和通风等条件进行控制。
不同植物的培养条件可能有所差异，因此要根据实验需要进行相应的调整。
4.感染监测和病菌防治：在植物组织培养过程中，要注意感染的监测和病菌的防治。
对于受感染的外植体，应及时进行处理，以避免病害的传播。
5.生长监测和移栽：对培养的外植体进行生长监测，观察其生长状态和发育情况。
在适当时机，可以进行移栽，将培养的外植体转移到更适合其生长的环境中。
注意事项在进行植物组织培养时，需要注意以下几个关键点：1.操作的无菌性：植物组织培养是一个无菌操作的过程，要保持工作区域的清洁，使用消毒的培养器具和培养基，避免杂菌的污染。
培育技术在植物组织培养中的操作流程与注意事项
培育技术在植物组织培养中的操作流程与注意事项植物组织培养是一种利用培养基和适当的环境条件，通过外植体组织的再生和分化，培养出完整的植株的技术。
这项技术被广泛应用于植物育种、生物工程和植物病理学等领域。
在植物组织培养过程中，正确的操作流程和注意事项对于成功培养健壮的植株至关重要。
首先，在进行植物组织培养之前，我们需要准备适当的实验材料和设备。
实验材料包括外植体（通常是幼嫩的茎尖、根尖或叶片）、无菌培养基和生长调节剂。
实验设备包括培养箱、显微镜、无菌操作台等。
其次，将外植体取出并进行消毒处理。
外植体的消毒是为了去除表面的细菌和真菌，保证培养的无菌性。
一般来说，外植体在漂洗时需要用含有盐酸或漂白粉的消毒液中浸泡一段时间，然后经过多次漂洗，直到完全去除消毒液。
然后，将消毒后的外植体转移到含有培养基和生长调节剂的培养瓶中。
培养基是植物组织培养中不可或缺的一部分，它提供了植物生长所需的营养物质和生长因子。
生长调节剂可以调控植物的增殖和分化。
在将外植体转移到培养瓶中时，需要注意操作的无菌性，以避免污染。
接下来，将培养瓶放置在恒温培养箱中，在适当的温度和光照条件下进行培养。
温度和光照是植物正常生长所必需的因素，不同植物有不同的最适生长温度和光照要求。
因此，在进行植物组织培养时，我们需要根据植物的生态习性和生长要求来设置合适的培养条件。
在培养的过程中，我们还需要经常观察外植体的生长情况，并及时调整培养条件。
如果发现外植体出现生长不良、污染或异常现象，需要及时采取相应的措施。
例如，可以更换培养基或生长调节剂，调整培养温度和光照条件，或进行二次消毒处理。
最后，在外植体生长并形成植株后，我们需要将其移栽到含有适量营养物质的土壤或介质中。
移栽过程需要注意保持植株的无菌性和避免损伤，以确保其顺利生长和发育。
植物组织培养作为一种重要的生物技术手段，在植物繁育和生物工程中具有广阔的应用前景。
然而，由于培养环境的复杂性和培养过程中的各种不确定因素，植物组织培养也存在一些局限性。
生根培养的注意事项
生根培养的注意事
项
生根培养是植物
组织培养中的重要步骤，以下是进行生根培养时需要注意的6个方面：
1.温度：温度是影响
植物生根的重要因素
之一。
在生根过程中，需要保持温度的稳定，
以促进根系的正常生长。
2.光照：光照也是影响植物生根的重要因素之一。
在生根过程中，需要提供适宜的光照条件，以满足植物生长所需的能量和光照需求。
3.湿度：湿度是影响植物生根的重要因素之一。
在生根过程中，
需要保持适宜的湿度条件，以防止过度干燥或过度湿润对植物生长造成不利影响。
4.营养：营养是影响植物生根的重要因素之一。
在生根过程中，需要提供适宜的营养条件，以满足植物生长所需的营养需求。
5.激素：激素也是影响植物生根的重要因
素之一。
在生根过程中，需要使用适宜的
激素浓度和比例，以
促进根系的正常生长。
6.容器和基质：容器
和基质的选择也是影
响植物生根的重要因
素之一。
在选择容器
和基质时，需要考虑
其透气性、排水性和
营养性等因素，以确
保植物根系正常生长所需的良好环境。
植物组培1-培养基配制
植物组织培养-培养基配制一 、【实验目的】1、掌握培养基的配制，灭菌等基本实验操作技术二 、【实验原理】植物组织培养是将植物的器官组织以至单个细胞，应用无菌操作方法，使其在人工条件下，能够分裂、增殖、分化发育成一完整植株的过程。
植物的组织在人工培养条件下，原来已经分化停止生长的细胞，可以重新分裂，形成没有组织结构的细胞团，即愈伤组织，这一过程称为“脱分化作用”。
而已经“脱分化”的愈伤组织，在一定条件下，又能重新分化形成输导系统以及根和芽等组织和器官，这一过程称为“再分化作用”。
植物激素在“再分化”过程中起着重要作用，生长素和细胞分裂素的比例，决定了根和芽的分化。
三、【实验仪器和试剂】仪器：培养室，高压灭菌锅，水浴锅，解剖刀，三角烧瓶（100mL ），烧杯，量筒，培养皿，棉线，接种箱或超净工作台，分析天平，长镊子，剪刀，容量瓶，移液管，牛皮纸试剂：乙醇、2 ，4 – D （生长素类似物）、次氯酸钠、6- 苄基氨基腺嘌呤（ 6-BA ）、MS 培养基、0.1 mol/L NaOH与 0.1 mol/L HCl 四、【实验步骤及内容】培养基的配制用于配制培养基的水最好是三蒸水。
所用的各种化学药品：分析纯级别的试剂，避免药品的交叉污染和混杂。
配制培养基最方便的方法是预先配制好不同组分的培养基母液，存放在2～4℃冰箱内，使用时按比例稀释配用即可。
1、 MS培养基的配制1）按照配方配制培养基时,先将储存母液按顺序摆放好，根据欲配制的总体积，量取各种不同体积的母液，加入2，4-D(2mg/L)，先加三蒸水至大约400ml2）称取加入蔗糖(浓度3%)，调节pH至5.7-5.83）加入琼脂（8-9g/L）加热搅拌溶解，沸腾后立即端离火源（第一个大气泡从缸底上升顶破泡沫层），分装在100ml的三角培养瓶中（一般以容器的1/3～1/4体积为宜），拧紧瓶盖。
4）培养基的pH值直接影响培养物对离子的吸收，过酸或过碱不仅影响到培养材料的生长，而且还影响到琼脂的凝固。
植物组织培养流程图及注意事项
植物组织培养流程图及注意事项
嘿呀！今天咱们就来好好聊聊植物组织培养流程图及注意事项！
首先呢，咱们得清楚植物组织培养的流程。
1. 准备工作可不能马虎呀！要选择健康、无病虫害的植物材料，这可是基础中的基础呢！
2. 接下来就是消毒啦！哎呀呀，消毒这一步可太重要啦，要把外植体表面的微生物统统消灭掉，不然会影响后续的培养哟！
3. 然后呢，就是把消毒好的外植体切成小块或者小段，这可得小心谨慎，不能切坏了呀！
4. 接着，把切好的外植体接种到诱导培养基上，哇，这一步就像是给它们找到了一个新家！
5. 诱导出愈伤组织后，再转移到分化培养基上，盼着它们能快快分化出芽和根呢！
6. 等芽和根长出来，就可以移栽到温室或者大棚里啦，让它们茁壮成长！
再来说说注意事项。
哎呀呀，这可多着呢！第一，培养环境得严格控制，温度、湿度、光照都得恰到好处，不然植物宝宝们可不高兴哟！第二，培养基的配方可不能出错，各种营养成分的比例要精准，这关系到植物组织能不能好好生长呢！第三，无菌操作一定要牢记在心，任何一点点的污染都可能导致前功尽弃，哇，这可太关键啦！第四，在移栽的时候，也要小心呵护，不能让它们受到伤害呀！
总之呢，植物组织培养可不是一件简单的事情，但是只要按照流程图认真操作，注意好各种事项，嘿，说不定就能成功培育出漂亮的植物呢！怎么样，大家是不是对植物组织培养有了更清楚的了解啦？。
植物组织培养
植物组织培养植物组织培养：在无菌的条件下，将离体的植物材料包括器官，组织，细胞以及原生质体在人工培养基上进行培养，使其再生发育成完整植株的过程，又称植物离体培养。
细胞全能性：植物体的任何一个细胞都携带该物种的全部遗传信息，离体细胞在一定的条件下具有发育成完整植株的潜在能力。
外植体：植物组织培养中离体的植物材料，包括植物器官，胚胎、组织、细胞和原生质体。
细胞分化：导致细胞形成不同结构，引起功能改变或潜在发育方式改变的过程。
脱分化：已分化成熟的植物组织或器官回复到分生状态，细胞开始分裂形成无组织结构的细胞团或愈伤组织的过程。
再分化：是指在一定条件下，脱分化形成的愈伤组织转变成为具有一定结构、执行一定生理功能的细胞团和组织、并进一步形成完整植株的过程，即从愈伤组织再生形成完整植株的过程。
愈伤组织：植物体受伤后的伤口处或在植物组织培养中外植体切口处产生的一团不定型的薄壁组织。
离体无性繁殖：根据植物细胞全能性原理，在无菌条件先短时间内形成大量植株。
玻璃化苗：在植物组培中，茎叶形成透明矮小肿胀的形态，生根能力差。
问答题：1、无菌操作是贯穿于整个组织培养过程的一门关键技术，请根据自己的体会论述如何在植物组织培养过程中做到无菌？1）取少菌的材料（春夏，中午的幼芽）2）严格灭菌3）合理安排操作程序4）无菌保存5）操作规范2、组培在生产上的应用有哪些？学好植物组培的意义？1）植物快速繁殖：增殖速度快，成本低，易于批量生成和管理。
比如利用一小块叶片或一个茎尖，一年内可繁殖出1000-100000株幼苗2）脱除病毒：植物在生长过程中几乎都要蒙受到病毒的危害，采用茎尖培养方法可以除去植物体内的病毒。
脱毒苗恢复了原有的优良种性，生长势明显增强，整齐一致。
3）培养新品种：克服远缘杂交不亲合性；克服远缘杂交的不孕性；选择细胞突变体；单倍体育种；转基因育种。
4）植物次生代谢产物生产：利用植物组织后细胞的大规模培养，可以生产一些天然有机化合物，这些次生代谢产物，往往具有一些特定的功能，对人类有重要的影响和作用。
植物组织培养的流程图及注意事项
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薄荷的组织培养实验注意事项
薄荷的组织培养实验注意事项
1、土壤
薄荷对土壤的适应性较高，除了太过粘重或是容易积水的土以外，其他的土都可以。
不过最好还是选择比较疏松，排水能力强的肥沃砂质土壤。
2、水分
薄荷耐湿不耐干，生长需要的水分较多，平时要保持土壤湿润，但不能浇太多的水，否则会让它受涝。
到了冬天的时候要减少浇水的频率和量。
3、光照
薄荷是一种长日照植物，喜欢阳光，平时要给它较长时间的光照，若是盆栽，冬天的时候要将它搬到南窗边，接受充足的光照。
4、温度
薄荷放在20-30℃的温度下培养生长的最好。
不过它对低温的承受能力非常强，能抵抗-15℃的低温。
5、注意事项
(1)及时补肥。
薄荷是一种非常喜肥的植物，在生长期内每月需要追施1次肥料，最好以氯肥为主，以磷钾肥为辅。
这样能够为它提供更多的营养，让它更好的生长。
(2)防病虫害。
在苗期，薄荷很容易换上黑胫病，这种病会使得薄荷的茎部发软发黑，从而使得植株倒伏枯萎。
一旦发生此症，可用70%的百菌清或40%多菌灵喷苗治疗。
植物组织培养操作注意事项
植物组织培养操作注意事项《植物组织培养操作的那些事儿》嘿，朋友们！今天咱来聊聊植物组织培养操作的注意事项，这可是一门有趣又有讲究的技术活呢！你可别小瞧了这些小小的植物细胞，它们可娇贵着呢！操作的时候就得像伺候老佛爷一样小心翼翼。
先说这消毒吧，那可是至关重要的一步。
就好比给植物们洗个超级干净的澡，把身上的细菌、病毒啥的统统洗掉。
要是消毒不彻底，那可就惨啦，就像咱们吃坏肚子一样，容易生病。
所以各种器具都得仔仔细细地消毒，一点儿马虎不得。
接种的时候呢，那手可得稳如泰山，心也得静得像湖水一样。
别一抖一抖的，万一不小心把不该接种的东西弄进去了，那不就完蛋啦！就像打游戏一样，得稳稳地操作，不能瞎比划。
而且要快、准、狠，不能犹犹豫豫，不然植物细胞可等不及。
培养的环境也很重要啊！温度、湿度都得控制得刚刚好。
不能热得它们中暑，也不能冷得它们感冒。
这就跟咱们住的房子一样，得舒服才行。
要是环境不合适，它们可不乐意长呢。
还有光照，可别以为随便照照就行啦。
太强了它们会晒晕，太弱了它们又会没精打采。
就好比咱们晒太阳，得找个合适的地方和时间，不然就得变黑炭或者缺钙啦。
在操作过程中，还得时刻保持警惕，别犯一些低级错误。
比如说把培养瓶打翻了，或者把标签贴错了，那可就麻烦大啦！这就像是出门穿错了鞋，一天都会别扭得很。
而且，别以为一次就能成功哦，这可得有耐心。
有时候可能会失败好几次，但别灰心丧气，要像打不死的小强一样，继续努力。
每次失败都是一次学习的机会，吸取教训，下次肯定能做得更好。
植物组织培养就像是一场冒险，充满了挑战和惊喜。
看着那些小小的细胞一点点长大，变成一棵棵健康的植株，那成就感简直爆棚！就像看着自己的孩子长大一样，满满的都是幸福。
总之呢，植物组织培养操作要细心、耐心、用心。
只有这样，才能让这些植物细胞们茁壮成长，开出美丽的花朵，结出丰硕的果实。
让我们一起加油，成为植物组织培养的小能手吧！。
植物组织培养实验指导
植物组织培养实验指导一、材料与设备准备1.植物材料：选择符合实验要求的植物组织，如茎段、叶片等。
2.吐温20：用于表面消毒材料。
3.植物生长调节剂：包括激素和营养成分等。
4.植物培养基：选择适合所培养植物组织的培养基。
5.培养器具：试管、蒸馏水瓶、烧杯等。
6.其他辅助材料：包括消毒用酒精、无菌操作需要的洁净衣和手套等。
二、无菌操作准备1.操作台面准备：清洁操作台面，并用75%酒精消毒，然后用紫外线灯照射30分钟。
2.实验者准备：穿戴洁净衣、口罩和手套，洗手并用75%酒精消毒双手。
3.工具准备：将试管、蒸馏水瓶等器具洗净，并用高温高压消毒或用离子蒸汽灭菌器进行灭菌。
三、无菌茎段培养实验步骤1.材料准备：选择健康的植物茎段，将其切成1-2厘米长的小段，洗净并去除表皮。
2.表面消毒：将茎段放入含有0.1%吐温20的蒸馏水中浸泡15-30分钟，再用无菌蒸馏水冲洗3-4次。
3.培养基制备：按照特定比例和配方制备适合茎段培养的培养基。
4.培养基固化：将培养基倒入试管中，约3/4满，然后用高温高压或离子蒸汽灭菌器进行灭菌，同时密封试管。
5.培养基接种：将消毒后的茎段放入培养基中，约每个试管放入1-2个茎段。
6.培养条件设置：将培养瓶在适宜的光照和温度条件下培养，通常为25摄氏度，光照强度为3000-5000勒克斯，光周期为16小时光照和8小时黑暗。
四、观察和记录1.培养基观察：每隔一段时间，观察培养基的颜色变化、植物组织的生长情况等，并记录下来。
2.茎段生长观察：观察茎段的生长情况，包括根的生长情况、叶片形态等，并记录下来。
五、结果分析与总结根据观察和记录的数据，分析植株生长的情况、比较不同处理之间的差异等，并对实验的结果进行总结和讨论。
六、安全注意事项1.在操作过程中要严格遵守无菌操作要求，避免细菌、霉菌等的污染。
2.注意使用化学试剂时的安全操作，避免直接接触皮肤和吸入有害气体。
3.实验完成后，洗手消毒，清洁操作台面，并关闭紫外线灯。
植物组织培养实验(1)
实验报告内容
实验名称 实验目的 实验原理 实验材料和用具 实验步骤 实验结果与分析
2. 分装。将培养基分装到8个50ml三角瓶中，培养 三角瓶中， 分装。将培养基分装到8 50ml三角瓶中 基厚度约为5mm。做好标记。 基厚度约为5mm。做好标记。 3. 灭菌。用高压蒸汽灭菌锅在121℃、 0.1MPa条件 灭菌。用高压蒸汽灭菌锅在121℃ 0.1MPa条件 下灭菌15～20min。操作按仪器操作步骤进行。 下灭菌15～20min。操作按仪器操作步骤进行。 灭菌后待压力下降到0Pa时取出 凝固后待用。 时取出， 灭菌后待压力下降到0Pa时取出，凝固后待用。
（三）实验材料和用具
实验材料： 实验材料：黄瓜种子 实验药品：灯用酒精、 70％酒精、 95％酒精、 实验药品：灯用酒精、 70％酒精、 95％酒精、 0.1％氯化汞，吐温-80，无菌水。 0.1％氯化汞，吐温-80，无菌水。 灭菌培养基： 灭菌培养基：MS 实验用具：无菌室、无菌滤纸、无菌培养皿、 实验用具：无菌室、无菌滤纸、无菌培养皿、烧 解剖刀、镊子、剪刀、酒精灯、酒精棉花、 杯、解剖刀、镊子、剪刀、酒精灯、酒精棉花、 滴管、记号笔、废液罐、火柴、光照培养箱。 滴管、记号笔、废液罐、火柴、光照培养箱。
当植株的其他部位难以消毒时，可以选用 当植株的其他部位难以消毒时， 种子， 种子，消毒后的种子在无菌条件下播种到 含有水－琼脂培养基上或1/10 MS培养基上 含有水－琼脂培养基上或1/10 MS培养基上 使其发芽。将无菌培养的幼苗切成小片， 使其发芽。将无菌培养的幼苗切成小片， 作为外植体。 作为外植体。
作业
1. 1 周后观察灭菌培养基有无污染 ， 计算污 周后观察灭菌培养基有无污染， 染率（染菌瓶数/总瓶数×100％ 染率（染菌瓶数 /总瓶数 ×100％ ），分析 染菌原因。 染菌原因。 2. 1 周后观察初代培养体系有无污染 ， 计算 周后观察初代培养体系有无污染， 每一瓶内染菌外植体数和外植体外的菌落 分析染菌原因。 数，分析染菌原因。 3. 1 周 后 观 察 种 子 发 芽 情 况 ， 计 算 发 芽 率 （发芽种子数/种子总数×100％）。 发芽种子数/种子总数×100％
植物组织培养目的
植物组织培养目的
植物组织培养的目的，一般有：
1、防止植物病毒的侵害；
2、培养出植物的新品种；
3、在短时间内成批生产大量植物。
延伸：
1、植物组织培养的注意事项：
（1）接种时应注意的事项：
①接种室要消毒；
②无菌操作；
③接种时要防止交叉污染；
④接种完立刻盖好瓶口。
（2）外植体接种前，需要将接种室、接种箱灭菌和对外植体消毒的操作：
①接种前一天，将接种室的四个角落用甲醛溶液和高锰酸钾熏蒸。
②接种前1小时，在接种室内用喷雾器喷洒来苏水；桌椅也用来苏水擦拭；接种箱内用甲醛溶液和高锰酸钾熏蒸。
③将灭菌室和接种箱内用紫外灯灭菌。
④接种前，操作者用肥皂清洗双手，擦干，再用酒精棉球擦拭双手。
⑤用次氯酸钠溶液将外植体消毒。
2、在离体的植物器官、组织或细胞脱分化形成愈伤组织的过程中，需要的条件：
①消毒灭菌；
②一定浓度的植物激素；
③适宜的温度；
④充足的养料。
3、影响植物组织培养的因素：
①培养基配制；
②外植体选取；
③激素的运用；
④消毒；
⑤温度、pH、光照。
实验一植物的组织培养
4
3．MS基本培养基的配制 基本培养基的配制：分别吸取MS贮备液30.0 ml（ 基本培养基的配制 大量元素）、3.0 ml微量元素、 3.0 ml铁盐、 3.0 ml有机, 加入1 L的搪瓷缸中，然后称取蔗糖18.0g, 加入琼脂4.8g ，加蒸馏水约550 ml，在电炉上加热，煮沸，融化琼脂 ，然后加水至560ml。
铁 盐 单 独 配 制 ， 其 配 法 为 5.57g 的 硫 酸 亚 铁 （ Fe SO4.7H2O）和7.45g乙二胺四乙酸二钠（Na2-EDTA）溶于 1L水中，用时每配1L培养基，取该溶液5ml。 IAA 、IBA、NAA等可用少量的乙醇溶解，然后在加 水定容。2,4-D可用1 N的Na OH 溶解然后再定容； KT和 6-BA应先定容于少量的1 mol/L 的HCl中，再加水定容。 玉米素应该溶于95% 的乙醇中再定容。 pH值对培养基的凝固情况和植物材料的生长有很大的 影响，因此，等培养基配好后，应该立即调整培养基的 pH ,最好用酸度计，既快又准。培养基配好后应该立即分 装，体积一般为容器的 1/4 或者1/3为好。
实验一植物的组织培养
实验原理
植物组织培养是指植物的任何器官、 组织或细 胞，在人工预知的控制条件下，放在含有营养物质和 植物生长调节物质等组成的培养基中，使其生长、分 化并形成完整植株的过程。其理论依据是植物细胞具 有全能性。
组织培养的特点是： 组织培养的特点是 ： 取材少，培养材料经
济；人为控制培养条件，不受自然条件影响；生 长周期短，繁殖率高；管理方便，利于自动化控 制。组织培养不但是进行细胞学、遗传学、育种 学、生物化学和药物学等学科研究的重要手段； 而且在农学、园艺、林业和次生代谢产物工程等 生产领域得到广泛升培养基取用量（ml）
植物组织培养的操作手段及注意事项
植物组织培养的操作手段及注意事项植物组织培养是一种利用植物的组织或细胞在无菌条件下进行培养和繁殖的技术。
通过植物组织培养，可以实现植物的无性繁殖、植物基因工程以及植物种质资源的保存等目的。
下面将介绍植物组织培养的操作手段及注意事项。
一、植物组织培养的操作手段1.材料准备：选择优良的母本植株，将其嫩茎、新芽、子叶等组织取出，进行消毒处理。
消毒处理一般采用漂白粉、酒精等方法，以确保材料的无菌状态。
2.培养基配制：根据实验需要，选择合适的培养基进行配制。
培养基可以分为基础培养基和添加物培养基。
基础培养基通常包括无机盐、糖类、维生素和植物激素等成分，而添加物培养基则根据具体实验需要添加特定的物质。
3.无菌操作：将材料放入培养室中进行无菌操作，保证实验的无菌条件。
无菌操作包括消毒台面、工具、培养器皿等，以及操作者本身的无菌状态。
4.培养条件控制：根据植物的特性和培养的目的，控制适宜的温度、光照和湿度等条件。
不同植物对于培养条件的要求有所不同，需要根据具体情况进行调整。
5.观察和记录：在培养过程中，要及时观察和记录植物的生长情况。
观察可以包括植物的生长速度、形态特征以及细胞分裂和器官发育等方面。
二、植物组织培养的注意事项1.消毒措施：在进行组织培养之前，必须进行彻底的消毒处理，以防止外源性的污染。
消毒处理可以使用漂白粉、酒精或高温高压等方法，具体方法根据实验需要进行选择。
2.培养器皿选择：选择适合的培养器皿进行培养。
常用的培养器皿有培养瓶、琼脂瓶、培养皿等。
不同的植物和实验要求可以选择不同的培养器皿。
3.培养基配制：培养基的配制要准确无误，按照配方进行称量和溶解。
培养基的pH值要适宜，一般在5.5-6.5之间。
4.无菌操作：在进行组织培养时，必须保持无菌操作。
操作者要穿戴无菌衣物、戴手套，并将操作区域消毒。
工具和培养器皿要进行高温高压消毒或用酒精擦拭。
5.培养条件控制：不同的植物对于培养条件有不同的要求，要根据具体植物的特性进行调整。
植物组织培养技术手册
植物组织培养技术手册引言:植物组织培养技术是一种用于植物繁殖、育种、生产以及研究的重要方法。
它通过植物的离体培养，可以实现无菌繁殖、株系保存、基因转化等多种目的。
本手册旨在介绍植物组织培养技术的基本原理、操作流程以及常见的培养方法，帮助读者更好地了解和应用植物组织培养技术。
一、植物组织培养的基本原理:植物组织培养是基于细胞分裂和分化的特性，通过提供适当的培养基和环境条件，实现植物组织或细胞的无菌培养和繁殖。
培养基中的植物激素可调节细胞分裂、分化和发育过程，从而实现植物的离体生长。
二、植物组织培养的操作流程:植物组织培养主要包括种子表面消毒、组织材料切割、组织培养基制备、无菌操作、培养和生长条件控制等步骤。
在进行培养前，必须保证实验室工作台、仪器及试剂无菌，并掌握基本的无菌技术。
三、植物组织培养的常见方法:1. 胚培养: 利用离体胚培养方法，通过改变培养基成分和激素配比，可实现胚的萌发、生根和生长等生理过程，从而获得大量繁殖后代。
2. 茎段培养: 将植物茎段无菌培养在含有适宜激素的培养基上，可诱导茎段发生分化、长出新芽或胚状体，进而形成新的植株。
3. 叶片培养: 利用植物叶片的组织分化和再生能力，通过无菌培养可实现新植株的繁殖和长出新叶片。
4. 胚性愈伤组织培养: 使用植物体内存在的愈伤组织分化能力，通过外部条件的调控，诱导愈伤组织的形成和萌发，进而向下分化和发育为新的植株。
5. 原基愈伤组织培养: 利用原基愈伤组织在培养基上的生长和分化能力，可以实现离体胚胎的形成和长成新植株。
四、植物组织培养的注意事项:1. 无菌操作: 在进行植物组织培养前，必须进行充分的无菌操作，保证实验材料和环境的无菌状态，避免细菌和真菌的污染。
2. 培养基配方: 不同植物组织或细胞具有不同的生理需求，需要根据具体物种和实验目的来调整培养基的成分和激素的配比。
3. 生长环境控制: 控制培养基的pH值、温度、光照强度和湿度等因素，可影响植物组织的生长和分化能力，需根据实际情况进行适当调节。
植物组织培养实验指导
植物组织培养实验指导2012.3附录培养基母液的配制一、实验目的：掌握培养基母液配制的方法。
二、实验原理：配制培养基时，为了使用方便和用量准确，通常采用母液法进行配制，即将所选培养基配方中各试剂的用量，扩大若干倍后再准确称量，分别先配制成一系列的母液置于冰箱中保存，使用时按比例吸取母液进行稀释配制即可。
以MS培养基为例，所需配制的母液可分为：MS大量元素母液、MS微量元素母液、MS铁盐母液和MS有机化合物母液等。
另外，还要配制生长物质母液，在不同类型的培养基中使用。
三、实验器具与药品：电子分析天平、托盘天平、烧杯（50ml, 100ml, 500ml, 1000ml）、量筒（1000ml,100ml, 25ml）、容量瓶（1000ml,500ml,100ml）、药勺、称量纸、玻璃棒、滴管、电炉、冰箱。
配制MS培养基所需药品按培养基的配方准备。
植物生长调节物质，2,4-D, NAA, 6-BA等。
四、培养基母液的配制过程首先，按下表“MS培养基母液的配制”，将各种母液根据各自的扩大倍数，计算出扩大后的称取量，然后，分别进行药品称取和母液配制。
母液种类成分规定用量ml/L 扩大倍数称取量mg母液定容体积ml配1LMS培养基吸取量ml大量元素KNO3NH4NO3MgSO4·7H2OKH2PO4CaCl2·2H2O 190016503701704402038000330007400340088001000 50微量元素MnSO4·4H2OZnSO4·7H2OH3BO322.38.66.2 10002230086006200 1000 1KINa2MoO4·2H2O CuSO4·5H2O CoCl2·6H2O 0.830.250.0250.0258302502525铁盐Na-EDTAFeSO4·7H2O 37.327.8 10037302780 1000 10维生素和氨基酸烟酸甘氨酸Vit.B1Vit.B6肌醇0.52.00.10.51001002510052550001000 10（1）MS大量元素母液的配制按照MS培养基配方的用量扩大20倍，将大量元素配制成20倍的母液。
植物组织培养的一些注意事项(1)
植物组织培养的一些注意事项一、常用培养基主要特性1、高盐成分培养基包括MS、LS、BL、BM、ER 等培养基。
其中MS 培养基应用最广泛,其钾盐、铵盐及硝酸盐含量均较高, 微量元素种类齐全, 其养分数量及比例均比较合适, 广泛用于植物的器官、花药、细胞及原生质体的培养。
LS、BM、ER 培养基由MS 培养基演变而来。
2 、硝酸钾含量较高的培养基包括B5 、N6 、LH、GS 等培养基。
①B5 培养基B5 培养基除含有较高的钾盐外, 还含有较低的铵态氮和较高的盐酸硫胺素, 较适合南洋杉、葡萄及豆科与十字花科植物等的培养。
②N6 培养基N6 培养基( 朱至清等1975 ) 系我国学者创造, 获国家发明二等奖, 适用于单子叶植物花药培养, 柑橘花药培养也适合, 在楸树、针叶树等的组织培养中使用效果也好。
③SH 培养基是矿盐浓度较高的一种培养基, 其中铵与磷酸是由磷酸二氢铵( NH4 H2 PO4 ) 提供的, 这种培养基适合于某些单子叶及双子叶植物的培养。
3 、中等无机盐含量的培养基①H 培养基本培养基大量元素约为MS 培养基的一半, 仅磷酸二氢钾及氯化钙稍低, 微量元素种类减少, 而含量较MS 为高, 维生素种类比MS 多。
适于花药培养。
②尼奇培养基(Niotsch 1969 ) 此培养基与H 培养基成分基本相同, 仅生物素比H 培养基高10 倍。
也适合于花药培养。
③米勒培养基(Miller 1963 ) 此培养基和Blaydes(1966) 培养基二者成分完全相同。
适合大豆愈伤组织培养和花药等培养用。
4 、低无机盐培养基大多情况下用于生根培养基。
有以下几种:①改良怀特培养基(White 1963 )②WS 培养基(Wolter & Skoog 1966)③克诺普液( Knop 1965 ) 花卉培养上用得多。
④贝尔什劳特液(Berthelot 1934)⑤HB 培养基( Holley & Baker 1963) 此培养基在花卉脱毒培养和木本植物的茎尖培养中效果良好。
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植物组织培养的一些注意事项一、常用培养基主要特性1、高盐成分培养基包括MS、LS、BL、BM、ER 等培养基。
其中MS 培养基应用最广泛,其钾盐、铵盐及硝酸盐含量均较高, 微量元素种类齐全, 其养分数量及比例均比较合适, 广泛用于植物的器官、花药、细胞及原生质体的培养。
LS、BM、ER 培养基由MS 培养基演变而来。
2 、硝酸钾含量较高的培养基包括B5 、N6 、LH、GS 等培养基。
①B5 培养基B5 培养基除含有较高的钾盐外, 还含有较低的铵态氮和较高的盐酸硫胺素, 较适合南洋杉、葡萄及豆科与十字花科植物等的培养。
②N6 培养基N6 培养基( 朱至清等1975 ) 系我国学者创造, 获国家发明二等奖, 适用于单子叶植物花药培养, 柑橘花药培养也适合, 在楸树、针叶树等的组织培养中使用效果也好。
③SH 培养基是矿盐浓度较高的一种培养基, 其中铵与磷酸是由磷酸二氢铵( NH4 H2 PO4 ) 提供的, 这种培养基适合于某些单子叶及双子叶植物的培养。
3 、中等无机盐含量的培养基①H 培养基本培养基大量元素约为MS 培养基的一半, 仅磷酸二氢钾及氯化钙稍低, 微量元素种类减少, 而含量较MS 为高, 维生素种类比MS 多。
适于花药培养。
②尼奇培养基(Niotsch 1969 ) 此培养基与H 培养基成分基本相同, 仅生物素比H 培养基高10 倍。
也适合于花药培养。
③米勒培养基(Miller 1963 ) 此培养基和Blaydes(1966) 培养基二者成分完全相同。
适合大豆愈伤组织培养和花药等培养用。
4 、低无机盐培养基大多情况下用于生根培养基。
有以下几种:①改良怀特培养基(White 1963 )②WS 培养基(Wolter & Skoog 1966)③克诺普液( Knop 1965 ) 花卉培养上用得多。
④贝尔什劳特液(Berthelot 1934)⑤HB 培养基( Holley & Baker 1963) 此培养基在花卉脱毒培养和木本植物的茎尖培养中效果良好。
其成分是大量元素比1/ 2 克诺普( Knop ) 液稍多, 微量元素用贝尔什劳特液, 每升培养基中加0 . 5ml。
二、与培养基有关的一些细节问题1、培养基所用药品应采用等级较高的化学纯CP(三级) 及分极纯AR(二级) , 以免杂质对培养物造成不利影响。
2、调节PH也可用精密pH试纸(应在干燥器中保存, 以免吸湿而失效)。
培养基过酸的可用1mol/ L 氢氧化钠( NaOH) 来调节; 培养基过碱的可用1mol/ L 盐酸( HCl ) 来调节( 1mol/ L NaOH 的配制方法是称40gNaOH, 溶解后加入蒸馏水, 定容到1 000ml 即可。
1mol/ L HCl 的配制方法是量取12mol/ L HCl 84ml , 加水定容至1 000ml)。
经高压蒸汽灭菌后, 由于某些成分的分解(如蔗糖的分解) 或氧化, 酸度会增加( pH 值一般可降低0 . 2 )。
有时玻璃器皿质量较差, 其中一部分物质溶解, 也会影响酸度的变化。
这些在调整pH 值时都要考虑进去。
分装后应立即灭菌, 若因故不能及时灭菌, 最好放入冰箱中在24h 内完成灭菌工作。
灭菌时压力表读数为0 . 8kg/ cm2 ～1 . 1kg/ cm2 , 121℃时保持15min～20min 即可。
3、某些生长调节物质, 如吲哚乙酸、玉米素及某些维生素等物质遇热不稳定, 因此不能进行高压灭菌, 而需用过滤方法灭菌, 经过滤灭菌的溶液, 可在琼脂培养基温度下降到大约40℃时加入到已高压灭菌的培养基中。
4、配好的培养基可放到培养室中预培养3d ,若没有污染反应, 则证明是可靠的, 可以使用。
暂时不用的培养基最好置于10℃下保存, 含有生长调节物质的培养基在4℃～5℃低温下保存则更理想。
含吲哚乙酸或赤霉素的培养基应在配制一周内用完, 其他培养基至多也不能超过一个月。
一般情况下, 两周内应用完, 以免干燥变质。
三、培养材料及消毒1、取材季节的影响：大多数植物应在其生长开始的季节采样, 生长末期或已进入休眠期, 则外植体对诱导反应迟钝或无反应。
2、器官的生理状态和发育年龄：沿植物的主轴, 越向上的部分所形成的器官其生长的时间越短, 其生理年龄也越老, 越接近发育上的成熟, 越易形成花器官。
反之, 越向下, 其生理年龄越小。
木本植物的组织培养中, 以幼龄树的春梢嫩枝段或基部的萌条较好, 下胚轴与具有3 对～4 对真叶的嫩茎段, 生长效果也较好。
一般情况下, 幼年组织比老年组织具有较高的形态发生能力。
3、材料大小的影响：材料越小成活率越低, 茎尖培养存活的临界大小应为一个茎尖分生组织带1 个～2 个叶原基, 约0 .2mm～0 .3mm 大小。
叶片、花瓣等约为5mm2 , 茎段则长约0 .5mm。
因此, 除非用于去除病毒否则不宜将外植体切的过小。
但并不是说外植体越大越好, 外植体过大易造成污染, 有实验证明外植体越大污染率越高。
4、材料的灭菌：一般是组织越大越易污染, 夏季比冬季带菌多，甚至不同年份污染的情况也有区别。
取材最好选在中午或下午, 避开阴雨天取材可减少污染率。
消毒是为了消灭病菌, 以保证无菌组织培养的进行。
但不同植物及一株植物不同部位的组织, 其带菌程度不同, 它们对不同种类、不同浓度的消毒剂的敏感度也不一样。
最初所使用的消毒剂种类, 浓度及消毒时间的长短都要进行摸索, 以达到最佳的消毒效果。
材料有绒毛最好在消毒液中加入几滴吐温- 80 ,对与难消毒的根及地下部位材料可将其浸入消毒液中进行抽气减压, 以帮助消毒液的渗入, 从而达到彻底灭菌的目的。
潘学峰等( 1998) 报道, 12% 的双氧水+ 0 .1%的升汞混合液对南方地下茎生姜灭菌10min 的效果最好。
四、材料的接种1、接种室的消毒：植物组织培养技术实际上是一种无菌操作和无菌培养技术, 做好接种室的消毒是至关重要的。
污染的主要来源是空气中的细菌和真菌孢子, 因此, 每次接种前应进行地面的清洁卫生工作, 并用70%酒精喷雾使空气的灰尘沉降, 并用紫外线灯照射20min。
接种前超净工作台面要用新洁尔灭或酒精擦洗,并定期清洗过滤膜, 以延长使用寿命。
2、无菌操作要求：工作人员使用的工作服、帽子、口罩等, 要经常保持干净, 并定期进行消毒, 即将洗净、晾干的衣帽、口罩等用纸包好后与培养基一起进行高压灭菌。
工作人员的头发、衣服、手指中都带有许多杂菌, 为此要穿上工作服, 戴上帽子, 也必须剪除指甲, 并用肥皂擦洗, 最好再在新洁尔灭溶液中浸泡10 min , 接种操作前则用70%酒精擦洗。
工作人员的呼吸所产生的污染, 主要是在接种时谈话或咳嗽所引起的, 因此, 在操作时应禁止谈话并应戴上口罩。
3、材料的分离、切取和接种切割动作要快, 防止挤压使材料受损伤而招致培养失败, 也要避免使用生锈的刀片, 以防止氧化现象产生。
接种时要防止交叉污染的发生,刀和镊子等接种工具使用一次应放入70% ( 或95%)酒精中浸泡, 然后灼烧放凉备用。
接种时轻轻取下封口纸, 动作要慢以免气流冲入瓶中造成污染。
将瓶口靠近酒精灯火焰, 瓶口倾斜, 以免空气中的微生物落入瓶中,将瓶口外部在灯焰上燎数秒钟, 将灰尘杂物等固定在原处, 然后用镊子将外植体送入瓶中, 材料在培养容器内的分布要均匀, 以保证必要的营养面积和光照条件。
茎尖、茎段等基部插入固体培养基中, 叶片通常将叶背接触培养基, 这是由于叶背气孔多, 利于吸收水分和养分的缘故。
五、材料的初代培养1、实验方案的设计1）、单因子实验设计：单因子实验是组织培养中最常用的实验方法, 尤其在选择适当的激素种类和浓度配比上使用最多。
2 ）、正交实验设计植物离体培养的成功是由多种因素决定的。
正交设计是多因素分析的有力工具, 它可以很方便的从众多因素中选出主要影响因素及最佳水平, 因为它可以用较少的实验次数得到较多的信息。
例如, 一个7 因素水平的实验, 若将各因素水平全部组合都做一遍, 需要27 = 128 次, 而正交设计只需做8 次实验就可以了, 虽然实验次数减少了, 但因为各因素水平搭配均匀, 8 次实验基本代表了全部实验的情况。
正交实验的设计, 主要工具是正交表。
大多数生物统计学书都列出了可供选择的正交表,如L4 ( 23 ) , L8(27 )见(表2 - 11 , 表2 - 12) 。
字母L 右下角号码8表示它有8 个实验要做, 括号内的指数7 表示这张表所安排的实验最多可考察7 个因素(也可安排2 个～6 个, 超过7 个要选择其他正交表) , 底数2 表示被考察的因素只要求两个水平。
在进行实验前可根据要测试因素的多少及每种因素所考察的水平, 选择适合的正交表, 然后按表进行实验。
现举一个例子来说明, 设影响某种植物试管苗生长的因素有光照时间、光照强度、pH 值、温度、蔗糖浓度、BA浓度、NAA 浓度7 个因素, 每个因素选择两个水平, 即, 光照时间( 10h , 14h )、光照强度(1000lx , 2000lx )、pH 值( 5 . 5 , 5 . 8 )、温度( 20℃ , 25℃) 、BA 浓度( 0 . 5 , 2 . 0 )、NAA 浓度( 0 . 5 ,1 . 0)、蔗糖浓度(2% ,4%)。
现根据因素和水平的多少选择一个适合本实验的正交表, 选L(27)最理想,8填表时, 因素水平对号入座, 见表( 2 - 13 )。
第一号实验是光照时间10h/ d、光照强度1000lx、pH 值5 . 5、BA 浓度2 . 0、NAA 浓度0 . 5、蔗糖浓度4% , 其他实验依次类推。
根据8 个实验结果, 如出苗数量、苗高、生根数、移栽成活率等, 综合考虑, 根据需要选取各最适培养条件。
也可通过一定的计算方法(参考统计学书) , 算出极差( R) , 极差(R) 表示每个因素在实验中所起作用的大小, R 越大表示该因素的不同水平对实验结果的影响越大, 但若没有可计算的指标时, 还是选择单因子实验较好。
2、初代培养物的建立1）、保证无菌2）、条件合适：首先, 一定要选择好合适的作物种类、品种及培养的部位; 其次,一定要选择合适的培养基, 激素及其他添加物; 还要注意掌握适宜的环境条件。
所以在进行一种植物的组织培养之前, 应查找该种植物有关方面的资料, 根据这种植物过去所采用的培养部位、培养基、培养条件和培养技术等, 再决定自己的工作步骤。
3）、操作技术过关3、污染的防治1）、植物材料的选择及防止污染通常多年生的木本材料比一二年生的草本材料带菌多; 老的材料比幼嫩的材料带菌多; 田间生长的材料比温室生长的材料带菌多; 带泥土的材料比不带泥土的材料带菌多。