Western Blot及IP细胞裂解液
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9. Chen Y, Sun R, Jiang W, Wei H, Tian Z. Liver-specific HBsAg transgenic mice are over-sensitive to Poly(I:C)-induced liver injury in NK cell- and IFN-gamma-dependent manner. J Hepatol. 2007 Aug;47(2):183-90.
deoxycholate
1% NP-40
Baidu Nhomakorabea
1% SDS
裂解强度
温和
强
中
温和
温和
强
对膜蛋白的提取
一般
很好
较好
一般
一般
很好
对胞浆蛋白的提取
很好
很好
很好
很好
很好
很好
对核蛋白的提取
较好
很好
较好
较好
较好
很好
胞浆磷酸化蛋白提取 很好
很好
很好
很好
很好
很好
细胞核转录因子提取 很好
很好
很好
很好
很好
很好
含蛋白酶抑制剂
是
是
8. Cheng BQ, Gong W, Geng Y, Chen L, Wu JB, Jiang B. Study of r elationship between expr ession of galectin- 3 and malignant degr ee of color ectal cancer in differ ential pathologic stage. China Journal of Modern Medicine. Jul.2007;Vol.17 No.13.
弱)或NP-40裂解液。如果发现IP的时候背景很高，即非特异的蛋白也被IP下来，则需要选用裂解强度较高的裂解液，例如
RIPA裂解液(强或中)。如果发现目的蛋白无法被IP下来，则说明裂解液的强度过强，可以使用较为温和的裂解液例如
RIPA裂解液(弱)或NP-40裂解液。
对于某些难溶解蛋白的Western，如果发现Western及IP细胞裂解液(P0013)效果不是非常理想，可以尝试使用裂解强度更高
的裂解液例如RIPA裂解液(强、中)或SDS裂解液。
使用本产品的文献：
1. Zhang X, Chen S, Wang Y. Honokiol up-regulates prostacyclin synthease protein expression and inhibits endothelial cell apoptosis. Eur J Pharmacol. 2007 Jan 5;554(1):1-7.
包装清单：
产品编号 P0013 —
产品名称 Western及IP细胞裂解液
说明书
包装 100ml
1份
保存条件：
-20℃保存，一年有效。
注意事项：
为取得最佳的使用效果，尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。 需自备PMSF。PMSF(ST506)可以向碧云天订购。 裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。 关于裂解液的选择，一方面可以参考碧云天的相关网页：http://www.beyotime.com/lysis-buffer.htm 选择合适的裂解液；另
6. Dong S, Li C, Wu P, Tsien JZ, Hu Y. Environment enrichment rescues the neurodegenerative phenotypes in presenilins-deficient mice. Eur J Neurosci. 2007 Jul;26(1):101-12.
3. Dong X, Wang JN, Huang YZ, Guo LY, Kong X. Cell - penetra ting Peptide PEP - 1 - med ia ted Tran sduction of Enhanced Green Fluorescen t Prote in in to Human Aortic SmoothMuscle Cells. J YMC.2007 Apr.26(2):71.
用，用户普遍反映很好。裂解细胞或组织后，没有非常粘滞的透明状DNA团块形成，不必采用超声处理等就可以非常理
想地用于后续操作。另外该裂解液裂解的产物也适合用于磷酸化蛋白的Western检测。
对于某些特殊蛋白的IP，如果发现Western及IP细胞裂解液(P0013)效果不是非常理想，可以尝试用RIPA裂解液(强、中或
孔板每孔加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2 秒后，细胞就会被裂解。 对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入100-200微升裂解液的比例加入裂解 液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/ 管，然后再裂解。大团的细胞较难裂解充分，而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触，相对比较容易裂解充分。 3. 充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。 裂解液用量说明：通常6孔板每孔细胞加入100微升裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量 到150微升或200微升。 对于组织样品： 1. 把组织剪切成细小的碎片。 2. 融解Western及IP细胞裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。 3. 按照每20毫克组织加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高 浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。) 4. 用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。 5. 充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。 6. 如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上
7. Shen Y, Yang X, Dong N, Xie X, Bai X, Shi Y. Generation and selection of immunized Fab phage display library against human B cell lymphoma. Cell Res. 2007 Jul;17(7):650-60.
P0013D
P0013F
P0013G
RIPA裂解液(弱) NP-40裂解液 SDS裂解液
有效裂解成分
1% Triton X- 1% Triton X-100, 1%
1% NP-40, 0.5%
100
deoxycholate, 0.1% SDS deoxycholate, 0.1% SDS
1% NP-40, 0.25%
10. Cai H, Yin D, Zhang L, Yang X, Xu X, Liu W, Zheng X, Zhang H, Wang J, Xu Y, Cheng D, Zheng M, Han Y, Wu M, Wang Y. Preparation and biological evaluation of 2-amino-6-[18F]fluoro-9-(4-hydroxy-3-hydroxy-methylbutyl) purine (6-[18F]FPCV) as a novel PET probe for imaging HSV1-tk reporter gene expression. Nucl Med Biol. 2007 Aug;34(6):717-25.
2. Cheng BQ, Geng Y, Wu JB, Jiang B. Influences of inhibiting Galectin-3 by RNA inter ference technique on the prolifer ation and apoptosis of human color ectal cancer cells LOVO. JournalofC linicalR ehabilitative Tissue E ngineering R esearch.April 22,2007 Vol.11,NO.16.
11. Zhang JQ, Zhao XK, He J, Zhu L, Wang XJ. Expr ess and role of FGFR2 in bladder tr ansitional cell car cinoma. China Medical Engineering.Sep.2007; Vol.15 No.9.
Western及IP细胞裂解液的主要成分为20mM Tris (pH7.5)，150mM NaCl，1% Triton X-100，以及sodium pyrophosphate，βglycerophosphate，EDTA，Na3VO4，leupeptin等多种抑制剂。可以有效抑制蛋白的降解，并维持原有的蛋白间相互作 用。
12.Liu Z, Sun L, Zhu L, Jia X, Li X, Jia H, Wang Y, Weber P, Long J, Liu J. Hydroxytyrosol protects retinal pigment epithelial cells from acrolein-induced oxidative stress and mitochondrial dysfunction. J Neurochem. 2007 Oct 18.
用Western及IP细胞裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用碧云天生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒(P0009/P0010/P0010S/ P0011/P0012/P0012S)测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的Triton X-100等干扰物质，不能用Bradford法测定由本裂解液裂 解得到样品的蛋白浓度。
产品编号 P0013
Western及IP细胞裂解液
产品名称 Western及IP细胞裂解液
包装 100ml
产品简介：
Western及IP细胞裂解液(Cell lysis buffer for Western and IP)，是一种在非变性条件下裂解细胞的裂解液。本细胞裂解液裂 解的细胞，可以用于PAGE，Western，免疫沉淀(immunol precipitation，IP)和免疫共沉淀(co-IP)。
清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。
附：碧云天生产的各种裂解液主要特点、差异和选择 首先请参考下表，了解各种裂解液的主要特点和差异。
产品编号 产品名称
P0013 Western及IP 细胞裂解液
P0013B RIPA裂解液(强)
P0013C RIPA裂解液(中)
5. Deng XQ, Chen LL, Li NX. The expression of SIRT1 in nonalcoholic fatty liver disease induced by high-fat diet in rats. Liver Int. 2007 Jun;27(5):708-15.
4. Zhang XT, Song TB, Du BL, Li DM, Li XM. Caspase-3 antisense oligodeoxynucleotides inhibit apoptosis in gamma-irradiated human leukemia HL-60 cells. Apoptosis. 2007 Apr;12(4):743-51. Epub 2007 Jan 12.
一方面也需要通过一些预实验来摸索最佳的适合您实验条件的裂解液。 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明：
对于培养细胞样品： 1. 融解Western及IP细胞裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。 2. 对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照6
是
是
是
是
含磷酸酯酶抑制剂
是
是
是
是
是
是
主要用途
WB, IP,co-IP
WB, IP
WB, IP
WB, IP, co-IP WB, IP,co-IP WB, ChIP
用于普通的Western、IP或co-IP，我们推荐使用Western及IP细胞裂解液(P0013)，该裂解液已被国内各大研究机构广泛使
deoxycholate
1% NP-40
Baidu Nhomakorabea
1% SDS
裂解强度
温和
强
中
温和
温和
强
对膜蛋白的提取
一般
很好
较好
一般
一般
很好
对胞浆蛋白的提取
很好
很好
很好
很好
很好
很好
对核蛋白的提取
较好
很好
较好
较好
较好
很好
胞浆磷酸化蛋白提取 很好
很好
很好
很好
很好
很好
细胞核转录因子提取 很好
很好
很好
很好
很好
很好
含蛋白酶抑制剂
是
是
8. Cheng BQ, Gong W, Geng Y, Chen L, Wu JB, Jiang B. Study of r elationship between expr ession of galectin- 3 and malignant degr ee of color ectal cancer in differ ential pathologic stage. China Journal of Modern Medicine. Jul.2007;Vol.17 No.13.
弱)或NP-40裂解液。如果发现IP的时候背景很高，即非特异的蛋白也被IP下来，则需要选用裂解强度较高的裂解液，例如
RIPA裂解液(强或中)。如果发现目的蛋白无法被IP下来，则说明裂解液的强度过强，可以使用较为温和的裂解液例如
RIPA裂解液(弱)或NP-40裂解液。
对于某些难溶解蛋白的Western，如果发现Western及IP细胞裂解液(P0013)效果不是非常理想，可以尝试使用裂解强度更高
的裂解液例如RIPA裂解液(强、中)或SDS裂解液。
使用本产品的文献：
1. Zhang X, Chen S, Wang Y. Honokiol up-regulates prostacyclin synthease protein expression and inhibits endothelial cell apoptosis. Eur J Pharmacol. 2007 Jan 5;554(1):1-7.
包装清单：
产品编号 P0013 —
产品名称 Western及IP细胞裂解液
说明书
包装 100ml
1份
保存条件：
-20℃保存，一年有效。
注意事项：
为取得最佳的使用效果，尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。 需自备PMSF。PMSF(ST506)可以向碧云天订购。 裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。 关于裂解液的选择，一方面可以参考碧云天的相关网页：http://www.beyotime.com/lysis-buffer.htm 选择合适的裂解液；另
6. Dong S, Li C, Wu P, Tsien JZ, Hu Y. Environment enrichment rescues the neurodegenerative phenotypes in presenilins-deficient mice. Eur J Neurosci. 2007 Jul;26(1):101-12.
3. Dong X, Wang JN, Huang YZ, Guo LY, Kong X. Cell - penetra ting Peptide PEP - 1 - med ia ted Tran sduction of Enhanced Green Fluorescen t Prote in in to Human Aortic SmoothMuscle Cells. J YMC.2007 Apr.26(2):71.
用，用户普遍反映很好。裂解细胞或组织后，没有非常粘滞的透明状DNA团块形成，不必采用超声处理等就可以非常理
想地用于后续操作。另外该裂解液裂解的产物也适合用于磷酸化蛋白的Western检测。
对于某些特殊蛋白的IP，如果发现Western及IP细胞裂解液(P0013)效果不是非常理想，可以尝试用RIPA裂解液(强、中或
孔板每孔加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2 秒后，细胞就会被裂解。 对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入100-200微升裂解液的比例加入裂解 液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/ 管，然后再裂解。大团的细胞较难裂解充分，而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触，相对比较容易裂解充分。 3. 充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。 裂解液用量说明：通常6孔板每孔细胞加入100微升裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量 到150微升或200微升。 对于组织样品： 1. 把组织剪切成细小的碎片。 2. 融解Western及IP细胞裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。 3. 按照每20毫克组织加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高 浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。) 4. 用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。 5. 充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。 6. 如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上
7. Shen Y, Yang X, Dong N, Xie X, Bai X, Shi Y. Generation and selection of immunized Fab phage display library against human B cell lymphoma. Cell Res. 2007 Jul;17(7):650-60.
P0013D
P0013F
P0013G
RIPA裂解液(弱) NP-40裂解液 SDS裂解液
有效裂解成分
1% Triton X- 1% Triton X-100, 1%
1% NP-40, 0.5%
100
deoxycholate, 0.1% SDS deoxycholate, 0.1% SDS
1% NP-40, 0.25%
10. Cai H, Yin D, Zhang L, Yang X, Xu X, Liu W, Zheng X, Zhang H, Wang J, Xu Y, Cheng D, Zheng M, Han Y, Wu M, Wang Y. Preparation and biological evaluation of 2-amino-6-[18F]fluoro-9-(4-hydroxy-3-hydroxy-methylbutyl) purine (6-[18F]FPCV) as a novel PET probe for imaging HSV1-tk reporter gene expression. Nucl Med Biol. 2007 Aug;34(6):717-25.
2. Cheng BQ, Geng Y, Wu JB, Jiang B. Influences of inhibiting Galectin-3 by RNA inter ference technique on the prolifer ation and apoptosis of human color ectal cancer cells LOVO. JournalofC linicalR ehabilitative Tissue E ngineering R esearch.April 22,2007 Vol.11,NO.16.
11. Zhang JQ, Zhao XK, He J, Zhu L, Wang XJ. Expr ess and role of FGFR2 in bladder tr ansitional cell car cinoma. China Medical Engineering.Sep.2007; Vol.15 No.9.
Western及IP细胞裂解液的主要成分为20mM Tris (pH7.5)，150mM NaCl，1% Triton X-100，以及sodium pyrophosphate，βglycerophosphate，EDTA，Na3VO4，leupeptin等多种抑制剂。可以有效抑制蛋白的降解，并维持原有的蛋白间相互作 用。
12.Liu Z, Sun L, Zhu L, Jia X, Li X, Jia H, Wang Y, Weber P, Long J, Liu J. Hydroxytyrosol protects retinal pigment epithelial cells from acrolein-induced oxidative stress and mitochondrial dysfunction. J Neurochem. 2007 Oct 18.
用Western及IP细胞裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用碧云天生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒(P0009/P0010/P0010S/ P0011/P0012/P0012S)测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的Triton X-100等干扰物质，不能用Bradford法测定由本裂解液裂 解得到样品的蛋白浓度。
产品编号 P0013
Western及IP细胞裂解液
产品名称 Western及IP细胞裂解液
包装 100ml
产品简介：
Western及IP细胞裂解液(Cell lysis buffer for Western and IP)，是一种在非变性条件下裂解细胞的裂解液。本细胞裂解液裂 解的细胞，可以用于PAGE，Western，免疫沉淀(immunol precipitation，IP)和免疫共沉淀(co-IP)。
清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。
附：碧云天生产的各种裂解液主要特点、差异和选择 首先请参考下表，了解各种裂解液的主要特点和差异。
产品编号 产品名称
P0013 Western及IP 细胞裂解液
P0013B RIPA裂解液(强)
P0013C RIPA裂解液(中)
5. Deng XQ, Chen LL, Li NX. The expression of SIRT1 in nonalcoholic fatty liver disease induced by high-fat diet in rats. Liver Int. 2007 Jun;27(5):708-15.
4. Zhang XT, Song TB, Du BL, Li DM, Li XM. Caspase-3 antisense oligodeoxynucleotides inhibit apoptosis in gamma-irradiated human leukemia HL-60 cells. Apoptosis. 2007 Apr;12(4):743-51. Epub 2007 Jan 12.
一方面也需要通过一些预实验来摸索最佳的适合您实验条件的裂解液。 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明：
对于培养细胞样品： 1. 融解Western及IP细胞裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。 2. 对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照6
是
是
是
是
含磷酸酯酶抑制剂
是
是
是
是
是
是
主要用途
WB, IP,co-IP
WB, IP
WB, IP
WB, IP, co-IP WB, IP,co-IP WB, ChIP
用于普通的Western、IP或co-IP，我们推荐使用Western及IP细胞裂解液(P0013)，该裂解液已被国内各大研究机构广泛使