芯片类检测：Luminex PLEXMAP BIOPLEX 液相芯片检测
Luminex液相芯片的发展及应用
Luminex液相芯片的发展及应用谢冲;王国民【摘要】液相芯片技术是20世纪90年代兴起的,集合流式细胞技术、激光技术、数字信号处理技术及传统化学技术为一体的新型生物分子检测技术.它的最大特点是通量大、灵活性好.Luminex公司利用液相芯片技术先后推出了Luminex 100、Luminex 200和Flexmap 3D液相芯片检测平台.现对Luminex液相芯片的发展、原理及应用作一简介.【期刊名称】《复旦学报（医学版）》【年(卷),期】2010(037)002【总页数】4页(P241-244)【关键词】Luminex;液相芯片;Flexmap 3D【作者】谢冲;王国民【作者单位】复旦大学附属中山医院泌尿外科,上海,200032;复旦大学附属中山医院泌尿外科,上海,200032【正文语种】中文【中图分类】Q78人类基因组计划于20世纪90年代完成,随后开启了以功能基因组学和蛋白质组学为核心的后基因组时代。
液相芯片技术就是在这样的背景下发展起来的新一代生物芯片技术。
它具有通量大、灵活性好、灵敏度高、动力学范围广等优点[1-4],它的发明对分子生物检测领域具有里程碑意义。
近十年来,Luminex公司对液相芯片技术不断推陈出新,使其与传统检验方法相比优点更多,运用范围也更加广泛。
Luminex液相芯片的发展过程液相芯片技术是20世纪90年代中期发展起来的,被誉为后基因组时代的芯片技术,也被称为xMAP技术。
它是集流式细胞技术、激光技术、数字信号处理技术及传统化学技术为一体的新型生物分子检测技术。
基于xMAP技术,Luminex公司于1999年推出第1代Luminex100液相芯片检测系统。
Luminex100的最大特点为高通量和高效性,即它可以同时对1个样本中的100种不同目的分子进行检测,并能在30min内检测96个不同样本。
在Luminex100的基础上,Luminex公司又于2005年推出了Luminex200液相芯片检测系统。
液相芯片检测
液相芯片检测液相芯片检测（liquid-phase chip detection）是一种高通量生物分析技术，通过利用芯片上微米级的通道系统和表面功能化的分析区域，能够在极短的时间内完成多个生物分子的检测和分析。
液相芯片检测技术在生物医学研究、药物筛选、食品安全监测等领域具有广泛的应用前景。
液相芯片检测技术的核心是芯片上微通道系统的设计和制备。
微通道系统不仅具有高通量的特点，还能够实现物质的精确控制和分离，从而提高检测的准确性和灵敏度。
此外，芯片的表面还可以进行功能化修饰，使其能够特异地与目标分子发生相互作用，实现对目标分子的选择性检测。
液相芯片检测技术主要包括样品处理、样品注入、分析区域的选择性识别和信号检测四个基本步骤。
首先，样品需要经过一系列的前处理步骤，如提取、浓缩、纯化等，以消除样品中的干扰物质，并保持目标分子的完整性和活性。
然后，样品被注入到芯片的微通道系统中，通过外部控制使样品在通道中流动。
在流动过程中，如果芯片的表面经过功能化修饰，则目标分子能够与修饰后的表面发生特异的相互作用，从而被选择性地捕获或固定在芯片的分析区域上。
最后，通过适当的信号检测手段，如荧光检测、质谱检测等，可以获得与目标分子浓度相关的信号，实现对目标分子的高灵敏度检测和定量分析。
液相芯片检测技术具有多种优点。
首先，液相芯片可以实现高通量的检测，大大提高了检测效率和样品处理能力。
其次，芯片上的微通道系统可以提供精确的流动控制和分离能力，使得样品处理更为简便和高效。
此外，液相芯片还可以实现多种检测手段的集成，实现多参数联合分析，提高了检测的精确性和可靠性。
最后，液相芯片检测技术无需大量的标记物和试剂，减少了实验成本和对环境的污染，具有绿色环保的特点。
液相芯片检测技术在生物医学研究领域有着广泛的应用。
例如，可以用于基因组学的DNA测序和基因表达的定量分析；可以用于蛋白质组学的蛋白质鉴定和酶活性测定；可以用于细胞分析和细胞外囊泡的分离与检测等。
luminex液相芯片技术原理
luminex液相芯片技术原理
Luminex液相芯片技术是一种用于做多色原理，蛋白质分析及重组药品检测等的分析化学技术。
又称离心多色芯片技术，是液相平台技术的一种。
Luminex技术是基于荧光原理、紫外-可见放射非特定性抗体双重标记法，广泛应用于免疫、蛋白分析、重组药品质量检测、细胞相互关系等研究。
Luminex技术主要分为离心多色芯片及液相平台信号集成等两个方面。
离心多色芯片是指用于检测单个表面染色体上标记细胞做多色研究的技术。
其中，放射性荧光来源可以检测标记细胞的分布，并可以使用多个不同的放射性源来查看多个表型。
液相平台则是用一定体积的液体接收单个孢子上的多种抗原或特异性抗体的刺激。
液相平台的信号集成则是把上述信号聚合在一起，追踪每个抗原或者特异性抗体的响应传导和激素变化中心进行分析，从而确定他们之间的相互作用。
Luminex技术主要优势是可以从极低的细胞表型水平上检测，从而更加深入地探索细胞内特定原材料和活性物质之间的介绍作用以及它们在分子细胞程序中所扮演的角色。
Luminex技术在许多研究领域中表现出较好，比如利用它可以高度灵敏、特异性的分离定性的抗原和抗体信息；可以用于分析新的免疫和其他生物反应物质，甚至可以用于快速、高效的疾病屣病毒特异性诊断，以及对付生物武器等。
通过Luminex技术，可以同时进行大量低成本的分析，而且可以使培养细胞从一次性制剂转化为可循环利用的重复使用细胞，极大的提高了分析的效率。
因此Luminex技术可以为细胞分析及更精确的活性物质结构解析提供一个有效的替代解决方案。
Bio-Plex-液相悬浮式蛋白质芯片系统简明操作
一、芯片平台与试剂盒悬液微珠芯片平台为：Bio-Plex Magpix System ( Bio-Rad)；实验中使用试剂盒包括以下几种：1.仪器校准：Bio-Plex Validation Kit ( Bio-Rad)，Bio-Plex Calibration Kit ( Bio-Rad)；2.Mouse多因子检测试剂盒：以上试剂盒包括了实验中使用的所有试剂、样品稀释液、缓冲液等。
3.其他仪器磁力洗板器，Handheld magnetic washer，美国Bio-Rad，171020100；二、样品与标准品准备按照试剂盒操作手册推荐，样本处理方法如下：标准品稀释：向标准品瓶中，加入500ul Standard diluents，涡旋5秒，冰浴30分钟。
然后按照以下稀释。
样品准备：（冰上操作）样本解冻后，按照客户要求进行稀释。
三、检测操作1、取微珠在振荡器上1400rpm振荡30s，按说明书上提示比例，用Assay Buffer稀释微珠。
2、按照说明书要求，稀释液重悬标准品、轻轻混匀，放置于冰上30min以保证其充分溶解。
3、用标准品稀释液对标准品进行稀释，本次实验共计稀释8个梯度，S1-S8。
4、将稀释完的微珠用vortex1400rpm震荡30s，每孔50ul的量加入96孔板中。
5、使用磁力洗板器洗涤两次。
6、加入稀释好的标准品和样品，每孔50ul，贴上封口膜，放置在平板摇床上850rpm振荡避光室温孵育30-60min。
7、使用磁力洗板器洗涤三次。
8、采用Detection Antibody Dilute Buffer按说明书要求稀释度稀释DetectionAntibody。
9、加入稀释好的用biotin标记的抗体，每孔25ul，贴上封口膜，放置在平板摇床上850rpm振荡避光室温孵育30min。
10、使用磁力洗板器洗涤三次。
11、用Assay Buffer按说明书要求稀释Streptavidin-PE。
液相芯片检测技术
液相芯片检测技术如下：
1.高通量：液相芯片检测技术可以对同一样本中的多种不同目的
分子同时进行实时、定性、定量分析。
理论上，如果不存在交叉反应，检测的通量等于微球的种类数，目前最多可达到100种。
2.样本用量少：由于在同一个反应孔中可以同时完成100种不同
的生物学反应，所以大大节省了样本用量，少至1μl的样本即可检测，非常适合分析小体积稀有样品。
3.操作简单、快速：液相芯片检测技术基于液相反应动力学，因
此反应速度快，孵育时间比传统的固相检测短。
4.灵敏度高：微球表面积大，每个微球上可包被100 000个捕获
抗体，如此高密度的捕获抗体保证了能够最大程度地与样本中的抗原分子结合，提高检测灵敏度。
5.准确性高：微球上的报告分子荧光强度与结合的待测分子成正
比。
由于液相芯片技术的检测范围大，因此不需要象ELISA检测中那样需将样本多倍稀释，从而减小了误差。
6.检测范围广：液相芯片检测技术可用于检测多种类型的生物分
子，包括蛋白质、多肽、抗体、抗原、DNA、RNA等。
液相悬浮芯片(Bio_Plex)PPT 培训
校验参数
• 光学部分校正（光学部件 位置精度）
• 液流系统校正（液流精度 和消除交叉污染）
• 报告激光校正（线性、灵 敏度、动态范围、斜率、 精确度等）
• 分类检测校正（微球色标 编码的正确性）
protocol编制
Bio-Plex 总结
• Bio-Plex是一个定量检测系统，每孔可检测150 种不同的指标
药物筛选
➢疾病Marker发现 ➢疾病Model
蛋白表达谱
➢一般细胞因子研究 ➢疾病建模
后翻译修饰
➢信号传导因子
蛋白功能\相互作用
➢抗体交叉反应和特异性 ➢蛋白蛋白相互作用 ➢受体配体结合 ➢酶的活性 ➢抗原决定簇
试剂开发的公司
Research/Drug Discovery Clinical Diagnostics
– 自动清洗、校正、校验
• 校正所有检测器通道
– 重置DD, CL1, CL2, RP1标准信号输出 – RP1低电压、高电压校正以调整灵敏度和动态范围 – 校正Kit标有各项目标值，输入对话框自动完成校正
校正程序
校验工具和作用
• 保证仪器性能符合设定的参数 • 保证世界上任意两个地方的仪器的数据可
检测大分子受到限制 数据精度 重复性问题
成本问题
液相芯片克服了这些问题…开拓了生物芯片 新的应用领域
液相芯片技术
20世纪90年代兴起，集流式细胞、激光、数字信号 处理等技术为一体的多功能液相分析平台。
基本原理
捕获微球
探针分子 待测分子 标记的检测分子
微球特点
• 不同浓度的两种颜色
– 荧光分类染料 Fluorescent Classification Dyes
Luminex液态芯片在临床及科研中的应用
Luminex液态芯片在临床及科研中的应用张保强;张晓【摘要】Luminex 液态芯片是一个多功能、多指标并行分析系统,集编码微球、激光技术、流式细胞、数字信号处理等技术于一体,具有高通量、既能检测蛋白,又能检测核算等特点,可广泛应用于免疫分析、核酸研究、酶学分析、受体和配体识别分析等研究.本文就液态芯片技术的原理、特点及在临床和科研中的应用进行阐述.【期刊名称】《当代医学》【年(卷),期】2012(018)004【总页数】3页(P18-20)【关键词】液态芯片;悬浮阵列;肿瘤标志物;HPV基因分型;移植配型【作者】张保强;张晓【作者单位】261061,潍坊市疾病预防控制中心检验科;261061,潍坊市疾病预防控制中心检验科【正文语种】中文液态芯片是美国纳斯达克上市公司Luminex于本世纪初研制出的后基因组时代的技术平台，又称悬浮阵列、流式荧光技术，是基于多功能流式点阵仪（Luminex 100）开发的多功能生物芯片平台，是一个多功能、多指标并行分析系统（见图1）。
它有机地整和了编码微球（color-codedbeads）、激光技术、应用流体学、最新的高速数字信号处理器和计算机运算法则，造就了高度的检测特异性和灵敏度，可广泛应用于免疫分析、核酸研究、酶学分析、受体和配体识别分析等研究，也是目前唯一得到权威机构和医学界共同认可用于临床诊断的生物芯片平台。
2003年美国食品与药品管理局(FDA)批准该项技术用于临床检验诊断。
图1 Luminex 100 多功能流式点阵仪1 Luminex液态芯片技术的概况1.1 工作原理该技术的核心是采用聚苯乙烯(polystyrene)制作微球，把微小的聚苯乙烯小球（5.6 μm）包覆以不同比例的红光及红外光染色剂，制成100种不同颜色的微球[1]（见图2）。
将每种颜色的微球（或称为荧光编码微球）共价交联上针对特定检测物的探针、抗原或抗体。
不同的微球结合了针对不同待检测物的蛋白（抗体或抗原，用于免疫检测）或核酸（DNA或RNA用于基因检测），检测抗体中以生物素标记，并用高灵敏的荧光染料染色。
luminex液相芯片技术实验流程
Luminex液相芯片技术是一种高通量的生物分子检测平台，可以同时检测多种生物标志物。
实验流程大致如下：
1. 样本准备：根据实验需求，准备好待检测的样本。
样本可以是细胞培养上清液、血清、血浆等。
2. 微球准备：Luminex液相芯片使用的微球内部含有三种免疫荧光染料，通过不同的荧光比例来区分500种不同的微球。
微球上会偶联针对不同待测物的抗体或基因探针。
3. 实验设计：根据需要检测的标志物，选择相应的微球和试剂。
可以设计多重检测，一次实验可以检测多达100种不同的生物学反应。
4. 加样：将样本或PCR产物与微球混合，使所形成的复合物与标记荧光素发生反应。
5. 检测：将混合后的微球放入Luminex液相芯片检测系统。
该系统包括激光系统、光学系统、液流系统、液流控制系统以及先进的数字处理系统和高通量XY平台。
微球在流动鞘液的带动下快速单列通过检测通道，红色激光用于识别微球的荧光编码，绿色激光用于测定微球上结合的报告分子的荧光强度。
6. 数据分析：利用配套的分析软件对检测数据进行分析，得到定性和定量的结果。
7. 结果解读：根据实验设计和数据分析，解读检测结果。
需要注意的是，实验操作过程中应严格遵循实验室规范和操作指南，确保实验的准确性和可靠性。
Luminex液相芯片技术检测与胰岛素抵抗相关的脂肪细胞因子水平在妊娠期糖耐量受损孕妇中的相关性研究
Luminex液相芯片技术检测与胰岛素抵抗相关的脂肪细胞因子水平在妊娠期糖耐量受损孕妇中的相关性研究钱源;宗迪;马润玫;褚嘉佑;孙浩【摘要】目的研究汉族妇女血清中的与胰岛素抵抗相关脂肪细胞因子水平,并且比较在妊娠期正常血糖水平组和糖耐量受损组中的水平差异.方法采用Luminex液相芯片技术对IL-6、TNF-α、瘦素、MCP-1等脂肪细胞因子在共80例孕妇血清中的表达水平进行检测,并进行差异性检测.结果瘦素水平在2组中具有显著性差异(P＜0.01),其他各细胞因子则无明显区别(P＞0.05).结论血清瘦素水平与妊娠期糖耐量受损(GIGT)密切相关,如果改善血清瘦素水平,提高胰岛素敏感性,将对GIGT的防治有重要的临床意义.而IL-6、TNF α、MCP-1等细胞因子水平与GIGT则无关,其与GIGT的关系需要进一步的研究.【期刊名称】《中国产前诊断杂志（电子版）》【年(卷),期】2012(004)004【总页数】4页(P10-13)【关键词】液相芯片;瘦素;胰岛素抵抗;糖耐量受损【作者】钱源;宗迪;马润玫;褚嘉佑;孙浩【作者单位】昆明医科大学第一附属医院妇产科,云南昆明 650032;中国医学科学院医学生物学研究所,云南昆明650118;昆明医科大学第一附属医院妇产科,云南昆明 650032;中国医学科学院医学生物学研究所,云南昆明650118;中国医学科学院医学生物学研究所,云南昆明650118【正文语种】中文【中图分类】R714.256妊娠期糖耐量受损（gestational impaired glucose tolerance，GIGT）为早期的血糖稳态改变，是介于正常妊娠状态和妊娠期糖尿病的一种中间状态，并有可能进一步转化为妊娠期糖（GDM）尿病。
已有研究支持在糖耐量受损的妊娠中，大于胎龄儿、新生儿转入ICU 及剖宫产、胎儿高胰岛素血症和胎盘成熟不良的发生率增高［1-3］。
HOPA 的新研究结果也支持“随着母体孕期糖耐量受损程度的加重，胎儿受累的危险性变化是连续的”这一结论。
Luminex液相芯片同时检测tPSA和fPSA方法的建立与评价
Luminex液相芯片同时检测tPSA和fPSA方法的建立与评价谢冲;唐群业;王国民【期刊名称】《复旦学报（医学版）》【年(卷),期】2010(037)004【摘要】目的建立用Luminex液相芯片技术同时测定前列腺特异性抗原(total prostate specific antigen,tPSA)和游离前列腺特异性抗原(free prostate specific antigen,fPSA)的方法,并对该方法进行评价.方法制备抗体交联微球及藻红蛋白标记二抗,用双抗体夹心法对临床血清标本进行测定,并与ELISA方法进行比较.结果Luminex液相芯片技术同时测定tPSA、fPSA与ELISA测定结果高度相关.Luninex方法测定tPSA的灵敏度为0.03 ng/L,批内精密度为4.38%～5.86%,批间精密度为3.40%～6.73%; 测定fPSA的灵敏度为0.013 ng/L,批内精密度为5.08%～7.94%,批间精密度为3.77%～5.74%.结论Luminex方法同时测定tPSA、fPSA具有灵敏度高、重复性好、系统误差小等优点,具有广泛的临床应用前景.【总页数】5页(P391-395)【作者】谢冲;唐群业;王国民【作者单位】复旦大学附属中山医院泌尿外科,上海,200032;复旦大学附属中山医院泌尿外科,上海,200032;复旦大学附属中山医院泌尿外科,上海,200032【正文语种】中文【中图分类】Q789【相关文献】1.兰州地区健康人群tPSA、fPSA以及fPSA/tPSA参考值范围的建立 [J], 邢福军;王小萍;柳渊洁;查成喜;田卫花;周思彤;杨邵华2.兰州地区健康人群tPSA、fPSA以及fPSA/tPSA参考值范围的建立 [J], 邢福军;王小萍;柳渊洁;查成喜;田卫花;周思彤;杨邵华;3.Luminex液相芯片技术检测6种虫媒病毒方法的建立 [J], 范丽;李裕昌;康晓平;林方;魏婧靖;杨银辉;熊正英4.非那雄胺联合坦索罗辛对老年良性前列腺增生患者前列腺体积及血清tPSA、fPSA、fPSA/tPSA水平的影响 [J], 管德辉;蔡航;陈薇5.基于分位数回归建立tPSA、fPSA、fPSA/tPSA的年龄特异性参考区间 [J], 刘凤玲;张桐硕;祝峰;汤元杰因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
液相芯片检测技术
14
灵敏性高
液相芯片最低的检测浓度可达到2 pg/mL, 线形范围宽,可达4个数量级；
灵活性好
既适合做核酸分析又可做蛋白分析；
耗时短
35~60 min即可对96个不同样本做检测分析；
成本较低
液相芯片的检测试剂、消耗品和检测仪器并不比现有的其他方法昂贵。
9
液相芯片与固相芯片的比较
传统固相片膜芯片
液相芯片
1
目录
液相芯片技术简介 液相芯片技术的技术原理 液相芯片技术的优势 液相芯片技术的临床应用 液相芯片技术的不足与展望
2
液相芯片技术
微 球 体 悬 浮 芯 片 (suspensionarray, liquid chip) ， 是 基 于 xMAP (flexible Multi-AnalyteProfiling) 技术的新型生物芯片技 术平台，它是在不同荧光编码的微球上进行抗原-抗体、酶-底 物、配体-受体的结合反应及核酸杂交反应，通过红、绿两束 激光分别检测微球编码和报告荧光来达到定性和定量的目的。
检测机制
探针固化、配体结合或杂 交技术和激光荧光检测技 术相结合
探针结合于荧光微球上
反应动力学
固相片膜表面反应
溶液中反应
芯片密度
上万种目标分子
1000种目标分子
芯片制备
不可随意增减项目
可自由搭配组合
应用方向
高密度定性或半定量检测 优势在于基因测序、基因 高通量检测疾病Marker或 新功能分子发现
中低密度精确定量检测病 理学、药效学、药理学研 究，突变检测，病毒检测， 高通量临床诊断
迄今为止10年时间，全球已有数百套基于xMAP 技术的 检测平台用于免疫学、蛋白质、核酸检测、基因研究等领域， 该技术已成为一种新的蛋白质组学和基因组学研究工具，也 是最早通过美国食品与药品管理局( FDA)认证的可用于临床 诊断的生物芯片技术。
Bio-Plex悬液芯片技术在生命科学与医学研究中的应用
2.2.1 Bio-Plex悬液芯片技术与蛋白质组学研究
蛋白质组学的范围是极其广泛的，传统的生物化学一般只研究一种蛋白质，其代表技术是色谱的分离纯化 与分析、一维凝胶电泳分析、ELISA、Western blotting、蛋白质相互作用、晶体结构等等。然而，过去十几 年来，两种技术的联姻——2D电泳和质谱，产生了无偏的（Unbiased）或导向发现的（discovery- oriented proteomics）蛋白质组学。而在传统生物化学和蛋白质组学之间还有一种可称为“聚焦”蛋白质组学（focused proteomics）或者“导向系统的”蛋白质组学（System-oriented proteomics），这种蛋白质组学的代表研 究技术就是悬液芯片系统。如下图所示。（Gavin MacBeath, Nature Genetics 32, 2002）
基因组学
RNAi平台
蛋白质组学
目标基因的功能 生物标志物 。。。
蛋白质表达谱分析： －2D 电泳技术 －Bio-Plex悬液芯片
驱动发现的蛋白质组学研究路线
•细胞因子（免疫学相关） •磷酸化蛋白（细胞信号转导） •脂肪炎性因子（肥胖与糖尿病） •血管增生标志蛋白（肿瘤） •… …
Bio-Plex 悬液芯片的蛋白质组学研究流程
传统的蛋白质化学对单个蛋白的结构和功能有很清晰的了解，从而揭示其在细胞或机体中所扮演的角色， 但却不能知道该蛋白质是否影响以及如何影响细胞或机体其它蛋白质表达，进而揭示细胞或系统整体性状的 改变。虽然“无偏的”蛋白质组学往往可以做到这点，所谓“导向发现”的意思是可以获得一些导致差异（如 不同发育、发展阶段，疾病与对照等）的未知蛋白质标志分子；但这种技术仍然有很多的局限性，例如定量 问题、样品的通量问题、2D电泳本身的重现性和灵敏度问题等等都限制了该技术的发现能力。例如在研究者 准备分析一种特殊的生物样品，如癌症病人的肿瘤组织切片的研究中，不可避免的涉及一次“完全的蛋白质 组学”分析，却存在样品中诸多如蛋白的丰度、修饰、活性、定位和相互作用的问题，因此在实际实验设计 中，研究者往往只能限定于上述的一到两个参数，或者限定于整体蛋白质中的某一类，如炎性蛋白、血管生 成标志蛋白、磷酸化蛋白等等。因此这种类型的实验其实是蛋白表达谱（expression profiling），现在已 被广泛的称之为蛋白谱（Protein profiling）的分析。对于一组给定的样品，包括检测组和对照组，聚焦某 一类蛋白质的蛋白谱的分析往往能导向新的发现。
7 液相芯片分子诊断新技术及其应用--汤郡 print 2014-08-15
液相芯片分子检测的工作原理
xMAP® 核心技术
已被验证的多个技术的组合
• xMAP®微球拥有唯一的光谱地址 • 微球表面携带生物活性物质可用于捕获蛋白或核酸 • 待测样品中的分析物被微球表面的特异生物分子识别 • 结果可被荧光报告标记物量化 • 基于液相的仪器设备使获得每个样品的多重检测结果仅
需几秒钟
鞘液
红激光激发微球内部 的荧光(635 nm)
识别微球
MAGPIX是基于CCD/LED拍照的检测分析
小室中的微球
8 | © Copyright 2012 Luminex Corporation
磁性捕获
绿色LED激发报告分子的 荧光 (525 nm)
CCD 成像来识别微球和定 量
红色LED激发微球内部的 荧光(635 nm)
• 一个反应实现对甲流分型
• 可靠 – 与快速的手工方法或非分子检测的方 法比，具有卓越的敏感性
• 临床注册– 加拿大卫生部及欧盟批准
• 快速 — 一天内获得结果
• 完整 – xTAG RVP FAST v2 试剂盒包含所有的 试剂
• 数据分析软件简单直观
优点
• 高效，仅需一个标本，可提高致病病原体的检出 率
• 覆盖亚型H1、H3及2009 H1N1，能为患者提供更好 的治疗
• 正确诊断，减少假阴性结果
• 有助于提供更好的治疗及降低由于抗生素的使用 而引起病原体耐药菌株的产生
• 快速出报告便于及时为患者提供有效的治疗。降 低劳动成本和手动操作时间
• 比培养更快，足以影响病情的治疗
• 自带的阈值简化分析，降低数据解释带来错误的 可能
2014-08-15
液相芯片分子检测技术的概况
液相芯片检测技术是美国Luminex最新研制出的一种先进的多重分 子检测技术平台，它有机整合了PCR技术、荧光编码微球、荧光报 告分子、流式细胞技术/成像技术、激光、数字信号处理以及以独特 方式结合的化学反应。
Luminex Flexmap 3D液相芯片系统的应用及使用维护技巧
Luminex Flexmap 3D液相芯片系统是美国luminex公司于近年推出的新一代超高通量检测系统，该系统是基于Flexmap 3D技术（又称流式荧光技术、液态芯片），以抗体为基础，荧光编码微球为核心，整合激光检测、应用流体学、高速数字信号和计算机运算法则等多项技术，从而实现多因子的高通量检测。
被誉为以功能基因组学和蛋白质组学为核心的后基因组技术，可广泛应用于临床诊断、生物医学研究、生物制药等领域，是医学诊断技术和疾病机制研究等的重要发展方向。
1.Luminex Flexmap 3D液相芯片系统原理及优势Flexmap 3D技术是xMAP技术的升级。
xMAP技术是基于两种不同荧光素配比标记的聚苯乙烯微球或磁力微球编码并共价交联特定检测物的探针、抗体或抗原，不同的微球混合后结合特异性待测物的蛋白（抗原或抗体）或核酸（DNA或RNA）。
再以生物素为标记并用荧光染料染色，当单个微球通过两色激光的检测通道，红色分类荧光可将微球分类，将不同分析反应区分开来；绿色报告荧光是确定微球上结合的报告荧光分子量。
通过亮色激光来实现定性和定量分析。
根据红色分类荧光的不同比例可将微球分为100种，Flexmap 3D技术将两种荧光素提升为三种，荧光素的比例不同而可将微球分为500种。
检测能力是前代机型Luminex100/200的5倍，微球通过激光激发，收集3种不同的荧光，而实现三维立体检测。
[1~2]Luminex Flexmap 3D液相芯片系统主要优势是：①高通量，10~50ul样本量理论一次可同时检测500个指标；②高速度，进样速度2ul/s，1h内最多获得48,000个数据，96孔板和384孔板均适用；③既能检测蛋白也能检测核酸，样本类型丰富，血清、血浆、尿液、培养液等都能作为检测样本；④灵敏度高，检测低限为10pg/ml，检测范围为4.5logs。
Luminex Flexmap 3D液相芯片技术相比固相芯片技术优势明显，Luminex Flexmap 3D液相芯片技术灵活性好，微球可以单独制备，使用时混匀，可根据需要随时调整检测体系。
Luminex液相芯片技术测定氨甲喋呤对映体耐药A549细胞株中磷酸化酪氨酸激酶受体
Luminex液相芯片技术测定氨甲喋呤对映体耐药A549细胞株中磷酸化酪氨酸激酶受体许维东;何晓东;孙利;李道静;张永娟;张白银;沈佐君【摘要】目的探讨氨甲喋呤(MTX)对映体诱导的耐药A549细胞株中磷酸化酪氨酸激酶受体(RTKs)的表达差异及受体间的相关性.方法用MTX对映体浓度递增结合低剂量持续诱导肺腺癌A549细胞株,用Luminex液相芯片技术检测L-(+)-MTX/A549细胞、D-(-)-MTX/A549细胞和亲本A549细胞3组细胞中7种磷酸化RTKs[磷酸化表皮生长因子受体(p-EGFR)、磷酸化胰岛素样生长因子1受体(p-IGF-1R)、磷酸化肝细胞生长因子受体(p-HGFR)、磷酸化血小板源性生长因子受体(p-PDGFRβ)、磷酸化人类表皮生长因子受体2(p-HER-2)、磷酸化血管内皮生长因子受体2(p-V EGFR2)、磷酸化血管生成素受体(p-Tie-2)]的表达水平,分析它们之间的相关性.结果 n-(-)-MTX/A549组p-EGFR、p-HER-2的平均荧光强度(MFI)分别为26.91±1.81、16.56±1.15；L-(+)-MTX/A549组的MFI分别为54.13±2.75、16.94±1.44；亲本细胞组的MFI分别为54.38±2.88、33.75+2.49.p-EGFR与p-HER-2显著相关(P＜0.05),p-HER-2和p-VEGFR、p-HGFR 之间显著相关(P＜0.05),其他磷酸化RTKs之间相关关系不显著.结论 MTX对映体诱导的耐药A549细胞株中,p-EGFR表达水平存在手性差异.【期刊名称】《临床检验杂志》【年(卷),期】2011(029)008【总页数】3页(P564-566)【关键词】氨甲蝶呤;A549细胞;对映体;酪氨酸激酶受体;液相芯片【作者】许维东;何晓东;孙利;李道静;张永娟;张白银;沈佐君【作者单位】金华市人民医院检验科,浙江金华321000;安徽省立医院,安徽省临床检验中心,合肥230001;安徽省立医院,安徽省临床检验中心,合肥230001;安徽省立医院,安徽省临床检验中心,合肥230001;安徽省立医院,安徽省临床检验中心,合肥230001;安徽省立医院,安徽省临床检验中心,合肥230001;安徽省立医院,安徽省临床检验中心,合肥230001【正文语种】中文【中图分类】R73-37;R734.2酪氨酸激酶受体(RTKs)是主要位于细胞膜表面的一类酶联受体，具有酶的效应，与配体结合后能将靶蛋白的酪氨酸残基磷酸化［1］。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
sCD30 可溶性CD30
sCD40L可溶性CD40L
sEGFR可溶性表皮生长因子受体
sgp130 可溶性糖蛋白130
sIL-2Rα可溶性白细胞介素-2受体α
sIL-4R可溶性白细胞介素-4受体
sTNF RI 可溶性肿瘤坏死因子受体I
sTNF RII可溶性肿瘤坏死因子受体II
p70 S6 Kinase (Thr412) 磷酸化核糖体S6蛋白激酶β2抗体
STAT1 (Tyr701)磷酸化信号转导与转录激活因子1
STAT1 (Tyr707)磷酸化信号转导与转录激活因子1
STAT3 (Tyr705)磷酸化信号转导与转录激活因子3
STAT5A/B (Tyr694/699) 磷酸化信号转导与转录激活因子
ZAP-70 (pan Tyr)磷酸化zeta相关蛋白70
Syk (pan Tyr)磷酸化非受体型酪氨酸蛋白激酶
Active Caspase 3 活化半胱胺酸蛋白酶 3
Active Cleaved PARP活化切割的多腺苷二磷酸多聚酶
ATF2 (Thr69/71)活化复制因子2
BAD (Ser112)磷酸化相关死亡促进因子
IFNγ干扰素γ
IL-10白介素-10
IL-12 (p70) 白介素-12
IL-13白介素-13
IL-17白介素-17
IL-1ra白介素-1ra
IL-2白介素-2
IL-20 白介素-20
IL-28a 白介素-28a
IL-29 白介素-29
IL-4 白介素-4
IL-5 白介素-5
IL-8 白介素-8
IL-9 白介素-9
sIL-1RII可溶性白细胞介素-1受体II
sIL-6R 可溶性白细胞介素-6受体
sRAGE 可溶性晚期糖基化中产物受体
sVEGF R2 可溶性血管内皮生长因子受体2
sVEGF R3 可溶性血管内皮生长因子受体3
TGFα转化生长因子α
TIMP-1组织金属蛋白酶抑制剂-1
TIMP-4组织金属蛋白酶抑制剂-4
IL-1β白介素-1β
IL-21 白介素-21
IL-23 白介素-23
IL-3白介素-3
IL-33/NF-HEV (mature) 白介素-33
IL-6 白介素-6
IL-7 白介素-7
IP-10 干扰素诱导蛋白-10
I-TAC/CXCL11干扰素诱导T细胞趋化因子
MCP-1(MCAF)单核细胞趋化蛋白1
PDGF Receptor α (pan Tyr)磷酸化血小板源性生长因子受体-α
Rsk1 (Ser380)磷酸化丝氨酸/苏氨酸激酶蛋白
STAT2 (Tyr690)磷酸化信号转导与转录激活因子2
STAT3 (Ser727)磷酸化信号转导与转录激活因子3
STAT6 (Tyr641)磷酸化信号转导与转录激活因子6
Substance P神经肽
α2-Macroglobulinα2巨球蛋白
4、骨代谢因子检测
IL-1β白细胞介素
ACTH促肾上腺皮质激素
Leptin瘦素
Osteopontin (OPN)骨桥蛋白
PTH甲状旁腺激素
TNFα 肿瘤坏死因子α
RANKL核因子κ B受体活化因子配体
Adiponectin脂联素
Complement Factor H补体因子H
C reactive protein (CRP) C-反应蛋白
MPO髓过氧化物酶
NCAM神经细胞黏附分子
Oxytocin催产素
PAI-1 (total)全部凝血酶元激活因子的抑制因子
PEDF色素上皮源性因子
Prealbumin前清蛋白
sICAM-1可溶性细胞间粘附分子1
TNFα 肿瘤坏死因子α
VEGF血管内皮生长因子
CEA 癌胚抗原
C reactive protein (CRP) C-反应蛋白
Eotaxin 嗜酸细胞活化趋化因子
ER-α 雌激素受体α
Fibrinogen纤维蛋白原
AFP 甲胎蛋白
Haptoglobin 结合珠蛋白
HER-2(erbB2) 表皮生长因子受体
IGF1R (pan Tyr)胰岛素样生长因子1受体
IRS1 (pan Tyr)胰岛素样生长因子1受体
LAT (pan Tyr)T细胞活化连接蛋白抗体
Lck (pan Tyr)磷酸化淋巴细胞特异性蛋白酪氨酸激酶
MSK1 (Ser212)炎性细胞因子依次激活
p21负调控因子
p53 (Ser46)磷酸化肿瘤抑制基因
CTACK/CCL27皮肤T细胞虏获趋化因子
EGF表皮生长因子
Eotaxin-2/CCL24/MPIF-2嗜酸细胞活化趋化因子-2
Eotaxin-3/CCL26嗜酸细胞活化趋化因子-3
Fractalkine 人神经趋化因子
GCP2/CXCL6 人中性粒细胞趋化蛋白2
GRO生长相关基因蛋白
HCC-1/3/CCL14α/β
3、神经因子检测
Apo CIII载脂蛋白
Apo E载脂蛋白
Complement C3补体C3
Complement C4补体C4
Melatonin褪黑激素
MIP-4巨嗜细胞趋化蛋白-4
Neurotensin神经降压素
Orexin A 食欲素A
PDGF-AA血小板衍生因子
PDGF-AB/BB血小板衍生因子
重复性好：类均相反应模式，每个指标有1000-5000个反应单元，分析100次取中位均值。
准确性高：检测范围达3.5-6个数量级，与ELISA和质谱分析具有很强的一致性。
成本低：流式荧光技术联检的试剂用量少，能有效降低临床应用的成本。
Luminex\PLEXMAP\BIOPLEX的检测项目
1、细胞因子/化学因子检测
RANTES趋化因子
SAP人血清淀粉样P物质/运兵车/ SAP蛋白
sVCAM-1可溶性血管细胞粘附分子 1
α1-Antitrypsinα 1-抗胰蛋白酶
β-Endorphinβ-内啡肽
α-MSH促黑激素
Cortisol皮质（甾）醇
Apo Al载脂蛋白
BDNF脑源性神经营养因子
Cathepsin D组织蛋白酶D
MMP -3 基质金属蛋白酶-3
MMP -7 基质金属蛋白酶-7
MMP -12 基质金属蛋白酶-12
MMP -13 基质金属蛋白酶-13
PDGF-AB/BB血小板衍生生长因子AB/BB
RANTES分泌趋化因子
SCF干细胞因子
SDF-1α+β/CXCL12基质细胞衍生因子-1α+β
sIL-1RI可溶性白细胞介素-1受体I
多功能性：xMAP技术可以运用到多种生物检测中，包括免疫分析、基因分型、基因表达、酶分析等。既能检测蛋白，又能检测核酸。除了用于临床外，也能用于科研、CDC、血站、农业、生物及制药专业实验室等。
灵活性高：微球上可连接特异性的探针、抗原或抗体等来满足不同客户的需要。
灵敏度高：检测低限可达0.01pg/ml。
c-Kit (pan Tyr)磷酸化原癌基因
Cleaved PARP 聚腺苷二磷酸-核糖聚合抑制酶
EGF Receptor (pan Tyr)表皮生长因子受体
Erb-B2/HER2 (pan Tyr)表皮生长因子受体
H2A.X (Ser139)泛素化组蛋白
HSP27 (Ser 78) 磷酸化热休克蛋白27抗体
IκBα (Ser 32)磷酸化蛋白激酶2
JNK (Thr183/Tyr185)双磷酸化应激活化蛋白激酶
MEK1 (Ser222)丝裂原活化蛋白激酶激酶1
MKK6 (Ser207/Thr211)炎性细胞因子依次激活
p38 (Thr180/Tyr182)丝裂原活化蛋白激酶
p53 (Ser15) 磷酸化肿瘤抑制基因
LIF白血病抑制因子
Lymphotactin淋巴细胞趋化蛋白
MCP-3/CCL7单核细胞趋化蛋白3
MCP-4单核细胞趋化蛋白4
MIG/CXCL9趋化因子9
MIP-1D (MIP-5/CCL15)巨噬细胞炎性蛋白-1D
MIP-3β/CCL19巨噬细胞炎性蛋白3β
MIP-3α/CCL20巨噬细胞炎性蛋白3α
【嘉美实验】嘉美生物可提供Luminex、Mllipore的FLEXMAP和Bio-Rad的BioPlex液相芯片检测实验外包服务。Luminex的代表产品 Luminex 100/200以及新推出的Mllipore的FLEXMAP 3DTM和Bio-Rad公司的BioPlex system都是基于xMAP技术原理，整合了荧光编码微球、激光检测、应用流体学、最新的高速数字信号和计算机运算法则等多项技术，真正实现了“高通量”检测，并荣获2005年度国际临床诊断技术革新奖。是唯一得到美国FDA批准的，也是唯一被纳入美国临床实验室质控网络的高通量诊断技术。被国际业界专家评价为临床诊断的趋势性技术之一。
MCP-2单核细胞趋化蛋白2
M-CSF巨噬细胞集落刺激因子
MDC/CCL22 巨噬细胞来源的趋化因子
MIP-1α巨噬细胞炎性蛋白-1α
MIP-1β巨噬细胞炎性蛋白-1β
MMP -1基质金属蛋白酶-1
MMP -2 基质金属蛋白酶-2
MMP -9 基质金属蛋白酶-9
MMP -10 基质金属蛋白酶-10
NAP-2/CXCL7中性粒细胞趋化蛋白2
TNFα 肿瘤坏死因子α
TRAIL/TNFSF10肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体
TSLP人胸腺基质淋巴细胞生产素
6Ckine/CCL2 次级淋巴组织趋化因子