人B细胞连接蛋白BLNK酶联免疫分析ELISA
酶联免疫吸附方法测定
酶联免疫吸附方法测定一、酶联免疫吸附方法测定的基本概念酶联免疫吸附测定（ELISA）呀，这可是个超级有趣又超级有用的检测方法呢。
它就像是一个超级侦探，能够在一堆复杂的东西里找到我们想要检测的特定物质。
比如说在医学上，要是想知道一个人有没有感染某种病毒，就可以用这个方法在血液样本里找找有没有病毒相关的抗原或者抗体。
在食品检测里也很厉害哦，如果想看看食物里有没有某种有害的细菌毒素，ELISA也能派上大用场。
二、ELISA的主要类型1. 间接ELISA这个类型呢，是先把抗原固定在板子上，然后加入含有抗体的样品。
这个抗体如果能和抗原结合，再加入一种酶标记的二抗，这个二抗是专门针对我们之前加入的抗体的哦。
最后加入底物，要是有反应，就说明样品里有我们要找的抗体啦。
就像一场接力赛，抗原先站好位置，抗体来接力，二抗再接力，最后底物来冲线。
2. 直接ELISA直接ELISA就简单一点啦。
直接把酶标记的抗体加入到固定了抗原的板子上，如果有反应，那就是有我们要检测的抗原啦。
就像是一对一的直接对决，简单明了。
3. 夹心ELISA这个就有点像三明治啦。
先把捕获抗体固定在板子上，然后加入含有抗原的样品，抗原就被捕获抗体抓住啦。
再加入检测抗体，这个检测抗体也是针对抗原的，不过它是另外一个识别位点哦。
最后加入底物，有反应就说明有抗原存在。
三、ELISA的操作步骤1. 包被就是把抗原或者抗体固定在酶标板的孔里。
这个过程就像是给每个小房间分配任务一样，要保证每个孔里都均匀地有我们要固定的东西。
一般是用合适的缓冲液把抗原或者抗体稀释到合适的浓度，然后加入到孔里，在一定的温度下孵育一段时间。
2. 封闭因为酶标板上可能还有一些没有被抗原或者抗体占据的地方，这些地方如果不处理，后面可能会有非特异性的结合。
所以我们要用封闭液把这些空的地方填满，就像把空房间都锁起来一样。
常用的封闭液有牛血清白蛋白（BSA）之类的。
3. 加样把我们要检测的样品加入到孔里，如果是检测抗体的，就加入血清之类的样品；如果是检测抗原的，就加入可能含有抗原的样品。
人β防御素2(hbd2)酶联免疫分析(elisa)
人β防御素()酶联免疫分析（）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆，细胞上清及相关液体样本中β防御素()的含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人β防御素()水平。
用纯化的人β防御素()抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入β防御素()，再与标记的β防御素()抗体结合，形成抗体抗原酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物显色。
在酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的β防御素()呈正相关。
用酶标仪在波长下测定吸光度（值），通过标准曲线计算样品中人β防御素()浓度。
试剂盒组成：样本处理及要求：. 血清：室温血液自然凝固分钟，离心分钟左右（转分）。
仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
. 血浆：应根据标本的要求选择或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合分钟后，离心分钟左右（转分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
. 尿液：用无菌管收集，离心分钟左右（转分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
胸腹水、脑脊液参照实行。
. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。
离心分钟左右（转分）。
仔细收集上清。
检测细胞内的成份时，用（）稀释细胞悬液，细胞浓度达到万左右。
通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。
离心分钟左右（转分）。
仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
. 组织标本：切割标本后，称取重量。
加入一定量的，。
用液氮迅速冷冻保存备用。
标本融化后仍然保持-8℃的温度。
加入一定量的（），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。
离心分钟左右（转分）。
仔细收集上清。
分装后一份待检测，其余冷冻备用。
. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.. 不能检测含的样品，因抑制辣根过氧化物酶的（）活性。
酶联免疫吸附试验(ELISA)的程序精选全文完整版
精选全文完整版酶联免疫吸附试验（ELISA）的程序第一节间接ELISA试验一用可溶性抗原的ELISA：1、纯化抗原：用包被液稀释至1—20ug/ml；2、以50—100ul/孔量加入酶标板孔中；3、置4（度）过夜或37（度）吸附3h；4、PBST洗三次；5、每孔200ulPBS/NCS 4（度）过夜封闭或37（度）封闭3h；6、PBST洗5次，每次1min（包被板可—20（度）或许（度）保存备用）7、每孔加50—100ul第一抗体，同时设阳性、阴性对照。
若杂交瘤筛选，每孔加杂交瘤培养上清；8、37（度）孵育2h9、PBST洗5次，每次5min10、每孔加50—100ul酶标第二抗体；若杂交瘤筛选，每孔加HRP 标记的抗小鼠（IgG+IgM）抗体；11、37（度）孵育2h12、PBST洗5次，每次数5分钟；13、每孔加OPD 或TMBS底物100ul14、37（度）避光作用；（OPD为10—20）分钟，TMBS为40分钟）；15以50ul2MH2SO4终止反应，在酶联免疫阅读仪上读取OD值（OPD底物选用490nm滤光片，TMBS底物选用450nm滤:光片）；16结果判定：（1）P/N≥2.1 为阳性(2) P≥N+3SD 为阳性成功范例:NDV单抗检测，粘附素单抗检测，H单抗检测亚类鉴定和鸡白痢检疫等。
二、用全菌抗原的ELISA法（一）GA法1、新鲜培养的细菌用蒸馏水悬浮，光密度法或比浊法调整细菌浓度至1X10（6）个/ml。
注意：沙门氏菌等人畜共患病原体，使用前必须灭活或采用市售的灭活诊断菌液；2、酶标板中加200ul/孔，5%戊二醛（GA）溶液（0.1M NaHCO4 95ml+25%DNY戊二醛溶液5ml）;37(度);2小时3、蒸馏水洗5次;4、加细菌悬浮液,50ul/孔;5、37(度)温箱内过液,干燥吸附(20—24h)6、加PBS/NCS 220ul/孔37（度）封闭3小时或4（度）过夜封闭；7、PBST洗5次（—20（度）或4（度））存放备用；8、以下步骤同一。
BCG,人B细胞生长因子(BCGF)酶联检测分析ELISA使用说明书
BCGF，人B细胞生长因子（BCGF）酶联检测分析ELISA使用说明书本试剂仅供研究使用标本：血清或血浆樊克生物专业供应：使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本B细胞生长因子（BCGF）含量。
试验原理：BCGF试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知BCGF浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。
先将BCGF和生物素标记的抗体同时温育。
洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。
再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。
产生颜色。
颜色的深浅和样品中BCGF的浓度呈比例关系。
试剂盒内容及其配制试剂盒成份（2-8℃保存）96孔配置48孔配置配制96/48人份酶标板1块板（96T）半块板（48T）即用型塑料膜板盖1块半块即用型标准品：80ng/ml 1瓶（0.6ml）1瓶（0.3ml）按说明书进行稀稀空白对照1瓶（1.0ml）1瓶（0.5ml）即用型标准品稀释缓冲液1瓶（5ml）1瓶（2.5ml）即用型生物素标记的抗BCGF抗体1瓶（6ml）1瓶（3.0ml）即用型亲和链酶素-HRP 1瓶（10ml）1瓶（5.0ml）即用型洗涤缓冲液1瓶（20ml）1瓶（10ml）按说明书进行稀释底物A 1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型底物B 1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型终止液1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型标本稀释液1瓶（12ml）1瓶（6.0ml）即用型自备材料1．蒸馏水。
2．加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
3．振荡器及磁力搅拌器等。
安全性1．避免直接接触终止液和底物A、B。
一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。
2．实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
3．不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
操作注意事项1．试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。
稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
人β2糖蛋白1抗体IgA(β2-GP1IgA)酶联免疫分析(ELISA)
人β2糖蛋白1抗体IgA(β2-GP1 IgA)酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中β2糖蛋白1抗体IgA(β2-GP1 IgA)含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中人β2糖蛋白1抗体IgA(β2-GP1 IgA)水平。
用纯化的人β2糖蛋白1抗体IgA(β2-GP1 IgA)抗原包被微孔板，制成固相抗原，往包被单抗的微孔中依次加入β2糖蛋白1抗体IgA(β2-GP1 IgA)，再与HRP标记的β2糖蛋白1抗体IgA(β2-GP1 IgA)抗原结合，形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的β2糖蛋白1抗体IgA(β2-GP1 IgA)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人β2糖蛋白1抗体IgA(β2-GP1 IgA)浓度。
样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。
通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
酶联免疫法ELISA的原理
酶联免疫法ELISA的原理引言酶联免疫法（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）是一种常用于探测和定量分析生物样本中特定分子的方法。
该方法利用抗原-抗体的特异性识别作用和酶的催化反应，可以检测到低浓度的抗原或抗体。
ELISA技术广泛应用于医学、生物学、农业等领域，被用于疾病诊断、药物筛选、免疫学研究等。
ELISA的原理ELISA的原理基于抗原-抗体的特异性识别和酶催化的反应。
ELISA方法通常分为直接ELISA、间接ELISA、竞争ELISA和间隔ELISA等。
下面将对其中的直接ELISA 进行详细介绍。
直接ELISA直接ELISA是一种简单、直接的抗原-抗体反应检测方法。
其基本原理是将要检测的抗原固定在固相（如微孔板）上，然后加入与抗原特异性结合的抗体。
接下来，通过添加与抗体结合的酶标记抗体，使样本中的抗原成为可测定的目标。
最后，加入适当的底物，测定底物的酶活性，从而确定抗原的存在量。
步骤1.准备固相：将要检测的抗原固定在固相（如微孔板）上。
2.来样及对照：加入待测样品和对照样品到固相中，使其与固相上的抗原发生特异性结合。
3.清洗：将固相反复洗涤，去除非特异性结合的物质。
4.添加酶标记抗体：加入与抗体特异性结合的酶标记抗体，形成抗原-抗体-酶标记抗体复合物。
5.清洗：将固相反复洗涤，去除未结合的酶标记抗体。
6.酶反应：加入适当的底物，使酶标记抗体催化底物反应产生可测定的信号。
7.停止反应：加入适当的停止液，停止酶活性，防止底物继续反应。
8.信号检测：通过测定底物反应后的产物或底物代谢产生的染色物质的吸光度或荧光强度来测定抗原的存在量。
特点和应用直接ELISA主要适用于检测抗原或抗体含量较高的样品，如分泌型免疫球蛋白或细胞上的抗原。
其特点包括简单、快速、灵敏度高，能够定量检测目标物质的含量。
直接ELISA广泛应用于疾病的诊断、感染的检测、生物标志物的鉴定等。
酶联免疫试验操作方法
酶联免疫试验操作方法酶联免疫试验（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，简称ELISA）是一种常用的实验方法，用于检测样本中特定抗原或抗体的存在与数量。
ELISA方法的原理是将特定的抗原或抗体与检测物质打标记，然后通过可以与标记物结合的特异性抗体反应来检测目标物质的存在与浓度。
下面将介绍ELISA的操作方法。
1. 试剂准备：(1) 底物：将所需底物溶于缓冲液，根据实验需求选择适当的底物，如TMB、ABTS等。
(2) 酶标记抗体：将所需的酶标记抗体充分稀释至适当浓度，通常为1:1000至1:10000。
(3) 试样：将待测样品按照需要进行稀释或处理。
如果检测抗体，则需将样品加入酶标记抗体反应，在室温下孵育。
(4) 洗涤缓冲液：常见的洗涤缓冲液为PBS-T（含有Tween 20）。
准备好PBS-T或其他适当的洗涤液，以用于洗涤步骤。
(5) 制备标准曲线：根据实验需求，选择适当的标准品并制备浓度梯度的标准曲线。
2. 板涂覆：(1) 取出ELISA板，将所需抗原或抗体稀释至适当浓度，加入每个孔中。
每个样品需设置多个平行孔，以进行可靠的实验结果分析。
(2) 封闭非特异性结合位点：将孔板封闭，并将其置于37C恒温箱中孵育1至2小时。
3. 底物-标记物结合：(1) 倾倒每个孔的液态，并在每个孔中分别加入酶标记的抗体。
通过抗体与抗原或抗体结合，在孔中形成免疫复合物。
(2) 将孔板置于恒温箱中，在室温下孵育1至2小时，促使免疫反应的发生。
4. 孔洗涤：(1) 将液体倾倒，然后用洗涤缓冲液充分洗涤每个孔，以去除未结合的抗体。
(2) 每孔洗涤的次数及洗涤时间依实验需求而定，通常为3至5次，每次洗涤持续约30秒。
5. 底物反应：(1) 将稀释好的底物加入每个孔中，底物与酶标记结合物质反应，形成可见的颜色变化。
(2) 在室温下进行底物反应，反应时间依抗体的检测结果而定，通常为15分钟至1小时。
酶联免疫吸附实验ELISA
选择合适的标记物
选择灵敏度高、稳定性好的酶标二抗，提高实验的检测灵敏度。
优化建议
非特异性结合
加入阻断剂封闭非特异性结合位点，或使用特异性的阻断剂。
确认抗原和抗体的特异性，并确保加样准确，避免交叉污染。
优化洗涤条件和显色条件，减少非特异性结合和背景干扰。
ELISA广泛应用于医学、生物学、化学等领域，用于疾病诊断、药物筛选、残留检测等方面
简介
ELISA实验采用间接酶联免疫吸附技术，将特异性抗体或抗原固定在固相载体表面，加入待测样本，样本中的抗原或抗体与固定在载体上的抗体或抗原特异性结合
加入酶标抗体或抗原，与结合在载体上的抗原或抗体结合，形成免疫复合物，再加入底物溶液，在酶的作用下底物溶液发生颜色反应，颜色的深浅与待测样本中的抗原或抗体浓度呈正比
加入包被抗原，使抗原与样品中的抗体结合。
加样步骤
将酶标板在湿盒中孵育一定时间，使抗原抗体充分结合。
孵育过程中需保持温度和湿度恒定，以保证实验结果的准确性。
孵育步骤
用洗涤液将酶标板上的未结合物质冲洗掉，以减少非特异性吸附和背景噪音。
洗涤过程中需保证每个孔的洗涤液用量相同，以避免实验结果的偏差。
洗涤步骤
选择灵敏度高的酶标二抗和底物，优化实验条件以提高灵敏度。
选择稳定性好的抗体，避免抗体失效导致实验结果不准确。
ELISA实验常见问题及解决方案
假阳性或假阴性结果
低灵敏度
不稳定的抗体
高背景
THANKS
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02
ELISA实验类型和试剂
实验类型
间接ELISA：用于检测抗原或抗体
竞争性ELISA：用于检测抗原或抗体
人白细胞介素1IL-1酶联免疫分析ELISA
人白细胞介素1(IL-1)酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中白细胞介素1（IL-1）的含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人白细胞介素-1（IL-1）水平。
用纯化的人白细胞介素-1抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入白细胞介素-1，再与HRP标记的羊抗人抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的白细胞介素-1（IL-1）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中人白细胞介素-1（IL-1）含量。
样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。
通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5. 组织标本：切割标本后，称取重量。
加入一定量的PBS，PH7.4。
用液氮迅速冷冻保存备用。
标本融化后仍然保持2-8℃的温度。
人B病毒HerpesvirusB酶联免疫分析ELISA
人B病毒（Herpes virus B）酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于检测人血清，血浆中B病毒（Herpes virus B）水平，感染人的血液学诊断。
实验原理：本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫法（ELISA）测定标本中人B病毒（Herpes virus B）。
用纯化的人B病毒（Herpes virus B）抗体包被微孔板，制成固相抗体，可与样品中B病毒（Herpes virus B）相结合，经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后再与HRP标记的B病毒（Herpes virus B）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），与CUTOFF值相比较，从而判定标本中人B病毒（Herpes virus B）的存在与否。
试剂盒组成：1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。
通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
人免疫球蛋白结合蛋白（BIP）酶联免疫分析
人免疫球蛋白结合蛋白（BIP）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用产品编号：CSB-E12119h检测范围：0.16 ng/ml -10 ng/ml最低检测限：0.04 ng/ml特异性：本试剂盒可同时检测天然或重组的BIP，且与其他相关蛋白无交叉反应。
有效期：6个月预期应用：ELISA法定量测定人血清，血浆及其它相关生物液体中BIP含量。
说明1．试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。
2．浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。
3．中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。
4．刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。
实验原理用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗BIP抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗BIP抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。
TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的BIP呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
试剂盒组成及试剂配制1.酶联板(Assay plate )：一块（96孔）。
2.标准品（Standard）：2瓶(冻干品)。
3.样品稀释液(Sample Diluent)：1×20ml/瓶。
4.生物素标记抗体稀释液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。
5.辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液（HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。
6.生物素标记抗体（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）7.辣根过氧化物酶标记亲和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）8.底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。
酶联免疫吸附实验ELISA
设备的选择与使用
ELISA实验的主要设备包括酶标板、加样器、洗板机、酶标仪等。
使用洗板机时需要注意洗涤液的更换，以保证实验结果的可靠性。
选择质量可靠的酶标板和加样器，保证实验结果的准确性。
使用酶标仪时需要注意波长和光路的调整，以及标准曲线的制作。
ELISA实验注意事项
在实验过程中需要注意操作环境的清洁，避免污染。
灵敏度
通过放大信号和提高灵敏度，ELISA实验可以实现对低浓度样本的检测，如病毒、细菌、细胞因子等。
ELISA的应用
02
ELISA实验步骤
实验开始前，需要清洗实验室器具并消毒，确保实验过程无污染。
清洗与消毒
器材准备
试剂准备
准备实验所需的各种器材，如酶标板、吸管、移液器等。
根据实验方案准备所有必需的试剂，包括酶标抗体、待测样本、标准品等。
酶标记二抗
加入底物溶液，在酶的作用下，底物发生化学反应，产生颜色变化，通过测量颜色变化可以实现对目标分子的定量或定性分析。
底物显色
特异性检测
ELISA实验可以用于特异性检测一种抗原或抗体，排除其他干扰因素的影响。
定量分析
通过加入不同浓度的标准品和未知样本，绘制标准曲线，可以实现对未知样本的定量分析。
调整抗原浓度，以提高抗体结合效率。
合理选择样本
选择具有代表性的样本，避免使用不适当或污染的样本。
控制温育时间
合理安排温育时间，以获得最佳的抗体抗原结合效果。
确定最佳的检测波长
选择最佳的检测波长，以获得最大的光吸收值。
选择合适的洗涤液
选择洗涤液的浓度和pH值，以去除未结合的物质。
应用拓展实例分享
ELISA被广泛应用于多种疾病的诊断，如感染性疾病、自身免疫性疾病和癌症等。
人核因子κB(NF-κB)酶联免疫分析试剂盒使用说明书
人核因子κB(NF-κB)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用产品编号：CSB-E12107h检测范围：0.32ng/mL -20ng/mL最低检测限：0.08ng/mL特异性：本试剂盒可同时检测天然或重组的NF-κB，且与其他相关蛋白无交叉反应。
有效期：6个月预期应用：ELISA法定量测定人血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中NF-κB 含量。
说明1．试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。
2．浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。
3．中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。
4．刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。
实验原理用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗NF-κB抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗NF-κB抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB 显色。
TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的NF-κB呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
试剂盒组成及试剂配制1.酶联板(Assay plate )：一块（96孔）。
2.标准品（Standard）：2瓶(冻干品)。
3.样品稀释液(Sample Diluent)：1×20ml/瓶。
4.生物素标记抗体稀释液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。
5.辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液（HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。
6.生物素标记抗体（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）7.辣根过氧化物酶标记亲和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）8.底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。
酶偶联免疫吸附法检测体液蛋白分析
酶偶联免疫吸附法检测体液蛋白分析酶偶联免疫吸附法（ELISA）是一种广泛应用于体液蛋白分析的检测方法。
这种方法具有敏感性高、专一性好、操作简便、速度快等优点，因而被广泛应用于医疗诊断、免疫学研究等领域。
ELISA的原理是将目标蛋白质与适当的抗体结合、检测，从而确定目标蛋白质的存在及其浓度。
通常情况下，ELISA可分为间接法、双抗体夹心法、竞争法等多种类型。
其中，双抗体夹心法是最常用的一种ELISA方法，其基本原理是将被检测蛋白酶解并分离出的特异抗原分别与固相吸附栏上的抗体和酶标记抗体结合，在酶催化的染色反应下测定可量化的信号。
此外，在标注抗体前，可考虑将其与酶物质进行偶联。
比较常用的酶包括碱性磷酸酶（AP）、过氧化物酶（POD）和辣根过氧化物酶（HRP）等。
其中，HRP 是最常用的酶标记物，可产生较强的荧光信号。
在具体操作过程中，需要注意的是样本的稀释倍数，以使结果落在标准曲线的线性范围内。
同时，为了减少非特异性背景信号，需将样本与阻断剂（如牛血清蛋白等）一同加入反应体系。
尽管ELISA具有许多优点，但也存在一些局限性。
其中，最为突出的是其特异性。
由于ELISA的原理是基于抗体与特定抗原之间的特异性结合，因此如果缺乏适当的选择和控制，就可能出现交叉反应或假阳性的问题。
此外，在半定量或定量分析中，要针对每种蛋白分析样本确定特异性和灵敏性的限制。
与常规方法相比，ELISA可能需要更多的实验参数来优化实验条件并控制可变性。
综上所述，ELISA是一种高效、可重复、可定量的方法，广泛应用于生物学、医学、农业和环境科学等领域。
然而，应用该技术需要充分理解其原理，进而选择相应的方法和试剂来维护其高度特异性和灵敏性。
酶联免疫吸附测定法elisa
酶联免疫吸附测定法elisa酶联免疫吸附测定法（ELISA）的原理酶联免疫吸附测定法（ELISA）是一种广泛用于生物医学研究和诊断的免疫分析技术。
ELISA 的原理基于抗原抗体特异性结合的原理，通过标记酶的抗体来检测目标抗原或抗体。
ELISA 的种类根据检测方法的不同，ELISA 可分为以下几种类型：直接 ELISA：将待测样品直接加入固定在微孔板上的抗原或抗体上，然后用标记酶的抗体检测。
夹心 ELISA：微孔板固定一层捕获抗体，待测样品通过捕获抗体与检测抗体结合，然后用标记酶的抗体检测。
竞争性 ELISA：待测样品与标记抗原竞争结合固定在微孔板上的抗体，标记抗原和待测样品结合量成反比。
ELISA 的步骤ELISA 的主要步骤包括：抗原或抗体固定：将待测抗原或抗体固定在微孔板上。
样品孵育：将待测样品加入微孔板，进行孵育。
洗涤：去除未结合的样品。
添加标记抗体：加入标记酶的抗体，再次孵育。
洗涤：去除未结合的标记抗体。
底物反应：加入底物，酶促反应产生有色产物。
终止反应：加入终止液，停止酶促反应。
测量吸光度：测量有色产物的吸光度，吸光度与样品中抗原或抗体浓度成正比。
应用ELISA 具有灵敏度高、特异性强、操作简便等特点，广泛应用于以下领域：诊断：检测传染性疾病（如艾滋病毒、乙肝）、自身免疫疾病（如类风湿性关节炎）、癌症标志物等。
研究：研究抗原抗体相互作用、免疫应答、药物开发等。
食品安全：检测食品中的残留农药、抗生素等。
环境检测：检测水体或土壤中的污染物。
注意事项进行 ELISA 时需要注意以下事项：抗体的特异性和亲和力：使用的抗体必须具有高特异性和亲和力，以确保准确的检测结果。
样品准备：样品应经过适当的处理，去除干扰物质，以获得准确的结果。
优化条件：ELISA 反应条件（如孵育时间、温度）应经过优化，以获得最佳检测灵敏度和特异性。
背景信号：应使用阴性对照进行检测，以去除背景信号的影响。
质量控制：应使用已知浓度的标准品进行质量控制，以确保检测结果的准确性和可重复性。
人血清白蛋白酶联免疫分析
人血清白蛋白酶联免疫分析人血清白蛋白（HSA）是一种重要的血浆蛋白，它在人体中广泛存在，且在多种生物体内具有高度保守性。
HSA在维持渗透压、运输代谢物质、调节血液凝固等生理过程中发挥着关键的作用。
因此，对HSA的准确检测和定量分析对于了解人体健康状态具有重要意义。
酶联免疫分析（enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA）是一种常用的高灵敏度、高特异性的免疫分析技术，被广泛应用于生物医学研究、临床检验和药物开发等领域。
ELISA基本原理是将待测物质（例如HSA）与特异性抗体反应，形成免疫复合物，然后通过抗原-抗体反应来检测目标物质的存在和数量。
下面将介绍人血清白蛋白酶联免疫分析的步骤和注意事项。
首先，制备试剂和材料。
这包括准备抗HSA抗体、酶标记的二抗和底物、微孔板、稀释缓冲液、洗涤缓冲液等。
利用了微量加样仪等器械，需要注意消毒和无菌操作，以避免污染。
其次，在微孔板上涂覆HSA抗体。
将HSA抗体稀释缓冲液加入微孔板孔槽中，与表面上的底物结合，使抗体固定在孔槽内。
在培养过程中，可以加入胶体金或辣根过氧化物酶等酶标记试剂，用于后续信号检测。
接下来，孔槽中加入待测样品，或即将配制好的标准物质溶液。
将孔槽封闭，进行孵育。
此过程中，待测HSA与抗体发生免疫反应，生成固相抗原-抗体复合物。
复合物的形成与待测样品中HSA的浓度成正比。
然后，洗涤步骤。
通过洗涤缓冲液对孔槽中的未结合试剂进行冲洗，去除干扰物和非特异性结合的物质。
最后，进行信号检测和数据分析。
将酶标记的二抗加入孔槽中，再次孵育，形成第二次的抗原-抗体反应。
此时，酶的活性可使底物分子变色或产生荧光信号。
测量信号的强度或荧光值，可以反映孔槽中HSA的含量。
在实际操作过程中，有几个注意事项需要考虑。
首先，需要了解选择合适的抗体和试剂，以保证实验的特异性和灵敏性。
其次，对于样品的处理和稀释需要严格控制，以避免干扰。
此外，洗涤步骤的次数和剂量也需要优化，以确保洗涤的彻底性和减少非特异性背景信号。
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人B细胞连接蛋白(BLNK)酶联免疫分析（ELISA）
试剂盒使用说明书
本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中人B细胞连接蛋白(BLNK)含量。
实验原理：
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人B细胞连接蛋白(BLNK)水平。
用纯化的人B细胞连接蛋白(BLNK)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入B细胞连接蛋白(BLNK)，再与HRP 标记的B细胞连接蛋白(BLNK)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。
TMB 在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的B细胞连接蛋白(BLNK)呈正相关。
用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中人B细胞连接蛋白(BLNK)浓度。
样本处理及要求：
1.血清：室温血液自然凝固10-20 分钟，离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA、者柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20 分钟后，离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3.尿液：用无菌管收集，离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
胸腹水、脑脊液参照实行。
4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。
离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。
仔细收集上清。
检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度
达到100 万/ml 左右。
通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。
离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。
仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5.组织标本：切割标本后，称取重量。
加入一定量的PBS，PH7.4。
用液氮迅速冷冻保存备用。
标本融化后仍然保持2-8℃的温度。
加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。
离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。
仔细收集上清。
分装后一份待检测，其余冷冻备用。
操作步骤：
1. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10 孔，在第一、第二孔中分别加标准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100μl 分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl 弃掉，再各取50μl 分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl 分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl 加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl 弃掉。
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。
在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5 倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。
4. 配液：将30（48T 的20 倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T 的20 倍）倍稀释后备用。
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此重复5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。
测定应在加终止液后15 分钟以内进行。
注意事项：
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。
一次加样时间最好控制在5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。
如标本中待测物质含量过高（样本OD 值大于标准品孔第一孔的OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
计算：
以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
保存条件及有效期：
1.试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6 个月。