蒽酮法测定可溶性糖方法

蒽酮法测定可溶性糖方法
（一) 实验原理
糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糠醛或羟甲基糠醛，生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物，在一定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比，故可用于糖的定量。

糖类与蒽酮反应生成的有色物质在可见光区吸收峰为630 nm，故在此波长下进行比色。

（二）材料、仪器设备及设计
1 材料
12种源砂生槐叶片，2种处理，4个重复，共96个样。

2 仪器设备
分光光度计，恒温水浴锅，20 ml刻度试管，5 ml和1 ml刻度吸管，5 ml和1 ml的移液枪，记号笔，吸水纸适量。

3 试剂
（1）蒽酮乙酸乙酯试剂：取分析纯蒽酮1 g，溶于50 ml乙酸乙酯中，贮于棕色瓶中，在黑暗中可保存数周，如有结晶析出，可微热溶解。

（2）100 ug/L蔗糖溶液：
1%蔗糖标准液：精确称取蔗糖 g，加入少量水溶解，移入100 ml容量瓶，加 ml浓硫酸，定容至刻度线。

100 ug/L蔗糖溶液的配制：用移液枪精确吸取1%蔗糖标准液1 ml，加入到100 ml容量瓶，加蒸馏水定容。

v1.0 可编辑可修改（3）浓硫酸（比重）
（三）实验步骤
1．标准曲线的制作：
按表1加入标准的蔗糖溶液，然后按顺序向试管中加入 ml蒽酮乙酸乙酯试剂和5 ml 浓硫酸，充分振荡，立即将试管放入沸水浴中，逐管准确保温1 min取出后自然冷却至室温，以空白作参比，在630 nm波长下测其光密度，以光密度为纵坐标，以糖含量为横坐标，绘制标准曲线，并求出标准线性方程。

管号
试剂
01，23,45,67,89,10 100µ蔗糖/ml01水/ml21蔗糖量/µg020*********
2．取样
取不同种源砂生槐幼苗，用蒸馏水冲洗干净，随后用吸水纸吸干水分。

将叶片切下，用锡箔纸包住，放入液氮中冷冻。

取完后将样品放入-80℃冰箱中保存。

3．可溶性糖的提取
将样品从冰箱中取出，称取－ g，记录重量，使用镊子将样品夹入刻度试管中，加入10 mL 蒸馏水，塑料薄膜封口，于沸水中提取30 min（提取2次），提取液过滤入25 ml 容量瓶中，反复冲洗试管及残渣，定容至刻度。

4．显色测定
吸取样品提取液 ml于20 ml刻度试管中（重复2次），加蒸馏水 ml，然后加入 ml 蒽酮乙酸乙酯试剂和5 ml浓硫酸，充分振荡，立即将试管放入沸水浴中，逐管准确保温1 min 取出后自然冷却至室温，以空白作参比（切勿忘掉对照）。

在630 nm波长下测其光密度，测定样品的光密度。

5．计算可溶性糖的含量，计算公式：
C ×V总× D
样品含糖量（%）= ─────────────×100%
W ×V测×106
其中：C——在标准曲线上查出的糖含量（µg），
V总——提取液总体积（ml），
V测——测定时取用体积（ml），
D——稀释倍数，
W——样品重量（g），
106——样品重量单位由g换算成µg的倍数
数据统计表。