实验二十一 可溶性总糖的测定(蒽酮比色法)

实验二十一可溶性总糖的测定（蒽酮比色法）

一、目的

掌握蒽酮法测定可溶性糖含量的原理和方法。

二、原理

强酸可使糖类脱水生成糠醛，生成的糠醛或羟甲基糖醛与蒽酮脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色，该物质在 620 nm 处有最大吸收 . 在 10 -100ug 范围内其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。

这一方法有很高的灵敏度，糖含量在 30ug 左右就能进行测定，所以可做为微量测糖之用。一般样品少的情况下，采用这一方法比较合适。

三、仪器、试剂和材料

1 .仪器

（ 1) 分光光度计

(2 ）电子顶载天平

(3 ）三角瓶： 50m1 X 1

（ 4 ）大试管： 9 支

（ 5) 试管架，试管夹

（ 6 ）漏斗，漏斗架

（ 7 ）容量瓶： 50rnl X 2

（ 8 ）刻度吸管： 1m1X3 ， 2m1X1 ， 5mlX1

（ 9 ）水浴锅

2 .试剂

（ 1) 葡萄糖标准液： l00ug/ml

(2 ）浓硫酸

(3) 蒽酮试剂 :0.2g 蒽酮溶于 100 ml 浓 H2SO4 中当日配制使用。

3 .材料

小麦分蘖节。

四、操作步骤

1 .葡萄糖标准曲线的制作

取 7 支大试管，按下表数据配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液：

管号 1 2 3 4 5 6 7

葡萄糖标准液（ ml ） 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.6 0.8

蒸馏水（ ml ） 1 0.9 0.8 0.7 0.6 0.4 0.2

葡萄糖含量（ ug ）0 10 20 30 40 60 80

在每支试管中立即加入蒽酮试剂 4.0m1 ，迅速浸于冰水浴中冷却，各管加完后一起浸于沸水浴中，管口加盖玻璃球，以防蒸发。自水浴重新煮沸起，准确煮沸 l0min 取出，用流水冷却，室温放置 10min ，在 620 nm 波长下比色。以标准葡萄糖含量（ ug) 作横坐标，以吸光值作纵坐标，作出标准曲线。

2 .植物样品中可溶性糖的提取

将小麦分蘖节剪碎至 2mm 以下，准确称取 Ig, 放入 50m1 三角瓶中，加沸水 25m1 ，在水浴中加盖煮沸10min ，冷却后过滤，滤液收集在 50m1 容量瓶中，定容至刻度。吸取提取液 2m1 ，置另一 50m1 容量瓶中，以蒸馏水稀释定容，摇匀测定。

3 .测定

吸取 lml 已稀释的提取液于大试管中，加入 4.Oml 蒽酮试剂，以下操作同标准曲线制作。比色波长

620nm ，记录吸光度，在标准曲线上查出葡萄糖的含量（ ug ）。

查表所得糖含量（ ug ）×稀释倍数

五、结果处理

六、注意事项

1 .该显色反应非常灵敏，溶液中切勿混入纸屑及尘埃。

2 . H 2 SO 4 要用高纯度的。

3. 不同糖类与蒽酮的显色有差异，稳定性也不同。加热、比色时间应严格掌握。

七、思考题

1 .用水提取的糖类有哪些？

2 .制作标准曲线时应注意哪些问题？