菌种的保存真空冷冻干燥法

合集下载

菌种保藏方法及复壮技术

●食用菌栽培●·34·欢迎刊发广告，欢迎种业界商家朋友赞助、协办。

菌种保藏方法及复壮技术菌种保藏的原理是通过干燥、低温、缺氧、避光、缺乏营养等方法，使菌种的代谢水平降低，乃至完全停止，达到半休眠或完全休眠的状态，而在一定时间内得到保存。

需要时再通过提供适宜的生长条件使保藏物恢复活力，使菌种在较长期的保藏之后仍然保持着原有的生命力、典型的形态特征、优良生产性能。

目前常用的菌种保藏方法有以下几种。

1菌种保藏方法1.1斜面低温保藏法将需要保藏的菌种，接种在适宜的斜面培养基上，菌丝长满斜面时，用硫酸纸包扎棉塞，旋转在4℃的冰箱保藏。

由于微生物的新陈代谢活动未停止，试管内培养基易失水变干，因此，保藏时间较短，转管次数多，不适于长期保藏。

每隔六个月转管一次。

草菇菌种不耐低温，需保藏在10~12℃，或在草菇菌落上灌注3~4毫升的防冻剂（10%的甘油）。

如菌丝长满斜面后，在无菌条件下，用无菌橡皮塞代替棉塞，并用石蜡密封，即可在室温或冰箱中保藏。

这种方法可防止杂菌污染，隔绝氧气，避免培养基干燥，使用方便。

1.2液体石蜡保藏法石蜡防止培养基水分蒸发，隔绝斜面菌丝与空气接触，降低微生物代谢活性，使其处于休眠状态，因此能延长微生物的生命，保持菌种优良的种性。

一般可保藏3~5年，是一种中长期的菌种保藏方法。

液体石蜡选用化学纯的，在121℃下高温灭菌30分钟，再将液体石蜡在160℃烘箱中保温1~2小时，蒸发掉液体石蜡中的水，或将高压灭菌后的液体石蜡放置在40~60℃温箱中，使灭菌后的液体石蜡层由乳白色变成无色透明。

在无菌条件下，将灭菌除水的液体石蜡用无菌吸管罐到长满菌丝的斜面试管中，液体石蜡要高出斜面尖端1厘米左右，然后用无毒泡沫试管塞塞好，直立地放在试管架上或罐头瓶中，置于冰箱或室温中保藏。

液体石蜡灌注过多，移种时不方便；过少，时间长容易干涸。

如将棉塞齐试管中剪平，用石蜡溶封，或用无菌橡皮塞代替棉塞，可延长保藏时间。

冷冻真空干燥保藏法的原理

冷冻真空干燥保藏法的原理
冷冻真空干燥保藏法，又称冷冻干燥保藏法，简称冻干法，是一种常用的微生物保藏方法。

其原理是在低温下快速将含菌样品冻结，然后在减压条件下抽真空，使水分子直接从固态升华到气态，从而实现对样品的干燥保藏。

具体操作过程如下：首先，将需要保藏的菌悬液或孢子悬液制备成适当的浓度，并添加适量的保护剂以提高菌种稳定性。

接着，将样品装入安瓿管中，并在低温下快速将含菌样品冻结。

然后，将安瓿管置于真空干燥设备中，在减压条件下进行抽真空处理。

由于水分子直接从固态升华到气态，无需经过液态，因此可以有效地避免菌种在干燥过程中的损伤。

最后，将干燥后的菌种管放置在4℃或-20℃的低温环境中保存。

冷冻真空干燥保藏法的优点在于能够有效地保存菌种，且保存时间较长，一般可达到几年或几十年。

此外，该方法还具有较高的保藏效果，菌种在复苏后仍具有较高的活力和生长能力。

因此，冷冻真空干燥保藏法被广泛应用于微生物学、生物制品和医药研究领域。

整理微生物菌种的冷冻干燥和低温冷冻保藏

精品文档国家自然科技资源平台微生物菌种的冷冻干燥和低温冷冻保藏技术规程（试行）《自然科技资源收集整理保存技术规程研究制定》项目组二00四年十二月十日精品文档目次前言 (2)弓I 言 (3)1范围 (4)2规范性引用文件 (4)3术语和定义 (4)4内容 (5)参考文献 (10)精品文档*»-t-刖言本规程由微生物菌种资源平台建设项目提出。

本规程起草单位：中国农业科学院土壤肥料研究所、中国兽医药品监察所、中国科学院微生物研究所、中国林业科学研究院森林保护研究所、中国药品生物制品检定所、中国医学科学院医药生物技术研究所、中国食品发酵工业研究院。

本规程主要起草人：张月琴、刘红宇、黄明玉、姜瑞波、顾金刚、周宇光、朴春根、叶强、陈敏、程池等。

精品文档精品文档引言微生物菌种资源的长期有效保藏是微生物菌种资源有效实施共享的前提，采用操作性简便、保藏周期长、遗传变异率低是菌种资源保藏方法的首要选择。

精品文档精品文档微生物菌种的冷冻干燥和低温冷冻保藏技术规程1范围本规程规定了冷冻干燥和低温冷冻保藏技术的定义、原理、技术要求、方法与步骤。

本规程适用于普通病毒、细菌、放线菌、酵母菌、丝状真菌及担子菌等微生物菌种的保藏。

对于病原微生物及其他需要特殊操作技术的微生物的参见相应的技术规程。

2规范性引用文件下列文件中的条款通过本规范的引用而成为本规范的条款。

凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本规范，然而，鼓励根据本规范达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本规范。

国务院令第424号《病原微生物实验室生物安全管理条例》GB 19489实验室生物安全通用要求科技部自然科技资源平台联合管理办公室文件自然科技资源共性描述规范（试行）3术语和定义下列术语和定义适用于本规范。

3.1冷冻干燥freeze-drying将微生物冷冻，在减压下利用升华作用除去水分，使细胞的生理活动趋于停止，从而长期维持存活状态。

冷冻干燥法保存菌株

1.制备无菌瓶。

药用青霉素小瓶先用2%盐酸浸泡8-10h，再用自来水冲洗多次，最后用蒸馏水洗2次，烘干。

贴标签，盖塞并用容器封口膜覆盖扎紧，高压蒸汽灭菌。

2.制备无菌脱脂牛奶。

配制20%脱脂乳115℃15min。

3.制备菌悬液。

在培养好的新鲜菌种斜面上，加入无菌水3ml，用接种环刮下，轻轻搅动，制成细胞分散均匀的菌悬液（不要刮破培养基）。

4.分装。

用无菌移液管将菌悬液分装与灭菌青霉素小瓶中，每瓶装0.2ml，再用无菌长滴管将灭菌脱脂乳0.2ml加入上述小瓶中，稍振摇使之混匀。

5.预冻。

将上述小瓶放入500ml干燥瓶中，放入-80℃的冰箱中预冻0.5h，待小瓶中菌悬液冻结成固体后取出；
6.冷冻真空干燥。

迅速将干燥瓶插在冷冻干燥器的抽真空管上，迅速抽真空，并冷冻干燥，约24-36h，待菌体混合物呈疏松态，稍一振动即脱离瓶壁方可取出。

7.封存。

在无菌室内将容器封口膜取下，迅速换以无菌橡皮塞，最后用封口膜将瓶口封住，-20℃低温冰箱保存。

经过试验，10%和20%的脱脂牛奶都可以。

食用菌菌种贮藏八法

食用菌菌种贮藏八法1.低温定期移植贮藏法将需要贮藏的菌种接种在适宜的斜面培养基上，适温培养，当菌丝健壮地长满斜面时取出，放在3℃-5℃低温干燥处或4℃冰箱、冰柜中贮藏，每隔4-6个月时间移植转管一次，具体应根据菌种特性决定。

贮藏时要注意环境温度不能太高，以防霉菌通过棉塞进入管内。

因此，若用棉塞，可用干净的硫酸纸或牛皮纸包扎棉塞，即可减少污染的机会，也可防止培养基干燥。

除草菇菌种外，其他食用菌菌种都能采用此法贮藏。

2.液体石蜡贮藏法取化学纯液体石蜡(要求不含水分、不霉变)装于三角瓶中加棉塞并包纸，在1公斤/平方厘米压力下灭菌1小时，再放入40℃恒温箱中数天，以蒸发其中水分，至石蜡油完全透明为止。

将处理好的石蜡油移接在空白斜面上，在28℃-30℃温度下培养2-3天，确定无杂菌生长方可使用。

然后用无菌操作的方法把液体石蜡注入待贮藏的斜面试管中。

注入量以高出培养基斜面1-1.5厘米为宜，塞上橡皮塞，用固体石蜡封口，直立于低温干燥处贮藏。

贮藏时间在1年以上，在低温下，保藏时间还可延长。

3.沙土管贮藏法取河沙用水浸泡洗涤数次，过60目筛除去粗粒，再用10%盐酸浸泡2-4小时，除去其中有机物质，再用水冲洗至pH值达到中性，烘干备用。

同时取贫脊土或菜园土用水浸泡，使其呈中性，沉淀后除去上清液，烘干碾细，用100目筛子过筛，将处理好的沙与土以(2-4)：1比例混匀，用磁铁吸出其中的铁质，然后分装小试管或安瓿内，每管装量0.5-2克，塞棉塞，用纸包扎灭菌(1.5公斤/平方厘米，1小时)，再干热灭菌(160℃，2-3小时)1-2次，进行无菌检验，合格后使用。

将已形成孢子的斜面菌种，在无菌条件下注入无菌水3-5毫升，刮菌薹，制成菌悬液，再用无菌吸管吸取菌液滴入沙土管中，以浸透沙土为止。

将接种后的沙土管放入盛有干燥剂的真空干燥器内，接上真空泵抽气数小时，至沙土干燥为止。

真空干燥操作需在孢子接入后48小时内完成，以免孢子发芽。

微生物菌种保藏方法

微生物菌种保藏方法菌种是一种重要的生物资源，菌种保藏是重要的微生物基础工作。

菌种保藏就是利用一切条件使菌种不死、不衰、不变，以便于研究与应用。

(一)常规保藏方法1 目的1.1 了解菌种保藏的基本原理1.2 掌握几种常用的菌种保藏方法。

2 原理菌种保藏的方法很多。

其原理却大同小异，不外乎为优良菌株创造一个适合长期休眠的环境,即干燥、低温、缺乏氧气和养料等。

使微生物的代谢活动处于最低的状态，但又不至于死亡，从而达到保藏的目的。

依据不同的菌种或不同的需求，应该选用不同的保藏方法。

一般情况下，斜面保藏、半固体穿刺,石蜡油封存和砂土管保藏法较为常用，也比较容易制作。

3 材料3.1菌株待保藏的适龄菌株斜面3.2培养基肉汤蛋白胨斜面，半固体及液体培养基。

3.3 试剂10%HCl无水氯化钙、石蜡油、五氧化二磷。

3.4 器具用于菌种保藏的小试管(10*100毫米)数支、5毫升无菌吸管、l 毫升无菌吸管等、灭菌锅、真空泵、干燥器、冰箱无菌水、筛子(40目、120目)、标签、接种针、接种环、棉花、牛角匙等等。

4 流程斜面保藏→半固体穿刺保藏→石蜡油封存→砂土管保藏5 步骤5.1斜面保藏5.1.1流程标记试管→接种→培养→保藏5.1.2步骤5.1.2.1贴标签取无菌的肉汤蛋白胨斜面数支。

在斜面的正上方距离试管口2-3厘米处贴上标签。

在标签纸上写明接种的细菌菌名、培养基名称和接种日期。

5.1.2.2斜面接种将待保藏的细菌用接种环以无菌操作在斜面上作划线接种。

5.1.2.3培养置37恒温箱中培养48小时。

5.1.2.4保藏斜面长好后，直接放入4℃的冰箱中保藏。

这种方法一船可保藏三个月至半年。

5.2半固体穿刺保藏5.2.1流程标记试管→穿刺接种→培养→保藏5.2.2 步骤5.2.2.1贴标签取无菌的半固体肉汤蛋白等直立柱数支，贴上标签，注明细菌菌名、培养基名称和接种日期。

5.2.2.2穿刺接种用接种针以无菌方式从待保藏的细菌斜面上挑取菌种，朝直立柱中央直刺至试管底部，然后又沿原线拉出。

微生物名词菌种干燥保存法

微生物名词菌种干燥保存法
在微生物学中，菌种干燥保存法是一种常用的方法，用于保持微生物的活性和稳定性，以便在长时间内保存和使用。

以下是菌种干燥保存法的主要步骤：
1.菌种的选择：选择需要保存的菌种，通常选择具有代表性的菌株或具有特殊性质的菌株。

2.培养基的制备：制备适合菌种生长的培养基，以便在干燥前对菌种进行充足的生长和繁殖。

3.菌落的制备：在培养基上培养菌种，使其形成菌落。

这一步骤可以增加菌种的活性和稳定性。

4.菌种的干燥：将菌落进行干燥处理，以去除多余的水分，保持菌种的活性和稳定性。

常用的干燥方法包括真空干燥、冷冻干燥等。

5.菌种的保存：将干燥后的菌种保存在密闭容器中，以防止外界环境对菌种的影响。

容器通常采用金属或塑料材质，具有良好的密封性和隔绝性。

6.定期检查：在保存期间，定期检查菌种的活性和稳定性，以确保其在使用时具有预期的效果。

7.记录管理：对整个干燥保存过程进行记录和管理，包括菌种的选择、培养基的制备、菌落的制备、菌种的干燥、菌种的保存、定期检查等信息，以便查询和管理。

总之，菌种干燥保存法是微生物学中重要的技术之一，可以有效地保持微生物的活性和稳定性，以便在长时间内保存和使用。

在实际
操作中，需要严格遵守操作规程，确保菌种的活性和稳定性不受影响。

菌种冷冻保藏

7.3分装时，需三个人配合，一个吸菌液，另一个塞棉花，还有一个贴标签。
7.4采用酒精喷灯进行封管时，烧的温度要适宜。封管后不要立即放在台面上，以防受冷撕裂。
附图：泪滴型安瓿管长颈毛细玻璃管
多头岐管
附：1、冷冻保藏改进方法（一）
因真空冷冻干燥器价格比较昂贵，通常抗生素生产厂都采用自制的简单易行办法，可达到同样的目的。即：
6.2制备脱脂乳
取市售新鲜、清洁、无抗生素污染的原牛奶300ml煮沸，在5000 r/min下离心10分钟，除去上层奶皮、油脂，吸取下层奶液，经脱脂棉过滤，如此反复3次脱去脂肪，然后分装入两个250 ml三角瓶中，加棉塞并用牛皮纸包头、扎牢，在115℃25min高压蒸汽灭菌，冷却后做无菌试验，4℃冰箱保存备用。
6.6预冻
因为迅速超低温预冻可保持菌体细胞结构成份原状，利于细菌存活。故将分装好的冷冻管及指示管置于低温冰箱冷冻室-70℃下快速冷冻过夜。无低温冰箱可用冷冻剂如干冰（固体CO2）酒精液或干冰丙酮液，温度可达-70℃。也可用液氮。将冷冻管插入冷冻剂，只需冷冻4—5分钟，即可使悬液结冰。也可用液氮预冻。还可用低温冰箱-80℃预冻1～2小时后转入冷冻真空干燥。
由于同时满足菌种保藏三要素，使微生物始终处在低温、干燥、缺氧的条件下，能克服传代、沙土管简单保藏方法的不足，保藏菌种范围广、时间长（保藏期可达数年至十数年）、存活率高、保存过程不易失活和退化等。
3、主要步骤为：
3.1将待保藏菌种的细胞或孢子悬浮于保护剂（如脱脂牛奶）中；
3.2在低温（-45℃以下）下使微生物细胞快速冷冻；
6.7冷冻真空干燥
真空冷冻干燥器有成套的装置出售（长药厂新近成立菌种中心，购有该机）。按其方法操作。冷冻干燥机要先开机预冷30分钟以上，再根据冷冻干燥机的水分蒸发能力，确定一次放入的冷冻管数量。将预冻好的冷冻管及指示管于次日取出迅速放入已预冷的冷冻干燥机的干燥箱内，开动真空泵进行一级真空抽干，待指示管出现由粉红色变全兰色时，再进行二级抽干12h。二级真空干燥既保持菌体细胞干燥度，又避免细胞反复冻结造成保存中菌体死亡，因而能更长期保存菌种，并能提高其存活率，又不会发生菌株的变异

简述菌种保藏的几种方法及条件。

菌种保藏是重要的生物资源的保护和利用过程，其主要方法有：
一、冷冻法。

冰冻法是最常用的保藏菌株的方法，也是目前最理想的保藏方法之一，其主要原理是将活菌体放入冰冻室，温度由常温降至-80℃，使得菌种活动受到抑制，在-80℃的状态下可以长期保存。

二、液氮法。

液氮法是一种依靠低温和高压技术保存菌种的方法，主要是将活菌体置入液氮容器中，使其处于-195℃的极低温状态。

三、干燥法。

干燥法是将活菌体及高浓度营养培养基同时干燥，使其中的水份完全蒸发而获得半干燥的状态，这种状态下可以防止菌种的增殖。

四、水银法。

水银法是一种利用活菌体对水银的耐受性，将活的菌体悬浮在7%的水银中的保存方法。

保藏菌种的条件：
1、环境温度应该控制在0~4℃，并保持温度稳定。

2、控制保藏过程中的湿度，干燥法中的湿度应在10%～15%之间，而冷冻、液氮保藏则要求保证容器中有足够多的液氮，避免菌种因温度过高而复苏。

3、控制光照，避免菌株遭受接触紫外线的伤害、褪色、衰退和增强其致病性等。

4、控制空气中的致病因子；
5、定期检测样品的质量，确保其始终处于较好的保藏状态。

- 1 -。

菌种保存方法

菌种保存方法菌种保存是微生物学研究中非常重要的一环，它可以保证菌种的长期保存和稳定性，为科研工作提供了可靠的保障。

下面将介绍几种常见的菌种保存方法。

首先，冷冻保存是最常见的菌种保存方法之一。

冷冻保存是指将培养好的菌种悬浮液或培养物在-80℃以下的低温条件下保存。

在保存前，需要将菌种悬浮液加入一定比例的保护剂，如甘油或DMSO，以增加菌种的冷冻耐受性。

冷冻保存不仅简单易行，而且保存时间长，可以保存数年甚至更长时间。

其次，干燥保存也是一种常用的菌种保存方法。

干燥保存是指将培养好的菌种用干燥剂或者真空干燥的方法将菌种完全脱水，然后保存在低温、低湿的条件下。

这种方法保存的菌种可以在常温条件下保存，并且保存时间也相对较长。

另外，液氮保存也是一种非常有效的菌种保存方法。

液氮保存是指将培养好的菌种悬浮液或培养物直接存放在液氮罐中保存。

由于液氮的温度极低，可以有效地阻止微生物的代谢和生长，因此保存效果非常好。

但是在使用液氮保存时需要注意安全问题，操作人员要具备相关的安全知识和技能。

最后，冷冻干燥保存也是一种常见的菌种保存方法。

冷冻干燥保存是将培养好的菌种在低温条件下冷冻，然后通过真空干燥的方法将菌种脱水保存。

这种方法既兼具冷冻保存和干燥保存的优点，保存效果非常好，被广泛应用于微生物学研究中。

综上所述，菌种保存方法有很多种，选择合适的保存方法需要根据具体的实验要求和条件来确定。

无论采用何种保存方法，都需要严格按照操作规程来进行，以确保菌种的保存质量和稳定性。

希望本文介绍的菌种保存方法对大家有所帮助。

5菌种保藏的原理和方法

16
.
17
.
方法。
9
.
（六）液氮保藏法
原理：低温悬浮介质： 10%甘油或5%的二甲亚砜机理：甘油或二甲亚砜可进入细胞，并通过降低强烈的
脱水作用而保护细胞。甘油—般用高压蒸汽灭菌，而二甲亚砜最好为过滤灭菌。适用菌种：适用于所有微生物、动植物细胞保藏。保藏期：置液氮内（-196 ℃ ），保存5-10年。特点：保藏期最长，但保藏费用高，仅用于保存经济价
4 菌种保藏的原理和方法
菌种保藏原理及条件菌种保藏的方法菌种保藏的注意事项菌种保藏机构
1
.
一、菌种保藏原理
原理：
根据菌种的生理生化特性，人为创造条件使菌体的代谢活动处于休眠的状态。
条件：
挑取优良纯种，最好是休眠体（孢子、芽孢等）
创造一个最有利于休眠的环境条件，如：降低培养基营养成分、低温、干燥、隔氧及添加保护剂等方法。
2
.
二、菌种保藏的方法
斜面保藏法穿刺保藏法固体曲保藏法沙土管干燥保藏法真空冷冻干燥保藏法液氮保藏法悬液保藏法低温保藏法
3
.
（一）斜面保藏法
原理：低温方法：将培养好的斜面菌种，置于4-5℃冰箱保存，定期
移植到新的斜面培养基上继续保藏。一般保存期3-6个月。注意事项: 冰箱的温度；培养基水分蒸发情况（用橡皮塞代替棉塞）。优点：简便，适合于实验室中菌种的短期保藏。缺点：短期内多次传代，易引起菌种变异、退化，染菌
过筛、灭菌并干燥的沙土为保藏介质，
可用硅胶、磁珠或多孔玻璃珠，但适于这些载体的微生物不多，保存期短，不及沙土实用。
7
.
（五）真空冷冻干燥保藏法
原理：在低温下迅速地将细胞冻结以保持细胞结构完整，然后在真空下使水分升华（最有效方法之一）。

简述真空冷冻干燥法保藏菌种的一般流程

真空冷冻干燥法是一种常用的菌种保藏方法，它通过将菌种在低温下冷冻、然后在真空条件下干燥的方式，实现了长期保存菌种的目的。

以下是真空冷冻干燥法保藏菌种的一般流程：一、菌种准备1. 选择合适的菌株：在进行菌种保藏前，首先需要选择适合的菌株。

通常应选择生长良好、代谢活跃的菌种进行保藏。

2. 菌种培养：将选好的菌株进行培养，培养条件需严格控制，保证菌种的纯度和活力。

二、预处理1. 预冷冻处理：将培养好的菌种进行预冷冻处理，将其置于低温环境中进行预冷冻，通常温度为-80℃以下，以减慢菌种的新附粘聚和氧化。

2. 冷冻保存：将预处理好的菌种转移到常规保存的冷冻设备中，将温度进一步调节至-196℃以下，以实现菌种的长期冷冻保存。

三、真空干燥1. 复苏：当需要使用保存好的菌种时，首先需要将其从冷冻状态中复苏出来，将其放置在适宜的培养基中进行复苏培养。

2. 真空干燥：在菌种复苏成功后，使用真空冷冻干燥设备进行干燥处理。

将菌种在低温下，通过升高温度并施加真空条件，使得菌种的水分逐渐蒸发，最终实现了菌种的干燥保存。

四、包装1. 包装材料：选择合适的包装材料，通常为玻璃瓶或者高密度聚乙烯瓶等耐高温、耐压、密封性好的材料。

2. 包装方法：将经过真空冷冻干燥处理的菌种装入包装容器中，并采用干燥消毒的方式，保证包装容器和菌种的无菌状态。

3. 封口保存：对包装容器进行封口处理，保证菌种在包装容器中的密封保存。

五、贮存1. 温度控制：将经过包装的菌种存放在恒温设备中，控制温度在-20℃至-80℃之间，以保证菌种的长期保存。

2. 防潮措施：在存放的过程中，采取适当的防潮措施，避免包装容器内部产生凝结水、霉菌和细菌。

3. 定期检测：定期对存放的菌种进行检测，观察其存活情况和纯度，必要时进行复苏培养。

通过以上流程，真空冷冻干燥法可以实现菌种的长期保存，确保菌种的活力和纯度，为科研工作提供了重要的技术保障。

在菌种保藏的过程中，真空冷冻干燥法作为一种常用的方法，具有许多优势。

菌种长期保存方法

菌种长期保存方法
菌种的长期保存方法有多种，常用的包括以下几种：
1. 冷冻保存：将菌株培养物添加适量的保护剂（如甘油、蔗糖等），将菌种冷冻在低温下保存。

通常在-70或更低的温度下保存，可以避免菌种的变异和死亡。

2. 真空冻干保存：将菌株培养物通过真空冷冻干燥技术，制备成干粉状，然后密封保存。

这种方法适用于某些脆弱的菌种，有助于保持菌株的原始特性。

3. 高温烘箱保存：将菌株培养物置于高温（通常为40-50）的烘箱中烘干，然后密封保存。

这种方法适用于耐热的菌株，可以较长时间地保持菌种的活性。

4. 冷冻干燥保存：将菌株培养物进行冷冻干燥处理，制备成干燥粉末，并密封保存。

这种方法可以长期保存菌种，且易于运输和储存。

5. 非洲紫外线灭菌保存：将菌株培养物置于紫外线照射仪中进行灭菌处理，然后密封保存。

这种方法适用于一些容易形成胞内孢子的菌株，可以有效地保持菌种的活性。

选择合适的保存方法应根据菌株的特性以及实验需求来确定，同时在保存过程中应注意使用无菌操作，确保保存的菌种不受外界污染。

菌种保藏方法范文

菌种保藏方法范文菌种保藏是指将具有特定遗传性状的菌种保持在一定的条件下存活和保存，以便于后续的研究和利用。

菌种保藏的目的是保持菌种的稳定性、纯度和活力。

下面将对常见的菌种保藏方法进行详细介绍。

1.冷冻保藏法：冷冻保藏法是最常见和常用的菌种保存方法之一、该方法是将菌种在适宜的培养基上生长至适宜的阶段，然后通过添加甘油或其他保护剂来增加菌种的耐冻存活力，并放入低温环境下冷冻保存。

通常使用-20℃或更低的温度进行保存。

这种方法简单易行，成本较低，在短时间内能够保持菌株的复原性很好。

2.干燥保藏法：干燥保藏法又称为脱水保藏法，是将菌种长时间保存于干燥状态中。

先将菌种培养至适宜的生长阶段，然后用无菌方法将菌种制成干燥菌粉，放入干燥瓶中密封保存。

常见的干燥剂有二氧化硅凝胶、无水CaCl2等。

干燥保藏法保存的菌种潜伏期长，比较安全可靠，但复苏的条件较为苛刻。

3.液氮保藏法：液氮保藏法又称为低温保存方法，是将菌种保存在液态氮中。

通过将菌种培养至适宜生长阶段后，将其转接入试管中，用无菌方法加入等体积的冷冻保护剂（例如甘油），放入液氮中保存。

液氮的温度达到-196℃，在这种环境下菌种可以长时间保存，但需要特殊的设备和条件。

4.胶体保藏法：胶体保藏法是将菌种培养至适宜生长阶段，然后将其与无菌明胶混合均匀，制成菌胶球，通过培养基中的各种成分供应菌种的生长和维持菌株的复原性。

这种保藏方法具有较长的复苏潜伏期，并且易于携带和传递，是一种较为理想的保存方法。

5.冷冻干燥保藏法：冷冻干燥保藏法是将菌种通过冷冻干燥的方法进行保存。

首先将菌种培养至适宜生长阶段，然后用无菌方法将菌种在-40℃或更低温度下冷冻干燥，形成冷冻干燥粉末。

这种方法保存的菌种潜伏期长，但复苏条件较为苛刻。

除了以上的常见保存方法，还有一些新兴的菌种保藏方法，例如微柱保存法、冷冻解冻保存法等。

这些方法在不同的实验室和研究领域可能有着不同的适用性和优势。

综上所述，菌种保藏方法有多种多样，每一种方法都有其自身的特点和适用范围。

菌种保藏方法

菌种保藏方法中国工业微生物菌种保藏管理中心微生物菌种保藏对于微生物菌种的研究和利用至关重要。

以下是中国工业微生物菌种保藏管理中心整理的目前国际国内常用的菌种保藏方法，包括：定期移植法、液体石蜡法、沙土管法、真空冷冻干燥法、80℃冰箱冻结法、液氮超低温冻结法、固体曲保藏法、蒸馏水保藏法，各种菌种保藏方法都有详细的步骤说明。

定期移植法亦称传代培养保藏法，包括斜面培养、穿刺培养、液体培养等。

是指将菌种接种于适宜的培养基中，最适条件下培养，待生长充分后，于4～6℃进行保存并间隔一定时间进行移植培养的菌种保藏方法。

操作步骤如下：1 培养基制备1.1 器皿准备培养基制备过程中所用的一些玻璃器皿，如三角瓶、试管、培养皿、烧杯、吸管等，经洗涤、干燥、包装、灭菌后使用。

1.2 溶解培养基配料先在烧杯中放适量水，按培养基配方称取各项材料，依次将缓冲化合物、主要元素、微量元素、维生素等材料加入水中溶解，最后加足水量，搅拌均匀。

1.3 调pH值配料溶解后将培养基冷却至室温，根据要求加稀酸（0.1mol/L盐酸）或稀碱(10%氢氧化钠)调pH值。

加酸或碱液时要缓慢、少量、多次搅拌，防止局部过碱或过酸而导致测量不准确和营养成分被破坏。

1.4 加凝固剂配制固体培养基时需加凝固剂，如琼脂、明胶等。

将凝固剂加入液体培养基中，加热并不断搅拌至融解，再补足所蒸发水分。

1.5 过滤分装在二层纱布中间夹入脱脂棉，将配好的培养基趁热过滤并分装。

斜面培养基分装量约为试管高度的四分之一(4～5mL)，穿刺培养基分装量以试管高度的二分之一为宜。

分装过程中勿使培养基沾污管口，以免弄湿棉塞造成污染。

1.6 包扎标记将试管加棉塞，外面包扎一层牛皮纸或铝箔并注明培养基名称及配制日期。

1.7 灭菌根据要求将培养基灭菌，通常蒸汽灭菌为121℃，15～20min。

1.8 斜面摆放灭菌后及时摆放斜面，斜面长度不超过试管管长的二分之一为宜。

1.9 无菌检查将灭菌的培养基放入培养箱中作无菌检验，通常30℃培养1～3天。

菌种的保存,真空冷冻干燥法

菌种的保存：真空冷冻干燥法1准备安培管用于真空冷冻菌种保藏的安培管宜采用中性玻璃制造，形状可用长颈球形底的，亦称泪滴型安培管。

大小要求外径6～7.5mm，长105 mm，球部直径9～11 mm，壁厚0.6～1.2 mm，也可用没有球部的管状安培管。

先用2%盐酸浸泡8～10h，再经自来水冲洗多次，用蒸馏水涮洗2～3次，烘干；在每管内放入打好菌号及日期的标签，字面朝向管壁，管口塞好脱脂棉塞，121℃下高压灭菌20分钟，备用。

2准备菌种用真空冷冻干燥法保藏的菌种保藏期可长达几年甚至几十年，为了不出现差错，所用菌种纯度要高，而且菌龄要适宜。

细菌和酵母菌的菌龄要求超过对数生长期，若用对数生长期的菌种进行保藏，其存活期反而降低。

一般细菌的菌龄要求24～48h；酵母菌为3d；形成孢子的微生物则宜保藏孢子；放线菌和丝状真菌菌龄为7～10d。

3保护剂的选择和准备选取新鲜牛奶作为保护剂，牛奶要先脱脂，用离心方法去除上层油脂，115℃下高压蒸汽灭菌25min，备用。

4菌种准备及分装菌种要求为生长良好的纯种，菌龄以处于稳定期为好，孢子是新鲜的。

每支长好的斜面加2～3ml保护剂，用接种环将菌苔轻轻刮起(注意勿刮起培养基)，制成菌悬液。

如用液体培养的菌种，则需经离心收集和用灭菌生理盐水洗涤细胞，收集的菌体用保护剂悬浮制成菌悬液。

悬液中菌数要求达到108～1010个/ml为宜。

悬液制备完成尽快分装和冻结。

分装安瓿时可用灭菌的长滴入安瓿管底部，每管分装量约0.1～0.2毫升，分装安瓿管时间尽量要短，最好在1-2小时内分装完毕并预冻。

分装时应注意在无菌条件下操作。

5 预冻-80℃冰箱预冻1～2小时。

6冷冻干燥将冷冻后的样品安瓿管置于冷冻干燥机的干燥箱内，开始冷冻干燥，时间一般为8-20小时。

终止干燥时间应根据下列情况判断：①安瓿管内冻干物呈酥块状或松散片状；②真空度接近空载时的最高值；③选用1-2支对照管，其水份与菌悬液同量，视为干燥完结。

实验室最常用的五种菌种保藏方法

实验室最常用的五种菌种保藏方法一、冷冻保存在实验室中，冷冻保存是最常用的菌种保藏方法之一。

这种方法利用低温的环境，将菌种置于-70°C以下的冰柜或液氮罐中进行保存，以减缓菌种的新陈代谢过程，从而延长其保存时间。

冷冻保存不仅适用于常见的细菌菌种，对真菌、酵母菌等微生物也同样适用。

在冷冻保存的过程中，需要注意样品容器的密封性和防潮性，以避免保存过程中的交叉污染和冻结损伤。

二、干燥保存干燥保存是另一种常见的菌种保藏方法。

这种方法通过将菌种置于低温低湿环境中，使其水分蒸发，使菌种变得干燥并进入休眠状态，从而延长其保存时间。

常见的干燥保存方式包括真空冷冻干燥、干燥剂吸附法等。

干燥保存尤其适用于灵敏对湿度敏感的菌种，以及一些难以存活在液体培养基中的微生物。

三、低温保存除了冷冻保存外，低温保存也是常见的菌种保藏方式之一。

在这种方法中，菌种通常被保存在4°C左右的冰箱中，通过控制温度和湿度，延缓菌种的新陈代谢，并保持其生长状态。

这种保存方式不仅适用于微生物的短期保存，也可以用于长期保存对保存温度敏感的微生物。

四、液氮保存液氮保存是一种极低温的保存方式，通过将微生物样品浸没在液氮中进行保存。

这种方法不仅可以有效地防止菌种的新陈代谢和变异，还能够保持菌种的生物特性和遗传信息。

液氮保存适用于需要长期保存的珍贵菌株和难培养的微生物，如土壤中的特殊嗜冷菌和特殊嗜热菌等。

五、冻干保存冻干保存是将微生物样品在冷冻的条件下先冻结，然后通过真空干燥的方式将水分蒸发，最终将样品转变成固态的干燥状态。

这种方法既能保留微生物的生物特性，又能有效地延长样品的保存时间，适用于需要长时间运输和保存的微生物。

总结回顾通过冷冻保存、干燥保存、低温保存、液氮保存和冻干保存等五种菌种保藏方法，可以满足实验室对于微生物样品保存的不同需求。

不同的菌种和实验目的，需要选择合适的保存方式，以确保微生物的品质和可用性。

在进行菌种保存的过程中，需要注意样品的密封性、温度和湿度的控制，以及保存设备的维护和管理。

一种简便的菌种冷冻真空干燥保存法

62 0
中国卫生检验杂志 2000 年 10 月第 10 卷第 5 期 Ch ines e Journ al of Heal t h L aborat ory T echnol ogy 2000. V ol. 10. N o. 5.
率达 98% 。不同菌种的存活情况见下表。对存活的 10 株沙门菌和 9 株志贺菌, 分别做革兰染色、三
Байду номын сангаас
【基层园地】
〔文章编号〕1004- 8685 ( 2000) 05- 0620- 02
固体食品样品的透析法处理
丛伟红苏敬武车燕妮徐莉
( 山东威海市卫生防疫站 264200) 〔中图分类号〕O 657. 704 〔文献标识码〕B
我们研究用透析罐透析法处理固体食品样品, 高效液相色谱法测定糖精纳、苯甲酸、山梨酸, 样品的前处理简单, 不使用有机溶剂, 测定结果令人满意。
糖铁斜面 ( 主要观察乳糖、蔗糖、葡萄糖发酵、产气及硫化氢产生 ) 、靛基质、氰化钾、pH7. 2 尿素、赖氨酸等生化试验, 并用诊断血清测定 O 抗原。19 株菌的形态、生化、O 抗原结构的测定结果, 均同 1981 年测定的结果一致。生物学特性未发生变异。
不同菌种的存活情况
实验要求, 若回收率< 95% 或 > 105% 时, 建议对标准曲线进行修正, 并适当缩小标准曲线范围。
对于一种新的检测方法, 在进行样品加标回收实验前, 建议先进行标准加标回收实验, 以摸清影响回收率的主要因素是由标准曲线本身对比尔定律的偏离或由样品基体效应所造成的。
出版社 1985; 270 2 中华人民共和国国家标准 . 饮用天然矿泉水检验方法 . 甲醛肟分光

微生物实验菌种保藏方案

一、石蜡油低温保藏法本方法的原理是在长好的斜面菌上覆盖灭菌的液体石蜡，达到菌体与空气隔绝，使菌处于生长和代谢停止状态，同时石蜡油还防止水分蒸发，在低温下达到较长期的保藏菌种的目的。

保藏温度要求在-4～4℃下。

液体石蜡法适用于不产孢子的菌种。

具体操作是：菌种为斜面培养菌种，斜面不宜过长；选择纯净优质石蜡油，置三角烧瓶中经过121℃高压蒸汽灭菌1～2h，将其放烘箱中(160℃左右)干热处理，去除灭菌时渗入的水分，待石蜡油变得清澈透明后冷却即可加入斜面，斜面上不能出现气泡，液蜡添加量以高出斜面顶部约1cm为宜。

二、甘油管冷冻保藏法1．试验方法介绍本法也是利用微生物在甘油中生长和代谢受到抑制的原理达到保藏目的。

其方法是，将80%的甘油高压蒸汽灭菌待用。

将培养好的斜面菌种用无菌水制成高浓度的菌悬液(108～1010/ml)。

取1ml灭菌甘油放入与甘油充分混匀，使甘油浓度约为10%-30%，于-70℃下冻存。

-20℃保存时间较短。

或采用体积比为8：2的甘油－生理盐水，加入新鲜培养的菌体肉汤，混合均匀后至-20℃冰箱保存。

2．效果该法适用于一般细菌的保存，同时也适用于链球菌、弧菌、真菌等需特殊方法保存的菌种，适用范围广，操作简便，效果好，无变异现象发生。

甘油－生理盐水保存液保存菌种优于甘油原液，其原因可能是加入生理盐水适当降低了甘油的高渗作用，且有肉汤培养物适量增加保存液的营养成分，从而更好地保护了待保存的菌株。

三、真空冷冻干燥法1．试验原理真空冷冻干燥保藏法是兼具低温、干燥、除氧三方面菌种保藏的主要因素，除不宜于丝状真菌的菌丝体外，对病毒、细菌、放线菌、酵母及丝状菌孢子等各类微生物都适用，不宜用冻干法保存的微生物不到2%。

冷冻干燥法是在低温下快速将细胞冻结，然后在真空条件下干燥，使微生物的生长和酶活动停止。

为了防止在冷冻和水分升华过程中对细胞的损害，要采用保护剂来制备细胞悬液，使菌在冻结和脱水过程中起到保护作用的溶质，通过氢键和离子键对水和细胞所产生的亲和力来稳定细胞成分的构型。

1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。

菌种的保存真空冷冻干
燥法
集团文件版本号：（M928-T898-M248-WU2669-I2896-DQ586-M1988）
菌种的保存：真空冷冻干燥法1准备安培管用于真空冷冻菌种保藏的安培管宜采用中性玻璃制造，形状可用长颈球形底的，亦称泪滴型安培管。