淀粉酶产生菌的筛选学习资料
《发酵工程实验》
《发酵⼯程实验》实验⼀淀粉酶⽣产菌的筛选⼀、实验⽬的学习淀粉酶产⽣菌的筛选⽅法。
⼆、实验原理淀粉酶在酿造、纺织、⾷品加⼯、医药等领域有⼴泛⽤途。
淀粉酶是⼀类淀粉⽔解酶的统称，它能将淀粉⽔解成糊精等⼩分⼦物质并进⼀步⽔解成麦芽糖或葡萄糖，淀粉被⽔解后，遇碘不再变蓝⾊，因此可根据淀粉培养基上透明圈的⼤⼩来判断所选菌株的淀粉酶活⼒。
三、实验⽤品1．样品淀粉含量丰富的⼟样。
2．培养基⾁汤培养基：⽜⾁膏3g，蛋⽩胨10g，NaCl 5g，加⽔⾄1000ml，pH7.0。
121℃灭菌20min。
初筛平板培养基：⽜⾁膏3g，蛋⽩胨10g，NaCl 5g，可溶性淀粉2g，琼脂18g，加⽔⾄1000ml，pH7.4。
121℃灭菌20min。
Lugol碘液：碘1g，碘化钾2g，蒸馏⽔300ml。
先将碘化钾溶解在少量⽔中，再将碘溶解于碘化钾溶液中，待碘全溶后，加⾜⽔即可。
3．器材⾼压蒸汽灭菌锅，超净⼯作台，电⼦天平，电炉，恒温振荡器，恒温培养箱；烧杯，量筒，三⾓瓶，培养⽫，移液管，洗⽿球，试管，试管架，接种针，涂布棒。
四、实验⽅法1．培养基制备：配制⾁汤培养基45ml，分装于250ml三⾓瓶中，纱布封⼝，灭菌。
配制初筛平板培养基350ml，分装于500ml三⾓瓶中，封⼝膜封⼝，灭菌。
2．倒平板：将融化的初筛平板培养基冷却⾄50～60℃，以⽆菌操作法倒⾄已灭菌的培养⽫中，⾄盖满底部。
冷却凝固待⽤。
3．样品预处理：取5g⼟样接⼊45ml⾁汤培养基中，30℃摇床振荡15min制成⼟壤悬液，此时的稀释度为10-1。
另取4⽀试管，分别记作10-2、10-3、10-4、10-5共5个梯度，每⽀试管内加⼊9mL⽆菌⽔。
⽤⽆菌移液管从三⾓瓶中吸取1mL⼟壤悬液，加⼊到10-2试管中混匀，再从此试管中吸取1mL加⼊到10-3试管中，依此类推直⾄10-5试管。
4．平板涂布分离：分别从不同稀释度的试管中吸取0.1ml悬液，均匀涂布于初筛培养基平板上，于30℃培养24～48h。
土壤样品淀粉酶产淀粉酶的筛选与鉴定
土壤样品淀粉酶产淀粉酶的筛选与鉴定
土壤中的淀粉酶主要是由微生物产生的，筛选和鉴定方法如下：
1. 筛选淀粉酶高产微生物。
首先需要从土壤中分离出微生物，然后通过对微生物的单菌培养和筛选，从中选出淀粉酶高产菌株。
2. 鉴定淀粉酶高产微生物。
对于筛选出来的淀粉酶高产菌株，需要通过生理学和生化特征进行鉴定，确定其种属和鉴定相关酶的产生情况。
3. 确定淀粉酶活性。
通过对筛选出来的淀粉酶高产菌株进行淀粉酶活性测试，确定其淀粉酶的活性水平。
4. 优化淀粉酶产酶条件。
针对筛选出来的淀粉酶高产菌株，需要进行酶产条件的优化，包括酸碱度、温度、培养基成分、培养时间等方面。
5. 应用淀粉酶。
将优化后的淀粉酶高产菌株应用于实际生产中，如工业制造、生物学研究等领域。
淀粉酶产生菌的筛选注意事项
淀粉酶产生菌的筛选注意事项淀粉酶是一种重要的酶类，在食品加工、制药和生物技术等领域有着广泛的应用。
而淀粉酶产生菌则是淀粉酶发酵的关键微生物，因此筛选合适的淀粉酶产生菌对于淀粉酶的生产至关重要。
下面将从以下几个方面介绍淀粉酶产生菌的筛选注意事项。
一、筛选前的准备工作1. 确定筛选目标：在进行淀粉酶产生菌筛选之前，需要明确自己所需要的菌株特性，如产量、稳定性、适应性等。
2. 了解基础知识：在筛选之前需要对淀粉酶发酵过程中微生物代谢途径、营养需求等基础知识有一定了解，以便于更好地设计实验方案。
3. 准备培养基：根据所需菌株特性选择合适的培养基，并进行消毒和质量检测。
二、筛选方法选择1. 传统方法：传统方法包括平板法、液体培养法等，这些方法简单易行，但筛选效率较低。
2. 高通量筛选：高通量筛选方法可以同时对大量菌株进行筛选，具有快速、高效的优点，但需要较高的设备和技术要求。
3. 分子生物学方法：分子生物学方法通过扩增和检测目标基因来确定淀粉酶产生菌，具有高灵敏度、高特异性和快速等优点。
三、菌株的来源选择1. 野生菌株：采集自然环境中的微生物进行筛选，可以获得多样性较高的菌株，但需要进行适应性培养和改良。
2. 已知菌株：已知菌株包括文献报道的、已经商业化应用的等，在筛选时可以优先选择这些已知稳定可靠的菌株。
3. 自体分离：自体分离是指从淀粉酶发酵中分离出产酶微生物进行筛选，这种方法具有与发酵过程相适应、稳定性好等特点。
四、实验设计与操作注意事项1. 设计合理实验方案：实验方案需要考虑到微生物营养需求、培养条件等因素，同时需要进行对照实验和重复实验以确保结果的可靠性。
2. 严格控制操作条件：操作过程中需要严格控制温度、pH值、氧气含量等因素，以确保微生物的正常生长和代谢。
3. 合理选择筛选指标：筛选指标需要与淀粉酶产生相关，如淀粉酶活力、淀粉酶产量等。
4. 筛选后的确认和评价：在筛选出淀粉酶产生菌后，需要进行进一步的确认和评价，包括菌株稳定性、代谢途径分析等。
淀粉酶产生菌的筛选
实验一淀粉酶产生菌的筛选及酶活力测定指导老师：辛树权生命科学学院08级生物技术（三）班豆豆同组人：xx xxx摘要：自然界是微生物的大本营，实验室微生物几乎都是从自然界中选育出来的。
我们从学校的花坛中采集一些土壤样本，拿到实验室中，进行淀粉产生菌的筛选。
利用土壤制成菌液，将其涂抹在牛肉膏蛋白胨培养基上进行纯化，再用淀粉培养基培养，最后通过淀粉透明圈的大小来判断淀粉产生菌产淀粉的能力。
再使用分光光度计精确测量淀粉酶的酶活力。
关键词：淀粉酶；分离；纯化；透明圈；酶活力；摇瓶；分光光度计一、实验目的：1、学习从土壤中分离微生物的方法；2、学习淀粉酶产生菌的筛选方法3、了解分光光度计法测定酶活力的原理及方法。
二、实验原理：土壤中含有大量的微生物，将土壤稀释液涂在不同类型的培养基上，在适宜的环境中培养几天，细菌或者是其他的微生物便能在平板上生长繁殖，形成菌落。
将初次筛选得到的微生物接到淀粉培养基上培养，因为只有能够产生淀粉酶的细菌才能够利用培养集中的淀粉成分来完成自身的生命活动，才能够生存。
故在淀粉培养基上长出的菌便是淀粉产生菌。
在培养基上滴碘液，淀粉被分解掉的部分不显现蓝色，出现透明圈，可以通过透明圈的大小来初步判断菌种产淀粉的能力。
淀粉酶是指一类能催化分解淀粉分子中糖苷键的酶的总称，主要包括α－淀粉酶和β-淀粉酶等，α-淀粉酶可从淀粉分子内部切断淀粉的α-1,4糖苷键，形成麦芽糖、含有6个葡萄糖单位的寡糖和带有支链的寡糖，是淀粉的粘度下降，因此又称为液化型淀粉酶。
淀粉遇碘呈蓝色。
这种淀粉-碘复合物在660nm处有较大的吸收峰，可用分光光度计测定。
随着酶的不断分作用，淀粉长链被切断，生成小分子的糊精，使其对碘的蓝色反应逐渐消失，因此可以根据一定时间内蓝色消失的程度为指标来测定α-淀粉酶的活力。
三、实验器材及试剂：1.、材料：长春师范学院家属楼前小菜园2培养基：（1）分离培养基：牛肉膏蛋白胨固体培养基（牛肉膏3g、蛋白胨10g、NaCl 5g、溶于1000mL蒸馏水中，再加入15g琼脂粉，pH调至7.2，121℃灭菌15min，待冷却至50℃左右时，于超净工作台倒平板）（2）筛选培养基：淀粉培养基（可溶性淀粉 20g, 硝酸钾 1g, 磷酸氢二钾 0.5g, 氯化钠 0.5g, 硫酸镁 0.5g, 硫酸亚铁 0.01g, 琼脂 20g, 水 1000毫升，调整pH值到7.2～7.4。
高产淀粉酶菌株筛选
淀粉酶产生菌的富集培养
①样品采集 用无菌锥形瓶，在栽有土豆的菜园里，从不同的采样点采取土样约 15g 。 （注意应采取距地表2-3cm以下的土样） ②制备土壤稀释液 称取土样 l0g ，放入盛 90ml 无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶中，振摇 20min ，使土样与水充分混合，将菌分散，即为稀释 10-1 的土壤悬液。取 1ml土壤悬液加入盛有9ml无菌水的大试管中充分混匀，然后用无菌吸管从 此试管中吸取lml加入另一盛有 9ml无菌水的试管中，混合均匀，以此类推 制成10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6不同稀释度的土壤溶液。 ③涂布平板 取9个筛选培养基，用记号笔在培养皿底部注明稀释度，每种稀释度标记 3 皿，然后用无菌吸管分别由 10-2 、 10-3 、 10-4 、 10-5 、10-6 五 管土壤稀释液中 各吸取0.1ml，小心地滴在对应平板培养基表面中央位置，用无菌涂布棒在 培养基表面轻轻地涂满整个平面，室温下静置5-10min。 ④培养 将平板倒置在37℃温箱中培养48h。
引起污染。
培养基的制备
④加塞 培养基分装完毕，在试管口或三角烧瓶口塞上棉塞，以阻止外界 微生物进入培养基内而造成污染，并保证有良好的通气性能。 ⑤灭菌 121℃，20min ⑥搁置斜面 将灭菌的试管培养基冷至 50℃左右，将试管口端搁置在玻棒或其 它合适高度的器具上，斜面长度以不超过试管总长的一半为宜。 ⑦倒平板 将灭菌后的培养基冷却到55～60℃倒平板。（倒平板的方法是右手
二
原理
土壤是微生物生活的大本营，是寻 找有重要应用潜力的微生物主要的菌源。 因此本实验选择从土壤中分离出淀粉酶 高产的菌种，再进行纯培养。主要运用 富集培养技术，稀释涂布平板法和平板 划线分离法及无菌操作技术获得我们所 需要的产淀粉酶菌种。淀粉酶作用于淀 粉时，打开了淀粉分子的糖苷键，从而 使淀粉失去粘性，同时使其失去了与碘 的显色反应能力，不再与碘结合，从而 形成透明圈。产淀粉酶菌株在选择培养 基上培养后，会水解淀粉形成水解圈， 加碘液染色后，水解圈尤为明显。
生物技术综合实验——淀粉酶产生菌的初步筛选
生物技术综合实验——淀粉酶产生菌的初步筛选一、实验目的学习从自然界中筛选分离淀粉酶产生菌株。
二、实验内容淀粉酶产生菌的筛选和分离。
三、实验原理在筛选培养基平板上，可溶性淀粉被目的菌株产生的淀粉酶水解，形成透明圈。
不同种类的微生物产生的淀粉酶的种类和活力各不相同，对可溶性淀粉的水解能力各不相同，所形成的水解圈与菌落大小比值故而不同，因而根据其比值可初步断定其对可溶性淀粉的水解能力。
许多细菌和霉菌产生淀粉酶，特别是一些芽孢杆菌，因此，本实验将土壤样品加热处理后，将其接种到筛选培养基平板进行培养，根据平板的水解圈做初筛，从中筛选出产淀粉酶活性较好的菌株进行保藏。
四、实验材料和用具1、材料：土壤样品2、试剂：牛肉膏蛋白胨筛选培养基平板（含可溶性淀粉1%）、45mL无菌水瓶3、仪器及用具：恒温培养箱、超净工作台、高压蒸汽灭菌锅、摇床、酒精灯、牙签、移液枪、试管、涂布器、量筒等。
五、操作步骤（一）准备材料1、筛选固体培养基：在牛肉膏蛋白胨培养基中加入可溶性淀粉（1%），配制600mL，制备30个平板。
2、含45mL水的三角瓶5瓶，200ul枪头及枪头盒3盒，牙签3瓶，涂布器3包，灭菌处理。
（二）菌种分离1、土壤采集选取采集地点地表植被根系周围的土壤，首先去除地表浮土，然后挖取2-5cm深的土壤样品，每个样品约取20g土壤，装入塑料袋内，备用。
2、制备菌悬液取5g土壤样品置于含45ml无菌水的三角瓶中，用振荡器震荡10分钟，在90度水浴锅中处理15分钟。
3、涂布平板培养与分离吸取100ul悬浮液，用涂布器涂布于筛选培养基平板，待液体充分被吸收后，置于37℃培养箱中培养48h。
每组做2个平板。
（三）菌种初步筛选在平板中加入少量卢戈氏碘液，观察菌落形成透明水解圈情况，用无菌牙签挑取产水解圈的菌落，转接到新的筛选培养基中，每个平板上接种16个菌种，每组接种2个平板，置于37℃培养24h。
在平板内加入卢戈氏碘液，根据单菌落透明圈直径与菌落直径比值(H/C)大小进行初筛，选择水解圈直径与菌落直径比值大的菌株，从中选取淀粉酶活力相对较高的菌株。
实验一 淀粉酶产生菌的筛选
实验一淀粉酶产生菌的筛选一、实验要求：1、写出完整的分离纯化淀粉酶产生菌的实验步骤；2、写出分离培养基及其相关试剂所需的量、仪器、器皿所需的量；3、掌握从土壤分离酵母菌的方法和技术，从样品中分离出所需菌株；4、学习并掌握平板倾注法和斜面接种技术，了解培养淀粉酶产生菌的培养条件和培养时间。
二、实验原理：用梯度稀释法来分离淀粉酶产生菌三、实验材料：1.培养皿、移液管、刮铲、显微镜等,2.可选取厨房土壤、面粉加工厂和菜园土壤 ;3.培养基与试剂 :牛肉膏、蛋白胨、NaCl 、可溶性淀粉、蒸馏水、琼脂粉。
四、实验步骤：1、选定采土点后，铲去表土层2-3cm，取3-10cm深层土壤5g，装入灭过菌的牛皮纸袋内，封好袋口，并记录取样地点、环境及日期。
土样采集后应及时分离，凡不能立即分离的样品，应保存在低温、干燥条件下，尽量减少其中菌相的变化。
2、培养基的配置，(1)分离培养基采用牛肉膏蛋白胨固体培养基加0.2%可溶性淀粉即牛肉膏3g、蛋白胨10g、NaCl 5g、可溶性淀粉2g溶于1000mL蒸馏水中再加入15g琼脂粉pH调至7.2121℃灭菌15min待冷却至50℃左右时于超净工作台倒平板。
注:先将可溶性淀粉加少量蒸馏水调成糊状再加到溶化好的培养基中调匀; (2)分离培养基液体培养基采用牛肉膏蛋白胨固体培养基加0.2%可溶性淀粉,即牛肉膏3g、蛋白胨10g、NaCl 5g、可溶性淀粉2g溶于1000mL蒸馏水中 pH调至7.2,121℃灭菌15min。
3、取所采的土样5g加入到三角瓶中,加入无菌水45mL,30℃摇床振荡30min制成土壤悬液,此时的稀释度为10-1。
另取7支试管分别记作10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7、10-8共8个梯度每支试管内加入9mL无菌水。
用无菌移液管从三角瓶中吸取1mL土壤悬液加入到10-2试管中混匀,再从此试管中吸取1mL加入到10-2试管中,依此类推直至10-7试管。
淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶的产生菌株筛选
1.淀粉酶产生菌的分离与纯化实验原理淀粉是由葡萄糖通过α-1，4糖苷键构成的直链淀粉和α-1，6位有分支的支链淀粉组成的。
按照水解淀粉方式的不同，主要的淀粉酶可分为α-淀粉酶、β-淀粉酶、葡萄糖淀粉酶和解枝酶（或异淀粉酶）4大类。
产淀粉酶的微生物有细菌、霉菌和酵母菌等。
利用淀粉遇碘液变为蓝色的特性，将分离的芽孢杆菌（或其他微生物）接种在含有淀粉的固体培养基表面进行培养，利用滴加碘液后菌落周围出现的透明圈判断该菌是否产生淀粉酶及初步判断淀粉酶活力的高低。
实验材料和用具土壤样品或其他富含淀粉质的样品、牛肉膏蛋白胨培养基平板、淀粉培养基平板、无菌水（带玻璃珠）、芽孢染色液；显微镜、恒温水浴锅、酒精灯、接种针、游标卡尺、无菌移液管、无菌试管、量筒等操作步骤分离1）采集土壤样品，用无菌水制备1：10土壤悬液；2）取1：10土壤悬液5 ml，注入已灭过菌的试管中，将此试管放入75-80 ℃水浴中热处理10min，以杀死非芽孢细菌；3）取加热处理过的土壤悬液100-200 μL，涂布接种到牛肉膏蛋白胨培养基平板，将平板倒置，于30-32 ℃培养24-48 h；4）对长出的单菌落进行编号，选择表面干燥、粗糙、不透明的菌落，挑取少许菌苔涂片，做芽孢染色，判断是否为芽孢杆菌。
筛选1）从判定为芽孢杆菌的菌落处，分别挑取少许菌苔，先接种淀粉斜面培养基，再转接淀粉培养基平板，30-32 ℃培养24-48 h。
在平板上滴加稀碘液（或卢戈氏碘液）后测定水解圈直径与菌苔直径的比值。
2）水解圈大的那个菌株对应的斜面培养物，可作为进行诱变选育或酶发酵、酶活力测定菌株。
注意事项1）土壤悬液加热处理的温度和时间应准确控制。
2）点接淀粉培养基平板时，接种量及接种面积要基本相同。
2. 蛋白酶产生菌的分离与纯化实验原理许多细菌和霉菌产生蛋白酶，细菌中的芽孢杆菌是常见的蛋白酶产生菌。
本实验将土壤样品（或其他样品）悬液加热处理，杀死非芽孢细菌及其他微生物后进行划线分离得到芽孢杆菌，将其接种到酪蛋白平板进行培养，根据酪蛋白平板的水解圈作初筛。
实验土壤中产淀粉酶菌株的筛选
实验1-5 产淀粉酶菌株的筛选及诱变系列实验
实验需知
实验分组：2个实验室，每个实验室分6组（名 单上报），每次实验结束留1组同学值日
实验成绩：占期末总成绩的20%，包括实验出 勤、实验操作、实验结果及实验报告撰写
实验结束：将实验用品收拾整齐，由实验老师 确认实验结束后方可离开
7. 产淀粉酶菌株的增殖培养
液体培养基分装：10ml/瓶，每个菌株对应1瓶（ 每组1-2瓶，参考鉴定结果）
液体培养基接种：用接种环从固体培养基表面上 沾取少许菌苔，将接种环在液体培养基内振摇几 次即可。
做好标记，放入摇床中振荡培养24h。
8. 产淀粉酶菌株的纯化——平板划线法
灼烧接种环，冷却后用接种环挑取少量菌苔 左手持平皿，将皿盖打开一条缝隙，右手将接种
稀释
1ml 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml
1g
10ml 10-1
9ml 9ml 9ml 9ml 9ml 9ml
10-2 10-3 10-4 10-5 10-6 10-7
分离
Hale Waihona Puke 实验步骤5.各组做好标记，置于30 ℃恒温培养48 h （倒置培养？？）
6. 产淀粉酶菌株的鉴定（下次课）
6. 产淀粉酶菌株的鉴定
实验结束后请各组同学务必与实验老师处签到后方 可离开，否则记为缺勤
最后一组同学使用完超净台后，需将台内废液、使 用过的枪头等清理干净，移液枪调回最大量程，并 用酒精棉球将台面擦拭干净后，打开紫外灯照射。
希望提出指导与建议
霉菌菌落特点
大而疏松，呈绒毛状（曲霉）、絮状（毛霉） 、地毯状（青霉）或蜘蛛网状（根霉）
有的无固定大小，延至整个培养基中 产色素，使菌落显色
细菌α淀粉酶产生菌种筛选
1、采样：即采集含菌的样品
1）研究所筛选的微生物得可能分布区域。 2）土壤是微生物的大本营，所以一般采集土样。 3）土壤中，数量上细菌>放线菌>霉菌>酵母菌。 4) 不同区域的土壤含有相应的优势微生物。例如
树林腐土和朽木中纤维素分解菌较多；面粉厂附 近、栽种淀粉质作物土壤中淀粉的分解菌较多； 果实、树叶表面酵母菌较多；蔬菜、牛奶中乳酸 菌较多；油田、炼油厂附近的土壤中石油分解菌 较多等。
2、培养基
1）分离培养基（w/v）：蛋白胨 1%；NaCl 0.5%；牛肉膏 0.5%；可溶性淀粉 0.2%；琼脂1.5%；pH7.2；水定容。 注：先将可溶性淀粉加少量蒸馏水调成糊状，再加到 溶化好的培养基中，调匀。
2）肉膏蛋白胨培养基（w/v）：肉膏蛋白胨培养基：牛 肉膏0.3%，蛋白胨1%，NaCl 0.5%，琼脂1.5%, pH7.07.2
最常用的分离方法是稀释分离法。
4、性能测定
分离得到纯种只是选种工作的第一 步。所分离的纯种是否具有生产上要求 的优良性能，还必须进行性能测定，根 据性能高低进行取舍。
性能测定的方法
1）初筛：一般在培养皿上根据选择性培养基 的原理进行。 例如要筛选淀粉酶产生菌，可以在稀释 分离时使用选择培养基——含淀粉的培养基， 经培养后通过测定透明圈与菌落直径的比 值来衡量淀粉酶活力的高低。
五．实验报告
总结整个分离筛选过程，写出筛 选结果并对筛选结果进行分析。
六. 实验时间安排
周一：配制培养基并灭菌、配制试剂；稀 释分离，37℃培养24h。
周二：碘液检查，挑取透明圈直径：菌落 直径比值大的单菌落，平板划线，37℃ 培养24h。
周三：挑取单菌落接斜面培养基。 周四：接麸曲培养基，37℃培养24h。 周五：测定酶活。
产淀粉酶菌株的筛选实验报告
产淀粉酶菌株的筛选实验报告一、实验背景淀粉酶是一种常见的酶，广泛存在于微生物和植物中。
淀粉酶能够水解淀粉分子，将其分解成糖类分子，如葡萄糖、麦芽糖等。
淀粉酶广泛应用于食品、医药、环保等领域中。
制备高效的产淀粉酶菌株，对实现产业化生产具有重要意义。
二、实验目的通过筛选不同菌株的淀粉酶产量，选出产淀粉酶效果较好的菌株，为后续工业化生产提供依据。
三、实验步骤及方法1. 菌株的选取本实验选取了3株常见的淀粉酶产生菌株，分别为Bacillus subtilis、Aspergillus niger、Trichoderma reesei。
2. 菌株的培养将3株菌株接种到琼脂培养基中，经过静置培养后，选取菌落较为圆润、生长状态良好的菌落，移植至含有淀粉质的液体培养基中，进行淀粉酶产量的筛选实验。
3.淀粉酶活性的测定分别取3组接种液，以葡萄糖和淀粉为基质，分别加入菌液，进行淀粉酶活性测定。
具体步骤如下：(1)准备含1%淀粉质的液体培养基和0.5%葡萄糖液体培养基。
(2)将接种液投入含1%淀粉质的液体培养基中，加入0.1mol/L乙酸钠溶液，pH为5.6，放置于37℃水浴中反应30min，加入 1%伊红色溶液备用。
(3)将接种液投入含0.5%葡萄糖的液体培养基中，加入0.1mol/L乙酸钠溶液，pH为5.6，放置于37℃水浴中反应30min，加入1%伊红色溶液备用。
(4)通过比较加入菌液前后溶液颜色的深浅，计算出淀粉酶的酶活力。
4. 结果记录及分析根据上述实验步骤，在不同的液体培养基中测定了3株菌株的淀粉酶活性，并记录结果如下表所示：表1.不同菌株的淀粉酶活性| 菌株名称 | 淀粉酶酶活力 || ------------------ | --------------- || Bacillus subtilis | 0.19 U/mL || Aspergillus niger | 0.21 U/mL || Trichoderma reesei | 0.23 U/mL |根据上表结果可以看出，3株菌株在淀粉酶产量方面的效果有所不同。
产淀粉酶菌株的筛选原理
产淀粉酶菌株的筛选原理
嘿，朋友们！今天咱就来讲讲产淀粉酶菌株的筛选原理。
你想啊，淀粉酶就像是一把神奇的钥匙，能把淀粉这个大城堡给打开。
那产淀粉酶的菌株呢，就是能制造出这把钥匙的小能手啦！
咱为啥要筛选它们呀？这就好比你要找一个特别会做饭的厨师，你得从一堆人里把他挑出来不是？产淀粉酶菌株能帮我们干很多大事呢！比如在工业生产中，让淀粉更快地变成我们需要的东西。
那怎么筛选呢？这就有点像找宝藏啦！我们得设置一些关卡，让那些有本事的菌株能脱颖而出。
首先呢，我们得有个含有淀粉的环境，就像给它们准备一个满是美食的厨房。
然后呢，把各种各样的菌株都放进去，让它们在里面竞争。
这时候，那些能产生淀粉酶的菌株就开始大显身手啦！它们会把淀粉分解掉，就好像它们找到了打开美食大门的钥匙。
那我们怎么知道哪些菌株做到了呢？嘿嘿，这就有很多办法啦。
比如说，我们可以用一些特殊的试剂，一遇到被分解的淀粉就会变色，哇，那可就一目了然啦！这不就像在一堆人里，一下子就看到了那个最会做饭的厨师嘛！
你说这神奇不神奇？产淀粉酶的菌株就这么被我们给找出来啦！它们就像是一群小小的超级英雄，能帮我们解决很多大问题呢！它们能让淀粉变得更有用，能让我们的生活变得更美好。
想象一下，如果没有这些产淀粉酶的菌株，我们的很多生产过程得变得多麻烦呀！所以说呀，筛选它们可真是太重要啦！我们得好好对待这些小家伙，让它们发挥出最大的作用。
总之呢，产淀粉酶菌株的筛选原理就像是一场有趣的游戏，我们要找到那些最厉害的小家伙，让它们为我们服务。
这就是科学的魅力呀，能让我们发现这么多神奇的东西，然后利用它们让我们的生活变得更加丰富多彩！怎么样，是不是很有意思呀？。
淀粉酶产生菌株细菌的分离纯化及检测
1%豆粕粉浸出液的制备
称取1%豆粕粉，加入适量水； 加热煮沸20min，过滤后定溶至1Hale Waihona Puke 的体 积备用； 加热过程注意补水。
实验中器材的准备（需要包扎灭菌）
1ml无菌吸管 6支 99ml无菌水 1瓶（带玻珠，装于 250ml三角瓶中） 9ml无菌水 4支（装于18×180mm试 管） 不锈钢涂布器 3支
实验步骤及安排
今天完成稀释平板分离培养——倒平板、 样品稀释、加样、涂布、恒温倒置培养 （37℃ 48hr）； 2天后晚上，挑菌保存，点植平板培养 24hr； 点植后24hr内检测淀粉酶产生量——测量 平板上透明圈、菌落直径，并计算出比值。
实验结果
记录稀释平板分离的结果——细菌数、产 淀粉的菌数及所点比例； 记录点植结果——挑取菌株编号、透明圈 直径、菌落直径，并计算出透明圈、菌落 直径比； 根据以上结果完成实验报告； 确定相关菌株（5~10株）保存好，准备 进行下周摇瓶初筛试验。
目的要求
了解利用选择培养基进行α-淀粉酶产生菌 株分离的要求。 掌握α-淀粉酶产生菌株相关分离纯化的方 法步骤——稀释平板菌落分离、挑菌保存、 平板点植、观察测定透明圈等。 学习在平板上进行α-淀粉酶产生菌株的检 测及产酶高低的判断。
平板分离用选择培养基
可溶性淀粉 10g； 1%豆粕粉浸出液 1000mL； Na2HPO4 .12H2O 2g； （NH4）2SO4 1g； CaCl2 0.5g； KCl 0.15g； 琼脂 20g pH 7.0~7.6 121.3℃灭菌20分钟
淀粉酶产生菌的筛选
实验1 淀粉酶产生菌（细菌）的筛选一、实验目的掌握完整的分离纯化淀粉酶产生菌的方法和技术二、基本原理土壤中含有大量的微生物，将土壤稀释液涂在不同类型的培养基上，在适宜的环境中培养几天，细菌或者是其他的微生物便能在平板上生长繁殖，形成菌落。
将初次筛选得到的微生物接到淀粉培养基上培养，因为只有能够产生淀粉酶的细菌才能够利用培养集中的淀粉成分来完成自身的生命活动，才能够生存。
故在淀粉培养基上长出的菌便是淀粉产生菌。
在培养基上滴碘液，淀粉被分解掉的部分不显现蓝色，出现透明圈，可以通过透明圈的大小来初步判断菌种产淀粉的能力。
三、材料与器材1、菌源校园土样2、培养基：淀粉培养基：蛋白胨10g，NaCl 5g，牛肉膏5g，可溶性淀粉2g，蒸馏水1000ml，琼脂15~20g，121℃高压灭菌锅灭菌20 min，待冷却至50℃左右时，于超净工作台倒摇瓶若干。
3、器材培养皿若干个、1ml移液管1根、刮铲1把、锥形瓶若干个、高压灭菌锅、超净工作台、试管若干、摇床四、实验步骤1、选定采土点后，铲去表土层2-3cm，取3-10cm深层土壤10g，装入灭过菌的牛皮纸袋内，封好袋口，并记录取样地点、环境及日期。
土样采集后应及时分离，凡不能立即分离的样品，应保存在低温、干燥条件下，尽量减少其中菌相的变化。
2、称取土样10g，放入盛有90mL蒸馏水并带有玻璃珠的锥形瓶中，振摇约20分钟，使土样与水充分混合，将细胞分散。
3、初筛：用一支1mL移液管从中吸取0.1mL土壤悬液加入盛有淀粉培养基的培养皿中，重复两次。
后置于培养箱中培养。
检测：培养出菌落后向培养皿均匀的喷洒碘液，有明显的透明圈的菌落即为活性较高的淀粉酶产生菌。
4、复筛：选取步骤3活性较高的淀粉酶产生菌菌落移植进盛有淀粉培养基的摇瓶中，放于摇床中培养。
测定：把所有摇瓶中的菌株发酵液用琼脂平板法测定一遍（同步重复2~3块板），将其中活性圈大而清晰的菌株发酵液进一步采用精确检测法测定，选出较优良的菌株2~3株，并移植进斜面中培养。
产淀粉酶菌株的筛选及生理生化鉴定
吉林化工学院环境与生物工程学院微生物学实验报告产淀粉酶菌株的筛选及生理生化鉴定学生学号：10350135学生姓名：郭金洋专业班级：生技1001指导教师：谢莹吉林化工学院Jilin Institute of Chemical Technology产淀粉酶菌株的筛选及生理生化鉴定姜建平，荣荣，赵永红，赵楠，郭金洋摘要：目的：筛选产淀粉酶菌株。
方法：利用碘液显色法，从土壤中筛选产淀粉酶菌株；通过菌落形态、菌体特征观察和生理生化鉴定对菌种进行鉴定。
关键词：产淀粉酶菌株，鉴定生理生化性1前言淀粉酶是水解淀粉和糖原的酶类的总称，广泛存在于动植物和微生物中，是最早实现工业生产并且迄今为止用途最广、产量最大的酶制剂品种【1】淀粉酶种类繁多，特点各异，可应用于造纸、印染、酿造、果汁、和食品加工、医药、洗涤剂、工业副产品及废料的处理、青贮饲料及微生态制剂等多种领域【2】本实验以土壤为原料，从中筛选出具有产淀粉酶能力的菌株，并对其进行生理生化鉴定，了解并熟悉淀粉酶的筛选及鉴定2材料与药品2.1材料取自学校周围的蛋糕坊附近的土壤，高压灭菌锅，移液管，试管，三角瓶，培养皿，牙签，载玻片，接种针，电炉子2.2药品牛肉膏，蛋白胨，淀粉，琼脂，硫酸铵， K2HPO4， MgSO4·7H2O， CaCl2·2H2O，蔗糖，蒸馏水， NaCl ，硝酸氢二钾，葡萄糖， 0.04%溴甲酚紫，碘液。
3 实验方法3.1 培养基的配制3.1.1.淀粉培养基3.1.1.1淀粉培养基配方牛肉膏 0.3g 蛋白胨1g NaCl 0.5g 淀粉 1% 琼脂1.5g 蒸馏水100ml PH=7.2----7.43.1.1.2淀粉培养基配制方法1）称取按照配方称取牛肉膏、蛋白胨、氯化钠，加入蒸馏水溶于小烧杯中，若有不融物，可加热溶解。
2）称取淀粉于小烧杯中，加入蒸馏水煮沸溶解，直至澄清透明。
倒入上述烧杯中。
3）定容4）在三角瓶中加入琼脂，将定容后的溶液倒入三角瓶，调节PH值。
a-淀粉酶产菌株筛选实验
a-淀粉酶高产菌株的分离鉴定及固定化枯草芽孢杆菌是革兰氏阳性细菌，是a-淀粉酶高产菌株之一，其菌落表面粗糙不透明，污白色或微黄色，在液体培养基中生长时，常形成皱醭。
需氧菌。
可利用蛋白质、多种糖及淀粉，在遗传学研究中应用广泛。
其芽孢0.6～0.9×1.0～1.5微米，椭圆到柱状，位于菌体中央或稍偏，芽孢形成后菌体不膨大。
广泛分布在土壤及腐败的有机物中，易在枯草浸汁中繁殖，故名。
广泛生长在中性的的含淀粉多的环境中，如富含淀粉的面粉厂、土壤等。
淀粉酶是一种用途极为广泛的生物催化剂，可应用于面包制作业、淀粉的糖化和液化、纺织品脱浆、造纸、清洁剂工业、化学、临床医学的分析和制药业等。
淀粉酶家族包括α- 淀粉酶、β- 淀粉酶和葡萄糖淀粉酶。
α-淀粉酶为内切酶，以无规则的方式切开淀粉分子内部的α- 1，4 糖苷键，而使淀粉生成糊精和低聚糖，是一种钙离子依赖性酶。
β- 淀粉酶从非还原性末端顺次切下麦芽糖，为外切酶。
葡萄糖淀粉酶是一种作用于α- 1，4 糖苷键的外切酶，从非还原糖末端切下葡萄糖分子。
a-淀粉酶是一种胞外酶，由于酶纯化等操作往往导致酶活性和稳定性都受影响，而利用细胞固定化可以很好的解决这一问题，其中α -淀粉酶的固定化交联法是目前比较理想的方法。
另可尝试探索用一定浓度的凝胶包埋枯草芽孢菌或用吸附法、交联法将枯草芽孢杆菌固定化，使菌体不能流动而酶可以存在反应液里。
凝胶柱底部可选用一定大小的半透膜使酶和淀粉不能流出反应凝胶柱，而产物可以流出。
【实验一】一、a-淀粉酶生产菌种的分离与培养、筛选二、【实验原理】大多数枯草芽孢杆菌好氧，最适生长温度为32℃,PH为7.2，转速为140r/min，接种量为9％，芽孢率生长最适温度36℃，最适PH为7.2，最适转速120r/min。
在以淀粉为碳源的固体培养基上用划线法分离纯化出产a-淀粉酶的菌株，根据是否可产生透明圈来筛选。
透明圈越大，产酶能力越强。
三、【实验仪器和材料】1、试剂：0.1%吕氏(Loeffier)美蓝染液配制方法：A 液：美蓝(methylene blue, 又名甲烯蓝)0.3 g, 95%乙醇30 ml；B 液：0.0l% KOH l00ml。
土壤中产淀粉酶菌株的筛选
土壤中淀粉酶产生菌的筛选分离一、实验目的♦学习和掌握从土壤中分离微生物的技术♦掌握产淀粉酶菌株的初筛方法二、实验原理淀粉酶能水解淀粉生成葡萄糖、麦芽糖、糊精等糖类物质，淀粉酶菌株是工业酶制剂生产的重要菌种。
利用淀粉酶菌产生淀粉水解酶的特性，可以选择可溶性淀粉为主要营养成分的分离培养基，因为菌株分泌的淀粉酶可以将可溶性淀粉水解而在菌落周围形成透明圈。
根据透明圈直径和菌落直径之比值可以初步确定酶活力，其比值越大，酶活力越高。
三、实验材料（1）样品从地表下10—15cm的土壤中用无菌小铲取土样，记录取样的地点、时间和周围环境。
（2）培养基淀粉培养基（牛肉膏0.5%，蛋白胨0.5%，Nacl0.5%，可溶性淀粉1%，kH2PO40.05g,,MgSO40.01g, CaCl20.05g，琼脂2%，PH6.0，配制时先用少量水将淀粉调成糊状，加热，边搅拌边加入剩余的水和其它成分。
）（3）其它碘液（0.02mol）、培养皿、试管、温度计、水浴锅、吸管、涂布棒等四、方法与步骤1、取样取土样平摊于干净的纸上，从四个角和中央各取一点土，混合均匀，称5克，置于有玻璃珠的45ml无菌水中，振荡约5-10分钟，制成10-1土壤稀释液。
2、涂布分离（1）以10倍稀释法稀释至10-4,10-5,10-6，每个稀释度各取0.1ml于淀粉平板培养基中，每个稀释度倒两个平皿。
（2）涂布：用无菌涂布棒均匀涂布，在平板上标记记号，倒置于30℃培养箱中培养24-48小时。
（3）挑菌落：观察菌落周围是否出现透明圈(可用碘液滴加在菌落周围)，挑取比值大的菌落接入斜面培养基，30℃培养24小时，备用。
（4）纯种鉴定菌种经革兰氏染色，油镜观察，根据细胞形态及菌落特征进行鉴定。
（5）纯化将选定的菌株于淀粉培养基上采用平板划线分离法进行纯化。
五、结果与讨论挑取3-5株菌落，绘制和描写菌株的形态，计算比值d H/d C。
实验 产淀粉酶菌株的筛选
六、结果分析
从不同地点获得的结果为什么会出现差1.为什么要用淀粉作为碳源？ 2.为什么要及时观察实验结果，否则会有什么样的后 果？
3.为什么同一个土样要稀释不同梯度进行涂平板？
当能合成淀粉酶的微生物在固体培养基中生长时，会将淀粉
酶分泌到菌体周围，使菌落周围的淀粉水解成为小分子量的 糊精、聚糖和单糖。
在用碘显色时，在菌体周围形成透明圈。
三、实验材料及仪器
实验材料：
实验仪器： 牛皮纸
蛋白胨
牛肉膏
培养皿
试管
NaCl
琼脂 可溶性淀粉 碘液
四、实验步骤
3. 土样的采集
（1）每一小组不同环境取土样并记录当时取样环境情况。
（2）以小组为单位进行稀释分离：
取土样 1g，加入 9mL无菌水，逐步稀释至105、106、107 ，每个梯度涂2个平皿。
（3）30℃恒温培养48 h。
图示：梯度稀释法分离微生物
四、实验步骤
（4）产淀粉酶菌株的鉴定。
涂布棒
恒温培养箱
玻璃珠
四、实验步骤
1.筛选培养基的配制
可溶性淀粉 2g，NaCl 5g，牛肉膏 5g，蛋白胨 10g，琼脂
20g，水1000mL。
2.碘液的配制 称取 KI 2g，用50 mL去离子水溶解，迅速称量I2 0.5g并加 入KI溶液中，用纯水定容到100mL，搅拌溶解后保存在棕色 瓶中，橡皮塞封口。
1实验一实验一产淀粉酶菌株的筛选产淀粉酶菌株的筛选一实验目的一实验目的n从土壤中筛选一株能够合成分泌淀粉酶的微生物二实验原理二实验原理n自然界中有些微生物能够以淀粉作为碳源进行生长繁殖
产淀粉酶的芽孢杆菌筛选
实验材料 玻璃器 皿`
烧杯（500ml） 锥形瓶（250ml）
培养皿 涂布棒 移液枪
试管
其他设备及仪 器`
超净 工作台、生化培养箱、高压蒸 汽灭菌锅、水浴锅、培养接种器具，
等
实验原理
一
Hale Waihona Puke 二三产淀粉酶的芽 孢杆菌含量在 不同土壤中含 量也不同，实 验前进行预埋 工作，能使土 壤中产淀粉酶 的细菌含量增 加。待实验前 取样即可
产淀粉酶的芽孢杆菌筛选
实验目的
学习掌握从环境中分离产淀粉酶菌株以及 菌株初步鉴定的方法
目的
获得产淀粉酶的菌株并对其进行初步的鉴 定
培养综合利用微生物学、生物化学等相关 知识，自行设计、实施并判断实验结果的 能力
巩固微生物分离纯化、细菌保藏等技能， 对所学习过的微生物学实验方法进行综合 技能训练
实验材料
鉴定
1、将单菌落点种落接到淀粉平板上纯培养，在37摄氏 度培养2天。
2、在培养后的平板上滴加碘液，用直尺测量透明圈 的大小。
在只用淀粉 充当碳源的 选择培养基 中，只有能 产生淀粉酶 利用淀粉的 菌体能成为 优势菌种， 从而得到富 集
细菌富集一 段时间后， 生长环境不 利，会产生 芽孢，再在 80-90 温度 下杀死菌体 ，可使芽孢 得到富集
五
在已确定的芽 孢杆菌情况下 ，在菌落处滴 加碘夜来观察 透明圈情况。
配无菌水，并将其分装 到7个试管中,每只9ml 。（7个管）
试验样 品处` 理
实验前选取淀粉密集的地方（面粉厂附近）取样品土壤， 用塑料袋将样品保存好，留做实验之用。
培养` 基
1、富集培养基： 10g的可溶性淀粉，蛋白胨10g， 酵母膏 3g/L、Nacl 2g、
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淀粉酶产生菌的筛选
实验1 淀粉酶产生菌（细菌）的筛选
一、实验目的
掌握完整的分离纯化淀粉酶产生菌的方法和技术
二、基本原理
土壤中含有大量的微生物，将土壤稀释液涂在不同类型的培养基上，在适宜的环境中培养几天，细菌或者是其他的微生物便能在平板上生长繁殖，形成菌落。
将初次筛选得到的微生物接到淀粉培养基上培养，因为只有能够产生淀粉酶的细菌才能够利用培养集中的淀粉成分来完成自身的生命活动，才能够生存。
故在淀粉培养基上长出的菌便是淀粉产生菌。
在培养基上滴碘液，淀粉被分解掉的部分不显现蓝色，出现透明圈，可以通过透明圈的大小来初步判断菌种产淀粉的能力。
三、材料与器材
1、菌源
校园土样
2、培养基：
淀粉培养基：蛋白胨 10g，NaCl 5g，牛肉膏 5g，可溶性淀粉 2g，蒸馏水1000ml，琼脂 15~20g，121℃高压灭菌锅灭菌 20 min，待冷却至50℃左右时，于超净工作台倒摇瓶若干。
3、器材
培养皿若干个、1ml移液管1根、刮铲 1把、锥形瓶若干个、高压灭菌锅、超净工作台、试管若干、摇床
四、实验步骤
1、选定采土点后，铲去表土层2-3cm，取3-10cm深层土壤10g，装入灭过菌的牛皮纸袋内，封好袋口，并记录取样地点、环境及日期。
土样采集后应及时分离，凡不能立即分离的样品，应保存在低温、干燥条件下，尽量减少其中菌相的变化。
2、称取土样10g，放入盛有90mL蒸馏水并带有玻璃珠的锥形瓶中，振摇约20分钟，使土样与水充分混合，将细胞分散。
3、初筛：用一支1mL移液管从中吸取0.1mL土壤悬液加入盛有淀粉培养基的培养皿中，重复两次。
后置于培养箱中培养。
检测：培养出菌落后向培养皿均匀的喷洒碘液，有明显的透明圈的菌落即为活性较高的淀粉酶产生菌。
4、复筛：选取步骤3活性较高的淀粉酶产生菌菌落移植进盛有淀粉培养基的摇瓶中，放于摇床中培养。
测定：把所有摇瓶中的菌株发酵液用琼脂平板法测定一遍（同步重复2~3块板），将其中活性圈大而清晰的菌株发酵液进一步采用精确检测法测定，选出较优良的菌株2~3株，并移植进斜面中培养。
五、实验结果。