干扰素53406 PPT课件
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干扰素治疗慢性乙型肝炎专家建议PPT课件
素对试验结果的影响。
给药方案和剂量
总结词：规范给药
VS
详细描述：应制定合理的给药方案 和剂量，包括治疗周期、给药频率 、药物剂量等，以确保药物疗效的 充分发挥，同时注意观察不良反应 的发生。
疗效评估指标
总结词：客观评估
详细描述：疗效评估应采用具有科学性和可 靠性的指标，如病毒载量下降幅度、肝功能 改善程度、不良反应发生率等，以客观评估
优化治疗方案和药物使用
通过简化治疗方案、优化药物使用和减少不良反应等措施，提高患者的依从 性和治疗效果。
THANKS
HBeAg血清转换率及持续时间
HBsAg水平下降及转阴率
02
干扰素治疗慢性乙型肝炎的专家建议
干扰素治疗慢性乙型肝炎的适应症
病毒复制活跃，HBVDNA阳性 ；
肝功能异常，ALT水平持续升高 或正常但有组织学证据显示肝
脏有炎症或纤维化；
有抗病毒治疗指征，如患者年 龄＞30岁，转氨酶水平正常但 肝组织病理学检查有中度炎症
老年患者往往具有更高的药物代 谢和分布体积
禁忌症需注意
儿童和青少年
总结词：根据情况， 慎重考虑
长期治疗，可能影响 生长发育
感染乙肝病毒可能影 响疫苗接种
青少年患者往往存在 抑郁等心理问题
治疗过程中需注意乙 肝病毒清除情况
妊娠和哺乳期妇女
妊娠期前3个月慎用
分娩后可继续治疗，但需要注意 新生儿乙肝疫苗接种情况
详细描述
过敏反应是干扰素治疗的少见不良反应之一，一旦出现 应立即停药并给予相应的治疗，如抗过敏药物、激素等 。对于严重的过敏反应，如过敏性休克，应立即给予紧 急抢救。ຫໍສະໝຸດ 04特殊人群的治疗建议
老年患者
建议在充分知情同意的情况下使 用
给药方案和剂量
总结词：规范给药
VS
详细描述：应制定合理的给药方案 和剂量，包括治疗周期、给药频率 、药物剂量等，以确保药物疗效的 充分发挥，同时注意观察不良反应 的发生。
疗效评估指标
总结词：客观评估
详细描述：疗效评估应采用具有科学性和可 靠性的指标，如病毒载量下降幅度、肝功能 改善程度、不良反应发生率等，以客观评估
优化治疗方案和药物使用
通过简化治疗方案、优化药物使用和减少不良反应等措施，提高患者的依从 性和治疗效果。
THANKS
HBeAg血清转换率及持续时间
HBsAg水平下降及转阴率
02
干扰素治疗慢性乙型肝炎的专家建议
干扰素治疗慢性乙型肝炎的适应症
病毒复制活跃，HBVDNA阳性 ；
肝功能异常，ALT水平持续升高 或正常但有组织学证据显示肝
脏有炎症或纤维化；
有抗病毒治疗指征，如患者年 龄＞30岁，转氨酶水平正常但 肝组织病理学检查有中度炎症
老年患者往往具有更高的药物代 谢和分布体积
禁忌症需注意
儿童和青少年
总结词：根据情况， 慎重考虑
长期治疗，可能影响 生长发育
感染乙肝病毒可能影 响疫苗接种
青少年患者往往存在 抑郁等心理问题
治疗过程中需注意乙 肝病毒清除情况
妊娠和哺乳期妇女
妊娠期前3个月慎用
分娩后可继续治疗，但需要注意 新生儿乙肝疫苗接种情况
详细描述
过敏反应是干扰素治疗的少见不良反应之一，一旦出现 应立即停药并给予相应的治疗，如抗过敏药物、激素等 。对于严重的过敏反应，如过敏性休克，应立即给予紧 急抢救。ຫໍສະໝຸດ 04特殊人群的治疗建议
老年患者
建议在充分知情同意的情况下使 用
基因工程药物——干扰素的制备PPT课件
•宿主：腐生型假单胞杆菌（Pseudomonas putida） •上市产品：IFN α-2b/安福隆 •表达产物：无糖基化可溶性蛋白质，具有天然分子 结构和生物活性 •工艺特点：发酵周期短（几个小时），无需变性、复 性过程，获得有活性产品，纯化过程：淘汰抗体亲和 层析
病毒的克星——干扰素！
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
动物无限细胞系培养生产工艺： 上市产品：rhuIFN β-1a 1996， Avonex(Biogen)； 2002， Rebif(Serono) 表达产物：166 aa 糖基化蛋白，22.5 ku 工艺特点：细胞培养，分泌表达 缺点：产量低，成本高,过程严格
基因工程假单胞杆菌发酵生产工艺
我们生活的环境是被微生物包围着的，时时刻刻都要接触到许多 微生物，其中病毒的侵染刺激也不少。科学家猜测，人的血液细 胞里本身就存在干扰素。后来研究证明，这种猜测是有道理的， 通过精密的血液分析，在人和许多动物的细胞中都找到了干扰素。 人们最初想到的是，通过血液制取干扰素。可惜，干扰素在 血液中的含量实在是太少了，用大量的血液才能制得微量的干扰 素，这种生产方式产量低得可怜，自然价格也就十分昂贵。治疗 一个病人的费用高达几万美元，一般百姓只能望“药”兴叹，是 名副其实的“贵族药”，干扰素无法得到普及、推广。 既然蛋白质是干扰素的本质，那么把制造成这种蛋白质的遗 传基因找出来，转入大肠杆菌体内，让它们代劳进行大量生产， 也许能行。经过科学家的试验，干扰素的批量生产便成为可能。 1980年，终于实现了干扰素的批量生产，这是美国科学家的杰作， 他们利用DNA重组技术构建了生产干扰素的基因工程。 如今，运用基因工程技术的国家有：美国、日本、法国、比 利时、德国、英国以及中国等。通过DNA重组、大肠杆菌发酵等方 法，大量获取各种干扰素。经过试验明，这样制得的干扰素对乙 型肝炎、狂犬病、呼吸道发炎、脑炎等多种传染病的病毒都有一 定疗效。干扰素能减缓癌细胞的生长，是很有希望的防癌治癌药 物，具有非常诱人的前影。
病毒的克星——干扰素！
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
动物无限细胞系培养生产工艺： 上市产品：rhuIFN β-1a 1996， Avonex(Biogen)； 2002， Rebif(Serono) 表达产物：166 aa 糖基化蛋白，22.5 ku 工艺特点：细胞培养，分泌表达 缺点：产量低，成本高,过程严格
基因工程假单胞杆菌发酵生产工艺
我们生活的环境是被微生物包围着的，时时刻刻都要接触到许多 微生物，其中病毒的侵染刺激也不少。科学家猜测，人的血液细 胞里本身就存在干扰素。后来研究证明，这种猜测是有道理的， 通过精密的血液分析，在人和许多动物的细胞中都找到了干扰素。 人们最初想到的是，通过血液制取干扰素。可惜，干扰素在 血液中的含量实在是太少了，用大量的血液才能制得微量的干扰 素，这种生产方式产量低得可怜，自然价格也就十分昂贵。治疗 一个病人的费用高达几万美元，一般百姓只能望“药”兴叹，是 名副其实的“贵族药”，干扰素无法得到普及、推广。 既然蛋白质是干扰素的本质，那么把制造成这种蛋白质的遗 传基因找出来，转入大肠杆菌体内，让它们代劳进行大量生产， 也许能行。经过科学家的试验，干扰素的批量生产便成为可能。 1980年，终于实现了干扰素的批量生产，这是美国科学家的杰作， 他们利用DNA重组技术构建了生产干扰素的基因工程。 如今，运用基因工程技术的国家有：美国、日本、法国、比 利时、德国、英国以及中国等。通过DNA重组、大肠杆菌发酵等方 法，大量获取各种干扰素。经过试验明，这样制得的干扰素对乙 型肝炎、狂犬病、呼吸道发炎、脑炎等多种传染病的病毒都有一 定疗效。干扰素能减缓癌细胞的生长，是很有希望的防癌治癌药 物，具有非常诱人的前影。
细胞-干扰素(医学PPT课件)
*
目前，在中草药中发现广泛存在半抗原，如小檗碱、茶碱、丹参酮等，具有生化活性基因的化学成分都有可能成为半抗原，这些半抗原可与体内蛋白质结合成完全抗原，造成一些过敏反应。
*
抗原的特异性既表现在免疫原性上，也表现在反应原性上。
沙门氏杆菌
大肠杆菌
抗大肠杆菌的抗体
抗沙门氏杆菌的抗体
结合
结合
抗体 是对其抗原有极强专一性 的 魔弹 或 巡弋飞弹
IFN作用特点:
产生的时间早； 中断受染细胞的病毒感染，限制病毒扩散； IFN诱导的抗病毒蛋白，只对病毒起作用， 不影响宿主细胞蛋白质合成。
专题二 抗体制药
第一节 概述 第二节 单克隆抗体 第三节 基因工程抗体 第四节 噬菌体抗体工程 第五节 抗体诊断试剂和抗体药物
四 干扰素抗病毒机理
干扰素具有广谱抗病毒作用，又具有细胞种属特征。即某一种动物产生的干扰素只能保护同种属或近缘种属动物细胞。 干扰素是一种活性很强的生物制剂，既能治疗病毒性疾病，又具有抗肿瘤和调节免疫机能的作用。
四 干扰素抗病毒机理
干扰素抗病毒作用
作用机理 不是直接杀灭病毒
IFN → 抗病毒蛋白基因 → 抗病毒蛋白 (蛋白激酶, 磷酸二脂酶)
Each hybridoma line can produce pure single antibody, called mon
oclonal antibody.
If B cell is fused with myeloma, the fused cell might be culture
d and produce antibody.
单克隆抗体的应用
*
基因工程技术为解决这两个问题提供了可能。 1984年：人-鼠嵌合抗体 1984年至今：单克隆抗体的鼠源性及分子过大的问题得以解决，可仅作为与抗原特异性结合试剂。 已通过基因工程技术，制备出改形抗体、单链抗体、单域抗体、最小识别单位等很多类型的抗体或抗体单位。基本消除了单克隆抗体的鼠源性，相对分子质量只有完整抗体分子的1/80~1/3，而且消除了鼠源性单克隆抗体的生物学活性如激活补体、促进吞噬功能（免疫调理）、抗体依赖细胞介导的细胞毒作用等，只保留同抗原特异性结合的活性。
目前，在中草药中发现广泛存在半抗原，如小檗碱、茶碱、丹参酮等，具有生化活性基因的化学成分都有可能成为半抗原，这些半抗原可与体内蛋白质结合成完全抗原，造成一些过敏反应。
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抗原的特异性既表现在免疫原性上，也表现在反应原性上。
沙门氏杆菌
大肠杆菌
抗大肠杆菌的抗体
抗沙门氏杆菌的抗体
结合
结合
抗体 是对其抗原有极强专一性 的 魔弹 或 巡弋飞弹
IFN作用特点:
产生的时间早； 中断受染细胞的病毒感染，限制病毒扩散； IFN诱导的抗病毒蛋白，只对病毒起作用， 不影响宿主细胞蛋白质合成。
专题二 抗体制药
第一节 概述 第二节 单克隆抗体 第三节 基因工程抗体 第四节 噬菌体抗体工程 第五节 抗体诊断试剂和抗体药物
四 干扰素抗病毒机理
干扰素具有广谱抗病毒作用，又具有细胞种属特征。即某一种动物产生的干扰素只能保护同种属或近缘种属动物细胞。 干扰素是一种活性很强的生物制剂，既能治疗病毒性疾病，又具有抗肿瘤和调节免疫机能的作用。
四 干扰素抗病毒机理
干扰素抗病毒作用
作用机理 不是直接杀灭病毒
IFN → 抗病毒蛋白基因 → 抗病毒蛋白 (蛋白激酶, 磷酸二脂酶)
Each hybridoma line can produce pure single antibody, called mon
oclonal antibody.
If B cell is fused with myeloma, the fused cell might be culture
d and produce antibody.
单克隆抗体的应用
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基因工程技术为解决这两个问题提供了可能。 1984年：人-鼠嵌合抗体 1984年至今：单克隆抗体的鼠源性及分子过大的问题得以解决，可仅作为与抗原特异性结合试剂。 已通过基因工程技术，制备出改形抗体、单链抗体、单域抗体、最小识别单位等很多类型的抗体或抗体单位。基本消除了单克隆抗体的鼠源性，相对分子质量只有完整抗体分子的1/80~1/3，而且消除了鼠源性单克隆抗体的生物学活性如激活补体、促进吞噬功能（免疫调理）、抗体依赖细胞介导的细胞毒作用等，只保留同抗原特异性结合的活性。
干扰素治疗慢性乙型肝炎专家建议PPT课件
联合其他抗病毒药物的疗效评估
联合治疗
采用干扰素联合其他抗病毒药物，如核苷类药物，以提高抗病毒效果。
疗效评估
定期监测患者的病毒学、生化学和病理学指标，以评估疗效和调整治疗方案。
05
干扰素治疗慢性乙型肝炎的未来展望
研究新的作用靶点
探索新的作用靶点是干扰素治疗慢性乙型肝炎的关键研究方 向。这些靶点可能包括病毒复制的各个环节，例如病毒进入 、转录、翻译和组装等。
干扰素治疗慢性乙型肝炎的疗效评价
总结词
全面、严谨
详细描述
在进行干扰素治疗慢性乙型肝炎的疗效评价时，需要综合考虑患者的病情、肝功 能、病毒载量等多个方面的因素。同时，需进行严密的观察和检测，以确保治疗 的有效性和安全性。
干扰素治疗慢性乙型肝炎的不良反应及处理
总结词
重视、及时
详细描述
干扰素治疗慢性乙型肝炎可能引起一系列不良反应，如流感样症状、白细胞减少、内分泌失调等。对于不良反 应的处理，应重视并及时处理，以保证患者的安全和治疗的顺利进行。同时，治疗过程中还需密切关注患者的 心理状况，给予必要的心理辅导和支持。
04
干扰素治疗慢性乙型肝炎的优化方案
优化干扰素种类和剂量
干扰素种类
采用聚乙二醇干扰素或复合干扰素，提高抗病毒效果和药物 持久性。
剂量优化
根据患者的病情和耐受性，适当调整干扰素剂量，以达到最 佳疗效和减少不良反应。
优化给药途径和疗程
给药途径选择皮下注射Fra bibliotek肌肉注射，以提高药物吸收和利用。
疗程优化
根据患者的病情和病毒学特点，制定个体化疗程，以达到最佳疗效和减少不 良反应。
2
干扰素治疗慢性乙型肝炎的原理是通过激活患 者的免疫系统，促进病毒清除和抑制病毒复制 。
干扰素PPT课件
2021/6/16
4
• 1980-1982年，科学家 用基因工程方法在大 肠杆菌及酵母菌细胞 内获得了干扰素，从 每1升细胞培养物中可 以得到20-40毫升干扰 素。从1987年开始， 用基因工程方法生产 的干扰素进入了工业 化生产，并且大量投 放市场。
2021/6/16
5
什么叫干扰素（IFN）
7
干扰素及其制剂的分类
1. 天然IFN
2. 非天然 IFN
干扰素制剂的分类，按制作方法不同，可分为利用基 因工程生产的重组α-干扰素和人自然干扰素两大类。
2021/6/16
8
1. 天然IFN
• 天然干扰素种类繁多，分子量也不同，亦有不同的抗原性。目前了解 由人的不同细胞产生的干扰素至少有三种不同的抗原成分：白细胞干 扰素抗原(Le),人成纤维细胞干扰素抗原（F）和T淋巴细胞干扰素抗 原（T）。
• 基因工程干扰素再按基因表达分子结构和抗原性可分为α 、β、γ型，同一型内按氨基酸组成差异再分20多个亚型 ：α1、α2、α3……在同一亚型内又因氨基酸的差异而细 分，如α2：有三种：α2a、α2b、α2c
• 人自然干扰素是通过分别刺激淋巴母细胞和人体白细胞， 然后提纯制备而得。目前市场供应的只有由类淋巴母细胞 产生的干扰素（IFN）…αN1，是天然的多亚型的混合物 。临床用的主要是重组制剂，有α2a、α2b和α1b。
干扰素-β制剂进入血液后，稳定性差，确切疗 效尚在观察中，但可作为干扰素- α的替代制剂。 当前国内对干扰素-α各亚型制剂的活用较佳剂 量为（3～5）X106单位／日，连续用1 周后改 为隔日或每周3次，肌内注射，疗程3～6月。
3
干扰素的发现
1957年，英国病毒生物学家Alick Isaacs和瑞士研究人员 Jean Lindenmann，在利用鸡胚绒毛尿囊膜研究流感干 扰现象时了解到，病毒感染的细胞能产生一种因子，后者 作用于其他细胞，干扰病毒的复制，故其命名为干扰素。
内分泌干扰素PPT课件
1.2 体外实验 这一类实验的设计是基于大部分环境内分泌干 扰物质在体内的作用机制,即在体内与17β -雌二 醇竞争结合雌激素受体体外实验主要有以下几 种 (1)细胞培养 (2)受体竞争性结合测定 (3)分子生物学检测技术 美国环境学家将与雌激素受体结合机制进一 步延伸,研究出与之对应的基于雄激素受体结合 的检测方法作为基于雌激素受体结合的检测方 法的补充。通过对环境内分泌干扰物质的雌激 素样活性
及对雄激素的抑制活性两个方面来综合考虑 环境内分泌干扰物质对内分泌系统的毒性。 但目前的生物检测方法的结果都只能说明环境 内分泌干扰物质的整体效应,而不能对受试物中 环境内分泌干扰物质的组成详加分析,并且一些 方法要求的技术条件较高,时间较长,费用也很高。 显然建立一种方便、准确、快捷且费用低的检 测方法是当务之急。
社会现象
人们接触较多的是含 有雌激素的日用品，包括 各种消毒剂、洗涤剂、化 妆品、稀释剂、塑料制品、 金属( 铅、汞和砷等)、杀虫 剂、电子产品中的电路板、 化工产品( 含甲基苯、苯胺、 酚、烷基类、硝基类化合物)。
环境内分泌干扰物通过 某些途径，如污染水源、食 物或经皮肤吸收进入机体后 可以干扰内分泌激素的合成 释放、转运、与受体结合、 代谢等途径，从而影响内分 泌系统功能，破坏机体内环 境的协调和稳定。
2.物理检测技术
一般使用色谱仪器分析化 学合成品,如液相色谱和气相 色谱分析。色谱分析技术对 样品的前处理过程要求非常 高,需要从复杂的基质样品中 将低浓度的目标化合物高效 提取、纯化和浓缩。随着色 谱技术与质谱技术的结合,检 测分析的选择性和灵敏度得 到很大提高,检测范围有所扩 大。
一般来说,色谱分析的前处理的萃取只能 提取一类或几类物理性质相似的环境内分泌干扰 物质,因此要完全分析样品,必须采用不同的萃取、 纯化方法分别提取与分析,这样耗时较长,费用也 较大。国内的姚文,栾和林采用GC-MS检测样品 中的烷基酚,在20min左右的进样时间内分别在 酮肟与醛肟萃取液中检测出几十种壬基酚的同 分异构体。
浙科版高中生物选修二复习课《干扰素》((共16张PPT) - 最新
04
品种及其价位
普通干扰素分子小、作用时间短，一般情况下，普通干扰素注射12小 时后基本完全排出体外，因而需要多次注射，普通干扰素的注射方法可以 为隔一天注射一针或是一周注射三针。对于普通干扰素的价位，普通干扰 素价格比较低，300万剂量的普通干扰素价格一般在50-80元不等。 相对于普通干扰素，长效干扰素半衰期长，长效干扰素的半衰期长达 40小时，可以在乙肝患者体内持续作用168个小时，因而，长效干扰素一 周只需要注射一次，使用比较方便，而且提高了干扰素治疗的安全性。长 效干扰素价格相对较贵，长效干扰素的价格一般在1200-1500元之间。
科学家猜测，人的血液细胞里本身就存在干扰素。 后来研究证明，这种猜测是有道理的，通过精密的血液 分析，在人和许多动物的细胞中都找到了干扰素。
人们最初想到的是，通过血液制取干扰素。可惜， 干扰素在血液中的含量实在是太少了，用大量的血液才 能制得微量的干扰素，这种生产方式产量低得可怜，自 然价格也就十分昂贵。干扰素无法得到普及、推广。
抗肿瘤作用:干扰素可抑制细胞分裂，对正 常细胞和肿瘤细胞均有明显的抑制作用，对迅 速分裂细胞的抑制作用尤为明显。干扰素通过 抑制肿瘤病毒的增殖、肿瘤细胞的增生，改变 肿瘤细胞表面性能，诱发新的抗原，从而易被 免疫细胞识别并加以排斥，通过免疫调节作用， 可增强机体抗肿瘤能力，如激活巨噬细胞，增 强NK细胞功能等。
1957年，经过大量的实验,美国菌学家萨克斯发现， 在病毒的刺激下，细胞中会产生一种蛋白质，能抑制后 来病毒的侵染。萨克斯认为这种特殊的蛋白质能起到干 扰作用，就将其命名为“干扰素”。人类的许多疾病都 是由病毒引起的，再好的抗生素也拿它们没辙，可是干 扰素却是对付病毒的克星。
但是，要使干扰素成为药品，进入实际应用当中， 必须有足够的量。那么，如何获得大量的干扰素呢？人 们首先想到，用病毒刺激老鼠，让它们产生干扰素，再 提取出来供人使用，但是这种方法失败了。原因是干扰 素的活动场所很专一，老鼠体内产生的干扰素对人不管 用。所以最理想的办法是用人自身产生的干扰素。
发酵产品---干扰素ppt课件
(2)培养基组成
种子培养基的营养成分宜丰富些，尤其是氮 源的含量应较高(即C/N低)。相反，对于发 酵培养基，氮源含量应比种子培养基稍低 (即C/N高)。
(3)溶解氧
基因工程菌发酵要求培养液中有足够的溶 解氧，为了提高发酵罐的供氧能力，往往 需要增大搅拌转速，增加空气流量，或通 入纯氧
(4)温度
1
干扰素概述
2
生产干扰素的菌种
发酵工艺过程 发酵过程控制
3
4 5
分离纯化过程
干扰素α-2b的发酵工艺过程：
取保存工作种子批菌种，室温融化 1.接种：接入50L种子罐，接种 连续流离心机：冷却的发酵液， 1.接种：通入300L培养基的发酵罐，接种量 摇瓶培养：30 ，pH7.0 ，250 量℃ 10% 。 16000 r/min 离心收集。 10%。 r/min，18±2. 2h 培养：30 菌体保存：－ 20 ℃ 冰柜，不超过 12℃ 个，pH7.0。 2.控制：级联调节通气量和搅拌转速。 检测：OD值和发酵液杂菌检查。 3.控制：级联调节通气量和搅拌 月。 3.前4h：30℃，pH7.0，DO为30%。 转速 检测：干扰素含量、菌体蛋白含量、 4.4h后：20℃，pH6.0，DO为60%，5～6.5h。 4.DO为30%，3～4h，OD>4.0。 菌体干燥失重、质粒结构一致性、质 5.终点控制：OD值达9.0±1.0，5℃冷却水快 5.检测：显微镜和LB培养基划 速降温至15℃以下。 粒稳定性。 线检查，控制杂菌。 6.检测：发酵液杂菌检查
溶解粗干扰素 沉淀除杂质 疏水层析 无菌过滤分装
溶解粗干扰素
• 用超纯水配制纯化缓冲液。 • 在2～1O℃将粗干扰素倒入匀浆器中，加pH7.5 磷酸缓冲液，匀浆，使之完全溶解。
干扰素ppt课件
4h后：20℃，pH6.0，DO为60%，5～6.5h。
终点控制：OD值达9.0±1.0，5℃冷却水快速降
温至15℃以下。
检测：发酵液杂菌检查
4．菌体收集
连续流离心机：冷却的发酵液，16000 r/min 离心收集。 菌体保存：－20℃冰柜，不超过12个月。 检测：干扰素含量、菌体蛋白含量等。
������
������
1990，rhuIFNγ-1b；1993，rhuIFNβ-1b；
2001－2002：PEG化IFN，PEG-Intron, Pegasys
表达产物：无糖基化，N-met，无活性包涵体
工艺特点：发酵过程，随后变性、复性过程。
3、干扰素生产工艺路线（4）
动物无限细胞系培养生产工艺：
第一步：干扰素α-2b基因的克隆 P73 图2－13
pBR322质粒
诱生的白细胞
提取全RNA 通过寡dT-纤维素柱获得寡A的mRNA
pBR322质粒DNA的PstI酶 蔗糖密度梯度离心提取12s的 mRNA 切割加上dA或dC 逆转录成cDNA 双链cDNA接上dT或dG尾
退火获的杂交质粒
转化大肠杆菌
干扰素教学
2、重组干扰素的临床应用
广谱抗病毒活性（rhuIFNα） 慢性乙型、丙型、丁型肝炎；疱疹、病毒性角膜炎。 直接抗肿瘤活性（rhuIFNα） ������ 毛细胞和慢性髓样白血病、Kaposi肉瘤、非霍奇
金淋巴瘤。 免疫调节活性——治疗慢性肉芽肿瘤（rhuIFNγ） 多发性硬化症rhuIFNβ
cDNA,PCR，基因连接质粒, 转化E.coli,筛选鉴定克隆。
1、基因工程假单胞杆菌菌种建立
第二步：表达载体构建 IFN基因与表达载体连接 转化大肠杆菌 筛选阳性克隆 获得序列正确表达载体