高效液相色谱仪维护保养操作规程

目的：建立高效液相色谱仪维护保养规程。

范围：高效液相色谱仪的维护保养。

责任：质量部、后勤保障部负责人。

内容：

1.泵的维护1.1流动相的更换1.1.1将新流动相置于储液瓶中。

1.1.2打开放空阀，启动泵使新的流动相从放空阀出口流出20ml.左右。

1.1.3关闭放空阀，然后将进样阀与色谱柱相连接端卸开，用小容器放置于

进样阀的出口处。

1.1.4启动恒流泵，让流动相从进样阀出口流出10ml左右。

1.1.5重新连接色谱柱，设定适当流速，当流动相流出约30倍于色谱柱体

积，并且检测器基线平恒后，流动相更换完毕。

1.2换非互溶性流动相（如甲醇系统更换为正己烷系统）1.

2.1准备50ml能与新旧流动相互溶

的中介溶剂（如异丙醇）

1.2.2用中介溶剂更换泵中的旧流动相，步骤同‘更换互溶流动相’中的 1

-5过程（不要接色谱柱）。

1.2.3如果色谱柱中流动相也需要更换，用该溶剂冲洗色谱性。

1.2.4准备新流动相并置于储液瓶中。

1.2.5用新流动相更换中介溶剂步骤同’更换互溶流动相’中的1-5过流

动相更换完毕。

1.3换缓冲液流动相（如磷酸盐缓冲液更换为甲醇系统）1.3.1取超纯水或去离子水500ml。

1.3.2用水更换色谱系统中缓冲液（不包括色谱柱），具体步骤与’更换互

溶流动相’中的1—5过程相同。

1.3.3用水含量10沧60%范围的溶剂冲洗色谱柱中的盐。

1.3.4用新流动相更换水或冲洗色谱柱溶剂，具体步骤与’更换互溶流动相’中的1 —5过程相

同。

135【注意】由于一般缓冲液遇到甲醇、异丙醇等高含量有机溶剂混合液

时容易将缓冲液中盐结晶出来，而结晶盐对密封圈、柱塞杆以及进样阀内部转子

和定子都有很大的损坏，也容易阻塞输液管路，因此要特别仔细操作。

1.3.6用缓冲液作流动相或一段时间不使用泵，在关机前，首选用含量较高

的超纯水或去离子水混合溶剂冲洗色谱柱和系统中的盐，然后用纯甲醇或乙腈冲洗。

2.恒流泵中气泡的排除

在初次使用、长时间没有使用、流动相脱气效果不好等情况下系统内会出现

气体，导致压力不稳、流速不稳甚至不能输液等问题。一般按如下顺序排除系统

内气泡:

2.1打开放空阀，按仪器前面板的“冲洗”功能键，用大流量冲洗系统直到

流出的液体连续，证明气泡已经排除；

2.2如果用“冲洗”状态仍不能吸液，可以用吸耳球或注射器在排液口抽吸,

直至液体流出；

2.3如果仍然无液体流出，可能是球阀座粘连，取出单向阀（取出方法见零

件更换部分），向单向阀两端分别吹气，一通一堵为正常，两端均堵说明阀球阀座粘连，需清洗阀球阀座（见’单向阀的拆装与清洗'

3.在线溶剂过滤器的清洗

为了防止由于流动项杂质微粒进入色谱系统，P203高压恒流泵在放空阀内

安装了在线过滤器，经泵出口流出的液体通过在线过滤器，经排空管流出的溶液不通过在线过滤器。仪器使用一定时间后，建议用户清洗在线过滤器的烧结不锈钢过滤片。用扳手卸下压帽，将密封环和烧结不锈钢过滤片一同取出清洗，清洗后按原位装上。

清洗具体过程如下：

3.1取下过滤片放在（1： 4, V/V ）硝酸溶液的烧杯中超声清洗15分钟。 3.2取出后用蒸馏水超声清洗10分钟。

3.3用吸球吹出过滤头中的液体。

3.4再用蒸馏水超声清洗10分钟（正相系统注意将过过滤片烘干）。

4. 溶剂过滤头的清洗

由于溶剂不干净，杂质有可能阻塞溶剂过滤头上的过滤板孔隙；或长时间

使用缓冲液，过滤头表面容易产生一层膜，阻碍流动相正常通过。严重时，即使

是已超声过的溶剂，泵吸液时也会有气泡在四氟输液管里产生， 因此应经常对过 滤头进行清洗。

具体方法是:

取下过滤头放在（1： 4，V/V ）硝酸溶液烧杯中超声清洗15分钟。

将过滤头重新插入溶剂瓶中（正相系统注意将过滤头烘干）

5. 柱塞杆后部的清洗 5.1当使用含盐的流动相时，由于脱水或蒸发，有可能在宝石柱塞杆密封圈

的后面形成晶体。泵运动时这些盐晶体会损坏密封圈和柱塞杆，因此最好每天开 机前和关机后都要用纯净水冲洗一次密封圈 （在柱塞密封圈和二级密封圈之间） 保持清洗管内有水以防止形成晶体。

5.2取一内径为1.6mm 合适长度的塑料管套入所要清洗泵头的上清洗管：

另

再取一内径为1.6mm 合适长度的塑料管套入所要清洗泵头的下清洗管， 塑料管另 一端插入

废液瓶中。

5.3用针头外径为1.6mm 的塑料注射器吸取一定的清洗液（如纯净的水）

将针头插入连接上清洗管的塑料管的另一端。

5.4缓慢将清洗液注入清洗管中。

4.1

4.2 取出后用蒸馏水超声清洗10分钟。 4.3 用吸球吹出过滤头中的液体。 4.4 再用蒸馏水超声清洗10分钟。 4.5 用吸球吹净过滤头中的水份。

4.6

5.5此时高压泵最好是在正常运转，连续重复数次，即可达以清洗柱塞杆的

目

的。

6.单向阀的拆装与清洗

6.1通常单向阀不用清洗。然而，阀中一旦有沉渣就会影响其性能。当单向

阀已完全组装好时，用下面的方法可使其得到改善。

6.2入口单向阀取出：将输液管从入口压帽拆下，用扳手卸下入口压帽，取

出单向阀组件。

6.3【注意】记住单向阀组件的位置，单向阀组件的标记通常是向下的方向。

6.4出口单向阀取出：用扳手将主副泵腔连接管拆下，用扳手卸下出口压帽,

取出单向阀组件。

6.5乙醇超声清洗15分钟两次，吹净里面的溶剂。

将清洗好的单向阀组件按原位置重新装配在泵头上，注意单向阀组件的标记环位置。

6.6在整体清洗单向阀组件无效时，需要拆开单向阀组件来冲洗。

6.7【注意】为了避免阀组件的丢失，冲洗时用一个小容器盛装是一个好办

法。如果泵较长时间不用（超过一个月），必须用去离子水清洗泵头及单向阀, 以防止阀被阀座“贴住”，泵头进流动相。

7.泵头的拆卸与安装

7.1泵头整体的拆卸与安装：

7.1. 1

7.1. 2 拆卸泵头无需打开机箱盖，泵头的拆卸与安装具体做法如下: 卸掉泵头上所有与泵头相连接的输液管路

7.1. 3 用仪器所配的3#内六角扳手，均匀旋下四个泵头固定螺丝，泵头即

可卸下。

7.1. 4 安装泵头时，注意要均匀旋紧四个泵头固定螺丝，泵头即可卸下。

7.1.5

7.2柱塞密封圈的更换：

7.2.1柱塞和柱塞密封圈长期使用会发生磨损，主要与流量、操作压力和所使用的流动相有关。因为这些可变因素对磨损的影响程度不确定，所以部件的耐连接拆装泵头时卸掉的输液管路。