离心机的原理和使用

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2 密度梯度离心
样品在密度梯度介质中进行离心，使沉 降系数比较接近的物质得以分离的一种 区带分离方法。
密度梯度系统：梯度介质有足够大的溶 解度，不与分离组分反应，不会引起分 离组分的凝集、变性或失活。
常用介质：蔗糖、甘油等。
样品铺在密度梯度溶液表面，离心后形 成若干条界面清楚的不连续区带。
主要用于样品作密度梯度离心
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常速离心机
1 常速离心机 <8000r/min, R.C.F<1*104g 用途：分离细胞、细胞碎片、培养基残
渣及粗结晶等较大颗粒
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高速离心机
2高速离心机 1*104g ～ 2.5*104 r/min ， R.C.F
1*104g～105g 用途：分离各种沉淀物、细胞碎片及较
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沉降系数S：单位离心力作用下粒子的 沉 降 速 度 ， 以 Svedberg 表 示 ， 简 称 S 。
1S=1*10-13s
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沉降系数S与分子量M有对应关系，测 出离心机转速、离心时间和粒子移动距 离，可求出S，再得到M
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二 离心方法的选择
大的细胞器等 高速冷冻离心机
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超速离心机
2.5*104g～8*104 r/min ，R.C.F 5*105g或更高
结构：离心管帽、冷冻装置和温控系统、真 空系统、安全保护系统、制动系统、指示仪 表等。
按用途分：
制备用超速离心机：分离纯化生物大分子、 细胞器和病毒等
分析用超速离心机：测定样品纯度（根据紫 外吸收率或折光率等判断）、沉降系数、相 对分子量
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对于常速和高速离心机，由于所分离的 颗粒大小和密度相差较大，只要选择好 离心速度和时间，就能达到分离效果。
超速离心的离心方法：差速离心、密度 梯度离心和等密度梯度离心
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1 差速离心
采用不同的离心速度和离心时间，使沉 降速度不同的颗粒分批分离的方法。主 要用于分离大小和密度差异较大的颗粒。
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1பைடு நூலகம்
一 离心机的种类与用途
速度：
常速（低速） <8000r/min 高速 10000~30000r/min 超速 >30000r/min
转子：
固定角转子（Eixed-Angle-Rotor）
主要用于分离沉降速度有明显差异的颗粒样品
甩平转子（Siwing-Bucket-Rotor）
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3 等密度离心
当欲分离的不同颗粒的密度范围在离心 介质的密度梯度范围内时，不同浮力密 度的物质颗粒在离心力作用下一直移动 到与各自浮力密度相等的位置（等密度 点），形成区带。
等密度离心常用的介质：铯盐，如CsCl， Cs2SO4，CsBr
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三 离心条件的确定
离心力（转速） 离心时间 温度 pH值 真空
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思考题
1 名词解释 离心分离 相对离心力 沉降系数
2 按离心机转速分，离心机有哪些种类？ 各自的适用范围是什么？
3 超速离心方法有哪些？ 4 离心操作应注意控制哪些条件？离心
转速和沉降时间有何关系？